Məlumat

Sirkulyasiya edən şiş hüceyrəsi və dövran edən şiş DNT

Sirkulyasiya edən şiş hüceyrəsi və dövran edən şiş DNT


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Bu iki ifadənin ifadəsi və epiteliya-mezenximal keçidin hansı kontekstdə baş verdiyi barədə bir az çaşqınam.

Misal üçün:

EMT keçirməsi üçün ctDNA-nı buraxan dövran edən şiş hüceyrəsidirmi?

Və ya

CTC-dən ctDNA bir şəkildə EMT fenomeninin baş verməsi üçün yeni təlimatlar yaradır?

Düşünürəm ki, əsaslı şəkildə çaşqın olduğum bir şey var və ya bir neçə və ya fərqli anlayış və fenomeni qarışdırıram və bu barədə bir qədər aydınlıq gətirmək istərdim. təşəkkürlər.

EDIT: Beləliklə, bu mənim yeni hipotezim / düşüncəmdir ...

Beləliklə, EMT meydana gəldikdə, CTC-lərin xərçəng kontekstində inkişaf etmə ehtimalı daha yüksəkdir və beləliklə, CTC-lər qan axını boyunca dövr etdikdə, CTC-lər əlavə məhsul kimi nekrozdan apoptoza edilə bilər, beləliklə ctDNA qan dövranında və ya bəlkə də bədəndən kənarda qalır. .

Bu mənim çaşqınlığımı düzgün izah edirmi?


EMT və xərçəng hüceyrələri arasında qurmağa çalışdığınız əlaqəyə əmin deyiləm.

Bəli, EMT keçirən bəzi "sağlam" hüceyrələr (xüsusi əsas mutasiyalara görə) xərçəng hüceyrələri ilə nəticələnə bilər, lakin belə bir fenomen "çətin və sürətli" bir qayda deyil.

Çox güman ki, ctDNT-nin əksəriyyəti (sizin təklif etdiyiniz kimi) parçalanmış hüceyrələrdən olacaq, lakin DNT-nin aberrant ixracına imkan verən mutasiyalar baş verərsə, ikincisi baş verə bilər (mən güman edirəm ki, bu nadirdir, lakin hazırda mövcud olan ədəbiyyata əsasən bu imkanı endirim edilə bilməz).

Beləliklə, sizin "yeni fərziyyəniz" ən çox ehtimal olunan kimi görünür.


Onkologiyada sirkulyasiya edən şiş DNT və maye biopsiyası

Xərçəngi aşkar etmək, xarakterizə etmək və izləmək üçün dövran edən şiş DNT-sini (ctDNA) təhlil etmək üsulları sürətlə inkişaf etmişdir. Getdikcə artan klinik sübutlar bu texnologiyanın diaqnostik test kimi imkanlarını nümayiş etdirir. Bərk və hematoloji bədxassəli şişlərin diaqnostikasında, səciyyələndirilməsində və idarə olunmasında ctDNA maye biopsiyasının tam potensialı klinik faydasını qiymətləndirən müdaxiləli klinik sınaqlar vasitəsilə aşkar ediləcək. Bu icmalda biz xərçəng kontinuumu boyunca ctDNA maye biopsiya tətbiqlərinin cari mənzərəsini müzakirə edirik və klinik araşdırma imkanlarını vurğulayırıq.


Giriş

Süd vəzi xərçəngi bütün dünyada qadınlar arasında ən çox rast gəlinən bədxassəli xəstəlikdir və Amerika qadınlarında xərçəngdən ölüm hallarının ikinci əsas səbəbini təmsil edir və yalnız ağciyər xərçəngindən üstündür. Yeni döş xərçəngi hallarının təxminən 6%-10%-i ilkin mərhələdə IV mərhələdir (de novo metastatik xəstəlik) və metastatik residivlərin sayının bütün mövcud döş şişi hallarının 20%-30%-i arasında olduğu təxmin edilir (1, 2).

Metastatik döş xərçənginin (MBC) əsas məqsədləri simptomların yüngülləşdirilməsi və həyat keyfiyyətinin yaxşılaşdırılması olaraq qalır, ümidi ilə effektiv müalicələr obyektiv remissiya və xəstəliyə nəzarətin uzadılması ilə nəticələnəcək və nəticədə sağ qalmağa təsir edəcəkdir.

Sistemli terapevtik strategiyanın seçilməsi, ən təsirli və ən az zəiflədici fərdi yanaşmadan istifadə etmək məqsədi ilə molekulyar və klinik amillərin birləşməsini nəzərə alır (3).

Xüsusilə, hormona həssas şişləri olan xəstələrdə endokrin terapiya kemoterapi ilə əldə edilənlərə bənzər sağ qalmağı təmin edə bilər (baxmayaraq ki, daha az obyektiv cavab verir) və aqressiv xəstəliyin klinik sübutu olmadıqda ilk seçim kimi qəbul edilməlidir (4-8). ). Buna baxmayaraq, endokrin terapiyaya uzun müddət məruz qalma qazanılmış müqavimət və xəstəliyin sonrakı inkişafı ilə nəticələnə bilər. Son sübutlar göstərdi ki, estrogen reseptor-α-nın liqand bağlayan sahəsində aktivləşdirici mutasiyalarESR1) endokrin müalicələrə məruz qalan xəstələrin təxminən 30%-də baş verir və bu genomik anormallıqlar endokrin müqavimətin sürücüsünü təmsil edə bilər (9).

Xərçəng sistemli müalicələrinin uğursuzluğunun əsas səbəblərindən biri, döş xərçənginin heterojenliyini dəqiq şəkildə ələ keçirə bilməməyimizdir. Bu müsabiqədə, fərdi xəstələrin ehtiyaclarına yönəlmiş diaqnostik testlər və nəticədə müalicələr toplusu kimi nəzərdə tutulan Precision Medicine-in bu problemi həll etməyin bir yolu ola biləcəyinə ümid var (10, 11).

Maye biopsiyası Precision Medicine alətidir və ctDNA və CTC-lərdə gen mutasiyalarının təhlili vasitəsilə MBC-nin ilkin və təkrarlanma zamanı real vaxt rejimində qiymətləndirilməsini təmin edir.

Bir sıra tədqiqatlar (12-17) göstərmişdir ki, ctDNT-də müəyyən edilmiş somatik mutasiyalar şiş genomunu geniş şəkildə təmsil edir və toxuma biopsiyası ilə bağlı bir çox çətinlikləri aradan qaldıran alternativ qeyri-invaziv metod təmin edə bilər (məsələn, tDNT-nin tək bir bölgəsi ilə məhdudlaşan mutasiyalar spektri). şiş, ardıcıl nümunə götürmə adətən mümkün deyil ref.17). ctDNA səmərəsiz müalicələrdən qaçmaq və yeni dərmanların faydasını qiymətləndirmək üçün müalicəyə cavabı izləməyə imkan verir. Məsələn, ctDNT-də liqand bağlayan domenində mutasiyaların aşkarlanması ESR1 ER-nin konstitutiv fəaliyyətini təmin edən MBC-də endokrin terapiya müqavimətinin ortaya çıxan bir göstəricisidir (18). Həmçinin göstərilmişdir ki, ctDNA səviyyələrindəki dinamik dəyişikliklər şiş yükündəki dəyişiklikləri yaxından əks etdirir və ctDNA səviyyələrindəki artımlar tez-tez standart görüntüləmədən bir neçə ay əvvəl mütərəqqi xəstəliyi proqnozlaşdırır. ctDNA səviyyələrinin qiymətləndirilməsi də proqnozun mühüm göstəricisi ola bilər, lakin ctDNA-nın proqnostik biomarker kimi rolunu təsdiqləmək üçün daha böyük xəstələr kohortlarında perspektiv tədqiqatlara ehtiyac olacaq (10, 19).

CTC-lər ilkin şişdən və ya metastatik lezyonlardan qan damarlarına tökülmüş və ya aktiv şəkildə miqrasiya edən və qan dövranında dövr edən xərçəng hüceyrələridir. Uzaq orqanlarda ilkin və ya digər lezyonlardan (toxum hipotezi) metastazlara səbəb ola bilər və xərçənglə əlaqəli ölümlərin böyük əksəriyyətinə cavabdehdirlər (20, 21). (i) Biz əvvəllər MBC olan xəstələrdə ilkin və təqibdə CTC siyahıyaalmasının ≥5 proqnostik dəyərini nümayiş etdirdik (22, 23). (ii) Bir və ya bir neçə CTC-nin olması, MBC olmayan kimya terapiyası keçirən xəstələrdə də erkən residiv və ümumi sağkalmanın (OS) azalmasını proqnozlaşdırır (24). (iii) Sadalamaqdan başqa, CTC-lərin genotipik və fenotipik xarakteristikası maraq doğurur. Tək hüceyrə səviyyəsində CTC-lər üzrə tədqiqatlar şişlərin və metastazların əsas mexanizmini aşkar etməyə kömək edə bilər (25, 26).

CTC-lərdən fərqli olaraq, daha pis proqnozla əlaqəli ctDNA-nın kəsilməsi hələ müəyyən edilməmişdir. Tədqiqatımızın məqsədi həm CTC-lərin, həm də ctDNA-nın proqnostik dəyərini - maksimum % (%ctDNA), allel variantların (mutasiyaların) sayı - bütün populyasiyada proqressiyasız sağ qalma (PFS) və OS baxımından dəqiq araşdırmaq idi. ER + xəstəliyi olan xəstələrin alt qrupunda.


Xərçəng biomarker kimi dövran edən şiş DNT: fakt yoxsa uydurma?

