Məlumat

DNT-nin izopropanol çöküntüsü - soyuq saxlama müddəti və miqyası

DNT-nin izopropanol çöküntüsü - soyuq saxlama müddəti və miqyası


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

DNT hazırlama protokolları tez-tez spirtlə, çox vaxt izopropanolla son çökmə mərhələsini əhatə edir, burada DNT spirtdə, -20C və ya -70C kimi aşağı temperaturda, çox vaxt bir gecədə saxlanılmalıdır.

Onu aşağı temperaturda saxlamağın mənası nədir? Aşağı daha yaxşıdır? Hansı məqamda gəlirlərin azaldığını görürsünüz?

Bəs vaxt? Gecə həqiqətən lazımdırmı, yoxsa desək, bir saat kifayət edər? Aşağı temperaturlar daha tez yağıntıya səbəb olurmu?


Çöküntü üçün müxtəlif reagentlərdən istifadə edirsiniz: DNT-nin daha az qütblü mühitdə çökməsinə əmin olmaq üçün əvvəlcə bir az turşulu şəraitdə duz əlavə edirsiniz. Bu, etanol və ya izopropanol kimi spirtlərin əlavə edilməsi ilə əldə edilir.

Adətən aşağı temperaturda inkubasiyanın nəticələri yaxşılaşdırdığı düşünülür, lakin bu maraqlıdır ki, doğru deyil. Bethesda Tədqiqat Laboratoriyalarından "DNT-nin Etanol Çöküntüsü" adlı bir məqalə var. bu əlaqələri (temperatur, vaxt və spirt konsentrasiyası) çox ətraflı təhlil edən, mütləq oxumağa dəyər.

Bu sənəddəki Şəkil 1-3 etanolun təsirini göstərir (amma əminəm ki, bu izopropanol üçün çox da fərqli deyil):

Mümkün olduqda ispropanoldan etanol çöküntüsünə üstünlük verərdim. İzopropanol duzları birgə çökdürür, ona görə də 70% etanol ilə bir neçə dəfə yumaq lazımdır və o, etanoldan daha az uçucudur, ona görə də qurutma mərhələsi daha uzun çəkir. O, həmçinin fenol kimi üzvi birləşmələri daha az təsirli təmizləyir və bəzən qranulları görmək daha çətindir.

Digər tərəfdən, böyük həcmlərlə məşğul olmaq lazım olduqda faydalı ola bilər, çünki 2,5 həcmli etanolla müqayisədə yalnız 0,7 həcm izopropanol lazımdır.

İzopropanol ilə yağıntılar adətən inkubasiya edilmir, qarışdırıldıqdan sonra birbaşa sentrifuqa edilir. Budur laboratoriyamın protokolu (əslində, səhv xatırlamıramsa, Qiagen-dən gəlib):

  • Duz konsentrasiyasını, məsələn, natrium asetat (0,3 M, pH 5,2, son konsentrasiya) və ya ammonium asetat (2,0-2,5 M, son konsentrasiya) ilə tənzimləyin.
  • DNT məhluluna 0,6-0,7 həcmdə otaq temperaturu izopropanol əlavə edin və yaxşı qarışdırın.
  • Nümunəni dərhal 10,000-15,000 x g-də 4°C-də 15-30 dəqiqə sentrifuqa edin.
  • Qranulları pozmadan supernatantı diqqətlə süzün.
  • 1-10 ml (hazırlığın ölçüsündən asılı olaraq) otaq temperaturunda 70% etanol əlavə edərək DNT qranulunu yuyun. Bu, birgə çökdürülmüş duzu çıxarır və izopropanolu daha uçucu etanolla əvəz edir, DNT-nin yenidən həll edilməsini asanlaşdırır.
  • 4°C-də 5-15 dəqiqə 10,000-15,000 x g-də sentrifuqa edin
  • Yuma və sentrifuqa addımlarını bir daha təkrarlayın.
  • Qranulları pozmadan supernatantı diqqətlə süzün.
  • Peleti 5-20 dəqiqə havada qurutun (qranulun ölçüsündən asılı olaraq).
  • DNT-ni uyğun bir tamponda yenidən həll edin.

Mücərrəd

aşkarlanması üçün sürətli və sadə polimeraza zəncirvari reaksiya metodu işlənib hazırlanmışdır Phytophthora infestans oospores, torpaqda kartofun gec zərərvericisinin törədicisi. Metod, şüşə tozunun və yağsız süd tozunun iştirakı ilə aşındırıcı xüsusiyyətlərdən istifadə edərək, quru torpağın üyüdülməsi ilə oosporların qısa müddət ərzində pozulmasını nəzərdə tutur. Sonuncu torpaq hissəciklərinə adsorbsiya və ya parçalanma yolu ilə DNT itkisinin qarşısını alır və PCR inhibitorlarının DNT ilə birgə çıxarılmasını azaldır. Fenol/xloroform ekstraksiyasından sonra DNT çökmə mərhələsi olmadan birbaşa PCR gücləndirilməsi üçün uyğundur. Bu gücləndirmə, məhsulun əkilməsindən əvvəl yoluxmuş torpaqlarda patogenin aşkarlanmasına gətirib çıxarır. Təsvir etdiyimiz real vaxt PCR analizi yüksək həssas və spesifikdir və adi PCR testləri ilə müqayisədə bir sıra üstünlüklərə malikdir. P. infestans kartof toxumlarında və başqa yerlərdə müsbət inokulum səviyyəsini təsdiqləmək üçün aşkarlanması. Standart DNT şablonlarının artan miqdarı ilə müvafiq hədd dövrü (Ct) dəyərləri müəyyən edildi və bu Ct dəyərləri ilə ilkin şablon məbləğlərinin loqarifmi arasında xətti əlaqə quruldu. Metod sürətli, qənaətcildir və uyğun daxili nəzarət vasitələri ilə birləşdirildikdə, onların aşkarlanması və kəmiyyətinin müəyyən edilməsi üçün tətbiq edilə bilər. P. infestans geniş miqyasda oosporlar.


Mücərrəd

Biomüxtəlifliyin qorunması bütün dünyanı narahat edən məsələdir və nəsli kəsilməkdə olan növlərin və ya icmaların düzgün idarə edilməsi etibarlı və dəqiq məlumatların toplanmasından asılıdır. Ətraf mühitin DNT-sinin (eDNT) mühafizənin idarə edilməsi üçün geniş faydasına və tropiklərdə biomüxtəlifliyin müvafiq idarə edilməsi zərurətinə baxmayaraq, indiyədək tropik bölgələrdə aparılan eDNA əsaslı tədqiqatlar məcmu eDNT ədəbiyyatının yalnız kiçik bir hissəsini təşkil edir. Tropik bölgələrdə sürətli və etibarlı növlərə və icma səviyyəli ekoloji məlumatlara artan tələbatı ödəmək üçün biz (1) tropiklərdə eDNT məlumatlarının seçmə dizaynı və nəticəsinə dair problemlər və mülahizələrin su eDNT mərkəzli icmalını təqdim edirik və (2) Tropiklərdə ekoloji tədqiqat və biomüxtəlifliyin idarə edilməsinə aid eDNA tətbiqləri. Biz təklif edirik ki, eDNT nümunəsinin adi çöl tədqiqatları ilə birgə tətbiqi tropik bölgələrdə biomüxtəlifliyin qorunmasının idarə edilməsinin effektivliyində inqilab etmək potensialına malikdir.


Nəticələr

Soyuq uyğunlaşma zamanı müvəqqəti transkript və metabolitlərin stabil səviyyələri

DNT mikroarray analizi CA müalicəsinin təsirinə məruz qalmış statistik əhəmiyyətli siqnal intensivliyi fərqlərini göstərən 8171 zond dəstinin müəyyən edilməsi ilə nəticələndi (Cədvəl S1). CA-nın başlanğıcı zamanı transkript və metabolit məzmununda dəyişiklikləri aşkar etmək üçün bitkilər 96 saata qədər 4 ° C-də saxlanıldı. Bu işdə istifadə olunan metabolit məlumatları əvvəllər dərc edilmiş işimizdən əldə edilmişdir (Kaplan və b., 2004). Cari analizlərdə istifadə edilən bütün metabolit məlumatları gen ifadə analizlərinin aparılması üçün istifadə edilən eyni bitki materialından əldə edilib və bu intreqativ təhlili mümkün etmək üçün eksperimental olaraq uyğunlaşdırılmış verilənlər dəstləri yaradılıb. Davamlı və keçici reaksiyalar üç əsas kateqoriyaya bölündü: erkən (dəyişikliklər 1-4 saat ərzində baş verdi), orta (dəyişikliklər 12-24 saat ərzində baş verdi) və gec (dəyişikliklər 48-96 saat ərzində baş verdi). Gen ifadəsində müşahidə edilən dəyişikliklərin bir hissəsinə kalloza, fermentasiya, fosfolipid, nişasta, şəkər, flavonoid, zülal amin turşuları, γ-aminobutirik turşu (GABA) kimi bir çox hüceyrə biosintetik yollarında iştirak edən fermentləri kodlayan genlər üçün transkriptlər daxil edilmişdir. və terpenoid biosintezi və fototənəffüsün repressiyası, fol turşusu, betain, sulfat assimilyasiyası, etilen, yağ turşusu, qlükoneogenez, amin turşuları, brassinosteroidlər və xlorofil biosintezi (bu analizdə müxtəlif metabolik yollara aid genlərin siyahısı təqdim olunur). S2). Eynilə, gen ifadə analizləri üçün istifadə edilən eyni bitkilərdə GC-MS ilə paralel metabolit profilinin aparılması, əvvəllər bildirildiyi kimi, 311 aşağı molekulyar kütləli qütb birləşmələrinin siqnal intensivliyinin CA-ya cavab olaraq dəyişdirildiyini aşkar etdi (Kaplan və b., 2004). Ümumilikdə, amin turşularının, trikarboksilik turşunun (TCA) dövrü aralıq məhsulları və karbohidrat metabolizmasının bir çox metabolitləri və fenilpropanoid yolunun aralıq məhsullarının nisbi sabit vəziyyətli hovuz ölçüləri CA-dan təsirlənmişdir (Cədvəl S3).

CA zamanı monitorinq edilən biosintetik yolların müvəqqəti reaksiyalarında transkriptlər və metabolitlər üçün statistik əhəmiyyətli dəyişikliklərin təhlili aparıldı və dörd növ cavab əlaqəsi aşkar edildi: 1, bəzi yolların fermentləri üçün transkript siqnal səviyyələrində artım (raffinoz biosintezi və GABA şunt) Gly, Ala, Thr, Leu, saxaroza sintezi və TCA dövrü daxil olmaqla bir çox biosintetik yollar üçün transkripsiya aktivləşdirilməsi 2 ilə uyğun bir şəkildə metabolit siqnal səviyyələrində artımdan əvvəl, metabolit siqnal səviyyələrində artım, transkript bolluğunda artımdan əvvəl (Cədvəl 1) ) 3, Lys, Met, Trp, Tyr, Arg, Cys, poliamin və fenilpropanoid biosintetik yollar kimi digər yollar üçün bir çox genin transkript siqnal səviyyələri azaldı, halbuki onların müvafiq metabolit siqnal intensivliyi artdı (Cədvəl 1) və 4, transkriptlər üçün Ile, Val və Glu üçün biosintetik yolların fermentləri aşkar edilə bilən dəyişikliklər göstərmədi, lakin kor cavab verən metabolit məzmunu əhəmiyyətli dərəcədə artmışdır. Transkript və metabolit məlumatları üçün bu dörd növ müvəqqəti reaksiya əlaqəsi bitkilərin CA-ya reaksiyalarında transkript bolluğundan asılı və müstəqil olan müxtəlif gen-metabolit əlaqələrini nümayiş etdirir.

Transkript səviyyəsi Metabolit səviyyəsi Yol
Erkən davamlı artım Erkən davamlı artım SERINE BİOSİNTEZİ
Erkən davamlı artım Erkən davamlı artım SAKROZA BİOSİNTEZİ
Erkən davamlı artım Erkən davamlı artım Nişastanın HİDROLİTİK PARÇALANMASI
Aralıq səviyyəsini artırın Erkən davamlı artım QLİSİN BIOSİNTEZİ
Aralıq səviyyəsini artırın Erkən davamlı artım QLİKOLİZ
Orta davamlı artırın Erkən davamlı artım ALANİN BİOSİNTEZİ
Orta davamlı artırın Erkən davamlı artım TCA DÖVRÜ
Orta davamlı artırın Erkən davamlı artım TREONİN BİOSİNTEZİ
Ara keçidi artırın Erkən davamlı artım b PROLİN biosintezi
Gec artır NA c PROLİNİN DEQRADASYASI
Ara keçidi (aminotransferaz) artırın Erkən davamlı artım LEYSİN BIOSİNTEZİ
Əhəmiyyətli dəyişiklik yoxdur Erkən davamlı artım İzoleysin biosintezi
Əhəmiyyətli dəyişiklik yoxdur Erkən davamlı artım VALİNİN BİOSİNTEZİ
Ara keçidi azaldın NA İZOLEYSİN VALİNİN PARÇALANMASI
Aralıq səviyyəsini azaldın Erkən davamlı artım Lizin biosintezi
Aralıq səviyyəsini azaldın Erkən davamlı artım METİONİN BIOSİNTEZİ
Aralıq səviyyəsini azaldın Erkən davamlı artım POLİamin biosintezi
Orta və gec azaldın Erkən davamlı artım TRYPTOFAN BIOSİNTEZİ
Orta və gec azaldın Erkən davamlı artım TİROSİN BIOSİNTEZİ
Ara keçidi azaldın Erkən davamlı artım ARGİNİN biosintezi
Gec azaldın Erkən davamlı artım Sistein biosintezi
Ara keçidi artırın Erkən davamlı U formasını artırın TREhaloz biosintezi
Ara keçidi artırın Orta davamlı artırın RAFFİNOZ BİOSİNTEZİ
Əhəmiyyətli dəyişiklik yoxdur Orta davamlı artırın ASPARAGİN BIOSİNTEZİ
Əhəmiyyətli dəyişiklik yoxdur Orta davamlı artırın QLUTAMAT BIOSİNTEZİ
Erkən davamlı azalma NA QLUTAMAT DEQRADASYASI
Erkən və orta səviyyədə azaldın Orta davamlı artırın FENİLPROPANOİD YOLU
Orta davamlı artırın Aralıq keçidi 24 saat artırın GABA ŞUNT
Aralıq səviyyəsini azaldın Ara keçidi azaldın Aspartat biosintezi
  • Erkən artım/azalma İlk statistik əhəmiyyətli cavab ya 1 və ya 4 saatda baş verdi. Aralıq artım/azalma İlk statistik əhəmiyyətli cavab 12 və ya 24 saatda baş verdi. Gec artım/azalma İlk statistik əhəmiyyətli cavab 48 və ya 96 saatda baş verdi.
  • a Hər bir yol ilə əlaqəli transkript bolluğunda dəyişiklikləri göstərən genlərin siyahısı Cədvəl S2-də tapıla bilər. b Gündəlik tənzimləmə c mövcud deyil

Əsas komponent təhlili

Əsas komponent təhlili (PCA) nümunələri müəyyən etmək və verilənləri oxşarlıqları və fərqləri vurğulayan üsullarla ifadə etmək üsulu kimi çoxdəyişənli məlumatların mürəkkəbliyini azaltmaq üçün istifadə olunur. PCA-nın ümumi istifadəsi kompozit metabolit profillərinin bir bitki və ya toxumanın metabolik statusu üçün xarakterik ola biləcəyini nümayiş etdirməkdir: yəni xarakterik və bəlkə də diaqnostik "metabolik fenotipi" aşkar etmək (Fiehn). və b., 2000). Bənzər bir konsepsiya gen ifadə statusuna da tətbiq edilə bilər (məsələn, Scholz və b., 2005). Qlobal gen ifadə modellərində (bu tədqiqat) və əvvəllər dərc olunmuş işdən əldə edilmiş metabolit siqnal intensivliyi profili məlumatlarında eyni vaxtda dəyişiklikləri qiymətləndirmək üçün PCA-dan istifadə etdik ( Kaplan və b., 2004). Nəticələr göstərir ki, CA-nın 4 günlük kursu ərzində nə transkript, nə də metabolit nümunələri statik olmayıb, həm transkriptomun ifadə profilində, həm də qütb metabolit profilində davamlı dəyişikliyin göstəricisi olan mütərəqqi ardıcıllığa əməl edib (Şəkil 1).

Soyuq uyğunlaşma zamanı transkript və metabolit profillərinin paralel əsas komponent analizi (PCA). Hər bir nöqtə gen ifadəsi üçün üç eksperiment və metabolit profili üçün iki təcrübə vasitəsini təmsil edir. Transkript PCA bərk xətt ilə, metabolit PCA isə kəsik xətt ilə göstərilir. Müxtəlif vaxt nöqtələri (h ilə) qrafikdə göstərilmişdir. Bu analiz üçün istifadə olunan metabolit məlumatları əvvəllər dərc edilmiş məlumat dəstindən əldə edilmişdir (Kaplan və b., 2004 ).

Amin turşularının mübadiləsi

Zülal amin turşularının əksəriyyətinin siqnal səviyyələri CA-nın müddəti ərzində artdı, amin turşusu biosintezində iştirak edən transkript siqnal səviyyələri artdı, dəyişmədi və ya azaldı (Cədvəl 1). Amin turşusu biosintetik yollarının ümumi təşkilinin təsviri Şəkil 2-də göstərilmişdir. 3-fosfogliseratdan (Ser, OCA zamanı -asetilserin, Cys), fosfoenolpiruvat (Phe, Trp), piruvat (Leu, Val), oksaloasetat (Asn, Lys, Met, Thr, Ile) və α-ketoqlutarat (Glu, Pro, Gln, Arg) müşahidə edilmişdir ( Şəkil 2). Koordinat artımları üçün diqqətəlayiq istisnalar, CA müddəti ərzində sıfır zaman səviyyəsində dəyişməz qalan şikimat və Asp yolu aralıqları idi. Aydındır ki, aromatik amin turşularının əhəmiyyətli dərəcədə artması şikimatın sabit səviyyələrinin artmasından asılı deyildi.

Amin turşusu biosintetik ailələri kontekstində amin turşusu sabit vəziyyət siqnal səviyyələrində dəyişiklik. Hər bir metabolit qutusunun altındakı qiymətlər 1, 24, 48 və 96 saatlıq soyuğa alışma zamanı sıfır vaxta nisbətən siqnal intensivliyinin qat dəyişməsini göstərir. Sınıq xətt fotonəfəsliyi göstərir (Sres) Gly və Ser biosintezi üçün yol. GABA, γ-aminobutirik turşu OAS, O-asetilserin 2PG, 2-fosfoqlikolat. Bu rəqəm Coruzzi və Last (2000)-də Şəkil 8.2-nin icazəsi ilə soyuğa uyğunlaşma zamanı siqnal intensivliyinin dinamikasını təsvir etmək üçün dəyişdirilmişdir.

Zülal amin turşuları arasında prolin çox diqqəti cəlb etdi, çünki o, soyuq stres də daxil olmaqla stres şəraitində möhkəm şəkildə yığılır (Gilmour). və b., 2000 Verbruggen və b., 1993 Wanner və Junttila, 1999 Xin and Browse, 1998 Yoshiba və b., 1995). Pro-ya aparan iki biosintetik yol var: biri glutamatdan (Şəkil 3), digəri isə ornitindən. Qlutamat yolunda bitkilərdə Pro biosintezində sürətə nəzarət edən mərhələni təmin edən əsas ferment Δ 1-pirrolin-5-karboksilat sintetazadır (P5CS), bu, ilk iki addımı (Şəkil 3a) qabaqcıl Glu-dan Δ 1 -pirrolin-5-karboksilata (P5C) kataliz edir. Bu ferment Pro tərəfindən əks əlaqə tənzimlənməsinə və gen ifadəsində işıq vasitəçiliyi dəyişikliklərinə məruz qalır (Hayashi və b., 1996 Hu və b., 1992). Arabidopsis iki ehtiva edir P5CS genlər (Strijov və b., 1997), hər ikisi ATH1 massivində tək zond dəsti kimi təmsil olunur. Transkript və metabolit profili burada sabit vəziyyət üçün mRNT siqnal səviyyələrini ortaya qoydu P5CS 12 saat 4°C-yə məruz qaldıqdan sonra nəzərəçarpacaq dərəcədə artdı və sonra 96 ​​saat soyuqdan sonra gərginlikdən əvvəlki səviyyələrə yaxınlaşdı (Şəkil 3b). Δ 1 -pirrolin-5-karboksilat reduktaza üçün transkript siqnal səviyyələri (P5CR) (At5 g14800) aşağı temperatura məruz qaldıqdan sonra ilk 24 saat ərzində dəyişməyib, sonra 48 və 96 saatdan sonra cüzi şəkildə 1,3 və 1,7 dəfə artıb (göstərilməyib). Müşahidə edilmiş kollektiv transkript siqnal səviyyələrindən fərqli olaraq, 4 ° C-yə məruz qaldıqdan 4 saat sonra Pro siqnal intensivliyində iki dəfədən çox statistik əhəmiyyətli artım baş verdi və bunun ardınca nəzarətin 130 qatına qədər davamlı və dramatik artım oldu. 96 saatdan sonra siqnal səviyyəsi (Şəkil 3b). Pro siqnalında çox erkən artım, eyni vaxt nöqtəsində (4 saatlıq nəzarət) götürülmüş təmizlənməmiş nəzarət bitkiləri Pro üçün oxşar siqnal səviyyəsini nümayiş etdirdiyinə görə aşağı temperaturla dəyişməmiş gündəlik dəyişkənliyin nəticəsidir (məlumatlar göstərilmir).

Soyuq uyğunlaşma (CA) zamanı kursu zamanı Pro metabolizmi üçün transkript və metabolit profilinin inteqrasiyası. (a) Prolin biosintezi və deqradasiyasına baxış. (b) Metabolit və transkript siqnal səviyyələri. Soldakı rəqəmlər CA-nın erkən mərhələlərində (0-12 saat) yığılan transkript və metabolit siqnal intensivliyindəki dəyişikliklərin genişlənməsidir. GSA, glutamik γ-semialdehid P5C, Δ 1 -pirrolin-5-karboksilat P5CDH, Δ 1 -pirrolin-5-karboksilatdehidrogenaz P5CR, Δ 1 -pirrolin-5-karboksilat reduktaza P5CS, Δ 1 -pirrolin-5-karboksilatdehidrogenaz, P5-karboksilatdehidrogenaz. Metabolit məlumatları mətndə təsvir olunduğu kimi əldə edilmişdir.

Pro deqradasiyası zamanı prolin dehidrogenaz (PDH) Pro-nun P5C-yə (Hayashi) qaranlıqla tənzimlənən çevrilməsini katalizləyir. və b., 1996) və Δ 1 -pirrolin-5-karboksilatdehidrogenaz (P5CDH) P5C-dən Glu istehsal edir (Şəkil 3). İlkin azalmadan sonra, üçün transkript siqnal səviyyələri PDH (At3 g30775) işıq dövründə (Şəkil 3) davamlı olaraq 96 saat CA-dan sonra 4,5 dəfə artdı, halbuki transkript siqnal səviyyələri üçün P5CDH (At5g62530) səviyyələr bir qədər artdıqda 48 və 96 saatdan sonra CA tərəfindən dəyişmədi. Birlikdə götürdükdə aydın olur ki, CA zamanı transkript bolluğunun modulyasiyası Pro səviyyələrində dinamikanı izah etmək üçün kifayət deyil. Enzimatik aktivliyin modulyasiyası da gen ifadəsində dəyişikliklərlə inteqrasiya edən həyati tənzimləmə prosesi olmalıdır.

