Məlumat

4.2: Xüsusi Bakterial Boyama Texnikaları - Biologiya


Təlim nəticələri

  • Sadalanan ləkələrin hər birinin məqsədini təsvir edin: sadə, Qram, Acid-Fast, Endospore, Capsule, Flagella, Spirochete.
  • Siyahıda göstərilən ləkələrin hər birinin aşkar etdiyi hüceyrə xüsusiyyətlərini tanıyın

Sadə Ləkələr:

Sadə ləkələr üçün ən çox istifadə olunan boyalar: Kristal Bənövşəyi, Metilen Mavisi, Safranin

  • Bir boya istifadə edir
  • Əks halda şəffaf bakteriya hüceyrələrinə rəng vermək üçün istifadə olunur
  • Hüceyrə ölçüsünü, morfologiyasını və quruluşunu müəyyən etmək üçün istifadə edilə bilər
  • İstifadə olunan tək boya ilə boyandıqda bütün bakteriyalar eyni rəngdədir

Şəkil 1: Çubuq formalı bakteriyaları göstərən kristal bənövşəyi ilə sadə ləkə. Qeyd edək ki, bütün bakteriyalar hüceyrə divarının tərkibindən asılı olmayaraq boyanın eyni rəngində, kristal bənövşəyi (bənövşəyi) olur. Şəkil Muntasir du, 2007 (https://commons.wikimedia.org/wiki/F...micrograph.jpg)

Qram ləkəsi

İlkin ləkə - kristal bənövşəyi

Mordant - yod; rəngsizləşdirici - 95% etanol

Qarşıdurma - Safranin

  • Ümumi diferensial ləkə
  • Qram reaksiyası (müsbət və ya mənfi) hüceyrə divarının xüsusiyyətlərini əks etdirir
  • Hüceyrə ölçüsünü, morfologiyasını və düzülməsini təyin etmək üçün də istifadə olunur

Şəkil 2. qram müsbət, çubuq, Bacillus subtilis. (Ann C. Smith, Merilend Universiteti, College Park, MD)

Şəkil 3: Qram mənfi çubuqlar (çəhrayı) və qram müsbət kokkları (bənövşəyi) göstərən qram ləkəsi: https://commons.wikimedia.org/wiki/F...m_stain_01.jpg

Turşu Tez Ləkə

Turşuya davamlı ləkə cinsin üzvləri kimi turşuya davamlı orqanizmləri müəyyən etmək üçün istifadə edilən diferensial ləkədir. Mikobakteriya .

Turşuya davamlı orqanizmlər muma bənzər, demək olar ki, keçirməyən hüceyrə divarları ilə xarakterizə olunur; onların tərkibində mikolik turşu və çoxlu miqdarda yağ turşuları, mumlar və kompleks lipidlər var. Turşuya davamlı orqanizmlər dezinfeksiyaedici maddələrə və quru şəraitə yüksək davamlıdır. (1)

Hüceyrə divarı əksər birləşmələrə çox davamlı olduğundan, turşuya davamlı orqanizmlər xüsusi bir rəngləmə texnikası tələb edir. Turşuya davamlı boyanmada istifadə edilən əsas ləkə, karbolfuksin lipiddə həll olunur və tərkibində fenol var ki, bu da ləkənin hüceyrə divarına nüfuz etməsinə kömək edir. Bu, istilik əlavə etməklə daha da kömək edir. Sonra yaxma çox güclü rəngsizləşdirici ilə yuyulur, bu, bütün turşuya davamlı olmayan hüceyrələrdən ləkəni çıxarır, lakin turşuya davamlı orqanizmlərin hüceyrə divarına nüfuz etmir. Rəngsizləşdirilmiş turşuya davamlı hüceyrələr daha sonra əks ləkəni götürür. (1)

İlkin ləkə - Karbol fuksin

Rəngsizləşdirici - turşu spirti

Kontrast - Metilen mavisi

  • Mikolik turşu hüceyrə divarları olan bakteriyaları aşkar etmək üçün istifadə edilən diferensial ləkə (genera MikobakteriyaNokardiya)
  • Vərəmə səbəb olan bakteriya növlərini aşkar etmək üçün hazırlanmışdır
  • Turşuya davamlı orqanizmlər turşu-spirt ilə rəngsizləşməyə müqavimət göstərir

Şəkil 4. Qarışıq mədəniyyət Mycobacterium smegmatus (turşuya davamlı, qırmızı/çəhrayı) və Staphylococcus epidermidis (turşuya davamlı olmayan, açıq mavi/bənövşəyi). (Alan Şenkel, Peter Ədalət və Erica Suchman, Kolorado Dövlət Universiteti, Fort Collins, CO)

Endospor ləkəsi

Bu ləkə cinsin üzvləri tərəfindən istehsal olunan bakterial endosporları vizuallaşdırmaq üçün istifadə olunur Bacillus Clostridium. Sporun təbiəti onu əksər adi ləkələrə və boyanma üsullarına qarşı keçirməz edir, lakin bir dəfə boyandıqdan sonra rəngsizləşdirməyə və əks ləkələrə qarşı güclü müqavimət göstərir. İçində Schaeffer-Fulton üsulla, malakit yaşılı ilə əsas ləkə bakterial emulsiyanı buxarlamaqla endospora məcbur edilir. Malakit yaşılı suda həll olunur və hüceyrə materialına aşağı yaxınlığa malikdir, buna görə vegetativ (aktiv bölünən) hüceyrələr su ilə rəngsizləşdirilə bilər. Vegetativ hüceyrələr daha sonra safraninlə əks olunur. Ləkələnmiş endosporların mikroskopik müayinəsi onların nisbi ölçüsünü və hüceyrədəki mövqeyini aşkar edəcək ki, bu da spor yaradan növlərin hər birinin fərqli xüsusiyyətləridir.