Feliks Leung, Vathany Kulasingam, Eleftherios P ​​Diamandis, Dave S B Hoon, Kenneth Kinzler, Klaus Pantel, Catherine Alix-Panabières, Sirkulyasiya edən şiş DNT-si xərçəng biomarkeri kimi: fakt yoxsa uydurma?, Klinik Kimya, Cild 62, Sayı 8, 1 avqust 2016-cı il, Səhifələr 1054–1060, https://doi.org/10.1373/clinchem.2016.260331

Hüceyrəsiz DNT (cfDNA) 8-in dövriyyədə surroqat biomarker kimi istifadə edilməsi anlayışı yeni bir konsepsiya deyil. Mandel və Metais, demək olar ki, 60 il əvvəl sağlam insanların qanında cfDNT varlığını müəyyən etdilər. Onilliklər sonra, bir çox qruplar Mandel və Metaisin işini xərçəng xəstələrinin qanında şişdən əldə edilən cfDNA-nın (həmçinin sirkulyasiya edən şiş DNT (ctDNA)) identifikasiyasına genişləndirə bildilər. Bu tapıntılar “maye biopsiyasının” mümkün klinik vasitə ola biləcəyini irəli sürdü, çünki şişlər həm aşkar edilə bilən, həm də şişə xas olan DNT fraqmentlərini qan dövranı sisteminə buraxır.

Son on ildə biz həm yeni texnologiyalarda artımın, həm də DNT-nin ardıcıllaşdırılması üçün mövcud texnologiyaların təkmilləşdirilməsinin şahidi olduq ki, bu da bir vaxtlar zəhmət tələb edən bu prosesi daha ucuz və daha sürətli edir. 2009-cu ildə bir genom üzrə ardıcıllığın dəyəri 100 000 dollar idisə, 2014-cü ildə bu xərc 5000 dollara düşdü (əmək, idarəetmə, idarəetmə, kommunal xidmətlər, reagentlər və istehlak materialları nəzərə alınmaqla). Nəticədə, ctDNT-nin maye biopsiyası kimi istifadəsi getdikcə daha mümkün olmuşdur.

Klinik olaraq desək, ctDNA əsaslı maye biopsiyası, o cümlədən müxtəlif üstünlüklərə görə xərçəng müalicəsinin optimal üsulu olardı: (a) ctDNT-nin axtarışı xüsusilə toxuma biopsiyası ilə müqayisədə minimal invaziv olardı (b) ctDNA şişin tam təsvirini təmin edə bilər (həmçinin hər hansı klonal metastazlar) və (c) ctDNA xəstənin xəstəliyinin fərdi surətini təqdim edərdi. Bir surroqat biomarker kimi ctDNA-nın klinik istifadəsi hələ də bioloji və texnoloji maneələrlə üzləşsə də, maye biopsiyanın nəticələri çox böyük ola bilər, çünki (lakin bununla məhdudlaşmayaraq): erkən aşkarlanma, minimal qalıqların monitorinqi kimi çoxsaylı potensial tətbiqlər ola bilər. xəstəlik (MRD), müalicəyə cavabın qiymətləndirilməsi və təkrarlanma riskinə əsaslanaraq sınaqdan keçirilməsi.

Bu sual-cavab məqaləsində 4 mütəxəssis xərçəngin idarə olunması üçün klinik vasitə kimi ctDNA-nın mövcud vəziyyəti haqqında öz fikirlərini təqdim edir. Xüsusilə, onlar bu texnologiyanın hələ də üzləşdiyi bioloji və analitik problemləri, eləcə də bu sürətlə böyüyən tərcümə tədqiqat sahəsinin potensial faydalarını müzakirə edəcəklər.

Sizcə, ctDNT-nin dövriyyəyə buraxılmasının əsas mexanizmi nədir?

Dave S.B. Hoon: Əsas mexanizm şiş hüceyrələri ilə əlaqəli çoxsaylı hadisələri nəzərə almaqla izah edilə bilər. Plazmadakı ctDNA ilkin, metastatik və ya dövran edən şiş hüceyrələrindən yarana bilər. O, apoptoz, nekroz (proqramlaşdırılmış və ya olmayan), şiş hüceyrələrinin məhv edilməsi və/və ya hüceyrə ifrazı ilə şişlərdən azad edilə bilər. Çox güman ki, şişin vəziyyətindən, yükündən və histopatologiyasından asılı olan qanda ümumi ctDNT tərkibinə çoxsaylı amillər təsir göstərir.

Kennet Kinzler: Bir ehtimal, DNT-nin dövran edən şiş hüceyrələrinin ölümü ilə sərbəst buraxılmasıdır. İkinci ehtimal, DNT-nin şiş yatağında şiş hüceyrələrinin ölümü ilə sərbəst buraxılmasıdır. Sonuncu izahatı ctDNA-nın əsas mənbəyi kimi dəstəkləyən bir neçə dəlil var. Birincisi, aşkar edilə bilən ctDNA olan halların əksəriyyətində aşkar edilə bilən sirkulyasiya edən şiş hüceyrələri yoxdur. İkincisi, hər ikisinin aşkar oluna bildiyi hallarda, ctDNA səviyyəsi dövran edən şiş hüceyrələrində mövcud olandan 1-2 dəfə böyükdür. Üçüncüsü, xərçəngin inkişaf etmiş halları tez-tez normal hüceyrələrdən cfDNA konsentrasiyasının artması ilə əlaqələndirilir, ehtimal ki, şiş yataqlarında normal hüceyrələrin ölümü və məhv olması səbəbindən.

Klaus Pantel: Prinsipcə, ctDNA xərçəng xəstələrində ilkin şişlərdən, sirkulyasiya edən şiş hüceyrələrindən, mikrometastazlardan və ya açıq metastazlardan azad edilə bilər. ctDNT-nin əksəriyyəti çox güman ki, parçalanmış DNT-ni dövriyyəyə buraxan apoptotik və nekrotik şiş hüceyrələrindən əmələ gəlir. DNT həmçinin bədxassəli olmayan ana hüceyrələr tərəfindən sərbəst buraxılır və bu normal DNT xərçəng xəstələrində, xüsusən də kemoterapi və ya radioterapiya kimi toxuma zədələyən müalicələrin tətbiq olunduğu hallarda ctDNT-ni sulandırır. Parçanın uzunluğu cfDNA-nın mənşəyi haqqında bəzi məlumat verə bilər. Bununla belə, bu məsələ hələ də müzakirə olunur, çünki müxtəlif qruplar xərçəng xəstələrində fərqli kəsmə dəyərlərini bildirmişlər. Bu uyğunsuzluqların bir hissəsi ctDNA və şiş növlərini təyin etmək üçün istifadə edilən müxtəlif texniki yanaşmalarla bağlı ola bilər. Buna baxmayaraq, biz hələ də ctDNT-nin dövriyyəyə buraxılmasının arxasında duran biologiya haqqında daha çox bilməliyik.

Catherine Alix-Panabières: Xərçəng hüceyrələri nekroz və ya apoptozla öldüyü zaman sərbəst buraxılan DNT-nin bir hissəsi passiv şəkildə qan dövranına daxil olur, beləliklə cfDNA-nın ölən hüceyrələr tərəfindən qana salınması əslində xərçəng xəstələri ilə məhdudlaşmır, cfDNA sağlam insanların qanında aşkar edilə bilər. xoşxassəli xəstəlikləri və ya iltihabi xəstəlikləri olan xəstələrdə və ya subyektlər qocaldıqda daha yüksək miqdarda olan şəxslər. "Nekroz" şiş hüceyrələrinə və ya xərçəng toxumalarına xaric olan faktorlar səbəb olur ki, bu da hüceyrə komponentlərinin nizamsız həzm olunması və sərbəst buraxılması ilə nəticələnir. “Apoptoz” müxtəlif fizioloji və farmakoloji agentlər tərəfindən törədilə bilən hüceyrə ölümünün idarə olunan növü, ardınca DNT-nin parçalanması və hüceyrə lizisi kimi müəyyən edilir. Hər iki halda, ölməkdə olan şiş hüceyrələri dövriyyədə parçalanmış DNT-nin kiçik hissələrini buraxır. ctDNA-nın parçalanması apoptozdan sonra nekrozdan sonra daha yüksək olduğu üçün xərçəng xəstələrində ctDNA-nın necə buraxıldığını müəyyən etmək mümkün olmalıdır. Xüsusilə, 160-180 bp uzunluğunda parçalanmış ctDNA apoptotik hüceyrələrdə müşahidə olunan nukleosomla qorunan DNT-yə uyğundur. Ölən şiş hüceyrələri ilə DNT-nin sərbəst buraxılmasına əlavə olaraq, son tədqiqatlar göstərir ki, çox az miqdarda DNT canlı hüceyrələr tərəfindən aktiv şəkildə ekzosomlarda sərbəst buraxıla bilər, lakin bu, hələ də mübahisəlidir. ctDNA-nın dövriyyəyə necə buraxılması əsas sualdır, çünki ctDNA-nı xərçəng xəstələrində klinik biomarker kimi qəbul etmək üçün yaxın gələcəkdə ctDNA-nın buraxılmasının şiş biologiyası ilə necə əlaqəli olduğunu başa düşmək yolu ilə aydınlaşdırmaq çox vacib olacaq: (1) hansı hüceyrələrin əldə edildiyi, (2) hansı xüsusi klonların onların klonal yükünü əks etdirən ümumi ctDNA səviyyəsinə töhfə verdiyi və (3) tətbiq olunan xərçəng müalicələrindən asılı olaraq ctDNA səviyyəsinin zamanla necə dəyişdiyi. ctDNT-nin mənbəyi son dərəcə vacibdir, çünki o, klinik cəhətdən əhəmiyyətli şiş hüceyrələrinin genetik məlumatlarını əks etdirməlidir. Xərçəng xəstələrinin qanında ctDNA-nın aşkarlanmasından asılı olaraq, əsasən ölməkdə olan şiş hüceyrələri olduğundan, onun aşkarlanması nəticəsində əldə edə biləcəyimiz məlumatlar şiş hüceyrələrinin rezistent klonlarının mutasiyalarını deyil, şiş hüceyrələrinin həssas alt populyasiyalarının mutasiyalarını əks etdirə bilər. , əsasən müalicənin başlanmasından sonra - məsələn, kemoterapi, hədəf terapiya.

ctDNA dövriyyədən necə təmizlənir və bu onun sabitliyinə necə təsir edir?