GABA şunt

GABA, stress siqnalı reaksiyalarında rol oynaması təklif edilən məlum kriyoprotektiv xüsusiyyətlərə malik dörd karbonlu amin tərkibli metabolitdir (Bouche və Fromm, 2004). GABA sitozolik qlutamat dekarboksilaza (GAD) tərəfindən Glu amin turşusunun geri dönməz dekarboksilləşməsi ilə sintez olunur ( Shelp və b., 1999 Şəkil 4a). Onun deqradasiyası daha sonra iki mitoxondrial fermentin fəaliyyəti ilə əlaqələndirilir: GABA və süksinik semialdehid (SSA) arasında geri dönən reaksiyanı kataliz edən GABA transaminazı (GABA-T) və geri dönməz şəkildə suksinik semialdehid dehidrogenaz (SSADH) S. Bouche və b., 2003 ) (Şəkil 4a). İki üçün transkript siqnal səviyyələrində artır GAD genlər 12 saat CA ilə aydın oldu və 24 saat ərzində zirvəyə çatan GABA siqnal intensivliyindəki artımdan əvvəl oldu, beləliklə xarakterik bir transkript bolluğu ilə tənzimlənən cavab nümayiş etdirdi (Şəkil 4b).

Soyuq uyğunlaşma zamanı kursu zamanı GABA metabolizması üçün transkript və metabolit profilinin inteqrasiyası. (a) GABA şuntuna ümumi baxış. (b) Metabolit və transkript siqnal səviyyələri. GABA, γ-aminobutirik turşu GABA-T, GABA transaminaza GAD, qlutamat dekarboksilaza GHB, 4-hidroksibutirik turşu SSA, süksinik yarımaldehid SSADH, SSA dehidrogenaz SSR, süksinik semialdehid reduktaza. Metabolit məlumatları mətndə təsvir olunduğu kimi əldə edilmişdir.

GABA katabolizminə gəldikdə, biz bunu tapdıq GABA-T transkript siqnal səviyyələri CA nəticəsində dəyişmədi, lakin bu SSADH transkript siqnal səviyyələri 24 saatdan sonra zirvəyə çatdı və beləliklə, 48 saat ərzində müşahidə olunan GABA məzmununda aşağıdakı azalmadan əvvəl oldu (Şəkil 4b). Süksinik semialdehid, sitozolik süksinik semialdehid reduktazın (SSR) geri dönən təsiri ilə də 4-hidroksibutarata (GHB) qədər azalda bilər. GHB, GABA-nın yüksəlişi və enişinə uyğun olaraq soyuq iqlimə malik bitkilərdə aşkar edilmişdir, lakin transkript siqnal səviyyələri üçün SSR CA zamanı ümumilikdə bir qədər aşağı tənzimləndi (göstərilmir). Buna görə də, transkript və metabolit profili göstərir ki, 24 saatda GABA məzmununun keçici artımı koordinat artımı ilə sıx bağlıdır. GADSSADH CA zamanı transkript səviyyələri.

Saxaroza mübadiləsi

Saxaroza sintezi üçün prekursorlar Glc-1-P, Glc-6-P və Fru-6-P və şəkər nukleotidi UDPGlc-dən ibarət heksoza fosfat hovuzundan əldə edilir (Şəkil 5a). Üç heksoz fosfat fosfoqlükomutaz və Glc-6-P izomeraz tərəfindən nisbi sabit vəziyyət balansında saxlanılır (Dennis və Blakeley, 2000). Aşağı temperatura keçdikdə, Glc-6-P və Fru-6-P siqnal səviyyələri 12 saata qədər sürətlə hiperbolik olaraq artdı və sonra CA müddəti ərzində yüksək olaraq qaldı (Şəkil 5b). Fosfoqlükutaza və Glc-6-P izomerazanın kütləvi fəaliyyət funksiyalarına uyğun olaraq, onların müvafiq transkript siqnal səviyyələri 96 saatlıq CA ərzində heç bir diqqətəlayiq dəyişiklik göstərməmişdir (məlumatlar göstərilmir). Bu fermentlər ekvilibrator rolunu oynayır və beləliklə, aşağı temperaturda müalicə zamanı Glc-6-P və Fru-6-P səviyyələrinin sıx paralelliyini nəzərə alır. Aşağı temperatura keçdikdə, Fru-6-P siqnal səviyyələri Glc-6-P-dən bir qədər yüksək olaraq qaldı. Bununla belə, Glc-6-P izomerazanın fəaliyyəti Fru-6-P-dən daha çox Glc-6-P səviyyələrinə üstünlük verməlidir.

Heksoza fosfatların transkript və metabolit profilinin inteqrasiyası və saxaroza sintezi soyuq uyğunlaşma (CA) zamanı kursu. (a) Heksoza-fosfat və saxaroza sintezinin qısa icmalı. (b) Metabolit və transkript siqnal səviyyələri. Soldakı rəqəmlər CA-nın erkən mərhələlərində (0-12 saat) yığılmış transkript və metabolit səviyyələri üçün dəyişikliklərin genişlənməsidir. Fru, fruktoza FK, fruktokinaz Glc, qlükoza HEX, heksokinaza SPP, saxaroza fosfat fosfataz SPS, saxaroza fosfat sintaza SS, saxaroza sintaza Suc, saxaroza UDP-GlcPP UDP-qlükoza ilaza. Metabolit məlumatları mətndə təsvir olunduğu kimi əldə edilmişdir.

Heksoz fosfat hovuzunun prekursorları nişasta və/yaxud saxaroza parçalanması nəticəsində əmələ gələn sərbəst heksozları fosforlaşdırmaqla qlükoneogenez prosesindən yarana bilər (Şəkil 5a). Heksokinaza (HEX) və fruktokinaz (FK) fermentləri müvafiq olaraq sərbəst Glc və Fru-nun fosforlaşmasını katalizləyir (Şəkil 5a). Orta dərəcədə artım HEX CA-nın 96 saatlıq dövründə heksoz fosfat artımlarına paralel olan transkript siqnal səviyyələri aşkar edilmişdir (Şəkil 5b). Bunun əksinə olaraq, transkript üçün siqnal səviyyələri FK 4 saat soyuq şokla kəskin şəkildə artdı və sonra azalmadan əvvəl 24 saata qədər artmağa davam etdi (Şəkil 5b). Güclü induksiyasının kinetikası FK Fru-6-P səviyyələrinin yüksəlməsi ilə əlaqədar olaraq, qlikolitik və/və ya qlükoneogen proseslərə əlavə olaraq, FK-nın Fru-6-P-nin tarazlıq hovuzunun artmasına kömək edən başqa bir biosintetik mənbə təmin edə biləcəyini göstərir.

Saxaroza fosfat sintaza (SPS) UDP-Glc və Fru-6-nı Suc-6-P hasil etmək üçün çevirərək saxaroza sintezini katalizləyir və bu reaksiyadan sonra sukroz fosfat fosfatazanın (SPP) fəaliyyəti davam edir, bu da sukrozdan fosfat qrupunu çıxarır. Suc və qeyri-üzvi fosfat istehsal etmək üçün 6-P (Şəkil 5a). Bunu tapdıq SPS transkript siqnal səviyyələri CA-nın 12 saatında artdı və zirvəyə çatdı və daha sonra aşağı temperatura məruz qalmadan əvvəl mövcud olan səviyyələrdən hələ də xeyli yuxarı səviyyələrə endi (Şəkil 5b). üçün transkript siqnal səviyyələri SPP CA zamanı dəyişməyib (məlumatlar göstərilmir). Saxaroza siqnal səviyyələri soyuq şoka məruz qaldıqdan sonra 1 saat ərzində dərhal artdı və 48 saata qədər artmağa davam etdi və sonra 96 ​​saatda azaldı (Şəkil 5b). 4 saatlıq CA (işıq dövrünə 6 saat) sonra saxaroza siqnal səviyyəsinin üçqat artmasının fotosintetik şəkildə idarə olunan gündəlik dəyişiklik olması ehtimalını istisna etmək üçün saxaroza siqnal səviyyələri nəzarət bitkilərində eyni vaxtda, lakin məruz qalmadan ölçüldü. soyuq temperaturlara. Nəzarət bitkilərində saxaroza tərkibində heç bir dəyişiklik tapmadıq (məlumatlar göstərilmir). Bu nəticələr CA-ya cavab olaraq saxaroza siqnal səviyyələrində erkən artımın müşahidə olunan artımdan əvvəl olduğunu göstərir SPSSPP transkript siqnal səviyyələri. Buna görə də, saxarozada ilkin artım transkript bolluğundan asılı deyildi.

CA zamanı saxaroza tərkibindəki artımın onun istifadəsinin və deqradasiyasının azalmasının nəticəsi ola biləcəyini araşdırmaq üçün invertazlar və saxaroza sintazaları (SS) üçün transkript siqnal səviyyələri qiymətləndirilmişdir. Müəyyən edilmişdir ki, bir neçə invertazı kodlayan transkript siqnal səviyyələri artmış, digər invertazların səviyyəsi isə azalmışdır. Eynilə, ən çox transkript siqnal səviyyələri SS genlər CA-dan təsirlənmədi və yalnız bir genin transkript siqnalı keçici artım göstərdi (məlumatlar göstərilmir).

Rafinoz mübadiləsi

Raffinoza qalaktoza, qlükoza və fruktoza vahidlərindən ibarət trisaxariddir və bitkilərin abiotik stress reaksiyalarında əsas uyğun həlledici kimi fəaliyyət göstərir (Taji və b., 2002). Rafinozun bilavasitə prekursorları qalaktinol və saxarozadır və onun biosintez sürəti onların mövcudluğundan asılıdır (Şəkil 6a). Qalaktinol sintez olunur myo-inositol və UDP-qalaktoza qalaktinol sintaza ilə, sonra isə qalaktinol saxaroza ilə reaksiyaya girərək rafinoza və myo- rafinoz sintaza ilə kataliz olunan inositol ( Taji və b., 2002 Şəkil 6a). Həqiqətən də, Şəkil 5(b) və 6(b)-də göründüyü kimi, substrat-məhsul əlaqələrindən gözlənildiyi kimi, saxaroza və qalaktinol səviyyələrindəki artımlar rafinozun tərkibindəki artımdan açıq şəkildə əvvəl baş verir. Qalaktinol sintaza və rafinoz sintaza genləri üçün transkript siqnal səviyyələrinin CA zamanı artdığını və koordinasiyalı şəkildə tənzimləndiyini gördük. Hər iki ferment üçün transkript siqnal səviyyələri 4 saat soyuq şokdan sonra artdı, 12 saatda sinxron pik həddə çatdı və sonra 96 ​​saatda tədricən aşağı stabil vəziyyət səviyyələrinə endi (Şəkil 6b). Ola bilsin ki, nəticədə və ya aşağı temperaturun maddələr mübadiləsinə təsirinin üstünlüyü kimi, həm qalaktinol sintaza, həm də rafinoz sintazanı kodlayan genlər üçün transkript siqnal səviyyələrindəki artımların qalaktinol və rafinozun sonrakı artımlarından açıq şəkildə əvvəl olduğunu görmək olar. yalnız müvafiq olaraq 12 və 24 saatda aydınlaşan siqnallar, transkript bolluğu ilə tənzimlənən prosesdən proqnozlaşdırıldığı kimidir (Şəkil 6b).

Soyuq uyğunlaşma (CA) zamanı kursu zamanı rafinoz biosintetik komponentlərinin transkript və metabolit profilinin inteqrasiyası. (a) Rafinozun biosintezi. (b) Metabolit və gen ifadəsinin vaxt kursu. Soldakı rəqəmlər CA-nın erkən mərhələlərində (0-12 saat) yığılmış transkript və metabolit səviyyələrindəki dəyişikliklərin genişlənməsidir. (c) Rafinozun deqradasiyası məhsulları. GS, qalaktinol sintaza RS, rafinoz sintaza. Metabolit məlumatları mətndə təsvir olunduğu kimi əldə edilmişdir.

Rafinozun parçalanması ya fruktoza və mellibioza, ya da saxaroza və qalaktoza istehsalı ilə nəticələnir (Şəkil 6c). Mellibioz siqnalının intensivliyi CA-nın 96 saatına (1,3 qat) qədər əhəmiyyətli dərəcədə dəyişmədi və rafinoz siqnalları nəzarətə yaxın səviyyələrə qayıtdıqda (2,6 dəfə) 24 saat deacclimation (1,4 dəfə) sonra da onun səviyyəsi eyni qaldı. (Kaplan və b., 2004). Eynilə, digər alternativ deqradasiya məhsulu olan saxaroza da rafinozun sürətlə metabolizə edildiyi zaman 24 saat deaklimasiyadan sonra azalmışdır (Kaplan). və b., 2004 ).

Karbohidrat reaksiyalarının zaman kursu və dinamikası

Bir çox tədqiqatlar göstərmişdir ki, Ərəbidopsis yarpaqlarında həll olunan şəkərlərin miqdarı CA zamanı kəskin şəkildə artır (Cook və b., 2004 Gilmour və b., 2000 Kaplan və b., 2004 Rohde və b., 2004 Wanner və Junttila, 1999). Cari tədqiqatda, CA zamanı kursu zamanı metabolit profilinin təhlilinə əsaslanaraq, karbohidrat səviyyələrinin artmasına səbəb olan sistem dinamikası və hadisələrin ardıcıllığı araşdırıldı. Şəkil 7 CA zamanı şəkərlər üçün siqnal reaksiyalarının vaxt kursunu göstərir və interpolyasiya yolu ilə maksimum və ya minimum dəyərdə 50%-ə çatdığı zaman nöqtəsini hesablamaqla hər bir metabolit üçün siqnal dəyərinin yüksəlməsi və ya azalmasının nisbi vaxtını təyin edir.T0,5[MAX]). Görünür ki, CA zamanı artım göstərən ilk karbohidratlar nişastanın β-amilaza aktivliyi ilə parçalanmasının birbaşa parçalanması məhsulları olan maltoza və maltotrioza olmuşdur (Şəkil 7b). Maltotrioza siqnal artımı maltozadan sonra baş verdi və buna görə də bu, maltotrioza və qlükoza ilə maltozun qeyri-mütənasibliyinin törəməsi və ya nəticəsi ola bilər. İzomaltoza və maltitol disakaridlərinin siqnal səviyyələri az dəyişiklik göstərir və nişastanın parçalanmasının əsas yığılmış məhsulları kimi görünmür. Onların siqnal səviyyələri maltoza və maltotriozadan daha gec yüksəlir və maltoza və maltotriozun yüksək siqnal səviyyələri ilə əlaqəli görünür (Şəkil 7a). Nişastanın parçalanması məhsulları üçün bu artımlar sinxron şəkildə Glc-6-P, Fru-6-P, Gal-6-P və Man-6-P heksoz fosfatlarının yığılması ilə müşayiət olundu (Şəkil 7b). Gal-6-P və Man-6-P-nin siqnal səviyyələri sürətlə yüksəlir, bir-biri ilə heyrətamiz paralellik nümayiş etdirir, sonra iki dövrəli salınan gərginlikdən əvvəlki səviyyələrə qayıdır (Şəkil 7b). Glc-6-P və Fru-6-P cavabları bir-birinə paralelləşdi və bəlkə də aşağı temperaturda metabolik zərurət üçün xarakterik olan yeni yüksəlmiş sabit vəziyyət siqnal səviyyəsinə doğru hiperbolik bir nümunə nümayiş etdirdi. Heksoza fosfatlar saxaroza biosintezi üçün bilavasitə prekursorlardır və həqiqətən də onların artımının kinetik cəhətdən yaxşı uyğunlaşdığını görmək olar. T0,5[MAX] saxaroza (Şəkil 7c).

Soyuqlara uyğunlaşma zamanı karbohidratların yığılmasının vaxt kursu. (a) nişastanın parçalanması məhsulları, (b) heksoza fosfatlar, (c) saxaroza və sərbəst heksozlar və (d) rafinoz metabolitləri. T0,5[MAX] zaman-nöqtə təxminləri fərdi metabolit vaxt kursu profillərinin interpolyasiyasından əldə edilir, burada hər bir metabolitin zaman kursu ərzində maksimum (*minimum) konsentrasiyasının 50%-nə çatdığı vaxt nöqtələri hesablanır. Kölgəli sahə stresdən əvvəlki sabit vəziyyət səviyyələrini və aşağısını göstərir. Səviyyələri azalan metabolitlər üçün T0,5[DƏQQƏ] ulduz işarəsi ilə göstərilir.

Saxaroza siqnalının intensivliyi təxmin edilən CA-nın 1-4 saatında artdı T0,5[MAX] təxminən 1 saat. Bu artımdan sonra onun parçalanma məhsulları Glc və Fru (Şəkil. 5b, 7c) ilə siqnal artımları müşahidə edildi. T0,5[MAX] təxminən 1 saat dəyərlər. Təxminən 1:1 hiperbolik nümunəni nəzərə alaraq, Glc və Fru-da müşahidə edilən artımlar ümumi bir mənbə təklif edir və çox güman ki, saxarozanın invertaz tərəfindən parçalanmasını əks etdirir. İnvertazları kodlayan genlər üçün transkript siqnal səviyyələri sabit qaldı və CA-dan təsirlənmədi (məlumatlar göstərilmir). Buna görə də, CA zamanı substratın (saxaroza) və bölmənin artan səviyyəsi Glc və Fru məhsullarında paralel və hiperbolik artımlarla nəticələnən hərəkətverici amil olacaqdır. Bunun əksinə olaraq, galactinol sintaza üçün transkript siqnal səviyyələrində müşahidə olunan artımdan sonra (Şəkil 6b) nisbətən sonrakı mərhələlərdə yığılan qalaktinol (T0,5[MAX] = 8-9 h) CA zamanı (Şəkil 7d). Nəhayət, saxarozada əvvəlki artımla birlikdə qalaktinolun birgə yığılması CA-nın ardıcıl sonrakı mərhələlərində rafinozun möhkəm biosintezinə və yığılmasına kömək edir.T0,5[MAX] = 17-18 h Şəkil 7d). Beləliklə, ümumilikdə təxmin edilir T0,5[MAX] dəyərlər Şəkil 7-də ümumiləşdirilmiş CA zamanı karbohidratların aşkar yığılması ilə nəticələnən hadisələrin inteqrasiya olunmuş metabolik ardıcıllığını təklif edir.


Tarixi quraqlıq torpağın qurudulması və yenidən islanması zamanı mikrob populyasiyasının dinamikasına və aktivliyinə təsir edir

Dəyişən yağıntı rejimləri tərəfindən dəstəklənən quraqlığa məruz qalma tarixi quraqlığa dözümlü torpaq mikrob taksonlarını seçə bilər, lakin torpağın quruması və yenidən nəmlənməsinin selektiv stressləri vasitəsilə mikrob populyasiyalarının yaşaması və ölməsi mexanizmləri yaxşı başa düşülməyib. 15 illik çöl quraqlığı təcrübəsindən ("Ətraf mühit" sahə nəzarətinə qarşı uzun quru dövrlərlə dəyişilmiş yağış tarixi) toplanmış torpaqları selektiv populyasiyanın sağ qalması, ölüm, və ya zülal sintezi potensialının saxlanması və dəyişən torpaq su şəraiti vasitəsilə mikrob tənəffüsü sahə quraqlığı irsindən təsirlənmişdir. 16S rRNA və 16S rRNA geninin Illumina MiSeq ardıcıllığı ilə ölçülən mikrob icmasının tərkibi laboratoriya qurutma/yenidən nəm və çöl quraqlığı müalicəsi ilə dəyişdi. Ətraf mühitdə olan torpaqlarda, yenidən nəmlənmə zamanı azalmış OTU bolluğunun daha yüksək nisbəti (ölüm göstəricisi), dəyişdirilmiş torpaqlarda isə qurutma/yenidən bolluğu dəyişməyən (sağ qalma göstəricisi) sabit OTU populyasiyalarının daha çox hissəsi var idi. yaş. Dəyişdirilmiş torpaqlarda qurutma zamanı rRNA:rRNA genlərinin daha aşağı nisbəti (aşağı zülal sintez potensialı), daha yüksək çəkili orta rRNT operon sayı (potensial artım sürəti və r-seçilməsi) olmuşdur ki, bu da Firmicutes (sifariş Bacillales) və aşağı orta mikrob tənəffüs dərəcələri. Bu məlumatlar göstərir ki, daha zəif tarixi quraqlıq irsi olan torpaqlar daha yüksək karbon itkisi potensialı ilə eyni vaxtda qısa müddətli qurutma və yenidən nəmlənmədən sonra OTU səviyyələrində mikrob su-stress ölümünün və diferensial sağ qalma və ölümün daha yüksək yayılmasını nümayiş etdirir. Bu iş uzun sürən quraqlıq şəraitindən yaranan torpaq mikrob dəyişikliklərinin mexanizmləri və nəticələri haqqında yeni fikirlər təqdim edir.

Bu, abunə məzmununun, qurumunuz vasitəsilə girişin önizləməsidir.


Xüsusi Soyuducular -80 °C (-112 °F)

Bu olduqca xoşagəlməz mənzərə mənim çiçək xəstəliyinə qarşı peyvəndimdən qolumdakı çapıqdır. Əgər gəncsinizsə, yəqin ki, bunlardan birinə sahib deyilsiniz, çünki bütün populyasiyalar arasında bu kimi peyvəndlər 1980-ci ilə qədər bütün dünyada çiçək xəstəliyini uğurla aradan qaldırdı.

Bu xüsusi vaksin istifadəyə hazır olana qədər -80 Selsi temperaturunda soyuducuda saxlanmalıdır. Bu, hər hansı bir kütləvi peyvənd proqramı üçün əhəmiyyətli bir problem yaradır, çünki -80 dərəcə dondurucular istehsal baxımından bitmiş bir müqavilə olsa da, cəmiyyət səhiyyəsində ümumiyyətlə tapılmır. Laboratoriyalarda və böyük xəstəxanalarda bunlar ola bilər, lakin biz dedik ki, hətta inkişaf etmiş bir ölkədə belə peyvəndi tətbiq etmək tapşırığı veriləcək ümumi praktikantların indiyədək peyvəndlərə çox az ehtiyacı olub. Əgər bu, əhəmiyyətli resursları olan bir yerdə problem yaradırsa, o zaman dünyanın daha az varlı bölgələrində əhəmiyyətli dərəcədə böyüyür, çünki qlobal pandemiya ilə effektiv mübarizə aparmaq üçün qalan infeksiya anbarının qarşısını almaq üçün bütün planetin peyvənd edilməsi vacibdir.

Mən bioloq deyiləm, amma hər məktəb biologiya sinfi uşaqlar üçün peyvəndin əsaslarını öyrədir. 18-ci əsrin sonlarında doktor Edvard Cenner çiçək xəstəliyinə qarşı immunitet vermək üçün bir oğlan uşağı uğurla inək çiçəyi virusu ilə aşıladı və bundan immunologiya elmi inkişaf etdi. Çox güman ki, biz hamımız orta məktəb biologiyamızın hədəflə zəifləmiş və ya daha az güclü əlaqələr kimi sadələşdirdiyi oxşar peyvəndləri alacağıq və keçmiş qatillərin indi xalq yaddaşına düşməsi onların uğurlarının sübutudur.