İlkin ləkə - Malakit yaşılı

Əks ləkə - safranin

  • Endosporlar əsas ləkələrlə boyanmağa müqavimət göstərir
  • Endosporlar malaxit yaşılı ilə ləkələnir; vegetativ hüceyrələr safranin (qırmızı) ilə boyanır

Şəkil 5. a-nın endospor ləkəsi Bacillus cereus mədəniyyəti Shaeffer-Fulton metodundan istifadə edərək və 1000x ümumi böyütmə ilə yağa batıran obyektiv altında baxılır. vegetativ hüceyrələr B. cereus qırmızı rəngdədir; endosporlar yaşıl rəngdədir. Kulturanın yaşı ilə əlaqədar olaraq hüceyrələrdən endosporlar ayrılmışdır. (Derek Weber və S. Finazzo, Broward Community College–Central kampus, Davie, FL)

Kapsul ləkəsi (mənfi rəngləmə)

Polisaxarid kapsulları və lil təbəqələrini seçici şəkildə ləkələmək ümumiyyətlə çətindir. Bunun əvəzinə onlar sadəcə olaraq onların konturlarını çəkməklə, fonu və/və ya hüceyrələri rəngləməklə, kapsulu boyamadan nümayiş etdirilir. Bu mənfi ləkə bir neçə yolla edilə bilər. Laboratoriya nümayişi slayd fonu və hüceyrələri əsas fuksinlə boyanmaqla hazırlanmışdır. Beləliklə, kapsul qırmızı fonda qırmızı hüceyrəni əhatə edən şəffaf bir zona və ya halo kimi görünür.

Turşu ləkəsindən istifadə edir: (Konqo qırmızısı və ya Nigrosin) və əsas ləkə: (kristal bənövşəyi və ya safranin)

  • Mənfi ləkələr nə istiliklə bərkidilir, nə də yuyulur
  • Slaydın fonu turşu ləkələri ilə boyanmışdır (kapsula ləkəsiz qalır)
  • Kapsulun içindəki hüceyrələr Əsas ləkələrlə boyanmışdır
  • Kapsüllənmiş hüceyrələrin nümunələri: Bacillus anthracis, Streptococcus pneumoniae, və Klebsiella pnevmoniyası

Şəkil 6: Kapsüllü Enterobacter aerogenes Anthony kapsul ləkəsi ilə boyanmışdır. (Gary E. Kaiser, The Community College of Baltimore County, Catonsville Campus, Baltimore, MD)

Flagella ləkəsi

Bu ləkə nazik bakteriya flagellasını ağır metallar və ya digər birləşmələrlə örtür ki, onları işıq mikroskopunda görünsün. Göründükdən sonra flagellanın yeri və sayı diaqnostik olaraq istifadə edilə bilər. Bayraqların olması mədəni şəraitə görə dəyişir, buna görə də mənfi nəticə hüceyrənin flagella istehsal edə bilməməsinin sübutu deyil. Nümayiş slayd flagella örtmək üçün gümüş birləşmə və hüceyrələri ləkələmək üçün qırmızı boya, əsas fuksin ilə hazırlanmışdır.

Gümüş nitrat

  • Digər boyanma üsulları ilə görünməyəcək qədər incə olan bakterial flagellaları görmək üçün istifadə olunur
  • Gümüş nitrat flagellaları olduğundan daha böyük göstərir
  • İdentifikasiya üçün flagellaların düzülməsini müəyyən etmək üçün istifadə edilə bilər.
    • Məsələn: Proteus vulgaris peritrik qamçıya malikdir

Şəkil 7: Pseudomonas fluorescens Presque Isle Cultures Flagella Ləkəsi ilə boyanmışdır. Etiketli görünüşdəki oxlar flagellaya işarə edir. (Jay Mellies və Giriş Biologiya tələbələri, Reed College, Portland, OR)

Şəkil 8: (A) Sxematik E. coli flagellum. Bazal gövdə: Bayraqcığın dibində yerləşir. Hüceyrə divarına və hüceyrə membranına daxil olan bazal bədən çıxış cihazıdır. Hərəkət üçün enerji təmin etmək üçün bir mühərrik rolunu oynayır. Yaxınlıqdakı keçid fırlanma istiqamətini təyin edir. Qarmaq: Bu quruluş birbaşa hüceyrədən uzaqlaşır və filamentlərin çıxdığı kəskin əyilmə (təxminən 90 °) var. Filament: Bu filiform quruluş bakteriya hüceyrəsindən çıxır. Bu, flagellin proteinindən hazırlanmış içi boş bir borudur. O, bakteriya hüceyrəsini hərəkət etdirmək üçün gəmi və ya təyyarə pervanesi kimi fəaliyyət göstərir. (B) Bakterial bayraq quruluşunun nümunələri. (C) Periplasmic flagella (flagella boyanması). Bakteriya hüceyrəsi qırmızı, flagella isə bakteriya hüceyrəsinin ətrafında açıq qırmızı rəngə boyanır. Şifahi Mikrobiologiya Atlasından, redaktə: Xuedong Zhou və Yuqing Li, 2015.


Videoya baxın: SITOLOGIYA I Muhazire (Yanvar 2022).