Dave S.B. Hoon: CtDNT-nin təmizlənməsi dövriyyəyə buraxılan və limfa düyünlərinə, böyrəklərə və qaraciyərə tökülən şişlər kimi müxtəlif orqanlar tərəfindən müntəzəm olaraq təmizlənən normal DNT-ninkinə oxşar fizioloji mexanizmləri izləyir. Şiş mikromühitində, limfa drenajının sərbəst buraxılan DNT fraqmentlərinin əksəriyyətini təmizləməsi ehtimal olunur. ctDNA, tam başa düşmədiyimiz bir səbəbdən daha uzun yarı ömrünə sahib görünən bəzi formalar istisna olmaqla, ümumiyyətlə qeyri-sabitdir. Forma (yəni, ekzosom), ölçüsü, bağlı molekul maddəsi (yəni, lipid, zülal) və sərbəst buraxılma mexanizmi birlikdə ctDNT klirensində rol oynayır.

Kennet Kinzler: CfDNT-nin qandan təmizlənməsi sürəti insan və heyvan modellərində ekzogen DNT, fetal DNT və şiş DNT-sindən istifadə etməklə tədqiq edilmişdir. Bu tədqiqatların hamısı DNT-nin qandan sürətlə təmizləndiyini göstərir. Tam şiş rezeksiyasından sonra plazması dəfələrlə nümunə götürülən tək subyektin qiymətləndirilməsi ilə biz əməliyyatdan sonra ctDNT-nin yarı ömrünü 114 dəqiqə hesabladıq. Dennis Lo və həmkarları doğuşdan sonra 8 qadında dövran edən fetal DNT-nin təmizlənməsini izləmiş və dövran edən fetal DNT-nin orta yarı ömrünü 16,3 dəqiqə (aralıq 4-30 dəq) olaraq tapmışlar. ctDNA üçün klirens mexanizmi yaxşı öyrənilməmişdir, lakin çox güman ki, digər mənbələrdən cfDNA ilə oxşardır və xəstənin fizioloji vəziyyətindən asılı olaraq dəyişə bilər. Çox güman ki, nükleazın deqradasiyası, böyrək klirensi və qaraciyər və dalaq tərəfindən mənimsənilməsinin birləşməsi rol oynaya bilər.

Klaus Pantel: ctDNA-nın klirensi tam başa düşülməmişdir. Əvvəlki hesabatlar göstərir ki, ctDNA-nın yarı ömrü 16 dəqiqədir. Bununla belə, eyni qrupdan edilən son tədqiqat ctDNA-nın kinetikasını öyrənmək üçün növbəti nəsil ardıcıllığından (NGS) istifadə etdi, bu, sürətli faza üçün təxminən 1 saat və ikinci faza üçün 13 saat yarım ömrü olan ikifazalı klirensi ortaya qoydu. Güman edilir ki, ctDNA-nın əksəriyyəti böyrəklər vasitəsilə təmizlənir, bu da son vaxtlar sidikdə ctDNA-nın aşkar edilməsinə marağı artırıb, nəinki sidik-cinsiyyət traktının xərçəngləri üçün. Böyrək disfunksiyası olan xəstələrdə ctDNA-nın klirens sürətinin təsirləndiyini nəzərdə tutmaq olar. Bu aspekt əlavə araşdırmaya ehtiyac duyur, çünki bu, dövriyyədəki ctDNA miqdarını modulyasiya edən mühüm qarışıq amil ola bilər. Böyrək klirensi ilə yanaşı, DNT dövriyyədən başqa mexanizmlərlə də təmizlənə bilər. Məsələn, DNT yapışqandır və qan damarlarını əhatə edən endotel hüceyrələri kimi ana hüceyrələrə də yapışa bilər, bu DNT-nin yenidən qana salınması qeyri-mümkün deyil. Bir sıra hesabatlar göstərir ki, ctDNA hətta ana hüceyrələr tərəfindən qəbul edilə bilər və bu tutulma bu hüceyrələrin biologiyasına təsir göstərir. Beləliklə, ctDNA klirensi mexanizmləri və onların ctDNA sabitliyinə təsirləri hələ də əlavə araşdırmaya ehtiyac duyur.

Catherine Alix-Panabières: ctDNA-nın təmizlənməsi, "təmizlənməsi üçün nə qədər vaxt lazımdır və bunun necə edildiyi" hazırda yaxşı başa düşülmür və hələ də araşdırılır. Məlum olan odur ki, ctDNA həqiqətən xərçəng xəstələrinin qanında məhdud sabitliyə malikdir, çünki qanda mövcud olan DNazlar da onu tez həzm edir. Beləliklə, ctDNA-nın qan dövranında bir neçə saatlıq qısa yarı ömrü var və bu, erkən oxunuşlar üçün imkanlar təklif edir. Bu genetik və parçalanmış material xərçəng xəstələrində sürətli dəyişikliklərə məruz qala bilər və qan nümunələrinin götürülmə vaxtları çox vacibdir və klinik sınaq hazırlayarkən əvvəlcədən müəyyən etmək asan deyil. Üstəlik, ölən şiş hüceyrələri ilə ctDNA-nın sərbəst buraxılması, şiş növü, şiş mərhələsi, xərçəng xəstələrinin terapiyaya reaksiyası, şiş yükü və hüceyrə replikasiyasına görə xərçəng xəstələri arasında olduqca dəyişkəndir.

ctDNA nöqtə mutasiyaları, aneuploidiya, yenidən qurulma və metilasiya kimi müxtəlif aspektlərdə araşdırıla bilər. Mövcud ardıcıllıq texnologiyaları nələri araşdırmağa qadirdir?

Dave S.B. Hoon: Genomik və epigenomik ctDNT aberrasiyalarının fərdi formalarını araşdırmaq üçün bir çox üsullar mövcuddur. Hər birinin öz üstünlükləri var və bəziləri klinik sınaqlarda digərlərinə nisbətən daha effektiv şəkildə yoxlanılıb. Ən əhəmiyyətlisi, ctDNA kliniki yardımı ilə yüksək dərəcədə əlaqəli olan fərdi analizin spesifikliyi və həssaslığıdır. Rəqəmsal kiçik molekulların ardıcıllığı hazırda ctDNA-nın nöqtə mutasiyası və gücləndirilməsinin aşkarlanması üçün çox həssas və spesifik yanaşmaya imkan verir.

Kenneth Kinzler: NGS-dən istifadə edərək ctDNA-nı müəyyən etmək üçün somatik nöqtə mutasiyaları, yenidən təşkillər, anevloidiya və metilasiyadan istifadə edilmişdir. Normalı şiş DNT-dən ayırmaq üçün bu yanaşmalar ctDNA-ya tətbiq olunduqda onların həssaslığı, spesifikliyi və praktikliyi baxımından dəyişir. Xüsusi klinik tətbiqetmə hansı yanaşmanın optimal olduğunu müəyyən edə bilsə də, biz öyrəndik ki, nöqtə mutasiyalarından istifadə bizim tədqiq etdiyimiz əksər klinik tətbiqlər üçün ən yaxşı xüsusiyyət birləşməsinə malikdir.

Klaus Pantel: Kopya sayı dəyişikliklərini təyin etmək üçün ctDNA-da tək nukleotid mutasiyalarını və ya bütün genom ardıcıllığını aşkar etmək üçün BEAMing, Safe-SeqS, TamSeq və rəqəmsal PCR kimi ctDNA-nı aşkar etmək üçün yüksək həssas və spesifik üsullar işlənib hazırlanmışdır. Prinsipcə, texnologiyaları əvvəlcədən təyin edilmiş genlər toplusunda mutasiyaları aşkar etməyə yönəlmiş hədəflənmiş yanaşmalara bölmək olar [məsələn, KRAS proto-onkogen, GTPase (KRAS) EGFR (epidermal böyümə faktoru reseptoru) antikorlar tərəfindən blokada kontekstində] və ya məqsədsiz yanaşmalar (məsələn, massiv-CGH (müqayisəli genomik hibridləşmə), bütün genom ardıcıllığı və ya ekzom ardıcıllığı) genomu yoxlamaq və yeni genomik aberasiyaları aşkar etmək məqsədi daşıyır. məsələn, xüsusi hədəflənmiş terapiyaya müqavimət göstərənlər (Murtarza et al., Nature 2013497:108-112). Bu texnologiyaların güclü tərəfləri və məhdudiyyətləri bu yaxınlarda əla rəylərdə müzakirə edilmişdir. Ümumiyyətlə, aşkarlama limitlərini yaxşılaşdırmaq üçün güclü səylərə baxmayaraq, hədəflənmiş yanaşmalar hədəfsiz yanaşmalardan daha yüksək analitik həssaslığa malikdir. Akademiya və sənayedən 30-dan çox qurumdan ibarət Avropa IMI (İnnovativ Dərman Təşəbbüsü) konsorsiumu [CANCER-ID www.cancer-id.eu elmi koordinatoru, Klaus Pantel EFPIA (Avropa Əczaçılıq Sənayesi və Assosiasiyaları Federasiyası) koordinatoru, Tomas Şlanq adlanır] hazırda maye biopsiyalarına diqqət yetirir əsas məqsəd müxtəlif cfDNA texnologiyalarını yan-yana doğrulamaqdır, əvvəlcə müxtəlif institutlar arasında halqa təcrübələrində, sonra isə çoxmərkəzli klinik sınaqlarda.