Bunlar mənim həkimlərimin və onların Oksfordşirdəki komandasının min nəfər tərəfindən idarə etdiyi zərbələrdir və onlar yalnız nisbətən adi soyuducudan istifadə edərək, onlarla nəsillər britaniyalı uşaqları qoruya bilərlər. Pfizer/BioNTech peyvəndi haqqında bu qədər xüsusi olan nədir? Cavab onun əməliyyat metodundadır, bizi patogenə məruz qoymaq əvəzinə, o, RNT peyvəndi adlanır. Onun tərkibində virusun genetik materialının bir fraqmenti var, bir dəfə tətbiq edildikdən sonra hüceyrələrimizə daxil olur və onların koronavirusa qarşı immun reaksiyalarını tetikler. Bizə deyilən problem RNT-nin kövrəkliyindədir və onun pisləşməsinin qarşısını almaq üçün əlavə soyuq soyuducu lazımdır.


Çaşdırıcı təsirlər

Tətbiqi nöqteyi-nəzərdən FTR protokolları, şübhəsiz ki, kiçik miqyaslı obyektlərdə mühüm həşəratların rəf ömrünü uzatmaq üçün faydalıdır. Bununla belə, onun sənaye həşərat istehsalında tətbiqi texniki çətinliklərlə üzləşə bilər. Kiçik həcmli şkafların temperaturunu qısa müddət ərzində tez dəyişmək nisbətən asan olsa da, böyük miqyaslı yetişdirmə qurğularının (məsələn, otaq ölçüsü) temperaturunda təkrarlanan, qısa dəyişikliklər texniki cəhətdən daha çətin və enerji sərf edən ola bilər. Bundan əlavə, temperaturun dəyişməsi də nisbi rütubətə (RH) birbaşa təsir göstərir. Havanın rütubətini dəyişdirmədən isti epizodlardan sonra temperatur azaldıqda, RH nəticədə 100% -ə çatacaq və su buxarı kondensasiya yaratmağa başlayacaq. RH-dəki dəyişikliklərin həşərat fiziologiyasına təsir etdiyi yaxşı bilinir (məsələn, Boardman və başqaları, 2013) və FTR ilə müşayiət olunan RH dəyişikliyi həşəratların soyuq sağ qalmasına birbaşa təsir göstərə bilər. Həqiqətən, yüksək rütubət soyuqların sağ qalmasına kömək edə bilər Drosophila bəzi temperaturlarda (Kobey və Montooth, 2013), lakin bu həmişə doğru deyil (Boardman et al., 2013 Enriquez and Colinet, 2017). FTR təcrübələri hər birinin təsirini ayırmaq üçün həm sabit, həm də dəyişən RH səviyyələrində tədqiq edilməlidir. İsti fasilələrlə bağlı FTR altında yetişdirmə qablarının səthində kondensasiya oluna bilən sərbəst su həm də mikrob və göbələklərin inkişafı üçün yüksək şərait yarada bilər (Sikorowski və Lawrence, 1994). FTR-nin həşərat koloniyalarının çirklənməsinə üstünlük verib-verməməsi və immun reaksiyaların mümkün dəyəri hələ qiymətləndirilməmişdir. Nəhayət, qidalanma mərhələləri qida təchizatı ilə FTR altında saxlandıqda, həşəratlar isti epizodlar zamanı qida qəbul edə bilər, halbuki CLT-də saxlanılan böcəklər bütün vaxt ərzində ac qalırlar (Koštál et al., 2016). Buna görə də, bəzi hallarda FTR-nin müsbət təsirləri özlüyündə temperaturdan başqa amillərdən də yarana bilər.


Lipid Nano- və Mikrohissəciklər: Patentlə Əlaqədar Tədqiqatlara Baxış

Lipidlərin biouyğunluğu və çox yönlü xüsusiyyətləri son iki onillikdə bərk və maye lipidlərdən matrislər kimi istifadə edilərək kürələr və kapsullar şəklində bir çox nano və mikrohissəcikli lipid formulalarının hazırlanmasına səbəb olmuşdur. Bu icmalda lipid nano- və mikrohissəciklərin əsas növləri, habelə onların hazırlanma üsulları, tətbiq marşrutları və əsas tətbiq sahələri təsvir edilmişdir. O, həmçinin təqdim edilmiş əsas patentlərin sintetik icmalını təqdim edəcək. Lipid nanohissəcikləri sahəsində patentləşdirmə fəaliyyəti 25 ildir davam edir və nanotexnologiyanın xəstəliklərin müalicəsi üçün innovativ vasitə kimi istifadəsinin artması və tam biouyğun vasitəyə potensial kommersiya marağı ilə şərtlənir. Əvvəlcə fəaliyyət əsasən texnoloji aspektlərə yönəldilib, daha sonra diqqət daha çox istifadə və kompozisiyaya keçdi. İnkişaf etməkdə olan ölkələr tərəfindən də artan sayda patentlər verilir. Lakin burada ən mühüm məhdudiyyət bazara çıxarılan məhsulların sayının az olmasıdır ki, bu da əsasən tənzimləyici məhdudiyyətlər və iqtisadi səbəblərdən qaynaqlanır.

1. Giriş

Lipid nano- və mikrohissəciklər polimer nanohissəciklərə nisbətən bir çox üstünlüklər nümayiş etdirir və dərman və aktiv maddələrin çatdırılmasında geniş istifadə olunduğunu görürlər. Onlar polimer nanohissəciklərə nisbətən daha yaxşı biouyğunluq nümayiş etdirirlər, çünki onlar fizioloji analoqlarına bənzər lipidlərdən ibarətdir [1].

Xüsusilə, lipid nanohissəcikləri çox yönlü çatdırılma vasitəsidir. Müvafiq olaraq fosfolipidlərdən və amfipatik lipidlərdən ibarət olan vezikulyar nanostrukturlar olan və uzun və təhlükəsiz istifadə tarixinə malik olan liposomlar və niosomlarla yanaşı, son iki onillikdə matrislər kimi bərk və maye lipidlərdən istifadə edilməklə çoxlu nanohissəcikli formulaların işlənib hazırlanması müşahidə edilmişdir. Kinetik sabitlik və sərt morfologiya lipid nanohissəciklərinin vezikulyar lipid kolloid sistemləri (liposomlar, niosomlar və s.) üzərində malik olduğu əsas üstünlüklərdir. Lipid əsaslı nanohissəciklər digər geniş yayılmış əczaçılıq və kosmetik daşıyıcıların, emulsiyaların məhdudiyyətlərini dəf edir, çünki onlar dayanıqlığı və yükləmə qabiliyyətini artırır və saxlama zamanı dərmanın/aktiv molekulun xaric edilməsinin qarşısını alır. Bununla belə, nanoemulsiya sistemləri nanohissəciklərin yaradılması üçün şablon kimi qəbul edilə bilər. Analoji olaraq, lipid nanohissəcikləri tez-tez termodinamik cəhətdən sabit sistemlər olan mikroemulsiyalardan hazırlanır [2]. Nanohissəcikləri iki əsas ailəyə bölmək olar: hissəcik boyunca homojen bir quruluşa malik olan nanosferlər və tipik nüvə-qabıq quruluşu nümayiş etdirən nanokapsullar. Lipid nanohissəciklərinin ən mühüm növləri Şəkil 1-də göstərilmişdir.

1.1. SLN

Bərk lipid nanohissəcikləri (SLN) nanosferlərin ən məşhur növüdür. SLN, foton korrelyasiya spektroskopiyasının orta diametri təxminən 50 ilə 1000 nm arasında olan bərk lipidlərdən ibarətdir [1]. Ümumi inqrediyentlərə bərk lipid(lər), səthi aktiv maddə(lər) və su daxildir. Lipid termini burada geniş mənada istifadə olunur və trigliseridləri (məsələn, tristearin), qismən qliseridləri, yağ turşularını (məsələn, stearin turşusu), steroidləri (məsələn, xolesterol) və mumları (məsələn, setil palmitat) əhatə edir. Lipid dispersiyalarını sabitləşdirmək üçün səthi aktiv maddələrin bütün siniflərindən (yük və molekulyar çəkiyə görə) istifadə edilmişdir [3]. SLN 1990-cı illərin əvvəllərində işlənib hazırlanmışdır və uzun müddətdir ki, perspektivli dərman daşıyıcı sistemlər hesab olunur, çünki onlar fiziki-kimyəvi cəhətdən sabitdirlər və asanlıqla iri sənaye miqyasında istehsal oluna bilirlər, eyni zamanda xammal və istehsal xərcləri nisbətən aşağıdır [1]. SLN istehsalı yalnız bərkimiş nanoemulsiya texnologiyalarına deyil, əsasən əsaslanır. Nanoemulsiya hazırlanmasında yüksək təzyiqli homogenləşdirmə (HPH), yüksək kəsmə homogenləşdirmə və ultrasəsləşdirmə istifadə olunur [4, 5].

1.2. NLC

Nanostrukturlu lipid daşıyıcıları (NLC) bərk və maye lipidlərin qarışığından ibarət bərk lipid nüvəsi ilə xarakterizə olunan lipid nanohissəcikləridir. Yaranan lipid hissəcik matrisi orijinal bərk lipidlə müqayisədə ərimə nöqtəsi depressiyasını göstərsə də, matris bədən temperaturunda hələ də bərkdir. İstehsal üsulundan və lipid qarışığının tərkibindən asılı olaraq müxtəlif növ NLC əldə edilir, qeyri-kamil, amorf və çox tipli olur (Şəkil 1). “Qüsursuz tipdə lipidlərin kristallaşması az miqdarda yağlar tərəfindən dəyişdirilir. Amorf tipdə lipid matrisi bərkdir, lakin kristal deyil (amorf vəziyyət) - buna xüsusi lipidləri, məsələn, hidroksiyoktakosanil hidroksisterat və izopropil miristatı qarışdırmaqla nail olmaq olar. Çoxlu tipdə bərk lipid matrisi kiçik yağ bölmələrini ehtiva edir. Bu növ qatı lipidi daha çox miqdarda yağla qarışdırmaqla əldə edilir. Əsas ideya ondan ibarətdir ki, lipid matrisinə müəyyən nanostruktur verməklə aktiv birləşmənin faydalı yükü artırılır və saxlama zamanı sıxılmış birləşmələrin xaric edilməsinin qarşısı alınır” [6]. NLC HPH tərəfindən istehsal edilə bilər və proses 30 ilə 80% arasında dəyişən bərk tərkibli lipid hissəciklərinin dispersiyalarını əldə etmək üçün dəyişdirilə bilər [7].

1.3. LDC

Lipid-dərman konjugatı (LDC) nanohissəcikləri hidrofilik dərmanlar üçün SLN və NLC-nin aşağı dərman yükləmə qabiliyyətini aradan qaldırmaq üçün hazırlanmışdır (Şəkil 1). Tipik bir prosesdə həll olunmayan dərman-lipid konjugatı ya duz əmələ gəlməsi (məsələn, yağ turşusu ilə) və ya kovalent birləşmə (məsələn, efirlər və ya efirlər) vasitəsilə hazırlanır. Alınan LDC daha sonra sulu səthi aktiv maddə məhlulunun köməyi ilə HPH istifadə edərək nanohissəciklərin formulasını yaratmaq üçün işlənir” [6, 8].

1.4. LNC

Lipid nanokapsulları (LNC) lipid nüvəsi qabığının nanostrukturlarının ən məşhur patentləşdirilmiş formasıdır. Onlar bərk lipidlərdən və emulsiyalaşdırıcı maddələrdən əmələ gələn xarici qabıqdan və yağlı nüvədən ibarətdir (Şəkil 1) [2]. Dərmanların bölünməyə meylli olduğu çoxsaylı yağlı bölmələri ehtiva edən bərk lipid matrisindən ibarət çox tipli NLC-dən fərqli olaraq, LNC nazik bərk örtüklə əhatə olunmuş yeganə yağlı nüvəyə malikdir (əsas qabıq quruluşu) .

İndi lipid mikrohissəciklərinə keçərək, ən məşhur növlər bərk lipid mikrohissəcikləridir (SLM).

1.5. SLM

“SLM SLN-ə ekvivalent tərkibə malikdir, lakin daha böyük hissəcik ölçüsünə (>1000 nm) malikdir, yəni onların tətbiq sahələri və idarəetmə marşrutları fərqli ola bilər” [6, 9]. Əslində, narkotik daşıyıcı sistemlər kimi əhəmiyyətli potensialına baxmayaraq, SLM SLN ilə müqayisədə hələ də əhəmiyyətli istifadə görməmişdir. Parenteral preparatların verilməsində onların istifadəsinə əsas məhdudiyyət onların i.v. ölçü məhdudiyyətlərinə görə idarəetmə. Bununla belə, onların ağciyər dərmanlarının çatdırılmasında istifadəsi ümidvericidir.

1.6. Patent Baxışı

Patent müraciətlərinin predmeti olan lipid hissəciklərinin əsas növlərinin xülasəsi Cədvəl 1-də göstərilmişdir. Yuxarıda göstərilən nanohissəcik növləri ilə yanaşı, polimer lipid hibrid nanohissəciklərinə (PLN) aid patentlər də daxil edilmişdir. PLN qarışıq lipid və polimer matrisindən ibarətdir ki, burada polimer ya nanohissəciklərin xüsusiyyətlərini yaxşılaşdırmaq və ya dərmanın birləşməsini asanlaşdırmaq üçün daxil edilir. Bundan əlavə, funksionallaşdırılmış və dəyişən formalı nanohissəcik sistemlərinə aid patentlər də sadalanır.

2. Hazırlanma üsulları

2.1. Lipid Nanohissəciklərin Hazırlanması Metodları

(a) İsti homogenləşdirmə. HPH 1950-ci illərdən bəri dəfələrlə sadə həlledicisiz texnika olduğunu sübut etmişdir. O/W parenteral emulsiyaların geniş miqyaslı istehsalı üçün yaxşı qurulmuşdur və əczaçılıq sənayesində mövcuddur. Bu yaxınlarda SLN, NLC və LDC istehsalında istifadə edilmişdir və bu nanohissəciklər üçün əsas üsuldur. Bununla belə, o, yüksək temperatur və təzyiqlər (kavitasiya qüvvələri) kimi bəzi kritik proses parametrlərini əhatə edir ki, bu da nəticədə yaranan məhsulda əhəmiyyətli termodinamik və mexaniki gərginliyə səbəb ola bilər. Bu səbəbdən və patentləşdirilmiş üsulları aradan qaldırmaq üçün alternativ və asan idarəolunan hazırlıq üsulları geniş araşdırmalara məruz qalmışdır [4, 6, 23].

(b) Mikroemulsiya Şablonları. SLN mikroemulsiya şablonlarından hazırlana bilər. Gasco və başqaları. [24] SLN hazırlanması üçün mikroemulsiya şablonundan istifadə edən ilk tədqiqatçılar olub “lipidlər ərimə nöqtəsindən yuxarı qızdırılır və eyni temperaturda qarışdırmaqla aydın O/W əmələ gətirmək üçün səthi aktiv maddələr və birgə səthi aktiv maddələr olan sulu faza əlavə edilir. mikroemulsiya” [6]. Çoxlu W/O/W də hazırlana bilər. Daha sonra nanohissəcikləri çökdürmək üçün mikroemulsiya sərin suda (2-10°C) seyreltilir.

Bir neçə il əvvəl stabil SLN istehsalı üçün mikroemulsiya əsaslı başqa bir üsul hazırlanmışdır [25]. Müəlliflər lipid fazası kimi emulsiyalaşdırıcı mumdan və sulu faza kimi polimer səthi aktiv maddə məhlulundan ibarət olan O/W mikroemulsiyasından başlayıblar və bu, ərimə nöqtəsinə uyğun olaraq 37-55°C temperaturda saxlanılır. emulsiya edən mum. SLN seyreltilmemiş O/W mikroemulsiyasını otaq temperaturunda qarışdırmaqla soyudmaqla əldə edilmişdir. “Bu ixtiranın üstünlüyü ondan ibarətdir ki, SLN bir addımlı prosesdə mikroemulsiya prekursorundan mülayim əməliyyat temperaturlarında sürətlə, təkrar istehsal oluna bilən və sərfəli qiymətə formalaşdırıla bilər və tək istehsal qabında, flakonda və ya konteynerdə saxlanıla bilər” [6].

(c) Solvent əsaslı üsullar. Həlledici toksikologiya məsələlərinin məhdudlaşdırıcı aspektlərindən asılı olmayaraq, müxtəlif növ lipid nanohissəciklərində sabitlik və bioavailability problemlərini təqdim edən molekulları əhatə edən bir vasitə kimi həlledici əsaslı üsullar təklif edilmişdir. “Solvent əsaslı metodların əsas üstünlüklərindən biri termohəssas dərmanların inkapsulyasiyası üçün faydalı ola bilən mülayim işləmə temperaturudur” [6]. Həlledicinin yerdəyişməsi bu üsullardan ən sadəsidir. Bu, lipidin su ilə qarışan üzvi həlledicidə (məsələn, etanol, aseton və izopropanol) həll edilməsinə və bu məhlulun qarışdırma altında şpris iynəsi ilə suya vurulmasına əsaslanır. Alternativ həlledici əsaslı üsullar emulsiya prekursoru ilə başlayır O/W və ya W/O/W emulsiyaları ya uçucu və ya qismən su ilə qarışan üzvi həlledicidən istifadə etməklə hazırlana bilər ki, bu da lipidi həll edir. Nanohissəciklər həlledicinin ya buxarlanma (həlledicinin buxarlanması üsulu) və ya su ilə seyreltilməsi (həlledicinin diffuziya üsulu) ilə çıxarılması zamanı əmələ gəlir [4, 22, 23].

(d) Koaservasiya metodu. Bu yaxınlarda yağ turşusu SLN-nin hazırlanması üçün həlledicisiz yeni üsul (koaservasiya adlanır) işlənib hazırlanmışdır. Bu texnika çox mürəkkəb avadanlıq və ya təhlükəli həlledicilərdən istifadə etmədən hətta termohəssas dərmanları daxil etməyə imkan verir. Buna görə də laboratoriya və sənaye tətbiqləri üçün ucuz bir üsuldur [26]. “Bu, müvafiq amfifil polimer stabilləşdirici agentin iştirakı ilə yağ turşusu natrium duzunun miselyar məhlulu ilə turşu məhlulu (koaservativ məhlul) arasında baş verən yavaş qarşılıqlı təsirə əsaslanır” [6]. Yağ turşusu nanohissəcikləri pH-ı aşağı salmaqla çökə bilər.

(e) Superkritik Maye Texnologiyası. Superkritik maye (SCF) texnologiyası, son illərdə nanohissəciklərin istehsalı üsulu kimi təmin etdiyi faydalara görə artan maraq səviyyəsinə malikdir. SCF vəziyyəti maddənin kritik təzyiqi və temperaturu üzərində əldə edilir, burada onun mayedə həll olması təzyiqdə nisbətən kiçik dəyişikliklərlə modullaşdırıla bilər. Karbon dioksid aşağı kritik nöqtəsi, 31°C və 74 bar, təhlükəsizliyi və aşağı qiymətinə görə ən çox istifadə edilən SCF-dir. SLN istehsalı üçün iki əsas SCF-əsaslı üsul işlənib hazırlanmışdır: SCF-nin emulsiyaların çıxarılması (SFEE) və qazla dəstəklənən ərimə atomlaşdırılması (GAMA).

SFEE-də lipid nanosuspenziyaları O/W emulsiyalarından üzvi həlledicinin SCF çıxarılması yolu ilə əldə edilir [27]. Superkritik CO-yə həlledicinin çıxarılması2 kompozit hissəciklər kimi həll olunan lipid/dərman materialının çökməsinə gətirib çıxarır. Bu texnikanın üstünlüklərindən biri superkritik CO-nun yüksək həlledici ekstraksiya səmərəliliyidir2, adi üsullarla müqayisədə, bu, həlledicinin tez və tamamilə çıxarılmasına və daha vahid hissəcik ölçüsü paylanmasına nail olmağa imkan verir (Şəkil 2).

GAMA metodunda “lipidlər termostatlı qarışdırma kamerasında (CM) əridilir və burada əridilir və superkritik CO ilə təmasda saxlanılır.2” [6]. Sonra, CM-nin altındakı bir klapan açılır, burada lipidlə doymuş qarışığı bir burun vasitəsilə məcbur edir. Qarışığın sürətli depressurizasiyası yüksək dərəcədə həddindən artıq doyma yaradır və nanosuspenziyalar vermək üçün toplama sistemi tərəfindən toplanan və burulğan və ultrasəs müalicəsi vasitəsilə suda səpələnən çökmə mikrohissəciklərinə gətirib çıxarır (Şəkil 3) [28]. Bu üsul həlledicisizdir və sənaye prosesləri üçün əlverişlidir.

(f) Mikrodalğalı yardım. Mikrodalğalı sobalar nanohissəciklərin hazırlanması [31] və birbaşa nanohissəciklərin [32] istehsalı üçün istifadə edilən mikroemulsiya şablonunun formalaşmasına kömək edə bilər. Bu ikinci halda, mikrodalğalı reaktordan istifadə sadə, sürətli, ucuz və davamlıdır. Bu texnologiya bir və ya iki addımda və qapalı sistemdə hissəciklərin bir qabda istehsalını asanlaşdırır. Bundan əlavə, üzvi həlledicilərdən və ya böyük həcmdə sudan istifadə etmir.

(g) İkili asimmetrik sentrifuqa. Lipid nanohissəcikləri ikili asimmetrik sentrifuqada (DAC) hazırlana bilər [33]. Nümunə öz şaquli oxu ətrafında fırlandığı üçün DAC adi sentrifuqasiyadan fərqlənir. Ənənəvi sentrifuqasiya nümunə materialını daim xaricə doğru itələsə də, bu əlavə fırlanma nümunə materialını daim sentrifuqanın mərkəzinə doğru məcbur edir. İki əks-fırlanan hərəkətin bu unikal kombinasiyası kəsmə qüvvələri və beləliklə, səmərəli homogenləşmə ilə nəticələnir.

(h) Membran kontaktı. SLN istehsalı üçün membran kontaktorundan istifadə edən başqa bir üsul hazırlanmışdır [34]. Fəaliyyət göstərən modul istehsal edilmişdir. Buraya keramika membranı (0,1, 0,2 və ya 0,45 μm məsamə ölçüsü) "membran səthinə tangensial dövriyyəyə icazə verilən sulu fazanı və lipid fazını ayıran" [6]. Lipid fazası təzyiq altında olan bir qabda əridilir və boru vasitəsilə modulda yerləşdirilən membran məsamələrinə doğru zorlanır və bu, kiçik damcıların əmələ gəlməsinə gətirib çıxarır, bu da tangensial su axını ilə membran məsamələrindən ayrılır. Alınan su dispersiyası soyuduqdan sonra SLN əmələ gəlir (Şəkil 4). Təklif olunan metod böyük həcmlərin davamlı hazırlanmasına imkan verir və buna görə də sənayenin genişləndirilməsi üçün yüksək uyğun olduğu iddia edilir.