Catherine Alix-Panabières: Plazmada ümumi cfDNA arasında ctDNA aşkarlanması molekulyar metodların istifadəsini tələb edir və normal və şişdən əldə edilən DNT arasındakı genetik və ya epigenetik fərqlərə əsaslanır. CtDNT-nin aşkarlanması üçün hədəflər (1) məlum və ya proqnozlaşdırılan funksional uyğunluğu olan mutasiyalar (onkogeni aktivləşdirən mutasiyalar və şiş supressoru təsirsizləşdirən mutasiyalar), (2) funksional əhəmiyyəti olmayan və ya naməlum mutasiyalar (somatik xromosomların yenidən qurulması, kodlaşdırılmayan DNT mutasiyaları və DNT variantları) ) və (3) epigenetik modifikasiyalar (əsas ardıcıllığın metilləşmə vəziyyəti və histon modifikasiyaları). ctDNA-nı tədqiq edə bilən bəzi müasir texnologiyalara aşağıdakılar daxildir: (i) PCR zamanı pirofosforolizlə aktivləşdirilmiş polimerləşmə və allel spesifik gücləndirməni birləşdirən texnologiya (ii) ctDNA-da genetik dəyişikliklərin identifikasiyasını təkmilləşdirən rəqəmsal genomik metodlar toplusu (iii) yağda su emulsiyalarında maqnit muncuqlarda tək molekullu PCR reaksiyalarının aparılmasına imkan verən PCR əsaslı metod, BEAMing yanaşması (iv) Damcılı rəqəmsal PCR və mikrofluidik sistemləri əhatə edən digər rəqəmsal PCR texnologiyaları (v) PZR gücləndirilməsi, ardınca NGS. NGS tərəfindən analiz edilən plazma cfDNA müəyyən edə bilər (a) verilmiş mutasiyanın mövcudluğu və nümunə daxilində onun allel tezliyini təxmin edin və (b) xərçəngdə mutasiyaların bütün repertuarının bütün genom xarakteristikası. Nəhayət, ctDNA aşkarlanması üçün təkmilləşdirilmiş texnologiyaların yüksək həssaslığı haqqında təsəvvür əldə etmək üçün bildirildi ki, rəqəmsal PCR və BEAMing 1%-dən 0,001%-ə qədər həssaslıqla somatik nöqtə mutasiyalarını aşkar edə bilir. Nöqtə mutasiyalarının və nüsxə sayı dəyişikliklərinin tədqiqindən əlavə, ctDNA-da şiş bastırıcı və metastaz supressor genlərinin metilasiya statusunun qiymətləndirilməsi real vaxt rejimində metilasiyaya xas PCR analizləri ilə qiymətləndirilə bilər. Bütün bu texnologiyalar xərçəng hüceyrə xətlərindən istifadə edərək müxtəlif in vitro həssaslıqlarla bildirilmişdir, lakin klinik nəticələr və onların müvafiq qiymətləndirilməsi hələ də klinik sınaqlarda davam edir.

Bu yaxınlarda biz etiketli amplikon dərin ardıcıllığı (TAM-Seq) və dərin ardıcıllıqla Xərçəng üçün fərdiləşdirilmiş profilləşdirmə (CAPP-Seq) kimi yeni ardıcıllıq texnologiyalarının ortaya çıxdığını gördük. Bu yeni texnologiyaların “köhnə”lərlə müqayisədə üstünlükləri nələrdir?

Dave S.B. Hoon: Daha yeni texnikalar daha birbaşa hədəfləmə təklif edir, lakin NGS-nin yeni yanaşmalarından mütləq yaxşı deyil. Rəqəmsal kiçik molekul analizində NGS adi NGS-dən daha yüksək həssas və spesifik yanaşmadır. Ənənəvi paralel NGS bahalı və məhduddur. Aşkarlama üsulları sürətlə inkişaf edir və təkmilləşir. Daha yeni yanaşmalar yalnız klinik faydalılıq möhkəm şəkildə nümayiş etdirildikdə səmərəli hesab edilə bilər.

Kenneth Kinzler: Bir çox üsullar ctDNA-nın fraksiyasının ümumi DNT-nin 5%-dən çoxunu təşkil edə biləcəyi qabaqcıl hallarda ctDNA-nı aşkar edə bilər. Bununla belə, aşkar edilə bilən ctDNA-lı halların, xüsusən də erkən xəstəlik halında, ümumi DNT-nin <0,1%-ni təmsil edən bir neçə mutant molekulu aşkarlaya bilən metodları tələb edir. Xoşbəxtlikdən, rəqəmsal yanaşmalar (məsələn, rəqəmsal PCR, BEAMing və SafeSeqS) hətta bu aşağı səviyyələrdə aşkarlama və dəqiq kəmiyyətləşdirməyə imkan verir.

Klaus Pantel: Bu yeni texnologiyaların əsas üstünlüyü onların yüksək həssaslığıdır. “Köhnə” texnologiyalar, ctDNA miqdarının çox yüksək olduğu və cfDNA-nın ümumi miqdarının 50%-ni keçə biləcəyi inkişaf etmiş xərçəng xəstələrinin qanını təhlil edən sübut-of-prinsip tədqiqatlarda istifadə edilmişdir. Bununla belə, bu texnologiyalar normal dövran edən cfDNA-nın “dənizində” daha az miqdarda ctDNA-nı aşkar edə bilmir, bu, xüsusən də analizlərimizi MRD və ya xərçəngin erkən aşkarlanması olan xəstələrə genişləndirsək, açıq bir məhdudiyyətdir. Bu vəziyyətlər üçün CAPP-Seq texnologiyası üçün 0,00025% kimi olduqca aşağı konsentrasiyalarda ctDNA-nı aşkarlaya bilən daha çox həssas texnologiyalar işlənib hazırlanmışdır. Bununla belə, indi cfDNA-nın ümumi miqdarı və mövcud genom ekvivalentlərinin sayı mühüm məhdudiyyətə çevrilə bilər. Beləliklə, bu yeni analizlərin diqqətəlayiq həssaslığına çatmaq üçün təhlil üçün kifayət qədər miqdarda ctDNA əldə etmək üçün plazma nümunəsinin ölçüsünü əhəmiyyətli dərəcədə artırmaq lazımdır. Bu baxımdan, erkən mərhələdə xərçəng xəstələrində ctDNA analizləri, sirkulyasiya edən şiş hüceyrəsi analizləri ilə eyni problemlərlə üzləşirlər. Beləliklə, ctDNA analizinin bir damla qandan xərçəng aşkarlayacağı vədi yanlışdır.

Catherine Alix-Panabières: Standart PCR-əsaslı analizlər nisbətən məhdud həssaslığa malikdir və allellərin ümumi hovuzunun <5%-10%-ni təşkil edən mutasiyaları aşkar edə bilmir. Həqiqətən, onlar çoxlu artefaktlar yaradırlar, xüsusən də ctDNA miqdarı kifayət qədər azdırsa, yeni texnologiyalar çox az miqdarda ctDNA aşkar edə bilir. Somatik genetik və epigenetik aberrasiyaların identifikasiyası indi yüksək spesifik və həssas texnikaların (məsələn, rəqəmsal PCR və BEAMing üçün 1%-dən 0,001%-ə qədər) gəlişi ilə asanlaşdırılıb. Bu, müxtəlif klinik məlumatların əldə edilməsini nəzərdə tutur: daha yeni, daha həssas texnologiyalarla xərçəngin diaqnozunda, erkən mərhələdə xərçəngin aşkarlanmasında və MRD-nin aşkarlanmasında faydalı olduğunu təsəvvür edə bilərik, halbuki köhnə texnologiyalarla yalnız inkişaf etmiş və metastatik mərhələdə. xəstəlikləri aşkar etmək və qiymətləndirmək olar.

Genotipləmə ctDNA ilə bağlı hələ də qarşılaşdığımız ən böyük texniki problem nədir?

Dave S.B. Hoon: Əsas texniki problem və ya Axilles dabanı kiçik miqdarda serum/plazmadan ctDNT-nin təcrid olunmasıdır. Bu izolyasiya maneəsi aşağı axın təhlilinə təsir edəcək. Bütün ctDNA-nı dəqiq şəkildə əldə edirikmi? Təhlil həssaslığı əsas problem olaraq qalır. Ən mühüm texniki problem ctDNA-nın hansı səviyyədə klinik faydalı olduğunu müəyyən etməkdir. Bu, ehtimal ki, xəstənin klinik vəziyyətindən və xüsusi analiz biomarker ctDNA tərəfindən hansı sualın həll olunduğundan asılı olaraq xərçəng növləri arasında dəyişəcək.