(i) Faza inversiya temperaturu. Nanoemulsiyaların hazırlanmasında adətən faza inversiya temperaturu (PIT) metodundan istifadə edilir. PIT konsepsiyası bəzi polietoksilləşdirilmiş səthi aktiv maddələrin temperaturdan asılı olaraq su və yağa yaxınlıqlarını dəyişmək qabiliyyətindən istifadə edir. “Belə bir səthi aktiv maddə növünün istifadəsi, temperatur PIT-dən yuxarı qalxdıqda, emulsiyanın O/W makroemulsiyasından W/O emulsiyasına çevrilməsinə gətirib çıxarır” [6]. Temperatur PIT-dən aşağı düşdükdə O/W nanoemulsiya əmələ gəlir. PIT üsulu daxili maye və ya yarı maye yağ nüvəsi və otaq temperaturunda bərk olan xarici lipid təbəqəsi ilə LNC hazırlanması üçün də istifadə edilmişdir [2]. Bu yaxınlarda SLN hazırlanması üçün də uyğunlaşdırılmışdır. Tərkibində NaCl olan sulu faza və bərk lipidlərdən və qeyri-ionik səthi aktiv maddələrdən ibarət yağ fazası ayrı-ayrılıqda qızdırılır.

90°C (PIT-dən yuxarı). “Sonra sulu faza S/O emulsiyasını əldə etmək üçün damcı-damcı, sabit temperaturda və çalkalama altında yağ fazasına əlavə edilir. Sonra qarışıq yavaş və davamlı qarışdırmaqla otaq temperaturuna qədər soyudulur. Bulanıq qarışıq PİT-də şəffaf olur və PİT-in altında lipidlərin ərimə nöqtəsindən aşağıda SLN-yə çevrilən O/W nanoemulsiya əmələ gəlir” [6, 36].

2.2. Lipid mikrohissəciklərinin hazırlanması üsulları

SLM istifadə edilən texnikadan asılı olaraq süspansiyon və ya bərk toz halında əldə edilə bilər [37].

(a) Ərintilərin dispersiyası. SLM formalaşdırılması üçün ərimə dispersiya texnikasından istifadə olunur. SLM dərmanın kimyəvi təbiətindən asılı olaraq ya O/W və ya çoxlu W/O/W emulsiyalarından əldə edilə bilər. O/W prekursoru vəziyyətində, lipofilik preparat ərinmiş lipidlərə həll edilir, onlar yüksək kəsici qarışdırıcıdan istifadə edərək suda isti səthi aktiv maddə məhlulu ilə emulsiya edilir. Lipid mikrohissəcikləri daha sonra otaq temperaturunda soyudularaq bərkidilir [38]. W/O/W prekursoru vəziyyətində, ilkin W/O emulsiyası dərmanı su fazasında həll etməklə əmələ gəlir, daha sonra eyni temperaturda xarici sulu faza ilə təmasda olur. Nəticədə yaranan W/O/W çoxsaylı emulsiya daha sonra mikrohissəcikləri əldə etmək üçün otaq temperaturuna qədər soyudulur [39].

(b) Kriogen mikronizasiya. “Kriogen mikronizasiyada ya ərimə dispersiyası (dərman ərinmiş lipidlə qarışdırılır) və ya həlledicinin soyulması (dərman və lipid qarışdırılaraq həlledici qarışığında həll olunur) yolu ilə əldə edilən lipid matrisləri” [6], -80° temperaturda saxlanılır. C və sonra maye azotun təsiri altında xüsusi bir cihazda mikronlaşdırılır. Bu texnika yalnız 5-5000 mikrohissəciklərin istehsalı üçün istifadə edilə bilər μm diametrdə [40].

(c) Sprey qurutma. Lipid hissəciklərinin sprey ilə qurudulması yem kimi üzvi həlledici məhluldan istifadə etməklə həyata keçirilir. Bu məhlul bir mərhələli prosesdə qurudulmuş hissəcik formasına buxarlanır [41].

(d) Elektrosprey. Elektrosprey texnikasındakı elektrostatik atomizator yüksək gərginlikli enerji təchizatına qoşulmuş və atomlaşdırılacaq maye ilə təchiz edilmiş ucluqdan ibarətdir. Üzvi həlledicidə olan lipid məhlulu şprisdə olur və metal kapilyar yüksək gərginlikli enerji təchizatı ilə birləşdirilir və elektrod kimi fəaliyyət göstərir. Metal folqa kollektoru kapilyarın qarşısında yerləşdirilir və əks elektrod kimi fəaliyyət göstərir. Bərk lipid hissəcikləri elektrik sahəsinin yaratdığı damcılardan həlledicinin buxarlanması ilə əmələ gələ bilər [42].

(e) Püskürtmə - Qatılaşdırma. “Sprey-qızdırma metodunda lipidlər ərimə nöqtəsindən yuxarı bir temperatura qədər qızdırılır” [6]. İsti lipidlər pnevmatik nozzle vasitəsilə karbon qazlı buz banyosunda saxlanılan bir gəmiyə atomlaşdırılır. Alınan mikrohissəciklər (50-500 μm) sonra qurudulur vakuum altında otaq temperaturunda [43].

2.3. Patent Baxışı

Həm lipid nano, həm də mikrohissəciklər üçün yuxarıda qeyd olunan hazırlama üsullarına aid olan ən mühüm texnoloji patentlərin icmalı Cədvəl 2-də göstərilmişdir.

3. İdarəetmə marşrutları

Dəri administrasiyası lipid nano- və mikrohissəciklər üçün böyük potensiala malik bir sahədir və onun bazara çıxarılması üçün qısa müddət onu kosmetik tərkiblərdə istifadə üçün xüsusilə perspektivli edir. Dərmanın lipid hissəciklərinin dəriyə çatdırılmasının fərqli üstünlükləri kimyəvi cəhətdən dayanıqlı olan inqrediyentləri kimyəvi parçalanmadan qorumaq qabiliyyəti, dərmanın buraxılmasını modulyasiya etmək qabiliyyəti və mümkün okklyuziv effekti təmin edən dəridə yapışan lipid filmləri yaratmaq qabiliyyətidir [64] .

Onların hissəcik ölçüsü və terapevtik məqsədləri o deməkdir ki, lipid nano- və mikrohissəcikləri bütün parenteral tətbiqlər üçün istifadə edilə bilər: intraartikulyardan əzələdaxili, dərialtı və venadaxili tətbiqə qədər [65]. Kiçik ölçülərinə görə, lipid nanohissəcikləri venadaxili yeridilə və dərmanları xüsusi orqanlara yönəltmək üçün istifadə edilə bilər. Bununla belə, bütün venadaxili yeridilmiş kolloid hissəciklərdə olduğu kimi, onlar qaraciyər və dalaq tərəfindən dövriyyədən təmizlənir. Retikuloendotelial sistemdən (RES) qaçmağa qadir olan “gizli” lipid nanohissəcikləri onların səthini polietilen qlikol (PEG) ilə örtməklə əldə edilə bilər.

Lipid nano- və mikrohissəcikləri sulu dispersiyalar şəklində və ya alternativ olaraq tabletlər, qranullar, kapsullar və ya kaşelərdəki tozlar kimi bərk dozaj formasına çevrildikdən sonra ağızdan tətbiq oluna bilər. Sulu hissəciklərin dispersiyaları tabletlərin istehsalı üçün qranulyasiya mayesi kimi istifadə edilə bilər. Alternativ olaraq, onlar toz halına gətirilə bilər (məsələn, sprey qurutma və ya dondurularaq qurutma yolu ilə) və tablet toz qarışığına əlavə oluna bilər və ya sərt jelatin kapsullarını doldurmaq üçün istifadə edilə bilər. Aşağı istehsal xərcləri o deməkdir ki, lipid hissəciklərinin dispersiyalarını tozlara köçürmək üçün çiləmə üsulu ilə qurutma üstünlük təşkil edə bilər [1]. Əgər oral yolla tətbiq olunarsa, lipid nano- və mikrohissəciklər mədə-bağırsaq traktında (GİT) dərmanların həllinə kömək edə bilər. Əslində, onlar zəif həll olunan maddəni həll olunan vəziyyətdə saxlaya bilir və xüsusilə də öd turşuları və ya fosfolipidlər kimi endogen həlledicilərlə qarışdırıldıqdan sonra həlledici ilə qarşılıqlı təsirləri gücləndirə bilər. Bundan əlavə, onların qoruyucu təsiri, davamlı və/və ya nəzarət edilən sərbəst buraxılma xüsusiyyətləri ilə birlikdə, dərmanların (xüsusilə makromolekulların) vaxtından əvvəl deqradasiyasına mane olur və onların GİT-də sabitliyini yaxşılaşdırır [66]. Bundan əlavə, nanoölçülü hissəciklər Peyer yamaqlarının M hüceyrələri tərəfindən qəbul edilə bilər ki, bu da öz növbəsində daşıyıcı sistemə ilk keçid effekti metabolizmindən yan keçməyə və limfa udma prosesinə keçməyə imkan verir. Yan təsirlərin azaldılması (yəni, qeyri-steroid antiinflamatuar dərmanların (QSİƏP) mədə toksikliyi) və dadın maskalanması da lipid hissəciklərinin ağızdan tətbiqi üçün iki müvafiq məqsəddir [67].

Lipid mikrohissəciklərinin ağciyərlərə tətbiqi də ümidvericidir, çünki onlar yaxşı aerozollaşma xassələri və maye formada nebulizasiya edildikdə əla sabitlik nümayiş etdirirlər. Bərk formada (yəni sprey qurutma yolu ilə) əldə edilən SLM aerodinamik ölçüləri sayəsində bu tətbiq üsuluna uyğundur. Düzgün lipid hissəciklərinin dizaynı onların bronxial bölgələrdə yığılmasının qarşısını almalıdır. Əslində, sürətli bronxial klirens dərman konsentrasiyasının terapevtik səviyyədən aşağı olmasına səbəb ola bilsə də, ağciyərlərdə lipid hissəciklərinin saxlanması dərmanın uzun müddət buraxılmasına kömək edir. Beləliklə, daha yüksək dərman bioavailability və daha uzun terapevtik effektlər əldə edilə bilər ki, bu da dozanın azalmasına və doza intervallarının uzadılmasına səbəb olur. Buna görə də, lipid hissəcikləri ağır tənəffüs yolları xəstəliklərinin yerli müalicəsində, eləcə də dərmanların sistemli çatdırılmasında geniş spektrli faydalar təklif edə bilər. Bundan əlavə, bir neçə tədqiqatda lipid matrislərinin ağciyərlərə tətbiqinin aşağı toksikoloji potensiala malik olduğu nümayiş etdirilmişdir. Bununla belə, təkrar pulmoner administrasiyanın uzunmüddətli təsirləri ilə bağlı heç bir araşdırma aparılmamışdır [68].

Lipid nanohissəcikləri gözün həm ön, həm də arxa seqmentlərinə bir neçə müxtəlif yollarla tətbiq olunan okulyar dərmanların terapevtik effektivliyini, uyğunluğunu və təhlükəsizliyini artıra bilər. Buynuz qişanın qalma müddətini artırmaq və beləliklə, buynuz qişanın maneələrini aradan qaldırmaq qabiliyyətinə görə topikal tətbiq üçün uyğundurlar. Üstəlik, gözün arxa seqmentinə dərmanın effektiv çatdırılmasının çətin olmasına və ümumiyyətlə alternativ tətbiq yollarının (periokulyar və intravitreal) tələb olunmasına baxmayaraq, torlu qişa üçün optimallaşdırılmış lipid nanohissəcik formulaları dərmanın sərbəst buraxılmasına nəzarət etmək və tətbiqetmə tezliyini azaltmaq məqsədi daşımalıdır [69] ].

3.1. Patent Baxışı

Lipid hissəcikləri üçün xüsusi idarəetmə marşrutları üzrə bir neçə istifadə patenti verilmişdir: xülasə Cədvəl 3-də göstərilmişdir.

4. Terapevtik və/yaxud Texnoloji Məqsədlər

Lipid nano- və mikrohissəcikləri bir neçə terapevtik və/yaxud texnoloji məqsədlərlə dərman və aktiv çatdırılma üçün təklif edilmişdir [4, 118, 119] ən uyğunları aşağıda təsvir edilmişdir.

4.1. Xərçəng Terapiyası

Xərçəng əleyhinə dərmanların çatdırılması üçün lipid nanohissəciklərindən istifadənin əsası bir sıra fizioloji mexanizmlərə əsaslanır. Şiş tez-tez zəif tənzimlənən angiogenez nəticəsində yaranan qüsurlu, sızan vaskulyarizasiya ilə əlaqələndirilir. Beləliklə, mikronaltı ölçülü hissəciklər şişin içinə üstünlük təşkil edə və orada saxlanıla bilər, çünki sözdə gücləndirilmiş keçiricilik və tutma (EPR) effekti. EPR effektinə əsaslanan passiv şiş hədəflənməsi düzgün dizayn edilmiş lipid nanohissəciklərindən istifadə etməklə əldə edilə bilər ki, bu da komplement vasitəsilə opsonizasiyanın qarşısını ala bilər və nəticədə RES tərəfindən aradan qaldırıla bilər. “Uzun dövran edən” lipid nanohissəcikləri məhz bu səbəbdən kiçik hissəcik ölçülərinə və hidrofilik səthlərə (onlar hidrofilik polimerlərlə örtülmüşdür) malik olmaq üçün nəzərdə tutulmuşdur [120]. Üstəlik, səthi işlənmiş lipid nanohissəcikləri xərçəng hüceyrələrinin selektiv sitotoksikliyini artırmaq üçün aktiv hədəfləmə üçün istifadə edilə bilər. Bu, xərçəng və sağlam hüceyrələrin səthi antigenləri və reseptorlarındakı fərqlərdən istifadə etməklə edilə bilər [96]. Nəhayət, çoxlu dərmanlara rezistentlik (MDR) xərçəng əleyhinə dərman müalicəsinin mühüm məhdudiyyətidir. MDR əsasən bir çox dərmanlar (antikanser agentlər, antibiotiklər və s.) üçün hüceyrədən axıdılması pompası kimi çıxış edən P-qlikoprotein (P-gp) ilə əlaqələndirilir. Lipid nanohissəcikləri MDR fenomeninin öhdəsindən gəlməyə kömək edə bilər, çox güman ki, kapsullaşdırılmış dərmanları endositoz yolu ilə xərçəng hüceyrələrinə daşıyır və bununla da P-gp dərman axını mexanizmini aşaraq [120].

4.2. Qan-Beyin Baryerinin aradan qaldırılması

Lipid nanohissəcikləri qan-beyin baryerini (BBB) ​​aşa bilən vasitələr kimi tez-tez təklif edilmişdir. BBB fiziki bir maneə rolunu oynayır və seçilmiş molekulların qan axını ilə beyin arasında keçidini tənzimləyir. Xüsusilə, endotel hüceyrələri arasında sıx birləşmələr parasellüler yol vasitəsilə həll olunan maddələrin passiv diffuziyasının çox məhdud olduğunu göstərir. Lipid nanohissəcikləri müxtəlif səviyyələrdə beynin mənimsənilməsi prosesində faydalı ola bilər, çünki onlar (i) dərmanları bioloji mayelərdə kimyəvi parçalanmaya qarşı sabitləşdirə, (ii) qan dövranında qalıcılığı artıra və dolayısı ilə beyinə köçürülməyə kömək edə bilər və (iii) birbaşa endotel hüceyrələrini tetikler, beləliklə, aktiv hədəfləmə mexanizmi vasitəsilə reseptor vasitəçiliyi ilə də ola bilən endositoza səbəb olur. Düz lipid nanohissəcikləri BBB-ni aradan qaldırmaq üçün vasitə kimi istifadə olunsa da, tədqiqatlar hazırda nanohissəciklər və endotel hüceyrələri arasında qarşılıqlı təsir seçiciliyini yaxşılaşdıran hədəflənmiş lipid nanohissəciklərinə doğru inkişaf edir [121].

4.3. Gen terapiyası

Lipid nanohissəcikləri gen terapiyası üçün qeyri-viral vektor kimi uğurla istifadə edilə bilər. Gen terapiyası protein ifadəsini induksiya etmək üçün hədəf hüceyrələrə genetik materialı (plazmid DNT, pDNT) daxil etməklə və ya alternativ olaraq ya antisens oliqonukleotidlərdən (ASO) və ya transkripsiya və/yaxud tərcümə kimi kiçik müdaxilə edən RNT (siRNA) istifadə etməklə əldə edilir. Qüsurlu genləri susdurmaq üçün inhibitorlar. Çılpaq nuklein turşuları bioloji mayelərdə olan fermentlər tərəfindən asanlıqla həzm olunur. Üstəlik, hüceyrənin daxililəşdirilməsi kortəbii şəkildə baş vermir, çünki həm nuklein turşuları, həm də hüceyrə membranları mənfi yüklü səthlərə malikdir və nəticədə qeyri-effektiv terapevtik reaksiyalar olur. Viral vektorlar ən təsirli daşıyıcı olsalar belə, qeyri-viral vektorlar daha təhlükəsizdir, daha aşağı qiymətə malikdir, daha çox təkrarlana bilir və DNT ölçüsünə məhdudiyyət qoymur. Gen terapiyasında lipid nanohissəciklərinin qeyri-viral vektorlar kimi istifadəsi nuklein turşularını elektrostatik olaraq bağlaya bilən müsbət yüklü lipidlərin istifadəsini nəzərdə tutur. Bu, transfeksiya üçün faydalıdır, çünki kondensasiya nuklein turşusunun hərəkətliliyini asanlaşdırır, onları ətraf mühitin fermentlərindən qoruyur, vektorların kationik xarakteri isə mənfi yüklü hüceyrə səthləri ilə qarşılıqlı əlaqəyə imkan verir [122].

4.4. Protein və peptidlərin çatdırılması

Lipid nano- və mikrohissəciklər zülalların çatdırılması üçün geniş istifadə olunur. Peptidlərin və zülalların terapevtik istifadəsi onların yüksək molekulyar çəkisi, hidrofilik xarakteri və məhdud kimyəvi sabitliyi ilə məhdudlaşdırılır ki, bu da bioavailability, bioloji membranlar vasitəsilə zəif ötürülməsi və qan dövranında aşağı stabilliyə səbəb olur. Mövcud olan peptidlərin və zülalların əksəriyyəti inyeksiya yolu ilə ötürülür, lakin onların qısa yarım ömrü, bahalı, ağrılı və xəstələr tərəfindən zəif dözümlü olan təkrar dozaların tələb olunması deməkdir. Son illər bu biomakromolekulların tətbiqi üçün iynəsiz alternativlərə yönəldilmiş əhəmiyyətli səylərin müşahidə edildiyini, əsasən, lakin istisna olmaqla, oral yolla istifadə edir. Bununla belə, bukkal, burun, ağciyər və transdermal administrasiya yolları da araşdırılmışdır [98]. Lipid nano- və mikrohissəcikləri lipidlərin stabilləşdirici və udulmasını təşviq edən təsirinə görə peptid və protein çatdırılmasında faydalı ola bilər. Üstəlik, bir müddətdir ki, zülal antigenləri üçün vasitə kimi hissəcik daşıyıcıları axtarılır. Peptid və ya protein antigenlərinin əksəriyyəti selikli qişalarda proteolitik deqradasiyaya görə selikli qişanın immunizasiyası üçün səmərəsiz olduğundan lipid hissəciklərindən istifadə etməklə peyvəndin hazırlanması sahəsində geniş iş aparılmışdır [123].

4.5. Antioksidant və Vitamin Çatdırılması

Lipid nano- və mikrohissəcikləri antioksidantları və vitaminləri deqradasiyadan səmərəli şəkildə qorumaq üçün böyük potensiala malikdir (onlar çox vaxt işığa və oksigenə həssasdırlar). Bundan əlavə, onlar dərinin nüfuzunu yaxşılaşdıra bilərlər. Buna görə də, lipid hissəciklərinin dermal çatdırılma sistemləri kimi istifadəsi antioksidantların aktual effektivliyini artırmaq üçün əlverişli strategiya kimi qəbul edilə bilər. Tərkibində antioksidant yüklü lipid nanohissəcikləri olan bəzi dəriyə qulluq məhsulları artıq bazara çıxarılıb [124]. Bundan əlavə, antioksidanlar tez-tez ağızdan tətbiq edildikdən sonra aşağı bioavailability ilə xarakterizə olunur. Onların lipid nanohissəcikləri içərisində tutulması bağırsaqda udulmanı artırmağa və bununla da onların farmakokinetiklərini yaxşılaşdırmağa kömək edə bilər [125].

4.6. Diaqnostik Çatdırılma

Müsbət kontrastlı maqnit rezonans görüntüləmə (MRT) üçün qurulmuş lipid nanohissəciklərdən istifadə etməklə diaqnostika sahəsində bu yaxınlarda mühüm preklinik tədqiqatlar aparılmışdır. Bu sistemlərə MnCl daxildir2, gadolinium (III) dietilentriaminpentaasetik turşusu (Gd-DTPA) və manqan (II) ekvivalenti (Mn-DTPA). Yaxın infraqırmızı (NiR) boyalar həmçinin Alexa Fluor™ 488 kimi lipid nanohissəciklərə konyuqasiya edilmişdir. Bununla belə, hazırda xərçəng müalicəsində yeni bir konsepsiya diqqəti cəlb edir: eyni multimodal teranostik nanohissəcikdə terapevtik agentlərin və diaqnostik vasitələrin konyuqasiyası [126] ].

4.7. Patent Baxışı

Cədvəl 4 xüsusi terapevtik və ya texnoloji məqsədlərə həsr olunmuş lipid nano- və mikrohissəciklərin istifadəsi və tərkibinə aid olan ən mühüm patentlərin xülasəsini təqdim edir.

5. Bazar narahatlıqları

Son bir neçə onillikdə lipid nano- və mikrohissəciklərə aid qeydə alınmış patentlərin sayında tədricən və əhəmiyyətli artım müşahidə edilmişdir. Digər tərəfdən, qeyd etmək lazımdır ki, satışa çıxarılan əksər formulalar kosmetik sahəyə aiddir. Hal-hazırda yalnız üç lipid-nanohissəciklərə əsaslanan oral reseptorlar satılır, lakin onlardan biri “qidalandırıcı” məhsul kimi lisenziyaya malikdir (Cədvəl 5). Bununla belə, bütün dünyada tərkibində NLC olan 500-dən çox kosmetik məhsulun mövcud olduğunu təxmin etmək mümkün olsa da, onları saymaq çətindir, çünki NLC çox vaxt Kosmetik Tərkiblərin Beynəlxalq Nomenklaturası (INCI) siyahısında NLC məhsulları kimi qeyd edilmir [182].

Bütün dünyadan olan tədqiqatçıların səyləri artır, bunu son illərdə nəşr olunan tədqiqatların sayı göstərir. Bu artım lipid nano- və mikrohissəciklərin potensial sənaye tətbiqi və onların həlledicisiz və asanlıqla miqyası artırılan hazırlama üsulları, biouyğun materialların istifadəsi və s. ilə öyünə bilməsi ilə bağlıdır. 1990-cı illərdə lipid hissəciklərinin patentləşdirilməsi fəaliyyəti ilə bağlı elmi ictimaiyyət, xüsusən də Avropada lipid nanohissəcikləri üçün innovativ hazırlanma üsullarına artan maraq göstərdi, halbuki yeni minilliyin əvvəlindən patentləşdirmə fəaliyyəti əsasən dərmanların çatdırılması tətbiqlərinə yönəldi və tədqiqatçılar İnkişaf etməkdə olan ölkələr getdikcə daha çox iştirak etdilər. Əsas biznesini lipid nanohissəciklərinə həsr edən bəzi kiçik və orta sənayelər (KOB) və spin-off şirkətləri də yaranıb: İtalyan Nanovector Srl, Rus Nanosystem Ltd., Alman PharmaSol GmbH, İspan Lipotec SA, Indian Transgene Biotek Ltd. və Koreya. AmorePacific Corp bəzi nümunələrdir [189, 190]. Əslində, KOM-ları bu sahədə innovasiyaların əsas hərəkətverici qüvvəsi kimi görmək olar, hətta iri şirkətlərdən də daha çox [182].

Bununla belə, lipid daşıyıcılarına marağın artmasına baxmayaraq, ədəbiyyat məqalələri ilə patentlərin sayı arasında böyük fərq var [189, 190]. Bundan əlavə, mövcud patentlərin statusunun qiymətləndirilməsi göstərir ki, yalnız bir neçəsi verilmiş statusa çatıb, qalanları isə hələ də ərizə kimi təsnif edilir. Müraciət edilmiş patentləri və bazara çıxarılan məhsulları müqayisə etdikdə bu, daha aydın görünür.

Bu sahədə bir çox patentləşdirilmiş işlərin ilkin mərhələdə qalmasının və sənaye məhsullarına çevrilməməsinin bir sıra səbəbləri var tənzimləyici narahatlıqlar əsas rol oynaya bilər. Beləliklə, dermal administrasiya üçün lipid nanohissəciklərinin istifadəsi ilə bağlı aparılan çoxlu araşdırmaya baxmayaraq [191], tənzimləyici aspektlər o deməkdir ki, dermal administrasiya üçün bazara çıxarılan bütün məhsulların kosmetika kimi lisenziyası var (Cədvəl 5), əslində kosmetik məhsulların emal edilməsi daha asandır. klinik qiymətləndirmə tələb etmədiyi üçün vaxt və iqtisadi investisiya baxımından.

Əslində, son illərdə nanotexnologiyanın eksponensial inkişafı təkcə böyük ümidlər deyil, həm də marketinq prosesinə əhəmiyyətli dərəcədə mane ola biləcək bir sıra təhlükəsizlik, etik və nəticədə tənzimləyici suallar doğurmuşdur [192]. Tənzimləmə nöqteyi-nəzərindən, lipid nanohissəcikləri nanomaterialların ümumi tənzimləyici narahatlığına məruz qalır.

Tədqiqatçılar, istehsalçılar və tənzimləyicilər tərəfindən istifadə edilən nanomaterialların tərifinin uyğunlaşdırılması ciddi zərurətdir. Avropa Komissiyasının nanomaterialın tərifinə dair Tövsiyəsinə (2011/696/EU) uyğun olaraq, 100 nm demarkasiya edən yuxarı hədddir, çünki bu, materialların xassələrinin adi ekvivalentlərdən əhəmiyyətli dərəcədə dəyişə biləcəyi ölçüyə istinad edir. Lipid nanohissəciklərinin ölçüləri 100 nm-i ötməyə meyllidir, lakin mikronaltı ölçü diapazonunda 100 nm-dən çox olan hissəciklər, membranlardan və dəridən keçmək qabiliyyətinin aşağı olmasına baxmayaraq, daha yüksək səthi enerji sayəsində “nano ilə əlaqəli xüsusiyyətlər” təklif edə bilər. [193].

Təsnifat elmi intizamdan və nanomaterialların insan orqanizminə təsirindən, həm də ətraf mühitə təsirindən asılı ola bilər. Xüsusilə, kosmetik məhsullar üzrə Avropa Qaydası (CE n.1223/2009) nanomaterialların həll olunmaması və davamlılığı anlayışını ölçü hədləri (100 nm) ilə əlaqələndirir [194], halbuki dərman vasitələrində nanomaterialların effektivliyi və/və ya təhlükəsizliyinin qiymətləndirilməsi hələ də davam edir. bu sistemlərin mürəkkəbliyinə görə ayrı-ayrılıqda qiymətləndirməyə əsaslanır. Avropa Dərman Agentliyi (EMA) 2006-cı ildə insan istifadəsi üçün nanotexnologiyaya əsaslanan dərman vasitələrinə dair əks etdirmə sənədi nəşr etdi və bu sənəddə nanomedicinin rəsmi tərifi də var. 100 nm [195]. Bununla belə, əczaçılıq tətbiqləri üçün tədqiq edilmiş nanotexnologiyaya əsaslanan məhsullar təklif olunan tərifdən daha geniş ölçü diapazonlarına malikdir və bu, EMA-nı xüsusi xüsusiyyətlərə malik olmaq üçün nəzərdə tutulmuş 1000 nm-dən kiçik ölçülərə malik bütün “strukturları” da daxil etməyə vadar edir [196] və sahəyə xüsusi dərman çatdırılmasını yaxşılaşdıra və toksikoloji profilləri əhəmiyyətli dərəcədə dəyişdirə bilər. Buna görə də tənzimləyici orqanlar istehsalçılardan yeni dərman məhsulunun keyfiyyətini, təhlükəsizliyini və effektivliyini qiymətləndirmək üçün dəqiq əvvəlcədən icazə tədqiqatları aparmağı tələb edir [197, 198].

Belə ki, elmi ictimaiyyətin və özəl əczaçılıq şirkətlərinin yeni nanoölçülü dərman vasitələrinin yaradılması üçün xeyli səy göstərməsinə baxmayaraq, yeni nanotibb məhsulları üçün təsdiq nisbəti, əsasən, preklinik və klinik tədqiqatlar zamanı təhlükəsizlik və effektivlik profilinin pozulması səbəbindən 10%-i ötməmişdir [199]. Buna görə də lipid nanohissəcikləri kimi digər nanosistemlər getdikcə daha maraqlı olurlar, çünki onlar müxtəlif üstünlüklər təklif edirlər: şübhəsiz matrisin biouyğunluğu, həlledicisiz hazırlama üsulları və bəzi hallarda yüksək temperaturlara ehtiyac yoxdur. Xüsusilə, həlledicilərin olması sənaye prosesi üçün çatışmazlıq ola bilər, çünki həlledicilər aktiv birləşmələrin sabitliyinə təsir göstərə bilər, onların çıxarılması bahalı ola bilər və toksikoloji (qalıqlar) və ekoloji problemlər yarada bilər.

Sistemin ixtirası ilə onun bazara çıxarılması arasında müəyyən tipik zaman çərçivəsi var. 1965-ci ildə liposomların ixtirasından onların kosmetik bazara (1986-cı ildə Dior tərəfindən buraxılmış yaşlanma əleyhinə məhsul “Capture”) çatması təxminən 20 il və ilk əczaçılıq məhsulunun (Alveofact tərəfindən Dr. Karl Thomae GmbH Almaniya) üçün 25 il çəkdi. . Buna əsaslanaraq və 1992-ci ili SLN-nin ixtira ili kimi götürsək, ilk əczaçılıq məhsullarının 2016-2020-ci illərdə gəlməsini gözləmək olardı. Bununla belə, bu günə qədər yalnız iki lipid nanohissəcik əsaslı əczaçılıq məhsulları bazara çıxarılmışdır. Üstəlik, 2008-ci ilin maliyyə böhranından sonra şirkətlər investisiya və məhsul inkişaf siyasətlərini yenidən nəzərdən keçirdilər və daha mühafizəkar oldular. Bu, lipid nanohissəcik sistemlərinin klinik sınaqlarına təsir göstərmiş ola bilər [182].

6. Nəticələr

Təxminən 25 ildir ki, lipid nano- və mikrohissəciklər üzrə tədqiqatlar aparılır. Patent fəaliyyəti artdı və eyni zamanda xəstəliklərin müalicəsi üçün innovativ vasitə kimi nanotexnologiyadan istifadə artdı, eyni zamanda biouyğun materiallara və həlledicisiz hazırlama üsullarına potensial kommersiya maraqları da artdı. Əslində, mikroemulsiya şablonları Gasco et al tərəfindən patentləşdirilmiş ilk texnika idi. 1993-cü ildə lipid nanohissəciklərinin hazırlanması üçün. O vaxtdan bəri, 2010-cu ilə qədər artan sayda patentlər təqdim edildi. Müller və Lucs tərəfindən 1996-cı ildə verilən patentlərə böyük əhəmiyyət verilməlidir. Onlar lipid nanohissəciklərinin tədqiqatında mühüm mərhələdir, çünki onlar yaxşı qurulmuş HPH-ni uyğunlaşdırmışlar. hazırda SLN, NLC və LDC istehsalında istifadə üçün nanoemulsiya hazırlanması üçün istifadə olunan sənaye texnikası. O vaxtdan bəri, mövcud metodların məhdudiyyətlərini aradan qaldırmaq üçün alternativ hazırlama üsullarına dair bir neçə texnoloji patent verilmişdir.

Bundan əlavə, xüsusilə 2000-ci ildən bəri artan sayda kompozisiya və istifadə patentləri verilmişdir. Bu, yəqin ki, lipid nanohissəcik texnologiyalarının uğurla istifadə oluna biləcəyi yeni praktik farmakoloji və texnoloji sahələrin kəşfi ilə əlaqələndirilə bilər. Əslində, kimyəvi stabilləşdirmə və dərmanların dəriyə nüfuzunun/permeasiyasının artması da daxil olmaqla, bu çatdırılma sistemlərinin təklif etdiyi bir sıra üstünlükləri nümayiş etdirən xeyli sayda dermal dərman çatdırılması patentləri verilmişdir. Bu sonuncu aspekt əsasən dəri üzərində lipid okklyuziyası təsiri ilə bağlıdır. Bununla belə, hal-hazırda əhəmiyyətli sayda ağızdan dərman çatdırılması patentləri təqdim olunur. Bu, çox güman ki, ona görədir ki, oral yol terapiya üçün ən geniş yayılmış və məqbuldur və Biofarmasevtika Təsnifat Sistemi (BCS) IV sinif dərmanları bir sıra bioavailability problemlərindən əziyyət çəkir. Bundan əlavə, bəzi dərmanların çatdırılması problemləri lipid nanohissəcikləri üçün fürsət hesab edilə bilər.Birincisi, lipid nanohissəciklərinin lipid tərkibinə və funksionallaşma asanlığına görə BBB-ni aradan qaldırmaq üçün maraqlı bir vasitə olduğu görülür. İkincisi, lipid nanohissəciklərinin istifadəsi ilə əlaqəli bir sıra mexanizmlər xərçəng müalicəsinə fayda verə bilər. Bu sahələrdə ən maraqlı yanaşmalardan bəziləri patentlərin mövzusu olmuşdur. Nəhayət, xeyli sayda patentlər makromolekulların çatdırılmasına yönəlmiş nuklein turşuları və zülallar farmakoloji terapiyanın gələcəyidir və hər ikisi stabillik, zəif bioavailability və yüksək molekulyar çəki ilə müqayisə edilə bilən problemlər yaradır ki, bu da onların cari müalicələrdə istifadəsinə mane olur və həmçinin lipid nano- və mikrohissəciklərin yüklənməsi üçün texnoloji çatışmazlıq.

Bazarda satılan lipid nano və mikrohissəciklərə əsaslanan məhsulların əksəriyyəti hazırda kosmetika kimi lisenziyalaşdırılır, halbuki, xüsusilə oral və parenteral istifadə üçün əczaçılıq dərmanlarının çatdırılması sistemlərinin inkişafı bəzi istisnalar istisna olmaqla, hələ də kliniki və ya hətta preklinik mərhələdədir. Farmakoloji sahədə bazara çıxmaq üçün əsas maneə tənzimləyici aspekt kimi görünür: bahalı klinik tədqiqatlar tələb olunur və bu xərclər əhəmiyyətli klinik nəticələr və kommersiya resepturaları və yüksək təkrarlanma qabiliyyəti, habelə dərmanların ümumi təhlükəsizliyi ilə əsaslandırılmalıdır. istifadə olunan bütün materiallar və formulalar. Avropa və ABŞ patent müraciətlərinə görə lider ölkələr olsa da, son illər inkişaf etməkdə olan ölkələrin patentləşdirmə fəaliyyətində artım olduğunu qeyd etmək lazımdır.

Maraqların toqquşması

Müəlliflər bildirirlər ki, bu məqalənin nəşri ilə bağlı maraqların toqquşması yoxdur.

Təşəkkürlər

Müəlliflər maliyyələşdirməyə görə İtaliyanın Təhsil, Universitet və Araşdırma Nazirliyinə (MIUR - Ricerca Locale 2017-2018 qrantı) təşəkkür etmək istəyirlər.