Kenneth Kinzler: İnkişaf edən texnologiya ctDNA-nın aşkarlanmasını mümkün edib və gələcək irəliləyişlər, çox güman ki, bu cür analizləri daha da möhkəm və sərfəli edəcək. Bununla belə, bu analizlər, cari olanlar kimi, texniki deyil, praktiki və bioloji məsələlərlə məhdudlaşa bilər. Praktik tərəfdən, plazma nümunəsində mövcud olan hüceyrəsiz molekulların sayı ilə məhdudlaşırıq. Məsələn, 1 ml plazma adətən hər hansı bir genin təxminən 3000 nüsxəsini ehtiva edir, bu da 5 ml plazma nümunəsi ilə ctDNA-nı aşkar etmək qabiliyyətimizi 15 000 nüsxədə 1 ilə məhdudlaşdırır. Bioloji tərəfdən, xoşxassəli şişlərin və bəzi şiş növlərinin (məsələn, qlioblastomaların) yalnız kiçik bir hissəsi optimal şəraitə yaxın şəraitdə çox həssas analizlərlə sınaqdan keçirildikdə belə, aşkar edilə bilən ctDNA konsentrasiyalarını buraxır. Bir biomarker kimi ctDNA-dan istifadənin bəzi məhdudiyyətləri daha böyük nümunə həcmləri və alternativ protokollar və ya qan toplanması üçün saytlar vasitəsilə aradan qaldırıla bilər. Nəhayət, şiş DNT-nin nəcis, sidik, bəlğəm, tüpürcək və Pap-smear nümunələri kimi asanlıqla əldə oluna bilən digər klinik nümunələrdə perspektivli xərçəng biomarkeri olduğu göstərilmişdir.

Klaus Pantel: Ən böyük texniki problem dəyişən miqdarda cfDNA ehtiva edən qan nümunələrində çox aşağı miqdarda ctDNA-nın müəyyən edilməsi və xərçəngə xas genomik aberrasiyaların düzgün panelinin seçilməsidir. Genomik aberrasiyalar mövcud hədəflənmiş terapiyanın seçimi ilə müəyyən edilirsə, bu vəzifə mövcud texnologiyalarla həyata keçirilə bilər. Bununla belə, əgər ctDNA analizi xərçəng xəstələrində MRD-nin skrininqi üçün və ya hətta “sağlam insanlarda” ilkin xəstəliyin erkən aşkarlanması üçün istifadə edilirsə, fərdi xəstədə genomik aberrasiyalar bilinmir. MRD olan xəstələrdə birincil şiş (və ya ən azı biopsiya) ardıcıllıq üçün mövcud ola bilər. Buna baxmayaraq, formalinlə fiksasiya olunmuş parafinə daxil edilmiş bu nümunələrin keyfiyyəti çox dəyişkəndir. Erkən aşkarlanması üçün şiş materialı mövcud deyil və mümkün genomik aberrasiyalar paneli əksər bərk şişlər üçün əhəmiyyətlidir. Üstəlik, məlumdur ki, xərçənglə əlaqəli mutasiyalar hətta həyatı boyu heç vaxt xərçəngə tutulmayan insanlarda da yaş artdıqca baş verir. Məsələn, bu yaxınlarda aparılan bir araşdırma göstərdi ki, 65 yaşdan yuxarı sağlam insanların 15%-ə qədərində leykemiya somatik mutasiyaları var, lakin leykemiya yalnız bu xəstələrin az bir hissəsində diaqnoz qoyulub. Beləliklə, cfDNA-da xərçənglə əlaqəli mutasiyaların aşkarlanması sınaqdan keçmiş şəxsin artıq xərçəng olduğunu və ya həyatı boyu xərçəng inkişaf etdirəcəyini göstərməyə bilər, lakin ehtimal olunan naməlum şişi axtarmaq üçün CT və MRT taramaları kimi geniş diaqnostik prosedurları sürətləndirə bilər. lezyon.

Catherine Alix-Panabières: Birincisi, ctDNA-nı optimallaşdırılmış şəkildə aşkar etməzdən əvvəl preanalitik addımlar standartlaşdırılmalıdır, məsələn, qan həcmi, plazma və ya zərdab, qan sentrifuqasiyası, yüksək keyfiyyətli DNT-ni təcrid etmək üçün nəzərdə tutulmuş xüsusi reagent, ekstraksiya strategiyası vasitəsilə DNT-nin hazırlanması və DNT-ni müəyyən etmək üçün saxlama şəraiti. ən çox təkrarlana bilən və möhkəm metodologiya, sonra analitik performansın tam qiymətləndirilməsi (məsələn, möhkəmlik, təkrar istehsal, həssaslıq, spesifiklik, daxili və xarici keyfiyyətə nəzarət), həmçinin qan nümunəsinin toplanmasından nəticənin xərçəng xəstəsinə qaytarılmasına qədər olan analiz müddəti lazımdır. Bütün bu texniki məqamlar nəzərə alınmalıdır, lakin daha da əhəmiyyətlisi, terapiya üçün xəstələrin təbəqələşdirilməsi, müalicənin effektivliyinin qiymətləndirilməsi, metastatiklərin erkən diaqnostikası kimi tətbiqlərlə bağlı müxtəlif əsas suallara cavab vermək üçün müxtəlif vaxt nöqtələrində ctDNA-nın klinik əhəmiyyətini qiymətləndirmək lazımdır. residiv və ya müalicə müqavimətini təyin etmək. Üstəlik, xərçəngin erkən diaqnozu üçün nəzərə almalıyıq ki, (1) ctDNA-nı aşkar etmək üçün xüsusi mutasiyalar bilinməlidir [məsələn, KRAS və ya B-Raf proto-onkogen, serin/treonin kinaz (BRAF) kolon xərçəngində mutasiya] və (2) bir çox insanlarda xərçənglə əlaqəli mutasiyalarla üst-üstə düşə bilən mutasiyalar daşıyan xoşxassəli şişlər (məsələn, dəri şişləri) var və ctDNA xərçəng skrininqi üçün istifadə edilərsə, yanlış müsbət nəticələrə səbəb ola bilər.

Sizcə, ctDNA-nın klinik praktikaya tətbiqini görməyimizə nə qədər vaxt lazımdır?

Dave S.B. Hoon: Hazırda biz ctDNA analizlərinin CLIA tərəfindən akkreditə olunmuş laboratoriyalarda aparıldığı bir zamana daxil oluruq. ctDNA analizləri həm səhiyyə ödəyiciləri, həm də fərdi xəstələr tərəfindən ödənilir. Ümid edirik ki, bir neçə ildən sonra biz ABŞ Qida və Dərman Administrasiyasının (FDA) spesifik xərçənglər üçün xüsusi ctDNA analizlərini təsdiqlədiyini görə bilərik.

Kenneth Kinzler: Hər hansı yeni texnologiyanın klinik praktikaya nə vaxt tətbiq ediləcəyini proqnozlaşdırmaq spekulyativ olsa da, ctDNA-nın xüsusi klinik vəziyyətlərdə hazırda istifadə olunan klinik xərçəng biomarkerlərini üstələyə biləcəyini göstərən tədqiqatların sayı artır. Müvafiq olaraq, mən ümid edərdim və gözləyərdim ki, ctDNA ölçmələri növbəti 5-10 il ərzində artan vəziyyətlərdə klinik qərarlara kömək etmək üçün istifadə olunacaq.

Klaus Pantel: Məqsədli terapiyaların qan əsaslı təbəqələşməsi, ehtimal ki, ctDNA analizinin klinik praktikaya tətbiqi üçün biletdir. Bu yaxınlarda epidermal böyümə faktoru reseptoru üçün ilk ctDNT testi (EGFR) qeyri-kiçik hüceyrəli ağciyər xərçəngində (KHDAK) mutasiyalar FDA tərəfindən heç bir şiş toxumasının biopsiya edilə bilməyəcəyi vəziyyət üçün təsdiq edilmişdir. Yaxın gələcəkdə terapevtik hədəfləri və/yaxud müvafiq müqavimət genlərini kodlayan genlərdə mutasiyalar üçün daha çox testlər aparılacaq. NSCLC bu tətbiq üçün maraqlı bir şiş varlığıdır, çünki həssas xəstələrin kiçik kohortlarında xüsusi hədəflənmiş müalicələri istiqamətləndirən müxtəlif mutasiyalar yaxınlarda müəyyən edilmişdir və xeyli sayda xəstələrdə biopsiya asanlıqla əldə edilmir. Bununla belə, vurğulamaq lazımdır ki, nə ctDNA-nın DNT analizləri, nə də şiş toxuması xəstənin müvafiq terapevtik agentlərə davamlı və ömrünü uzatan cavab verəcəyinə zəmanət vermir. CtDNA analizinin (hər hansı digər diaqnostik test kimi) klinik faydası terapiya qərarlarının ctDNA analizinə əsaslandığı randomizə edilmiş klinik müdaxilə tədqiqatlarında sübut edilməlidir, yəni ctDNA analizi fərdi xərçəng xəstəsində müalicəni istiqamətləndirə bilərmi və bu dəyişikliyi edir. yaxşılaşmış sağ qalmağa səbəb olur? Bu tədqiqatların tibb ictimaiyyəti tərəfindən başa çatdırılması və qəbul edilməsi uzun illər çəkə bilər. Çoxmərkəzli, açıq etiketli, konsepsiya sübutu, randomizə edilmiş, nəzarət edilən 2-ci faza SHIVA sınağının son nəticələri molekulyar hədəflənmiş agentlərin göstərişləri xaricində istifadəsi olduqca məyus oldu, həkimin seçdiyi müalicə ilə müqayisədə irəliləməsiz sağ qalmağı yaxşılaşdırmadı. Xərçəngdən ağır müalicə alan xəstələr. Məqsədli müalicələrə müqavimət göstərən mutasiyalar üçün ctDNA-nın monitorinqi də ctDNA-nın buraxılmasının dinamik biologiyası haqqında hələ də az məlumatlı olduğumuz üçün mane ola bilər. ctDNA əsasən ölməkdə olan şiş hüceyrələrinin genomunu təmsil edir, lakin canlı şiş hüceyrələri xərçəngin inkişafını sürətləndirir və terapiya müqavimətinə səbəb olur. Beləliklə, ctDNA skrininqi üçün uyğun vaxt nöqtələrinin seçilməsi davamlı şiş hüceyrə klonlarından əldə edilən ctDNA növlərini aşkar etmək üçün çox vacib olacaqdır. Bu kontekstdə, klinikada istifadə edilən standart şiş markerlərindən üstün olan terapiyanın uğursuzluğunun erkən göstəriciləri kimi canlı dövran edən şiş hüceyrələrinin paralel müəyyən edilməsi faydalı ola bilər.