İstinadlar

  1. R. H. Müller, K. Mäder və S. Gohla, "Nəzarət olunan dərman çatdırılması üçün bərk lipid nanohissəcikləri (SLN) - texnikanın vəziyyətinin nəzərdən keçirilməsi", Avropa Əczaçılıq və Biofarmasevtika Jurnalı, cild. 50, yox. 1, səh. 161–177, 2000. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  2. N. Anton, J. P. Benoit və P. Saulnier, "Nano-emulsiya şablonlarından hazırlanmış nanohissəciklərin dizaynı və istehsalı - bir baxış" Nəzarət olunan Buraxılış Jurnalı, cild. 128, yox. 3, səh. 185–199, 2008. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  3. W. Mehnert və K. Mader, “Bərk lipid nanohissəcikləri: istehsal, xarakteristikası və tətbiqləri,” Qabaqcıl Dərman Çatdırılma Rəyləri, cild. 47, yox. 2-3, səh. 165–196, 2001. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  4. L. Battaglia və M. Gallarate, “Lipid nanohissəcikləri: müasir texnologiya, yeni hazırlıq üsulları və dərmanların çatdırılmasında çətinliklər”, Dərman Çatdırılması üzrə Ekspert Rəyi, cild. 9, yox. 5, səh. 497–508, 2012. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  5. D. Mişra, D. Dhote və P. Mişra, “Bərk lipid nanohissəcikləri: perspektivli kolloid daşıyıcı” Dərman Çatdırılması üçün Yeni Daşıyıcılar, səh. 278–301, PharmaMed Press, 2014. Baxın: Google Scholar
  6. L. Battaglia, M. Gallarate, P. P. Panciani et al., "Texniques for the hazırlanması bərk lipid nano və mikrohissəciklər", Dərman çatdırılmasında nanotexnologiyanın tətbiqi, IntechOpen, London, Böyük Britaniya, 2014. Baxış: Publisher Site | Google Alim
  7. R. H. Müller, M. Radtke və S. A. Wissing, "Dərmanların təkmilləşdirilmiş mikrokapsulyasiyası üçün nanostrukturlaşdırılmış lipid matrisləri", Beynəlxalq Əczaçılıq Jurnalı, cild. 242, yox. 1-2, səh. 121–128, 2002. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  8. C. Olbrich, A. Gessner, O. Kayser və R. H. Müller, “Lipid-dərman-konjugat (LDC) nanohissəcikləri hidrofilik antitripanosomal dərman diminazendiaseturat üçün yeni daşıyıcı sistem kimi”, Narkotiklərin Hədəflənməsi Jurnalı, cild. 10, yox. 5, səh. 387–396, 2002. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  9. S. Jaspart, G. Piel, L. Delattre və B. Evrard, "Bərk lipid mikrohissəcikləri: formulasiya, hazırlıq, xarakteristikalar, dərmanların buraxılması və tətbiqləri," Dərman Çatdırılması üzrə Ekspert Rəyi, cild. 2, yox. 1, səh. 75–87, 2005. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  10. R. H. Müller və J. S. Lucs, “Bərk lipid hissəciklərindən hazırlanmış dərman (bərk lipid nanosferlər - SLN),” Patent EP0605497, 1996. Baxış: Google Scholar
  11. R. H. Müller, R. Becker, B. Kruss və K. Peters, “Dərmanların tətbiqi üçün əczaçılıq nanosuspenziyası, yüksək doyma həllediciliyi və həll sürəti olan sistemlər,” Patent WO9614830, 1996. Baxış: Google Scholar
  12. R. H. Müller, E. B. Souto və M. Radtke, “Maye və bərk lipidlərin qarışıqları əsasında lipid hissəcikləri və eyni istehsal üsulları”, Patent EP00/04111, 2000. Baxış: Google Scholar
  13. R. H. Müller, “Lipid matrisi-dərman konjugatlarından istehsal edilən aktiv agentin idarə olunan idarəsi üçün dərman vasitəsi,” Patent WO2000067800, 2000. Baxış: Google Scholar
  14. R. H. Müller və C. Olbrich, “Lipid matrix-drug conjugates particle for controlled release of active ingredient”, Patent US6770299, 2004. Baxış: Google Scholar
  15. N. Wu və B. C. Keller, “Dərman çatdırılması üçün lipid dərman konjugatları”, Patent WO2010107487, 2010. Baxın: Google Scholar
  16. B. Hertault, P. Saulnier, J. P. Benoit, J.-E. Proust, B. Pech və J. Richard, “Lipid nanokapsüllər, hazırlanma üsulu və dərman kimi istifadə”, Patent WO0164328, 2001. Baxış: Google Scholar
  17. S. Anton, P. Saulnier və J. P. Benoit, “Hidrofilik və/yaxud lipofil molekulları əhatə edən sulu əsas lipid nanokapsulları,” Patent WO2009037310, 2009. Baxış: Google Scholar
  18. A. Royere, J. Bibette və D. Bazile, “Monodispersed bərk lipid hissəcik kompozisiyaları,” Patent US20070053988, 2007. Baxış: Google Scholar
  19. K. Westesen və B. Siekmann, “Bərk lipid hissəcikləri, bioaktiv maddələrin hissəcikləri və onların istehsalı və istifadəsi üsulları,” Patent WO9420072, 1994. Baxış: Google Scholar
  20. H. Y. Gao, J. Schwarz və M. Weisspapir, "Hibrid lipid-polimer nanohissajlı çatdırılma tərkibi," Patent US20080102127, 2008. Baxın: Google Scholar
  21. J. L. Viladot Petit, R. Delqado Qonzales və A. Fernandez Botello, “Lipid nanohissəciklər kapsulları,” Patent WO2011116963, 2011. Baxın: Google Scholar
  22. J. P. Benoit və T. Ferrier, "Funksionallaşdırılmış lipid kapsullarının hazırlanması metodu", Patent WO2010113111, 2010. Baxış: Google Scholar
  23. F. Korrias və F. Lai, “Lipid nanohissəciklərinin hazırlanması üçün yeni üsullar”, Dərman Çatdırılması və Formulyasiyası üzrə Son Patentlər, cild. 5, yox. 3, səh. 201–213, 2011. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  24. M. R. Qasko, R. Kavalli və M. E. Karlotti, “Liposferlərdə timolol”, Die Pharmazie, cild. 47, yox. 2, səh. 119–121, 1992. Baxın: Google Scholar
  25. J. M. Koziara, J. J. Oh, W. S. Akers, S. P. Ferraris və R. J. Mumper, "Ketil spirti/polisorbat əsaslı nanohissəciklərin qan uyğunluğu", Əczaçılıq Tədqiqatı, cild. 22, yox. 11, səh. 1821–1828, 2005. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  26. L. Battaglia, M. Gallarate, R. Cavalli və M. Trotta, "Bir koaservasiya üsulu ilə istehsal olunan bərk lipid nanohissəcikləri," Mikrokapsulyasiya jurnalı, cild. 27, yox. 1, səh. 78–85, 2010. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  27. P. Chattopadhyay, B. Shekunov, D. Yim, D. Cipolla, B. Boyd, and S. Farr, "AERx sistemindən istifadə edərək ağciyərlərə çatdırılma üçün emulsiyaların superkritik maye ekstraksiyasından (SFEE) istifadə etməklə bərk lipid nanohissəcik süspansiyonlarının istehsalı", Qabaqcıl Dərman Çatdırılma Rəyləri, cild. 59, yox. 6, səh. 444–453, 2007. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  28. S. Salmaso, N. Elvassore, A. Bertucco və P. Caliceti, "Yeni superkritik qazla dəstəklənən ərimə atomizasiyası prosesindən istifadə edərək zülalların çatdırılması üçün bərk lipid submikron hissəciklərinin istehsalı," Əczaçılıq Elmləri Jurnalı, cild. 98, yox. 2, səh. 640–650, 2009. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  29. P. Chattopadhyay, B. Shekunov, J. Seitzinger, and R. Huff, "Particles from supercritical liquid extraction of emulsion," Patent WO2004004862, 2004. Baxış: Google Scholar
  30. A. Bertucco, P. Caliceti və N. Elvassore, “Process for production of nanohissicles,” Patent WO2007028421, 2007. Baxış: Google Scholar
  31. R. M. Shah, D. S. Eldridge, E. A. Palombo və I. H. Harding, "Mikonazol nitrat və ekonazol nitratla yüklənmiş bərk lipid nanohissəciklərinin istehsalı üçün mikrodalğalı mikroemulsiya texnikası", Avropa Əczaçılıq və Biofarmasevtika Jurnalı, cild. 117, səh. 141–150, 2017. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  32. S. M. T. Cavalcanti, C. Nunes, S. A. Kosta Lima, J. L. Soares-Sobrinho və S. Reis, "Mikrodalğalı yardımlı istehsal metodundan istifadə edərək Zidovudinin çatdırılması üçün nanostrukturlu lipid daşıyıcılarının optimallaşdırılması," Avropa Əczaçılıq Elmləri Jurnalı, cild. 122, səh. 22–30, 2018. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  33. H. Katarija və J. Prajapati, “Bərk lipid nanohissəcikləri üzrə patentlərin nəzərdən keçirilməsi”, Inventi Rapid: NDDS, cild. 2013, №. 2, səh. 1–3, 2013. Baxın: Google Scholar
  34. C. Charcosset, A. A. El-Harati və H. Fessi, "Membran kontaktorundan istifadə edərək bərk lipid nanohissəciklərinin hazırlanması", Nəzarət olunan Buraxılış Jurnalı, cild. 108, yox. 1, səh. 112–120, 2005. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  35. C. Charcosset və H. Fessi, “Membran reaktorundan istifadə edərək bərk lipid nanohissəciklərinin hazırlanması üçün yeni metod”, Patent WO2007000531, 2007. Baxış: Google Scholar
  36. L. Monteneqro, A. Campisi, M. G. Sarpietro et al., "Beynə dərman çatdırılması üçün idebenon yüklü bərk lipid nanohissəciklərinin in vitro qiymətləndirilməsi," Dərman İnkişafı və Sənaye Əczaçılıq, cild. 37, yox. 6, səh. 737–746, 2011. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  37. A. Berton, G. Piel və B. Evrard, “Puzlu lipid nano və mikrohissəciklər: istehsal və tətbiqlər,” Dərman Çatdırılması və Formulyasiyası üzrə Son Patentlər, cild. 5, yox. 3, səh. 188–200, 2011. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  38. R. Bodmeier, J. Wang və H. Bhagwatwar, “Mum mikrohissəciklərinin ərimə dispersiya üsulu ilə hazırlanmasında proses və formulasiya dəyişənləri. I. Suda həll olunmayan dərmanlar üçün suda yağ texnikası” Mikrokapsulyasiya jurnalı, cild. 9, yox. 1, səh. 89–98, 1992. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  39. R. Bodmeier, J. Wang və H. Bhagwatwar, “Mum mikrohissəciklərinin ərimə dispersiya üsulu ilə hazırlanmasında proses və formulasiya dəyişənləri. II. Suda həll olunan dərmanlar üçün W/O/W çoxlu emulsiya texnikası,” Mikrokapsulyasiya jurnalı, cild. 9, yox. 1, səh. 99–107, 1992. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  40. M. D. Del Curto, D. Chicco, M. D'Antonio et al., "Lipid mikrohissəcikləri GnRH antaqonisti (Antide) üçün davamlı buraxılış sistemi kimi" Nəzarət olunan Buraxılış Jurnalı, cild. 89, yox. 2, səh. 297–310, 2003. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  41. T. Sebti və K. Amighi, “İnhalyasiya üçün lipid daşıyıcıları və doldurucuların hazırlanması və in vitro qiymətləndirilməsi”, Avropa Əczaçılıq və Biofarmasevtika Jurnalı, cild. 63, yox. 1, səh. 51–58, 2006. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  42. M. Trotta, R. Cavalli, C. Trotta, R. Bussano və L. Costa, “Bərk lipid əsaslı hissəciklərin istehsalı üçün elektrosprey texnikası,” Dərman İnkişafı və Sənaye Əczaçılıq, cild. 36, yox. 4, səh. 431–438, 2010. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  43. N. Passerini, B. Perissutti, B. Albertini, D. Voinovich, M. Moneghini və L. Rodriguez, "Spreyin dondurulması ilə hazırlanmış mumlu mikrohissəciklərdən verapamil hidroxloridinin nəzarətli buraxılması", Nəzarət olunan Buraxılış Jurnalı, cild. 88, yox. 2, səh. 263–275, 2003. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  44. R. H. Müller, K. Krause və K. Mader, “Ultra incə mikrohissəciklərin və nanohissəciklərin idarə olunan istehsalı üsulu,” Patent WO0103670, 2001. Baxın: Google Scholar
  45. M. A. Repka, H. G. Patil, S. Majumdar, J. B. Park və V. İ. Kulkarni, “Bərk lipid nanohissəciklərinin hazırlanması üçün sistemlər və üsullar,” Patent WO2015148483, 2015. Baxış: Google Scholar
  46. C. Singh, “Ostwald yetişməsi azaldılmış suda həll olunmayan əczaçılıq maddələrinin bərk nanohissəcik formalaşdırılması,” Patent WO2008013785, 2008. Baxış: Google Scholar
  47. P. Burke, M. Gindy və D. Mathre, “Preparation of lipid nanohissicles,” Patent WO2011127255, 2011. Baxın: Google Scholar
  48. Y. Zhou, N. Wang və T. Wang, “Yeni hazırlıq metodu bərk lipid nanohissəciklər,” Patent CN201010112202, 2010. Baxış: Google Scholar
  49. M. R. Gasco, “Dar ölçülü paylanmaya malik bərk lipid mikrosferlərin istehsalı üçün metod”, Patent US5250236, 1993. Baxın: Google Scholar
  50. R. J. Mumper və M. Jay, “Microemulsion as precursor to solid nanohissicles”, Patent US7153525, 2001. Baxın: Google Scholar
  51. I. P. Kaur və R. Bhandari, “Hidrofilik/amfifil dərmanı tutan bərk lipid nanohissəcikləri və eynisini hazırlamaq prosesi,” Patent IN127/DEL/2012, 2012. Baxış: Google Scholar
  52. L. Battaglia, M. Trotta və R. Cavalli, “Method for Preparat of bərk mikro və nanohissəciklərin hazırlanması”, Patent WO2008149215, 2008. Baxış: Google Scholar
  53. J. L. Soares Sobrinho, S. Melo Tiburcio Cavalcanti Duarte Coelho, M. D. L. S. De Freitas Fernandes Hipolito Reis Dias Rodrigues və C. D. Oliveira De Lacerda Nunes Pinho, "Mikrodalğalı sintez yolu ilə lipid nanohissəciklərinin istehsalı" Patent WO2018, Google-da Görünüş: S.02018.
  54. U. Maasing, “İkili asimmetrik sentrifuqadan istifadə edərək lipid əsaslı nanohissəciklərin istehsalı,” Patent EP1838286, 2005. Baxış: Google Scholar
  55. P. Saulnier, J. P. Benoit və S. Anton, “Method for preparing lipid nanohissicles,” Patent WO2009004214, 2009. Baxın: Google Scholar
  56. E. Roger, F. Lagarce və J. P. Benoit, “Lipid nanokapsules, eyni preparatların hazırlanması üsulu və onlardan dərman kimi istifadə”, Patent WO2011036234, 2011. Baxın: Google Scholar
  57. P. E. Galuska və L. M. Rasmussen, “Lipid hissəciklərinin istehsalı üçün proseslər,” Patent US2010233344, 2010. Baxış: Google Scholar
  58. A. Fatmi və T. K. E. Kim, “Suda həll olunmayan aktiv maddələrin sərbəst buraxılması və udulmasının artırılması üsulları,” Patent WO2010075065, 2010. Baxış: Google Scholar
  59. M. D. Del Curto, D. Chicco və P. Esposito, "Lipid microparticles by cryogenic micronization," Patent US2004091522, 2004. Baxış: Google Scholar
  60. K. Amighi və T. Sebti, “Bərk lipid hissəcikləri inhalyasiya üçün farmasötik cəhətdən məqbul doldurucular və ya daşıyıcılar”, Patent WO2006066367, 2006. Baxın: Google Scholar
  61. L. A. Dellamary, J. Riess, E. G. Schutt, J. G. Weers və T. E. Tarara, “Dərmanların çatdırılması və istifadə üsulları üçün stabil metal ion-lipid tozlu əczaçılıq kompozisiyaları,” Patent WO0185137, 2001. Baxış: Google Scholar
  62. R. Cavalli, C. Trotta və M. Trotta, “Metodo per la preparazione di micro e nanoparticelle lipidiche,” Patent ITTO2008A000475, 2008. Baxın: Google Scholar
  63. L. Rodriguez, C. Cavallari, və G. Motta, “Aktiv tərkib hissəsinin idarə olunan buraxılması ilə bərk formaların hazırlanması üçün aparat və üsul,” Patent WO9603979, 1996. Baxış: Google Scholar
  64. R. H. Müller, M. Radtke və S. A. Wissing, "Kosmetik və dermatoloji preparatlarda bərk lipid nanohissəcikləri (SLN) və nanostrukturlu lipid daşıyıcıları (NLC)," Qabaqcıl Dərman Çatdırılma Rəyləri, cild. 54, səh. S131–S155, 2002. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  65. S. A. Wissing, O. Kayser və R. H. Müller, "Parenteral dərman çatdırılması üçün bərk lipid nanohissəcikləri", Qabaqcıl Dərman Çatdırılma Rəyləri, cild. 56, yox. 9, səh. 1257–1272, 2004. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  66. H. Harde, M. Das və S. Jain, "Bərk lipid nanohissəcikləri: ağızdan bioavailability gücləndirici vasitə," Dərman Çatdırılması üzrə Ekspert Rəyi, cild. 8, yox. 11, səh. 1407–1424, 2011. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  67. G. Fricker, T. Kromp, A. Wendel et al., "Oral dərman çatdırılmasında fosfolipidlər və lipid əsaslı formulalar," Əczaçılıq Tədqiqatı, cild. 27, yox. 8, səh. 1469–1486, 2010. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  68. S. Weber, A. Zimmer və J. Pardeike, "Ağciyər tətbiqi üçün bərk lipid nanohissəcikləri (SLN) və nanostrukturlu lipid daşıyıcıları (NLC): Ən müasir vəziyyətin nəzərdən keçirilməsi," Avropa Əczaçılıq və Biofarmasevtika Jurnalı, cild. 86, yox. 1, səh. 7–22, 2014. Baxın: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  69. L. Battaglia, L. Serpe, F. Foglietta et al., "Lipid nanohissəciklərinin göz dərmanının çatdırılmasına tətbiqi", Dərman Çatdırılması üzrə Ekspert Rəyi, cild. 13, yox. 12, səh. 1743–1757, 2016. Baxın: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  70. C. Keck, “Bərk hissəciklərin dəri təsirini gücləndirmək üçün lipid mikro və ya nanohissəcikləri ehtiva edən kompozisiyalar,” Patent WO2010051918, 2010. Baxış: Google Scholar
  71. K. Padois, F. Pirot və F. Falson, “Minoksidil və eyni tərkibli sulu suspenziyanı əhatə edən bərk lipid nanohissəcikləri”, Patent WO2010112749, 2010. Baxış: Google Scholar
  72. R. H. Müller, S. A. Wissing və K. Mäder, “UV radiasiyasını əks etdirən və ya udan, zərərli UV radiasiyasından qoruyan və təbii dəri maneəsini gücləndirən maddələr,” Patent WO0103652, 1999. Baxış: Google Scholar
  73. M. R. Gasco, “Transdermal administrasiya üçün uyğun SLN-lərə daxil edilmiş aktiv prinsiplərin formulaları,” Patent WO2008041116, 2008. Baxın: Google Scholar
  74. G. Dahms, A. Jung, and H. Seidel, “Compositions for targetted release of ətirlər və aromalar”, Patent WO2004098555, 2004. Baxış: Google Scholar
  75. J. C. Cho, C. K. Kang, S. H. Han, E.-D. Oğlu və H.H.Kang, “Omeqa-3 yağ turşusu olan dəri xarici istifadəsi üçün kompozisiya,” Patent US20100104522, 2010. Baxın: Google Scholar
  76. LA Miranda Ferreira, G. Assis Catro Goulart, R. Lambert Orefice, VT Lopes Buono, CA De Oliveira və GA Bohórquez Mahecha, “Retinoidlərin əczaçılıq tərkibinin əldə edilməsi prosesi, retinoidlərin törəmə məhsulları və onun istifadəsi,” Patent WO20091111 2009. Baxın: Google Scholar
  77. C. Mallard və L. Baudonnet, “Avermektin nanokapsullarından ibarət dermatoloji kompozisiyalar,” Patent S20130034612, 2013. Baxış: Google Scholar
  78. C. Krysxtof və H. Wosicka, “Saç tökülməsi və ya sızanaq üçün roksitromisinin bərk lipid nanohissəcikləri,” Patent WO2014077712, 2014. Baxış: Google Scholar
  79. C. A. D. Paula, A. M. R. Dias və R. A. Heffliger, “Aktiv kosmetik və/yaxud kovucu maddələrin davamlı buraxılması üçün nanoölçülü sistem”, Patent WO2017143421, 2017. Baxış: Google Scholar
  80. M. H. Andrade Santana, M. Chorilli, N. Fachinetti, P. Severino və R. Balansin Rigon, “Process to əldə bərk lipid nanohissəcikləri və onların istifadəsi,” Patent BR1020140173161, 2014. Baxış: Google Scholar
  81. P. R. Vavia və P. R. Wavikar, “Qəbə əleyhinə agentin bərk lipid nanohissəciklərinə əsaslanan formulası və onun hazırlanma üsulu,” Patent IN611/MUM/2011, 2011. Baxış: Google Scholar
  82. G. Jesudian, J. Gnana, C. Vijaya və I. P. Kaur, “Topik tazaroten bərk lipid nanohissəcikləri,” Patent IN149/CHE/2014, 2014. Baxış: Google Scholar
  83. P. A. S. Mandal, “Tərkibində bərk lipid nanohissəcikləri olan topikal gel,” Patent IN3658/MUM/2014, 2014. Baxış: Google Scholar
  84. G. D. Gupta, “Aritmiya üçün bərk lipid nanohissəciklərindən istifadə edərək diltiazem hidroxloridinin transdermal matriks tipli yamasının işlənməsi,” Patent IN201711046022, 2017. Baxış: Google Scholar
  85. I. P. Kaur, T. Geetha, K. Meenakshi və B. Gautam, “Sesamol bərk lipid nanohissəciklərindən ibarət əczaçılıq aktual kompozisiyaları,” Patent IN428/DEL/2010, 2010. Baxış: Google Scholar
  86. S. Jain, R. A. Sonawane, H. P. Harde və M. K. Katariya, “Sedef xəstəliyinin effektiv müalicəsi üçün yeni submikronik aktual formulasiya”, Patent IN1394/DEL/2011, 2012. Baxış: Google Scholar
  87. S. Majumdar, S. K. Samanta və S. Sarkar, “Acyclovir loaded solid lipid nanoparticulate gel for topik tətbiqi və eyni formalaşdırma metodu,” Patent IN26/KOL/2014, 2014. Baxış: Google Scholar
  88. L. B. Jensen və K. Peterson, “Lipid nanohissəcikləri və kortikosteroid və ya D vitamini törəmələrindən ibarət kompozisiya,” Patent WO2012127037, 2012. Baxış: Google Scholar
  89. F. B. Vanderbist, K. Amighi və G. Pilcer, “İnhalyasiya üçün təkmilləşdirilmiş əczaçılıq quru toz kompozisiyaları”, Patent WO2009050217, 2009. Baxın: Google Scholar
  90. A. Faure, JFM Voorspoels, RJM Mertens və FRI Kiekens, “Əczaçılıqda istifadə üçün bərk dozaj formasının, xüsusən də tabletin hazırlanması prosesi və bərk dozaj forması üçün prekursorun hazırlanması prosesi, xüsusən də planşet,” Patent US2011082214, 2011. Baxın: Google Scholar
  91. VE Babii, AV Ignatiev, SE Gelperina, OO Maksimenko, LV Vachugova və EV Shipulo, “Bütün lipid nanohissəciklərinə əsaslanan Helicobacter pylori tərəfindən törədilən vərəm və xəstəliklərin müalicəsi üçün dərman tərkibi və vərəmin müalicəsi metodu,” Patent EA200900, EA15, View02. : Google Scholar
  92. J. Weiss, C. Maier, A. Kessler, C. Tedeschi, B. Leuenberger və M. Novotny, "Bərk lipid nanohissəcikləri (II)," Patent WO2014140268, 2014. Baxış: Google Scholar
  93. J. Weiss, C. Maier, B. Leuenberger, M. Novotny, C. Tedeschi və A. Kessler, "Bərk lipid nanohissəcikləri (I)," Patent WO2014140264, 2014. Baxın: Google Scholar
  94. Q. R. Cao, L. L. Shi, T. Y. Cao və J. H. Cui, “Docetaxel bərk lipid nanohissəciklərinin liofilləşdirilmiş hazırlanması və onların hazırlanma üsulu,” Patent CN201510071840, 2015. Baxış: Google Scholar
  95. J. G. Kim, H. S. Kim, J. H. Cha, A. Alamzeb və S. Q. Omer, "Oral tətbiq üçün dosetaksel ehtiva edən bərk lipid nanohissəcik tərkibi", Patent KR20150093510, 2015. Baxış: Google Scholar
  96. CCF Mosqueira, LT Oliveira və RG Castanheira, “Tərkibində benznidazol və onun törəmələri olan mikro və nanostrukturlu əczaçılıq və baytarlıq kompozisiyaları, mədə-bağırsaq traktında mikro və nanostrukturlar və onların bioloji istifadələri,” Patent Baxışı: WO392:015092. Google Alim
  97. H. Lin, S. Zhang, H. Deng, T. Chen, Y. Li və C. Yu, “Hydrobromic acid lappaconitine solid lipid nanohissiccle and Preparation method of them,” Patent CN200910192553, 2009. Baxış: Google Scholar
  98. L. X. Zhang, M. Xue və Z. Z. Jiang, “Triptergium wilfordii qlikozidlərinin bərk lipid nanohissəcikləri və onların hazırlanma üsulu,” Patent CN200910034968, 2009. Baxış: Google Scholar
  99. T. Jun, D. Wang, H. T. Ge, və Y. Tao, “Finasteridin bərk lipid nanohissəcikləri və onların hazırlanma üsulu,” Patent CN200910027782, 2009. Baxış: Google Scholar
  100. L. Gu, W. Lu, T. Chen və L. Yu, "Asiya turşusu trometamin duzunun lipid nanohissəciklərinin hazırlanması və onun hazırlanması üsulu," Patent CN201410531574, 2014. Baxış: Google Scholar
  101. N. Feng, Y. W. Liu, R. Tan və Z. Chen, "Nanostrukturlaşdırılmış lipid daşıyıcısı, hazırlanma üsulu və onun tətbiqi", Patent CN201010224865, 2010. Baxış: Google Scholar
  102. R. Pandey və G. K. Khuller, “İçində dərman və ya dərman preparatları olan bərk lipid nanohissəcikləri,” Patent IN430/DEL/2004, 2004. Baxış: Google Scholar
  103. A. K. Bansal və K. Vasukumar, “Mütəxəssislərin bioavailability təkmilləşdirilməsi üsulu, bərk lipid nanohissəciklərindən istifadə etməklə,” Patent IN3139/DEL/2005, 2005. Baxış: Google Scholar
  104. N. V. Satheesh Madhav, “Kakao yağı biolipidindən istifadə edərək tenofovir yüklü bərk lipid nanohissəciklərinin formalaşdırılması,” Patent IN3310/DEL/2012, 2012. Baxış: Google Scholar
  105. I. P. Kaur və H. Singh, “Rifampisinin bioavailability yaxşılaşdırılması üçün bərk lipid nanohissəciklərinin hazırlanması prosesi,” Patent IN3356/DEL/2012, 2012. Baxış: Google Scholar
  106. N. V. Satheesh Madhav, “Kolon spesifikliyi üçün azatioprin bərk lipid nanohissəciklərinin dizaynı”, Patent IN3509/DEL/2012, 2012. Baxış: Google Scholar
  107. M. D. Sabir və S. Amin, “Bərk lipid nanohissəcikləri lerkanidipin daşıyıcısı kimi, oral bioavailability üçün amexanizm,” Patent IN264/DEL/2013, 2013. Baxış: Google Scholar
  108. G. J. C. B. Gupta, K. R. Jadhav, P. P. S. Pednekar və V. J. Kadam, "Şəkərli diabet üçün effektiv daşıyıcı sistem kimi qlipizid ehtiva edən bərk lipid nanohissəcikləri", Patent IN1365/MUM/2014, 2014. Baxış: Google Scholar
  109. V. B. Patravale və P. A. Patel, “Lipidik nanohissəciklərə əsaslanan tərkib və onların hazırlanması və istifadəsi üsulu,” Patent IN3329/MUM/2010, 2010. Baxış: Google Scholar
  110. J. Natarajan, S. Sood, K. Jain, G. Kuppusamy, E. Kannan və S. Bhojraj, “Olanzapinin bərk lipid tərkibi üçün gücləndirilmiş oral bioavailability,” Patent IN2194/CHE/2010, 2010. Baxış: Google Alim
  111. S. K. Rajput, S. Gullaiya və D. Naqpal, "Alkoqol intoksikasiyası üçün bitki nanohissəciklərinə əsaslanan hədəfli dərman çatdırılması," Patent IN2960/DEL/2014, 2014. Baxış: Google Scholar
  112. K. Na, S.-W. Jin, D. -H. Li, K.-B. Hahm, H.-C. Shinn və G.-J. Chung, “Dərman çatdırılması üçün bərk lipid nanohissəcikləri, bunun üçün istehsal üsulu və nanohissəciklərdən ibarət inyeksiya üçün hazırlıq”, Patent WO2009102121, 2009. Baxın: Google Scholar
  113. M. R. Gasco, G. P. Zara və M. F. Saettone, "Oftalmoloji xəstəliklərin müalicəsi üçün uyğun dərman kompozisiyaları," Patent WO2004039351, 2004. Baxış: Google Scholar
  114. A. Rodriguez-Gascón, M. A. Solinís Aspiazu, A. Del Pozo-Rodriguez, D. Delgado San Vicente və E. Fernandez Jover, “Okulyar xəstəliklər üçün lipid nanohissəciklər,” Patent WO2012085318, 2012-ci il. Google S.
  115. A. R. Blanco, M. L. Bondì, G. Cavallaro et al., “Okulyar xəstəliklərin müalicəsi üçün silibinin və digər aktiv maddələrin çatdırılması üçün nanostrukturlaşdırılmış formulalar,” Patent WO2016055976 2016. Baxış: Google Scholar
  116. I. P. Kaur və M. Yadav, “Okulyar formula və onun hazırlanması üsulu,” Patent IN2339/DEL/2014, 2014. Baxış: Google Scholar
  117. J. Kong, W. Pan, J. Liu et al., “A farmasevtik nanostrukturlu lipid daşıyıcısı - IOL System and Its Application,” Patent CN201610005904, 2016. Baxış: Google Scholar
  118. M. Üner, S. Damgalı, S. Özdemir və B. Çelik, “Lipid nanohissəcikləri vasitəsi ilə dərman çatdırılmasının terapevtik potensialı: reallıq, yoxsa illüziya?”. Cari Əczaçılıq Dizaynı, cild. 23, yox. 43, səh. 6573–6591, 2017. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  119. M. Geszke-Moritz və M. Moritz, “Cəlbedici dərman vasitələri kimi bərk lipid nanohissəcikləri: tərkibi, xassələri və terapevtik strategiyalar,” Material Elmləri və Mühəndisliyi: C, cild. 68, səh. 982–994, 2016. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  120. H. L. Wong, R. Bendayan, A. M. Rauth, Y. Li və X. Wu, "Bərk lipid nanohissəcikləri ilə əhatə olunmuş antikanser dərmanlarla kemoterapi," Qabaqcıl Dərman Çatdırılma Rəyləri, cild. 59, yox. 6, səh. 491–504, 2007. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  121. L. Gastaldi, L. Battaglia, E. Peira et al., "Bərk lipid nanohissəcikləri narkotik vasitələrin beyinə daşınması kimi: sənətin mövcud vəziyyəti", Avropa Əczaçılıq və Biofarmasevtika Jurnalı, cild. 87, yox. 3, səh. 433–444, 2014. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  122. R. A. Del Pozo, D. Delqado, M. A. Solinis və A. R. Gascon, “Lipid nanohissəcikləri makromolekullar üçün vasitə kimi: nuklein turşuları və peptidlər”, Dərman Çatdırılması və Formulyasiyası üzrə Son Patentlər, cild. 5, səh. 214–226, 2011. Baxın: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  123. A. J. Almeida və E. Souto, "Peptidlər və zülallar üçün dərman daşıma sistemi kimi bərk lipid nanohissəcikləri", Qabaqcıl Dərman Çatdırılma Rəyləri, cild. 59, yox. 6, səh. 478–490, 2007. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  124. L. Monteneqro, “Lipid əsaslı nanohissəciklər antioksidantların dəriyə çatdırılması üçün daşıyıcı kimi” Mövcud Dərman Metabolizması, cild. 18, yox. 5, səh. 469–480, 2017. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  125. S. Nunes, A. R. Madureira, D. Campos və başqaları, "Fenol birləşmələrinin ağızdan çatdırılması sistemləri kimi bərk lipid nanohissəcikləri: qidalanma tətbiqləri üçün farmakokinetik məhdudiyyətlərin aradan qaldırılması," Qida Elmləri və Qidalanma üzrə Tənqidi Baxışlar, cild. 57, yox. 9, səh. 1863–1873, 2015. Baxın: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  126. A. D. Miller, "Xərçəng diaqnozu və müalicəsində lipid əsaslı nanohissəciklər" Dərman Çatdırılma Jurnalı, cild. 2013, Məqalə nömrəsi 165981, 9 səhifə, 2013. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  127. GP Vassal, K. Ioulalen, BC Brun və N. Lassu, “Pediatriyada faydalı bərk lipid hissəcikləri şəklində qalenik forma, lipid matrisində temozolomiddən ibarətdir, burada matrisin doymuş yağ turşuları ilə trigliseridləri və bir qarışığı var. spesifik yağ turşuları olan yağ turşuları,” Patent FR2935270, 2010. Baxın: Google Scholar
  128. M. R. Gasco, “Xolesteril propionat və/və ya xolesteril butiratdan ibarət bərk lipid nanohissəciklərinin istifadəsi,” Patent WO2006128888, 2006. Baxış: Google Scholar
  129. M. R. Gasco, “Hüceyrələrə sürətlə daxil olmaq üçün uyğun olan bərk lipid nanosferlər”, Patent US6685960, 2004. Baxın: Google Scholar
  130. M. R. Gasco, P. Gasco və A. Bernareggi, “Platin birləşmələrinin nanohissəcik formulaları,” Patent WO2005092298, 2005. Baxış: Google Scholar
  131. J. P. Benoit və A. Lamprecht, “Kolloid daşıyıcının səthində P-qlikoprotein inhibitor səthi aktiv maddələrin istifadəsi,” Patent WO2004071498, 2004. Baxış: Google Scholar
  132. B. X. Xu, Y. Z. Vanq və J. Zheng, “Cucurbitacin bərk lipid nanohissəciklərinin hazırlanması və onun hazırlanması üsulu,” Patent CN200910065523, 2009. Baxış: Google Scholar
  133. D. H. Xu, “Suda həll olunan anti-şiş dərmanının bərk lipid nanohissəciklərinin hazırlanması üsulu,” Patent CN201110022618, 2011. Baxış: Google Scholar
  134. Y.-P. Li, L. L. Chen və W.-W. Gu, “Uzun dövran edən bərk lipid dosetaksel nanohissəcikləri və onların hazırlanma üsulu,” Patent CN200810041865, 2008. Baxış: Google Scholar
  135. N. Feng, F. Shi, Y. Liu, J. Zhao, and Y. Zhang, “Chinese bitki mənşəli birləşmə antitümör nanopreparasiyası və istifadəsi,” Patent WO2014206093, 2014. Baxış: Google Scholar
  136. D. Pandita, A. Ahuja, R. Kakhar və başqaları, “Paklitakselin çatdırılması üçün bərk lipid nanoptiküllərinin istehsalı üçün yeni dəyişdirilmiş inyeksiya texnikası”, Patent IN421/DEL/2008, 2008. Baxış: Google Scholar
  137. M. L. G. Bondi, E. F. Craparo və F. Draqo, "Riluzol ehtiva edən nanostrukturlaşdırılmış lipid daşıyıcıları və qeyd olunan hissəcikləri ehtiva edən dərman preparatları", Patent US2010247619, 2010. Baxış: Google Scholar
  138. A. Nagler, “Beyin şişlərinin müalicəsi üçün Edelfosine”, Patent US6514519, 2003. Baxış: Google Scholar
  139. R. H. Müller, M. Lück və J. Kreuter, “Dərmanların toxumalara xüsusi tətbiqi üçün dərman köməkçi hissəcikləri”, Patent WO9920256, 1997. Baxış: Google Scholar
  140. Y. İvri, “Bərk lipid nanohissəcikləri: mərkəzi sinir sisteminə intrakoxlear dərman çatdırılması,” Patent WO2011019954, 2011. Baxış: Google Scholar
  141. M. R. Gasco, “Mikrohissəciklər selikli qişa və qan-beyin baryeri vasitəsilə dərman ötürülməsi,” Patent WO9927918, 1999. Baxın: Google Scholar
  142. J. Schwarz və M. Weisspapir, “Nevroloji xəstəliklərin müalicəsi üçün idebenon tərkibi,” Patent US20100129431, 2010. Baxış: Google Scholar
  143. J. Shi və T. Zhang, “Aripiprazolun inyeksiyası və hazırlanma metodu,” Patent CN201610002634, 2016. Baxın: Google Scholar
  144. S. L. Wang, R. R. Zhu və X. L. He, "Bərk lipid nanohissəciklərinin antidepresan dərman daşıyıcısı kimi tətbiqi", Patent CN201610262638, 2016. Baxış: Google Scholar
  145. J. Abraham, V. Mittal, R. Saha və V. Naqpal, "Tapentadolun bərk lipid nanohissəcikləri," Patent IN201621034343, 2016. Baxış: Google Scholar
  146. V. T. Kadam və B. K. Nanjvade, “Neyrodejenerativ xəstəliklərin müalicəsi üçün nanostrukturlaşdırılmış lipid daşıyıcı dərman daşıyıcı sistemlər,” Patent IN1251/MUM/2012, 2012. Baxış: Google Scholar
  147. A. V. Bhalerao və S. V. Şirolkar, “Selikli qişanın çatdırılması üçün uyğun olan bərk lipid nanohissəcikli dərmanların çatdırılması sistemi,” Patent IN2009/MUM/2012, 2012. Baxın: Google Scholar
  148. N. V. Satheesh Madhav, "Qulaq vasitəsilə beyin hədəflənməsi üçün karbidopa bio-nanohissəcikləri," Patent IN3451/DEL/2012, 2012. Baxış: Google Scholar
  149. C. Kneuer, C.-M. Lehr, C. Olbrich və RH Müller, “Azaldılmış toksikliyə, daha yüksək fiziki sabitliyə və daha yüksək transfeksiya səmərəliliyinə və onların istehsalı üsuluna malik olan transfeksiya kompleksləri (Transoplex), Patent WO02051446, 2002. Baxış: Google Alim
  150. T.-G. Park, H.-Y. Kim və I.-K. Kim, “Nüklein turşusu geninin ötürülməsi üçün LDL kimi kationik nanohissəciklər, onların hazırlanması üsulu və eyni istifadə edərək nuklein turşusu geninin çatdırılması üsulu,” Patent WO2009051451, 2009. Baxış: Google Scholar
  151. J.-P. Benoit, B. Pitard, P. Saulnier, C. Passirani, O. Lambert, and A. Vonarbourg, “Nanocapsules of lipophilic complexes of nuclein acids,” Patent WO2008096321, 2008. Baxış: Google Scholar
  152. M. R. Gasco, “Lipid nanohissəcikləri nuklein turşuları üçün vasitə kimi, onların hazırlanması və istifadəsi prosesi,” Patent WO2005120469, 2005. Baxış: Google Scholar
  153. A. Rodríguez-Gascón, M. A. Solinís Aspiazu, A. Del Pozo-Rodriguez, D. Delgado San Vicente və J. L. Pedraz Munoz, "Gen terapiyası üçün lipid nanohissəciklər", Patent WO2011015701, 2012-ci ildə Google Scholar.
  154. W. Ying, R. Adami, Y. Wang, H. Ying, L. Wang, and D. Liu, "Compositions and methods for nanoparticle liophile forms", Patent WO2017015552, 2017. Baxış: Google Scholar
  155. Z. Cui və R. J. Mumper, “Nanohissəciklərə əsaslanan vaksin çatdırılması sistemi, tərkibində köməkçi maddə,” Patent WO20040530056, 2004. Baxın: Google Scholar
  156. I. P. Kaur, G. Sharma, K. Chopra, S. Puri, M. Bishnoi və P. Rishi, “Process for incapsulating macrobiomolecules in solid lipid nanohissicles,” Patent IN201611003140, 2016. Baxış: Google Scholar
  157. L. Penkler, R. H. Müller, S. Runge və V. Ravelli, “Təkmilləşdirilmiş biofarmasötik xüsusiyyətlərə, təkmilləşdirilmiş fiziki keyfiyyətə və daha yüksək sabitliyə malik əczaçılıq siklosporin formulası və sözügedən formulanın istehsal üsulu,” Patent WO9956733, 1999. Baxış: Google Scholar
  158. Y. Chen, H. Liu və M. J. Pan, “Sirolimus ehtiva edən xarici preparat, habelə hazırlanma üsulu və tətbiqi”, Patent CN201610203074, 2016. Baxış: Google Scholar
  159. M. Gallarate, E. Peira və L. Battaglia, “Yağlı turşunun koaservasiya üsulundan istifadə edərək ion cütü şəklində antikorları ehtiva edən bərk lipid nanohissəciklərin hazırlanması üsulu,” Patent WO2015007398, 2015. Baxış: Google Scholar
  160. M. Dorly del Curto, D. Chicco, and P. Esposito, “Amphiphilic lipid nanohissicles for peptide and/or protein incorporation,” Patent WO02051390, 2002. Baxış: Google Scholar
  161. J. Richard, H. G. Baldascini, R. Agostinetto, L. De Angelis və F. Deschamps, "Daxili bərk nüvədə böyümə hormonu ehtiva edən bərk lipid mikrokapsulları," Patent WO2009080164, 2009. Baxış: Google Scholar
  162. J. Richard, F. Fais, and H. Baldascini, “Solid lipid microcapsules containing hGH,” Patent WO2010017965, 2010. Baxış: Google Scholar
  163. R. H. Müller, N. Grubhofer və C. Olbrich, “Sabitlik və biouyğunluq (SBA) baxımından optimallaşdırılmış və humoral və hüceyrə immun reaksiyalarını artırmaq üçün təkmilləşdirilmiş adjuvant,” Patent WO0071077, 2000. Baxış: Google Scholar
  164. R. H. Müller, N. Grubhofer və C. Olbrich, “Humoral və hüceyrə immun reaksiyasını artırmaq üçün stabillik, biouyğunluq optimallaşdırılmış köməkçi (SBA),” Patent WO0071154, 2000. Baxış: Google Scholar
  165. D. Burkhart, J. T. Evans, H. Oberoi və Y. M.Yorgensen, “Yeni köməkçi formulalar,” Patent WO2017097783, 2017. Baxın: Google Scholar
  166. A. Bot, L. Dellamary, D. Smith, and C. M. Woods, "Mühəndisləşdirilmiş sprey qurudulmuş lipid əsaslı mikrohissəciklər hüceyrə hədəflənməsi üçün," Patent WO0164254, 2001. Baxış: Google Scholar
  167. X. G. Vanq, Y. Çen və J. Huanq, “Katalaza bərk lipid nanohissəciklərinin hazırlanmasının hazırlanması üsulu”, Patent CN201010522545, 2010. Baxış: Google Scholar
  168. K. K. Rao, “Terapevtik zülalların və peptidlərin ağız və ya selikli qişaya çatdırılması üçün polimerləşdirilmiş bərk lipid nanohissəcikləri,” Patent WO2007113665, 2007. Baxış: Google Scholar
  169. J. Schwarz və M. Weisspapir, “Əczaçılıqda istifadə üçün kolloid bərk lipid vasitə,” Patent WO2006102768, 2006. Baxın: Google Scholar
  170. S. M. Nazzal və P. W. Sylvester, "Tokotrienol tərkibi," Patent WO2011028757, 2011. Baxın: Google Scholar
  171. S. A. Frautschy və G. M. Koul, “Alzheimer xəstəliyi və digər yaşa bağlı pozğunluqların müalicəsi üçün bioavailable curcuminoid formulaları,” Patent WO2007103435, 2007. Baxın: Google Scholar
  172. A. K. Bansal, B. Munjal, və S. V. Patel, “Özü nano-emulsiyaya çevrilmiş kurkuminoidlərin tərkibi, yüksək bioavailability,” Patent WO2010010431, 2010. Baxış: Google Scholar
  173. I. P. Kaur və M. K. Verma, “Vitaminlərin çatdırılması üçün bərk lipid davamlı buraxılan nanohissəciklərin hazırlanması prosesi,” Patent WO2013105026, 2013. Baxış: Google Scholar
  174. K. Westesen və B. Siekmann, “Dəyişdirilmiş kimyəvi xassələri olan hissəciklər, onların tətbiqi və istifadəsi,” Patent WO9505164, 1995. Baxış: Google Scholar
  175. K. Satyavani, T. Ramanathan, S. Gurudeeban və T. Balasubramanian, “Rutin yüklü bərk lipid nanopretiküllərindən istifadə edərək diabet və diabetik ayaq xorasının müalicəsi üçün dərman. Diabet və diabetik ayaq xorasının ağızdan dərman şəklində müalicəsi və diabetik ayaq yarasının məlhəm şəklində müalicəsi,” Patent IN718/CHE/2013, 2013. Baxış: Google Scholar
  176. I. P. Kaur və M. K. Verma, “D3 vitamini və retinoik turşunun bərk nanolipidik hissəcikləri,” Patent IN79/DEL/2012, 2012. Baxış: Google Scholar
  177. J. H. Sun, H. Yuan, F. Liu və S. Q. Çen, “Bərk lipid maqnit rezonans nanohissəcikləri və hazırlanma üsulu və onlardan istifadə”, Patent WO2017041609, 2017. Baxış: Google Scholar
  178. S. Ghiani, A. Maiocchi, C. Brioschi, M. Visigalli, C. Cabella və L. Miragoli, “MRT üçün metal amfifil kompleksləri ehtiva edən paramaqnit bərk lipid nanohissəcikləri (PSSLNS),” Patent WO2014037498, 2014. Baxış: Google Alim
  179. S. Ghiani, A. Maiocchi, L. Caminiti və L. Miragoli, “Flüoresan bərk lipid nanoptikulların tərkibi və hazırlanması,” Patent WO2014191467, 2014. Baxış: Google Scholar
  180. S. K. Hahn, W. H. Kong və K. Park, “Aşağı sıxlıqlı lipoprotein analoq nanohissəcikləri və tərkibində qaraciyərin məqsədyönlü diaqnostikası və müalicəsi üçün eyni tərkib,” Patent WO2014058179, 2014. Baxış: Google Scholar
  181. F. Yuan, M. Cao, C. Li, X. Wang, S. Chen və J. Kong, "Emamektin benzoat bərk lipid nanohissəcik, və onun hazırlanma metodu və insektisid formalaşdırılmasında tətbiqi", Patent CN200910192863, 2009. : Google Scholar
  182. R. Müller, U. Aleksiyev, P. Sinambela və C. M. KekN. Dragicevic və H. Maibach, "Nanostrukturlaşdırılmış lipid daşıyıcıları (NLC): bərk lipid nanohissəciklərinin ikinci nəsli", Perkutan Penetrasiya Gücləndiriciləri Penetrasiya Gücləndirilməsində Kimyəvi Metodlar, Springer, Berlin, Almaniya, 2016. Baxış: Publisher Site | Google Alim
  183. M. Üner və G. Yener, “Müxtəlif idarəetmə yollarında bərk lipid nanohissəciklərinin (SLN) əhəmiyyəti və gələcək perspektiv”, Beynəlxalq Nanomedicine Jurnalı, cild. 2, yox. 3, səh. 289–300, 2007. Baxın: Google Scholar
  184. P. Severino, T. Andreani, A. S. Macedo et al., "Oral dərmanların çatdırılması üçün lipid nanohissəcikləri (SLN və NLC) üzrə cari müasir və yeni tendensiyalar", Dərman Çatdırılma Jurnalı, cild. 2012, Məqalə nömrəsi 750891, 10 səhifə, 2012. Baxış: Publisher Site | Google Alim
  185. B. K. Nanjwade, D. J. Patel, R. A. Udhani və F. V. Manvi, "Suda zəif həll olunan dərmanların ağızdan bioavailability artırmaq üçün lipidlərin funksiyaları", Scientia Pharmaceutica, cild. 79, yox. 4, səh. 705–727, 2011. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  186. S. Kalepu, M. Manthina və V. Padavala, “Oral lipid əsaslı dərman çatdırma sistemləri – ümumi baxış” Acta Pharmaceutica Sinica B, cild. 3, yox. 6, səh. 361–372, 2013. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  187. A. Beloqui, M. A. Solinis, A. Rodríguez-Gascón, A. J. Almeida və V. Préat, "Nanostrukturlaşdırılmış lipid daşıyıcıları: gələcək klinikalar üçün perspektivli dərman çatdırma sistemləri" Nanomedicine: Nanotexnologiya, Biologiya və Tibb, cild. 12, yox. 1, səh. 143–161, 2016. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  188. M. Radtke və R. Müller, “Nanostrukturlu lipid dərman daşıyıcıları,” Yeni Dərmanlar, cild. 2, səh. 48–52, 2001. Baxın: Google Scholar
  189. C. Carbone, S. Cupri, A. Leonardi, G. Puglisi və R. Pignatello, "Dərmanların çatdırılması və hədəflənməsi üçün lipid əsaslı nanodaşıyıcılar: istehsal və xarakteristikası üsullarının patent sorğusu", Əczaçılıq Patent Analitiki, cild. 2, yox. 5, səh. 665–677, 2013. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  190. C. Carbone, A. Leonardi, S. Cupri, G. Puglisi və R. Pignatello, "Lipid əsaslı nanodaşıyıcıların əczaçılıq və biotibbi tətbiqləri," Əczaçılıq Patent Analitiki, cild. 3, yox. 2, səh. 199–215, 2014. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  191. A. Garces, M. H. Amaral, J. M. Sousa Lobo və A. C. Silva, "Dəri istifadəsi üçün bərk lipid nanohissəciklərinə (SLN) və nanostrukturlu lipid daşıyıcılarına (NLC) əsaslanan formulalar: icmal," Avropa Əczaçılıq Elmləri Jurnalı, cild. 112, səh. 159–167, 2018. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  192. A. D. Mainard, R. J. Aitken, T. Butz və başqaları, “Nanotexnologiyanın təhlükəsiz idarə edilməsi”, Təbiət, cild. 444, yox. 7117, səh. 267–269, 2006. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  193. M. Geiser və W. G. Kreyling, "Nəfəs alınan nanohissəciklərin çökməsi və biokinetikası", Hissəcik və Lif Toksikologiyası, cild. 7, yox. 1, səh. 2, 2010. Baxış: Publisher Site | Google Alim
  194. C. M. Keck və R. H. Müller, "Nanotoksikoloji təsnifat sistemi (NCS) - nanohissəcikli dərmanların çatdırılması sistemlərinin risk-fayda qiymətləndirilməsi üçün bələdçi", Avropa Əczaçılıq və Biofarmasevtika Jurnalı, cild. 84, yox. 3, səh. 445–448, 2013. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  195. EMA, İnsan İstifadəsi üçün Nanotexnologiyaya əsaslanan Dərman Məhsulları haqqında Reflection Paper, EMA, 2006.
  196. M. L. Etheridge, S. A. Campbell, A. G. Erdman, C. L. Haynes, S. M. Wolf və J. McCullough, "Nanomedicine haqqında böyük şəkil: tədqiq edilmiş və təsdiqlənmiş nanomedici məhsulların vəziyyəti" Nanomedicine, cild. 9, yox. 1, səh. 1–14, 2013. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  197. U. M. Musazzi, V. Marini, A. Casiraghi və P. Minghetti, “Avropa tənzimləmə çərçivəsi nanomateriallar olan sağlamlıq məhsullarından istifadə edən vətəndaşların təhlükəsizliyini təmin etmək üçün kifayətdirmi?” Bu gün narkotik kəşfi, cild. 22, yox. 6, səh. 870–882, 2017. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  198. A. Hafner, J. Lovric, G. P. Lakos və I. Pepić, “Aİ-də nanoterapevtiklər: cari vəziyyət və gələcək istiqamətlərə baxış”, Beynəlxalq Nanomedicine Jurnalı, cild. 9, səh. 1005–1023, 2014. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  199. M. Hay, D. W. Thomas, J. L. Craighead, C. Economides və J. Rosenthal, "Tədqiqat dərmanları üçün klinik inkişaf müvəffəqiyyət dərəcələri" Təbiət Biotexnologiyası, cild. 32, yox. 1, səh. 40–51, 2014. Baxış: Publisher Site | Google Alim

Müəllif hüququ

Müəllif hüquqları © 2019 Luigi Battaglia və Elena Ugazio. Bu, Creative Commons Attribution License əsasında paylanmış açıq giriş məqaləsidir və orijinal əsərə lazımi sitat gətirmək şərti ilə istənilən mühitdə məhdudiyyətsiz istifadəyə, paylanmağa və təkrar istehsala icazə verir.


Giriş

Bitkilərin aşağı temperatura məruz qalması həm yabanı, həm də mədəni bitkilərin məhsuldarlığına, eləcə də coğrafi paylanmasına təsir edir və bitki metabolizmində əhəmiyyətli dəyişikliklərə səbəb olur (Alberdi və Corcuera 1991, Graham və Patterson 1982, Guy 1990). Bitkinin soyuq stresə reaksiyası mürəkkəb ola bilər və temperaturun 0°C-dən yuxarı və ya aşağı qalmasından, məruz qalma müddətindən və bitkinin soyuqlara uyğunlaşma qabiliyyətinə malik olub-olmamasından asılı olacaq. Meşəli bitkilərdə aşağı temperatura reaksiya da qısa fotoperiod reaksiyası ilə əlaqələndirilir. Aşağı, donmayan temperaturlara cavab olaraq bitkilərdə baş verən və onların donma dözümlülüyünü artırmağa imkan verən proses soyuq uyğunlaşma adlanır (Guy 1990, Thomashow 1998). O, gen ifadəsində, zülal ifadəsində və metabolitlərində fərqli dəyişiklikləri əhatə edir (Hurry və digərləri 1995, Kaplan və digərləri 2004, Orvar və digərləri 2000, Öquist və başqaları 2001, Renaut və digərləri 2004, 2005, Thomashow və digərləri 2001 ).

Donma, duz və su stressi kimi hüceyrə susuzlaşması ilə nəticələnən ətraf mühit stresləri çox vaxt bitki geninin ifadəsində və maddələr mübadiləsində oxşar dəyişikliklərə səbəb olur (Cook et al. 2004, Kaplan et al. 2004, Kreps et al. 2002, Rabbani et al. 2003, Seki et al. 2001) və onların siqnal yollarında çarpaz söhbət mövcuddur (Chinnusamy et al. 2004, Knight and Knight 2001). Göstərilmişdir ki, bu susuzlaşdırma şəraiti hər iki ümumi cavab yollarını işə sala bilər [məs. Ca 2+ vasitəçiliyi ilə cavab, mitogenlə aktivləşdirilmiş zülal kinaz (MAPK) kaskadları (Zhang və Klessig 2001), eləcə də stressə xas olanlar (məsələn, ICE1, Chinnusamy et al. 2003, Fowler and Thomashow 2002, Sung et al. 2001) )]. Mikroarraylar kimi genomik yanaşmaların istifadəsi və müxtəlif stresə məruz qalan və stressə məruz qalmayan bitki növlərindən, həmçinin eyni növ daxilindəki müxtəlif toxumalardan tərtib edilmiş ifadə ardıcıllığı etiketlərinin bioinformatika təhlili genlərdə qlobal dəyişiklikləri aşkar etməklə çoxlu məlumat təmin etmişdir. ifadə və cavabın mürəkkəbliyini aşkar etməklə. Aşağı temperaturda induksiya olunan genlər müəyyən edilmiş və gen transferi ilə bitkilərin donma dözümlülüyünü yaxşılaşdırmaq üçün istifadə edilsə də (Holmberg və Bulow 1998), artan tolerantlıq çox vaxt çox təvazökar olur və zərərli fenotipik əlamətlərlə nəticələnə bilər. Məlum olub ki, aşağı temperaturlu stresslə mübarizə mexanizmləri mürəkkəb və multigenikdir (Hughes and Dunn 1996, Thomashow 1998). Buna görə də, soyuq dözümlülük prosesini daha yaxşı başa düşmək və müqaviməti yaxşılaşdırmaq üçün strategiyaları inkişaf etdirmək üçün müəyyən edilmişdir ki, genomik yanaşmalar transkriptom, proteom və metabolom daxil olmaqla bir neçə səviyyədə bitkinin keyfiyyət və kəmiyyət analizləri ilə tamamlanmalıdır.