Catherine Alix-Panabières: Texnoloji inkişaflarla birlikdə müalicə qərarlarının qəbulu üçün molekulyar testlərin inkişafı son illərdə dəb halına gəldi və biz hələ də ümid edirik ki, real vaxt rejimində maye biopsiya xəstələrdə xərçəngin aşkarlanması və monitorinqinin qeyri-invaziv və həssas üsullarına gətirib çıxaracaq. Bununla belə, ctDNA-nın klinik praktikaya tətbiqi bir neçə il çəkə bilər, çünki ctDNA-nın hazırlanması (preanalitik addımlar) və aşkarlanması üçün ən yaxşı texnologiyanın nə olacağını, son nöqtələrin nə olacağını və ctDNA analizinin daha informativ olub-olmayacağını müəyyən etmək lazımdır. toxuma biopsiyaları kimi mövcud standartlardan asılı olmayaraq. Daha əvvəl qeyd edildiyi kimi, ctDNT-nin klinik əhəmiyyətini və ilk növbədə onun klinik faydasını, fərdiləşdirilmiş tibb üçün əsas sualı qiymətləndirmək lazımdır. Bundan əlavə, ilkin skrininq üçün xərçəng xəstələrinin çox böyük qrupları və uyğunlaşdırılmış nəzarət fərdləri, o cümlədən nəzarət qrupu kimi xoşxassəli xəstəlikləri olan xəstələr də daxil olmaqla, prospektiv olaraq təhlil edilməlidir. Digər skrininq yanaşmalarını [məsələn, prostat xərçəngi üçün PSA (prostata spesifik antigen) və ya döş xərçəngi üçün mamoqrafiya] nəzərə alsaq, bu səy minlərlə xəstə, nəzarət və 10 il və ya daha çox müşahidə dövrləri tələb edir.

Moderatorlar tərəfindən əlavə edilən qeyd: Bu sual-cavab tamamlandıqdan sonra, ardıcıllıq nəhəngi Illumina, 1000 dollardan aşağı qiymətə başa gələn və bir çox xərçəng növlərini asemptomatik mərhələdə aşkar etmək qabiliyyətinə malik qan testlərini inkişaf etdirmək məqsədi ilə yeni Grail şirkətinin yaradıldığını elan etdi. Testlər "maye biopsiyaları" (qan testləri) və təcrid olunmuş ctDNT-nin ardıcıllığına əsaslanacaq. Şirkət artıq 100 milyon dollar toplayıb və onun tərkibinə Bill Gates (Microsoft) və Jeff Bezos (Amazon) kimi yüksək profilli investorlar daxildir. Illumina-nın CEO-su bu testlərin 2019-cu ilə qədər istehlakçılara çatacağını və həkim kabinetlərində mövcud olacağını proqnozlaşdırır.


Sirkulyasiya edən şiş hüceyrələri

CTC-lər xərçəngli xəstələrin qan dövranında tək hüceyrələr şəklində və ya daha az yaygın olaraq hüceyrə qrupları şəklində tapıla bilər və CTC səviyyələrinin sağ qalma və terapiyaya cavab ilə klinik əlaqəsi olduğu göstərilmişdir (7). CTC-lər ilkin şişdən və ya uzaq metastatik ocaqlardan damarlara tökülür və metastazların əkilməsi və yenidən əkilməsi üçün cavabdeh olan “günahkar hüceyrələrin” subpopulyasiyalarını ehtiva edir və nəticədə xəstənin ölümünə səbəb olur (8). Beləliklə, yalnız xəstəlik yükünün ölçülməsi və minimal qalıq xəstəliyin aşkarlanması üçün CTC-ləri sadalamaq deyil, həm də CTC-ləri bu ehtimal olunan günahkar hüceyrələrə yönəlmiş terapiya üçün bir vasitə kimi xarakterizə etmək xahiş olunur.

CTC zənginləşdirmə və aşkarlama texnologiyaları

Bir neçə icmalda müxtəlif CTC zənginləşdirmə və aşkarlama texnologiyaları müzakirə edilmişdir (7, 9-12). Cədvəl 1-də son 5 il ərzində xəstə nümunələrinin sınaqdan keçirilməsi üçün istifadə edilmiş CTC analizlərinin yenilənmiş siyahısı və onların kommersiyalaşdırılması statusu təqdim olunur. CTC aşkarlama və ya tutma üsulları, həmçinin epitelial hüceyrə yapışma molekulu (EPCAM) kimi hüceyrə səthi markerləri ilə müsbət zənginləşdirmədən istifadə edərək, etiketdən asılı olaraq geniş şəkildə təsnif edilə bilər. in vivo tutma üsulları və ya etiketdən asılı olmayaraq, mənfi seçim, ölçü və ya digər biofiziki xüsusiyyətlərə əsaslanan CTC-lər üçün zənginləşdirici digər strategiyalara CTC-lərin və funksional analizlərin birbaşa təsviri daxildir. Etiketdən asılı üsullarla CTC-lərin aşkarlanması və tutulmasında əhəmiyyətli bir problem onları normal epitel hüceyrələrindən fərqləndirən etibarlı immunositokimyəvi müəyyən edilə bilən markerlərin olmamasıdır. Belə ki, epitel hüceyrələri sağlam fərdlərdən alınan qan nümunələrində nadir hallarda mövcud olduğundan və xərçəngli xəstələrdə dövran edən epitel hüceyrələri (CEC) tez-tez ilkin şişdə müşahidə olunan eyni genetik aberrasiyaları daşıdığından (13), CTC-lərin ümumi tərifi ekvivalent olmuşdur. MEK-lərinkinə: epitelial sitokeratinləri ifadə edən və ağ qan hüceyrəsi səthi antigen CD45-i ifadə etməyən qan dövranında nüvəli hüceyrələr.Bu yaxınlarda, potensial olaraq epitelial-mezenximal keçiddən (EMT) keçən şiş hüceyrələrini və ya alternativ olaraq, epitelial differensiasiyanı hələ göstərməmiş xərçəng kök hüceyrələrini təmsil edən sitokeratin-mənfi CTC-lər müəyyən edilmişdir (14-17).

Bu yaxınlarda dərc edilmiş klinik tədqiqatlarla CTC aşkarlama/tutma üsulları, 2010-2015

Klinik sınaqlarda CTC-lər

Cədvəl 1-də sadalanan bəzi texnologiyalar fərqli CTC alt populyasiyalarını aşkar edə bilər və buna görə də gələcəkdə müxtəlif klinik ssenarilərdə istifadə oluna bilər. Bununla belə, klinikada istifadə ediləcək hər hansı bir texnologiya üçün analitik etibarlılığın nümayişi (maraq hədəfini ölçmək üçün testin dəqiqliyi), klinik etibarlılıq (klinik nəticəni proqnozlaşdırmaq üçün testin dəyəri) və nəticədə klinik faydalılıq ( Müalicə seçimi test nəticələrinə əsasən bildirildikdə testin təkmilləşdirilmiş klinik nəticəyə gətirib çıxarma qabiliyyəti tələb olunur (9, 18). Hal-hazırda FDA tərəfindən metastatik döş, kolorektal və ya prostat xərçəngi olan xəstələrin monitorinqində yardım kimi təsdiq edilmiş yeganə sistem CELLSEARCH-dir (Janssen Diagnostics refers. 19-21). Son məlumatlar göstərir ki, bu texnologiya davamlı təlim və mərkəzi təsvirin nəzərdən keçirilməsi şərti ilə qeyri-metastatik şəraitdə çoxsaylı laboratoriyalarda klinik sınaqlar üçün də istifadə edilə bilər (22).

2015-ci ilin aprel ayında “ClinicalTrials.gov” saytında “sirkulyasiya edən şiş hüceyrəsi” açar sözlərindən istifadə etməklə aparılan axtarış CTC-ləri əhatə edən 296 tədqiqatı aşkar etdi. Cədvəl 2, daxil edilmə meyarı kimi CTC sadalanması və ya xarakteristikasından istifadə edən çoxsaylı şiş növləri üzrə tədqiqatlara istinad edir. Cədvəl 3 müəyyən bir göstəriş üçün CTC analizlərinin hazırlanması və/yaxud təsdiqlənməsi üçün tədqiqatlara istinad edir.