Transkriptom səviyyəsində, mikroarray analizi kimi güclü üsullar mövcuddur və hansı genlərin ətraf mühitin stresinə reaksiyası və uyğunlaşmasında iştirak etdiyi haqqında çoxlu məlumat verir. Bununla belə, bu nəticələr mRNT bolluğu və zülal səviyyəsinin aydın şəkildə korrelyasiya edilməməsi (Gygi et al. 1999), aşağı nüsxə sayı mRNA-ların (tənzimləmə üçün potensial olaraq çox vacib) bol mRNA-lar qədər asanlıqla ölçülməməsi faktı ilə tarazlaşdırılmalıdır. və gen ifadəsi tədqiqatları nə gen məhsullarının hüceyrəaltı lokalizasiyası, nə də onun funksiyası, daşınması və aktivləşdirilməsi üçün vacib ola biləcək zülalda baş verən post-translational dəyişikliklər haqqında məlumat vermir (Rose et al. 2004). Soyuq stresə cavab olaraq, çoxlu sayda genin ya həddindən artıq ifadə olunduğu, ya da repressiyaya məruz qaldığı göstərilmişdir (Chen et al. 2002, Fowler and Thomashow 2002, Kreps et al. 2002, Seki et al. 2001, Shinozaki et al. 2003, Sung və başqaları 2001, 2003).

Transkript profilindən fərqli olaraq, metabolomika geniş spektrli metabolitlərin qlobal profilini təmin etmək üçün istifadə edilə bilər (Cook et al. 2004, Gray and Heath 2005, Kaplan et al. 2004). Bu məlumat hüceyrənin və ya orqanizmin biologiyasını başa düşmək üçün lazımdır, çünki müxtəlif metabolitlərin səviyyələri birbaşa fermentativ fəaliyyətin və transkripsiya və ya biokimyəvi proseslər üzərində dolayı hüceyrə tənzimlənməsinin xalis nəticəsidir. Proteomika, zülallarda qlobal dəyişikliklərin öyrənilməsi, transkriptom və metabolom arasında vacib bir körpü təmin edir. Aşağı temperaturlara və ətraf mühitin digər streslərinə cavab olaraq zülallarda dəyişikliklərin qlobal tədqiqatları vasitəsilə yeni zülallar, zülal-zülal qarşılıqlı əlaqəsi və translyasiyadan sonrakı dəyişikliklər müəyyən edilə bilər. Metabolomika, proteomika və transkriptomika və onların sistem biologiyasına inteqrasiyası ilə birlikdə hüceyrə biologiyasının hərtərəfli təhlilini və hüceyrə metabolizmini istiqamətləndirilmiş və idarə olunan şəkildə dəyişdirmək üçün strategiyaların işlənməsini təmin edəcəkdir.

Xüsusi müalicələrə cavab olaraq proteomun böyük hissələrinin təhlili ikiölçülü elektroforez (2DE) və ya tandem kütlə spektrometriyası (LC-MS/MS) ilə birləşdirilmiş maye xromatoqrafiyası kimi üsullarla mümkündür. Bu alətlər genlər tərəfindən kodlanan və transkripsiya faktorları ilə tənzimlənən fermentativ, tənzimləyici və struktur funksiyalarında iştirak edən faktiki zülallar haqqında məlumat verməklə biokimyəvi proseslərin daha birbaşa qiymətləndirilməsini təmin edə bilər. Müxtəlif zülal ailələrinin bitkinin soyuq stresə yeni sintez edilərək, yığılaraq və ya azalaraq reaksiyası ilə əlaqəli olduğu bilinir. Digər şeylər arasında, bu zülallar siqnal, tərcümə, ev sahibi müdafiə mexanizmləri, karbohidrat metabolizması və amin turşusu mübadiləsində iştirak edir. Bu zülallara dehidrinlər və digər gec embriogenezdə bol (LEA) zülallar ( Close 1997, NDong et al. 2002, Welling et al. 2004, Wisniewski et al. 1999 ) və həmçinin antifriz zülalları (AFPs) (Griffith və Yaish 200) daxildir. , istilik şoku zülalları [məs istilik şok zülalı 70 (HSP70) Sung et al. 2001, Wisniewski et al. 1996] və digər soyuqla tənzimlənən (COR) zülallar (Jaglo-Ottosen et al. 1998).

İkiölçülü gellərin mümkünlüyü və təkrar istehsal oluna bilməsi böyük müzakirələrə səbəb olsa da, zülalları mürəkkəb qarışıqlardan ayırmaq üçün çox istifadə edilən üsul olaraq qalır. Bu icmalda bitkilərin proteomik analizlərini aparmaq üçün ikiölçülü elektroforetik üsullardan, ardınca matrislə dəstəklənən lazer desorbsiya/ionlaşdırma (MALDI)-uçuş vaxtı (TOF) və ya MS-MS analizlərindən istifadənin potensialı müzakirə olunacaq. İkiölçülü fərq gel elektroforezi (2D-DIGE) olaraq adlandırılan flüoresan etiketli multipleksli gellərin istifadəsi ilə gel əsaslı texnikanın son təkmilləşdirmələri də müzakirə olunacaq. Çoxsaylı üstünlükləri arasında DIGE yüksək bol olanları doyurmadan daha az bol zülalları aşkar edərək analizin dinamik diapazonunu genişləndirir və kəmiyyət nəticələr verir. Proteomik analizlərin aparılması üçün gelsiz üsullar da mövcud olsa da, hazırda bitki biologiyası sahəsində geniş istifadə olunmur. Bunun səbəbi, gelsiz üsulların araşdırılacaq orqanizmin bütün genomunun ardıcıllığının mövcud olmasını tələb etməsidir. Bitkilərdə soyuq streslə bağlı mövcud proteomik nəticələrin toplusu da təqdim olunacaq.


Materiallar və metodlar

Bitki materialı və böyüməsi

"Puya" becərilən (C) sortunun meyvəsi Bibər illik var. illik İrapuato, Quanaxuato, Meksikadan (20,67° ş., 101,35° şt.) əldə edilmişdir. Yabanı meyvə (W) bibər "Chiltepín" Bibər illik var. glabriusculum El Patol, Queretaro, Meksikada (20.79° ş., 99.87° şt.) yerləşən vəhşi populyasiyadan toplanmışdır. Toxumlar qurudulmuş meyvələrdən çıxarılır, 10% həcmli ağartma məhlulu ilə yuyulur, 35 ° C-də 0,05 N HCl ilə 30 dəqiqə qaşındırılır və 3: 1 nisbətində olan 0,5 l qablarda əkilmədən əvvəl distillə edilmiş su ilə yuyulur: 1 torf mamırı, vermikulit qarışığı.

Bitkilər 18-28 °C diapazonda temperatur, təbii işıq və rütubətlə idarə olunan İrapuatoda istixanada yetişdirilib. Bitkilər hər 2 həftədən bir standart NPK gübrəsi ilə döllənir. Bitkilər cinsi yetkinliyə çatdıqdan sonra F1 hibridlər əvvəllər təsvir olunduğu kimi C dişi və W kişi kimi istifadə edilərək istehsal edilmişdir (Pickersgill 1971). C və W ana ehtiyatlarını yaratmaq üçün əlavə çiçəklər öz-özünə mayalanmaya buraxıldı.

Meyvə Morfologiyasının Təhlili

40 DAA-da 10 C×W, 5 C və 5 W bitkilərin hər birindən bitki başına 20 meyvə toplandı və standart düz yataqlı skanerdən istifadə edərək 300 dpi-də skan edildi. Şəkillər aşağıdakı forma deskriptorlarını çıxarmaq üçün ImageJ proqram paketindən (Rueden et al. 2017) istifadə edərək təhlil edilmişdir: sahə (A), kiçik ox (MiA), əsas ox (MaA), aspekt nisbəti (AR = MaA/MiA), yuvarlaqlıq (Ro = 4×[(A)/π(MaA) 2 ]) və dairəvilik (Ci = 4π[(AR)/(perimetr) 2 ]). Morfometrik məlumatlar log10 və ya arsine çevrildi və əsas variasiya meyllərini (PC) əldə etmək üçün əsas komponent analizinə (PCA) məruz qaldı. Fərdi əlamətlər (sahə, aspekt nisbəti, dairəvilik, əsas və kiçik oxlar) PC1 ilə yüksək korrelyasiya edildi (əlavə şəkil S1 A, Əlavə material onlayn), ona görə də biz PC1-dən valideyn və hibrid morfologiyanı təsvir etmək üçün özlüyündə bir əlamət kimi istifadə etmək qərarına gəldik, həm də fərdi kompüterlər mürəkkəb fenotipləri yaxşı tuta bilir (Rosas et al. 2013). Sahənin, böyük oxun, kiçik oxun (ölçü təsviri), eləcə də aspekt nisbətinin və dairəviliyin (forma deskriptorları) PC1-ə fərdi töhfələri müvafiq olaraq 0,74, 0,52, 0,22, 0,30 və 0,13 olmuşdur (əlavə şəkil S1). A, Əlavə material onlayn). Beş əsas əlamətin paylanması əlavə S1 rəqəmində hər bir genotip üçün ayrıca göstərilmişdir B–F, Əlavə material online. Xüsusiyyətin irsiyyəti haqqında bilik kəmiyyət genetik yanaşmaların mühüm tərkib hissəsidir, çünki o, əlamətin seçimə reaksiyasını və fenotipik fərqliliyə səbəb olan genetik dəyişikliklərin xarakterini müəyyənləşdirir. Bizi subyektiv hesab etdiyimiz diskret kateqoriyalara əlavə olaraq mirasın davamlı paylanması maraqlandırırdı. Gördüyümüz kimi, paylama vəhşi və mədəni valideynlərdən olan allel variantlarının heterozigot hibriddə necə qarşılıqlı əlaqədə olduğunu və ya onların gen fəaliyyət rejimini araşdırmaq üçün daha az qərəzli bir yol təqdim edir.Bu, həmçinin gen ifadəsinin irsi tədqiqatlarında tez-tez göz ardı edilən natamam dominantlıq qutularını və ya kateqoriyalarını ayırd etmək imkanını açır. Dominantlığı qiymətləndirmək üçün biz dominantlıq dərəcəsinin ölçüsündən istifadə etdik (k = d/a), əlavə və dominantlıq effekti arasındakı əlaqəni qiymətləndirir. istifadə etdik k transkript bolluğu kimi ölçülən C və W və gen ifadəsi arasındakı variasiya ilə əlaqəli gen hərəkətini qiymətləndirmək. əlavə təsir (a) bir becərilən allelin bir yabanı allelin əvəz edilməsi və ya əksinə hibriddə baş verən fenotipin dəyişmə dərəcəsinin ölçüsünü təmin edir. Üstünlük effekti (d) F-də fenotipin necə ölçüldüyünü ölçür1 hibrid iki homozigot sinfin orta nöqtəsindən kənara çıxır, bu halda valideynlərin hər biri. biz əlavəni təxmin etdik (a = (W−C)/2) və dominant (d = C×W−[(W+C)/2]) effektləri verin və dominantlıq dərəcəsini hesablayın (k = d/a) bütün morfometrik əlamətlərin. Həm PCA, həm də k qiymətləndirmələr R-də aparılmışdır (v. 3.5.2, CRAN).

RNT Çıxarışı, Kitabxananın Hazırlanması və Sıralanması

Ümumi RNT plasenta və meyvələrin perikarp toxumasından 40 DAA-da, hər bir genotip (C, W və ya C×W) üçün üç fərdin hər birindən yığılmış bir meyvə üçün cəmi doqquz nümunə üçün çıxarılmışdır. Plasenta və perikarp toxumasının toplanmasından əvvəl meyvələr etanol ilə tez təmizləndi və toxumları çıxarmaq üçün parçalandı. RNT istehsalçının tövsiyələrinə uyğun olaraq TRIzol (Invitrogen) istifadə edərək aşağıdakı modifikasiyalarla çıxarıldı: TRIzol reagenti əlavə 24:1 xloroform-izoamil spirtindən istifadə etməzdən əvvəl 56 °C-də inkubasiya edildi, RNT çöküntüsü bir həcmdə şoran məhlulu ilə aparıldı. məhlul (0,8 M natrium sitrat + 1,2 M natrium xlorid) izopropanolun bir həcmi üçün əlavə 70% etanol yuyulması həyata keçirilmişdir. Ümumi RNT konsentrasiyası NanoDrop 2000 spektrofotometrindən (Thermo Scientific Nanodrop) istifadə edilərək ölçüldü və RNT bütövlüyü 1,5% denaturasiya etməyən agaroza geldə elektroforez yolu ilə qiymətləndirildi. Ardıcıllıq üçün cDNT kitabxanaları Illumina TrueSeq RNT Kitabxana Hazırlama Dəsti v3 istifadə edərək 3 μg ümumi RNT-dən (RIN ≥ 5) hazırlanmışdır. Nəticədə doqquz cDNT kitabxanası Illumina Hi-Seq 4000 platformasının yarım zolağında ardıcıllıqla sıralandı və ~350,000,000 milyon 2×101-bp cütləşdirilmiş oxunuş əldə etdi.

Valideynlər arasında diferensial ifadə və gen fəaliyyət rejiminin qiymətləndirilməsi

Adapterləri çıxarmaq və hər bir baza keyfiyyəti <25 və ya ümumi uzunluq <70 əsas cütləri olan oxuları silmək üçün ardıcıllıqla oxunuşlar əvvəlcə Trimmomatic v. 0.32 (Bolger et al. 2014) istifadə edərək süzüldü. Kəsilmiş oxunuşlar daha sonra keyfiyyətini, uzunluğu paylanmasını və Illumina adapterlərinin olmadığını yoxlamaq üçün FastQC proqramı (https://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/ sonuncu dəfə 20 oktyabr 2019-cu ildə daxil olub) ilə təhlil edildi. Mütləq ümumi transkript bolluğunun ifadə profilləri cüt sonunda Kallisto ver 0.43.0 (Bray et al. 2016) istifadə edərək çili bibərinə (CM334 v.1.55) istinad transkriptomuna (Kim et al. 2014) psevdoaligning edərək ardıcıllıqla oxunuşlarla yaradıldı. -b 100, -t 16 və -bias parametrləri ilə rejim. Becərilən kitabxanalara aid oxunmaların təxminən 71-86%-i istinad transkriptomunda bir xüsusiyyətə uyğunlaşdırılıb, W və F üçün xəritələnmiş oxunmaların faizi isə1 kitabxanalar müvafiq olaraq 66-73% və 61-73% arasında dəyişdi (əlavə cədvəl S1, Əlavə material onlayn). Hər genotip üçün medianı beşdən kiçik oxunan transkriptlər əlavə təhlil üçün xaric edilmişdir. Transkript bolluğu təxminləri mənfi binomial paylanmadan sonra ümumiləşdirilmiş xətti modelə (GLM) uyğunlaşdırmaqla diferensial ifadəni ölçən DESeq2 R paketindən (Love et al. 2014) istifadə edərək diferensial ifadəni (FDR 5%) sınamaq üçün istifadə edilmişdir. normallaşdıran amillərlə. Oxunma saylarını normallaşdırdıqdan sonra ümumi gen modellərinin 48,5%-ni təşkil edən 16,938 gen modeli üçün ifadə profilləri yaradıldı. DESeq2 vasitəsilə ehtimal nisbəti testindən (LRT) (FDR = 5%) istifadə edərək sayma məlumatlarını oxumaq üçün GLM yerləşdirməklə mədəni və yabanı transkriptomlar arasında transkripsiya fərqini qiymətləndirdik. Üstünlük indeksi (k) hər bir transkriptin gen fəaliyyət rejimini (əlavə, dominant-resessiv, transqressiv) araşdırmaq üçün proxy kimi istifadə edilmişdir. Normallaşdırılmış transkript bolluğu genotip başına orta dəyərə endirildi və k xüsusi bir R skripti vasitəsilə ardıcıl olaraq təxmin edildi.

ASE məlumatlarının yaradılması

F-də valideynlərə xas oxunuşları müəyyən etmək və kəmiyyətini müəyyən etmək üçün1 hibrid transkriptomlar üçün psevdoreferans yanaşması tətbiq edilmişdir. Qısaca olaraq, iki valideyn kitabxanasının oxunuşları STAR (Dobin et al. 2013) ilə CM334 v.1.55 istinad genomuna (Kim et al. 2014) uyğunlaşdırıldı. Nəticədə BAM faylları daha sonra standart parametrlərlə Haplotype Zəng edən rejimindən istifadə edərək GATK alətlər dəsti (Poplin et al. 2017) vasitəsilə SNP-lərə zəng etmək üçün istifadə edilmişdir. Alternativ allel üçün homozigot genotipi və oxuma dərinliyi ən azı 4× olan SNP-lər saxlanıldı və GATK alət dəstinin FastaAlternateReferenceMaker funksiyası vasitəsilə hər bir valideyn üçün psevdoreferans yaratmaq üçün istifadə edildi. C×W kitabxanaları müstəqil olaraq STAR vasitəsilə iki psevdoreferansın hər birinə uyğunlaşdırıldı və daha əvvəl qeyd edildiyi kimi GATK tərəfindən təhlil edildi. Üç F-nin oxunuş xəritəsi1 kitabxanalar mədəni psevdoreferentsiyaya qarşı (F1–C) müvafiq olaraq 54,910, 39,401 və 59,493 SNP əldə etdi, halbuki üç vəhşi psevdoreferans (F) ilə uyğunlaşma1–W) 34,237, 24,134 və 36,394 SNP verdi. Bu SNP dəstləri birləşdirildi və yalnız altı SNP dəsti arasında paylaşılan mövqelər saxlanıldı, sonra gen modellərinə təyin edildi və uyğunlaşma keyfiyyətinə və əhatə dairəsinin dərinliyinə görə süzüldü (QUAL>30 DP>20). Valideynlərə xas ifadə ilə bağlı birmənalı məlumatı olan SNP saytlarını tutmaq üçün yalnız F arasında heterozigot və qarşılıqlı genotipləri olan biallelik mövqelərdə olan SNP-lər1-C və F1–W düzülmələri (məsələn, A/G G/A) saxlanıldı (əlavə cədvəl S2, Əlavə material onlayn). ASE profillərini yaratmaq üçün hər bir allelin oxuma dərinliyi VCF fayllarından yalnız o halda alındı ​​ki, hər bir allelin oxu dərinliyinin dəyərləri C×W–W və C×W–C arasında qarşılıqlılıq göstərsin. Nəhayət, hər bir allel oxuma dərinliyi eyni gen modelinə uyğunlaşdırılan SNP-lər üzərində cəmləndi və nəticədə üç təkrarda 5077 transkript üçün ASE profilləri əldə edildi.

Modelləşdirmə Cis- və trans-GLM vasitəsilə tənzimləyici fərqlər

Transkripsiya səviyyəsində gen ifadəsi arasında qarşılıqlı təsirlər idarə olunur cis-trans-tənzimləyici elementlər, beləliklə, onların hər birinə və ya hər ikisinə təsir edən mutasiyalar aşağı axın genlərinin ifadəsinə təsir göstərir. -nin rolu cis-trans-Valideynlərin iki qoşulması arasında transkript bolluğu fərqləri ilə bağlı tənzimləyici variasiyalar ortaq iki allelin allel balanssızlığını qiymətləndirməklə nəticələnə bilər. trans F1 hibridində mühit. Bu ssenaridə allel balanssızlığı olan transkriptlər əlaqəli olduğunu göstərir cis-hərəkət dəyişikliyi valideynlər arasında ifadə fərqlərindən məsuldur.

DESeq2 R paketindən istifadə edərək, ASE-ni C×W transkriptomlarında iki allel arasında diferensial ifadə kimi modelləşdirdik. İki modeli sınaqdan keçirmək üçün GLM quraşdırıldı və LRT işə salındı: azaldılmış = ∼ 1 tam = ∼ allel. Test etmək üçün trans-fəaliyyət göstərən variasiya, biz ən azı bir valideyn allelinin F arasında diferensial şəkildə ifadə edilib-edilmədiyini yoxlamaq üçün GLM quraşdırdıq.0 və F1 nəsillər. LRT ilə iki modeli sınaqdan keçirdik: azaldılmış = ∼ allel + tam nəsil = ∼ allel + nəsil + allel × nəsil. Sonra, McManus və digərlərinə görə transkriptləri tənzimləmə fərqinin yeddi kateqoriyasına ayırmaq üçün xüsusi bir R skripti yazılmışdır. (2010). Bu dəstdən təhlil edilən cəmi 2339 (69%) transkript hər iki F-də qorunmuş ifadəni göstərdi.0 və F1 və nəsillər arasında, halbuki 1,517 transkript qeyri-müəyyən kimi təsnif edilmişdir, çünki müşahidə edilən əhəmiyyət nümunələri transkripsiya səviyyəsində heç bir bioloji şərhə malik deyildir (McManus et al. 2010). Cis-yalnız F-də C və W arasında əhəmiyyətli diferensial ifadə kimi müəyyən edilmişdir0, sübut cis heç bir sübut olmadan fikir ayrılığı trans effektləri. Trans-yalnız F-də C və W arasında əhəmiyyətli diferensial ifadə kimi müəyyən edilmişdir0, sübut trans heç bir dəlil olmadan cis fərqlilik. Biz qorunmayan və ya qeyri-müəyyən ifadə ilə transkriptlərə diqqət yetirdik. nin nisbi qatqısını təxmin etdik cis-trans-F-də ifadə fərqlərinin yaranmasında tənzimləyici dəyişikliklər0 genləri təsir ölçülərinə görə (|parentLog2FC(W/C)|) birləşdirmək və hesablamaqla cis faiz (|cis|/(|cis|+|trans|)).


Videoya baxın: How to Precipitate DNA (Iyul 2022).


Şərhlər:

  1. Akinojin

    haqlı deyilsən. Mən əminəm. PM-ə yazın, əlaqə saxlayaq.

  2. Shazahn

    nə mücərrəd fikir

  3. Polycarp

    News. Give Where can I find more information on this topic?

  4. Conrad

    Maraqlı mövzu, iştirak edəcəm. Biz birlikdə düzgün cavaba gələ bilərik.

  5. Vigore

    Tamamilə onunla razıyam. Oradakı bu heç bir şey və düşünürəm ki, bu çox yaxşı bir fikirdir. Onunla tam razıyam.

  6. Kegor

    Çıxmayacaq!

  7. Dailrajas

    Bu idi və mənimlə.



Mesaj yazmaq