Daxil edilmə meyarı kimi CTC aşkarlanması və ya səciyyələndirilməsi olan davam edən tədqiqatlar

Müəyyən bir göstəriş üçün CTC analizlərinin inkişafı və/yaxud təsdiqi üçün tədqiqatlar

CTC siyahıları

Bu yaxınlarda birləşdirilmiş təhlil metastatik döş xərçəngində pis proqnozun göstəricisi kimi yüksək CTC səviyyələrinin klinik etibarlılığına birinci səviyyəli sübut təqdim etdi (23). Bununla belə, metastatik döş xərçəngində müalicə qərarının qəbul edilməsi üçün CTC siyahılarının dəyəri Cənub-Qərb Onkoloji Qrupunun (SWOG) S0500 klinik sınaqlarında prospektiv olaraq sınaqdan keçirilmişdir (24). SWOG sınağı, birinci sıra kimyaterapiyaya başladıqdan sonra ilk təqibdə davamlı olaraq artan CTC-ləri olan xəstələr üçün kimyaterapiyada erkən dəyişikliyin faydasını qiymətləndirdi. Qiymətləndirilmiş 595 xəstədən terapiyanın 21-ci günündə CTC-ləri davamlı olaraq yüksəlmiş 123 xəstə ya eyni müalicəni davam etdirmək, ya da həkimin seçdiyi alternativ kimyaterapiyaya keçmək üçün randomizə edilib. Bu sınaqda alternativ kimyaterapiyaya erkən keçid ümumi sağ qalma müddətini (OS) artırmadı. CTC-lərin güclü proqnozlu olmasına baxmayaraq, yüksək CTC saylarına əsaslanan müalicənin dəyişdirilməsinin sağ qalma faydasının olmaması onu göstərir ki, residivin erkən aşkarlanması yalnız daha effektiv müalicə mövcud olduqda vacib ola bilər: Bir səmərəsiz terapiyadan digər səmərəsiz terapiyaya keçid dəyişmir. nəticə. Bunun əvəzinə, CTC molekulyar xarakteristikaya əsaslanan müalicənin dəyişdirilməsi test üçün daha perspektivli bir yanaşma ola bilər.

Metastatik olmayan döş xərçəngində CELLSEARCH və digər platformalardan (25-29) istifadə edərək yüksək CTC səviyyələrinin aşkarlanması da mənfi proqnozla əlaqələndirilir. Davam edən Treat CTC sınağı (NCT01548677 Cədvəl 2) CTC dinamikasını dərman fəaliyyətinin erkən siqnalı kimi qiymətləndirir. Bu sınaq ilkin yüksək riskli qadınları əhatə edir HER2-Cərrahiyyə və (neo)adjuvant kimyaterapiyadan sonra aşkar edilə bilən CTC-ləri olan gücləndirilməmiş döş xərçəngi. O, altı dövr trastuzumabın (HER2 böyümə faktoru reseptorunu hədəf alan humanizə edilmiş monoklonal antikor) tək müşahidə ilə müqayisədə davamlı CTC-ləri yox edib-etmədiyini qiymətləndirir. Bu sınaq bir neçə dəlil xəttinə əsaslanırdı: (i) klinikadan əvvəlki modellərdə trastuzumab, tələb olunmayan bir prosesdə xərçəng kök hüceyrə populyasiyasını hədəf alır. HER2 gen amplifikasiyası (30) (ii) perspektiv sınaqların alt qrup analizləri yerli testlə HER2-müsbət şişləri olan, lakin mərkəzi patoloji araşdırmasına görə HER2-mənfi hesab edilən qadınlar üçün oxşar trastuzumab faydasını nümayiş etdirir (31, 32) və (iii) tək mərkəzli randomizə edilmiş HER2-mənfi erkən döş xərçəngi olan 75 xəstənin II faza tədqiqatı müəyyən etdi ki, qısamüddətli trastuzumab kemoterapiyaya davamlı CK19 mRNA-müsbət CTC-ləri aradan qaldıra və müşahidə ilə müqayisədə xəstənin nəticəsini yaxşılaşdıra bilər (33). Döş xərçəngində CTC istifadə edən əlavə tədqiqatlar Cədvəl 2 və 3-də verilmişdir.

CTC sayının metastatik kastrasiyaya davamlı prostat xərçəngində proqnostik məlumat verməsi də göstərilmişdir (34, 35). Abirateron və prednizonu tək prednizonla müqayisə edən COU-AA-301 qeydiyyat sınaqında, müalicədən 12 həftə sonra CTC göstəriciləri və laktat dehidrogenaz (LDH) səviyyələrinin birləşməsi fərdi xəstə səviyyəsində ƏS üçün surroqat olduğu göstərildi (36) . Bu biomarker panelini təsdiqləmək üçün səylər davam edir.

Döş və prostat xərçəngindən başqa şiş növlərində CTC-lərdən istifadə edilən klinik tədqiqatlar Cədvəl 2 və 3-də təsvir edilmişdir.

CTC xarakteristikası

CTC-lərdə protein ifadəsi.

CTC sadalanmasından başqa, CTC-lərdə zülal ifadəsinin xarakteristikası da klinik sınaqlarda müalicə seçiminə rəhbərlik etmək üçün istifadə edilmişdir (Cədvəl 2). Döş xərçəngində, HER2-mənfi döş xərçəngi olan bəzi qadınlarda aşkar edilə bilən HER2-müsbət CTC-lərə malik ola biləcəyi nümayişi ilə CELLSEARCH texnologiyasından istifadə edilməklə, CTC-lərdə HER2 protein ifadəsi qiymətləndirilmişdir (37, 38). Bununla belə, tək agentli lapatinibin (anti-HER2 tirozin kinaz inhibitoru) II faza tədqiqatı tədqiqata giriş zamanı HER2-mənfi əsas şişləri və HER2-müsbət CTC-ləri olan metastatik döş xərçəngi olan xəstələrdə obyektiv cavablar tapmadı (39). 139 skrininq edilmiş HER2-mənfi xəstədən yalnız 96-da (69%) ≥2 CTC, yalnız 7-də (5%) ≥50% HER2-müsbət CTC olub və müalicə olunub. Bir xəstədə (139 skrininq edilmiş xəstədən 1-i) müalicənin üçüncü xətti kimi lapatinibi qəbul edərək xəstəliyin davamlı stabilləşməsi müşahidə edildi, lakin müalicə olunan xəstələrin sayının az olması səbəbindən effektivlik təhlili aparıla bilmədi. Qeyd edək ki, müalicə olunan 7 xəstənin 6-sı irəliləmiş xəstəlik üçün ≥dördüncü sıra terapiyası kimi lapatinibi qəbul etdi və bu, CTC-lərin HER2 statusunun çox gec mərhələdə olan xəstəlikdə metastazların əsas hissəsinin HER2 statusunu təmsil edib-etməməsi sualını doğurdu. Davam edən III faza sınağı (DETECT III, NCT01619111) eyni xəstə populyasiyasında lapatinibin kemoterapiyaya əlavə edilməsinin rolunu qiymətləndirir (Cədvəl 2). Digər tədqiqatçılar ER-müsbət HER2-mənfi metastatik döş xərçəngində endokrin müqavimətini izləmək üçün CELLSEARCH-dən istifadə edirlər. Bu məqsədlə, estrogen reseptoru (ER), Bcl-2, HER2 və Ki67 üçün CTC sadalanması və xarakteristikaya əsaslanan xal, CTC-Endokrin Müalicə İndeksi (CTC-ETI ref. 40) hazırda COMETI-də sınaqdan keçirilir. Faza II tədqiqatı (NCT01701050 Cədvəl 3).

CTC protein ifadəsi digər şiş növlərində də xarakterizə edilmişdir. Metastatik kolorektal xərçəngi olan xəstələrdə CTC-lərdə timidilat sintaza ifadəsi 5-fluorourasil müqavimətinin potensial markeri kimi tədqiq edilmişdir (41). İmmunofluoresan markerlər hormonal müalicə yanaşmalarını uyğunlaşdırmaq üçün metastatik prostat xərçəngi olan xəstələrdən CTC-lərdə androgen reseptor (AR) siqnalını öyrənmək üçün istifadə edilmişdir (42).

CTC-lərdə RNT ifadəsi.

İnkişaf etməkdə olan bir araşdırma sahəsi, real vaxt rejimində dərman seçiminə rəhbərlik etməyə kömək etmək üçün CTC-lərin transkripsiya profilidir. Məsələn, kastrasiyaya davamlı prostat xərçəngi (CRPC) olan xəstələrin AR siqnalını maneə törədən və ya zəiflədən dərmanlara cavab verməməsinin əsas səbəbi onların şiş hüceyrələrində AR splice variantlarının olması ola bilər. Bu, abirateron və ya enzalutamid müalicəsinin klinik sınaqlarında iştirak edən metastatik CRPC olan xəstələrdən prospektiv olaraq toplanmış CTC-lərdən mRNT-nin araşdırılması ilə nümayiş etdirildi. CTC mRNA liqand bağlayan domendən məhrum olan AR-nin konstitutiv olaraq aktiv izoformu olan AR-V7 splice variantı üçün təhlil edildikdə, dolayı (abirateron) və ya birbaşa (abirateron) və ya birbaşa (abirateron) dərmanlara terapevtik müqavimətlə əhəmiyyətli əlaqə var idi. enzulatamid) bu liqand bağlayan domeninin mövcud olduğu AR-ni hədəf alır (43).

Bununla belə, CTC ilə zənginləşdirilmiş hüceyrə fraksiyalarının RNT ifadə analizi ilə bağlı mühüm problem çirkləndirici leykositlərdən gələn potensial qarışıqlıq siqnalıdır. Bu problemi həll etmək üçün CTC-xüsusi mRNA-larla (44-46) multipleks PCR və tək hüceyrəli yanaşmalar tədqiq edilir. İmmunomaqnit zənginləşdirmə texnologiyası olan MagSweeper (47) ilə təmizlənmiş CTC-lərin yüksəkölçülü tək hüceyrəli transkripsiya profili eyni qan qəbulunda belə əhəmiyyətli CTC heterojenliyini aşkar etdi və şişin molekulyar müxtəlifliyinə yaxınlaşmaq üçün çoxlu dərman terapiyasına ehtiyac olduğunu göstərir (8). Əhəmiyyətli olan odur ki, CTC-lər də döş xərçəngi hüceyrə xətlərinin tək hüceyrələrində olanlarla müqayisədə nəzərəçarpacaq dərəcədə fərqli gen ifadəsi profillərini göstərdilər ki, bu da CTC analizinin dərman inkişafında hüceyrə xətti analizini tamamlaya biləcəyini göstərir. Eynilə, prostat xərçəngi də kastrasiyaya həssas və kastrata davamlı xərçənglərdən CTC-lər arasında EMT ilə əlaqəli genlərin tək hüceyrəli ifadəsində fərqli fərqlərlə CTC heterojenliyi ilə xarakterizə olunur (48).

CTC-lərdə DNT aberrasiyaları.

Konsepsiyanı sübut edən bir neçə tədqiqat müxtəlif şiş növləri olan xəstələrin yığılmış və ya tək CTC-lərdə xüsusi somatik mutasiyaların və ya digər genetik dəyişikliklərin aşkar edilməsinin mümkünlüyünü nümayiş etdirmişdir (49-54). Üstəlik, indi hədəfsiz yanaşmalar tək CTC-lərin tam ekzom ardıcıllığı daxil olmaqla, massiv müqayisəli genomik hibridləşmə (aCGH) və NGS üsulları (55-57) ilə tək CTC-lərdə bütöv genom nüsxə sayı aberrasiyalarını təhlil etmək üçün istifadə olunur (58).

Sanger və ya NGS metodlarından istifadə edərək tək CTC-ləri təhlil edərkən problem, bütün genomun gücləndirilməsi ilə təqdim edilən qərəzlərə görə yalan-müsbət və yanlış-mənfi tapıntıları istisna etməkdir. Üstəlik, müalicənin effektivliyini proqnozlaşdırmaq üçün kifayət qədər şiş heterojenliyini tutmaq üçün neçə CTC-nin təhlil edilməsi lazım olduğu aydın deyil.

CTC in vitro və in vivo dərman reaksiyası üçün modellər

Xəstələrdən CTC-lər təbliğ edilmişdir in vitro çoxlu qruplar tərəfindən. Bunlara döş, kolorektal, plevra mezotelioması, prostat, sidik-bağırsaq, sidik kisəsi, qida borusu, mədəaltı vəzi, mədə və ağciyər xərçəngi (59-70) və uzunmüddətli kulturalar (28 gün və ya daha az) və uzunmüddətli kulturalar daxildir. 6-24 ay) döş, prostat və kolorektal xərçəngi olan xəstələrdən CTC (71-74). Bu cür model sistemlərin məqsədi dərman reaksiyasını öyrənmək və ya bir araşdırmada 14-cü günə qədər mədəniyyətdə görünsələr, terapiya müqavimətinin erkən proqnozlaşdırıcısı ola biləcək çox qatlı klasterləri müəyyən etmək olardı (70).

Bir sıra son tədqiqatlar inkişaf etmiş döş, kolorektal, prostat, hepatosellüler, kiçik hüceyrəli ağciyər və mədə xərçəngi olan xəstələrdən birbaşa CTC-lərdən və ya CTC kulturalarından əmələ gələn siçan ksenoqraftlarının inkişafını bildirmişdir (68, 72, 74-79). Bu analizlərdən bəziləri CTC-lərin metastatik alt populyasiyalarını araşdırır, digərləri isə müalicəni istiqamətləndirmək üçün xəstəyə xas modellər yaradır.

Lüminal döş xərçəngi CTC-lərinin ksenoqraft analizində nümayiş etdirildi ki, kütləvi EPCAM + CTC-lərdən fərqli olaraq, immun çatışmazlığı olan insanların sümük iliyinə yeridildikdə, EPCAM + CD44 + CD47 + MET + CTC subpopulyasiyası metastaz başlatan hüceyrələr üçün yüksək dərəcədə zənginləşir. siçanlar (75). Başqa bir araşdırmada, döş xərçəngi olan xəstələrin periferik qanından alınan EpCAM-mənfi CTC-lərin bir hissəsi (EpCAM - /ALDH1 + /CD45 -) artırıldı. in vitro. Kulturada yetişdirilən bütün EpCAM-mənfi CTC-lər quyruq venasından və ya intrakardiyak inyeksiyadan sonra ağciyər metastazlarına səbəb olsa da, yalnız “beyin metastazı seçilmiş marker (BMSM) imzası” üçün zənginləşdirilmiş hüceyrələr, HER2 + /EGFR + /HPSE + /Notch1+, artan potensial nümayiş etdirdi. həm ağciyər, həm də beyin metastazları üçün (71).

Kiçik hüceyrəli ağciyər xərçəngi olan xəstələrin qanından zənginləşdirilmiş CTC-lər immun çatışmazlığı olan siçanlara CTC-dən əldə edilən eksplantlar (CDX) kimi dərialtı implantasiya edilmişdir. Yaranan 7,5 ml qanda 400-dən çox CTC olduqda CTC-lər şiş törədici idi. CTC hüceyrə xəttlərindən əldə edilən ksenoqraftlar müxtəlif dərman birləşmələrinin effektivliyini yoxlamaq üçün də istifadə edilə bilər (68, 72). Bu cür tədqiqatlar klinik qiymətləndirmə üçün rasional dərman birləşmələrini müəyyən etmək üçün CTC genotipləmə və funksional sınaqdan istifadə üçün maraqlı imkanlar açır.

Potensial məhdudiyyətlər, lakin in vitroin vivo modellər bunlardır ki, onlar adətən şiş hüceyrələrinin heterojenlik spektrini dəqiq əks etdirməyən yüksək aqressiv şiş subklonlarından əmələ gəlir və bəlkə də daha da əhəmiyyətlisi, xərçəng immunoterapiyasının inkişaf etdiyi indiki dövrdə, in vivo Ksenograft modelləri dərmana qarşı müqavimətdə rol oynaya bilən şiş-ev sahibi qarşılıqlı təsirlərini təkrar etmir. Metastatik xərçəngi olan xəstələrin əksəriyyətindən bu modellərin səmərəli yaradılması üçün eksperimental şəraitin optimallaşdırılması və bu modellərin nəticələrinin klinik şəraitdə nəticələri dəqiq əks etdirdiyini nümayiş etdirmək üçün əlavə iş tələb olunur.

CTC-lər və metastatik kolonizasiyaya meyl

CTC-lərdə metastatik irəliləməyə kömək edə bilən EMT fenotipini (8, 80-82) təklif edən müxtəlif mezenximal markerlər müəyyən edilmişdir. Plastin3 (şifrələnmişdir PLS3 birincili və metastatik kolorektal xərçəngi olan xəstələrin şişlərində və CTC-lərində aktin bağlayan/bağlayan zülal olan gen aşkar edilmişdir. Plastin 3-ü ifadə edən CTC-lər EMT fenotipini göstərir və pis proqnozla əlaqələndirilir. (83).

CTC-lərin əksəriyyəti tək olsa da, metastatik xərçəngi olan xəstələrdən alınan qan nümunələrində CTC qrupları da müəyyən edilmişdir. Sirkulyasiya edən şiş mikroemboliyası kimi də tanınan, CELLSEARCH platformasından istifadə edərək immunomaqnit yolla tutulan klasterlər kiçik hüceyrəli ağciyər xərçəngi olan xəstələrin 30%-dən çoxunda müəyyən edilmişdir və apoptotik və ya proliferasiya edən hüceyrələrin olmadığı görünür, bəlkə də sağ qalma üstünlüyü təklif edir (84). Yeni cihazın, Cluster-Chip-in istifadəsi mikrofluidik "klaster tələləri" kimi fəaliyyət göstərən üçbucaqlı sütunların istifadəsi ilə CTC klasterlərinin etiketsiz izolyasiyasını təklif edir (85). Bu üsul göstərdi ki, metastatik melanoma, döş xərçəngi və prostat xərçəngi olan xəstələrin 30-40%-də çoxluqlar müəyyən edilib, qrupların əksəriyyətində 2-10 hüceyrə, bəzən isə 19-a qədər hüceyrə var. Bununla belə, metastatik kiçik hüceyrəli ağciyər xərçəngində CELLSEARCH tərəfindən təcrid olunmuş CTC klasterlərindən fərqli olaraq, metastatik döş xərçəngində Cluster-Chip tərəfindən təcrid olunmuş klasterlərdəki CTC-lərin təxminən yarısı çoxalırdı.

Tək miqrasiya edən mezenxima bənzər CTC-lərə bənzər olaraq, CTC klasterləri mezenximal markerlər üçün zənginləşdirilmiş görünür (82, 86). CTC klasterlərinin yüksək metastatik potensiala malik oliqoklonal şiş hüceyrə qruplarından yarana biləcəyi və CTC çoxluqlarındakı EMT-nin bu qruplara qoşulmuş trombositlər vasitəsilə TGFβ siqnalı vasitəsilə vasitəçilik edilə biləcəyi güman edilir (refs. 82, 87, 88 Şəkil 1).

Tək CTC-lər və müxtəlif növ CTC klasterləri. Onların müstəmləkəçilik potensialı açıq tədqiqat sualı olaraq qalır.

CTC-lərdən başqa, metastatik irəliləmədə sirkulyasiya edən stromal hüceyrələrin və makrofaqların roluna artan maraq ifadə edilmişdir. Siçan modellərində, birincil şişdən əldə edilən stromal hüceyrələrlə birlikdə dövrəyə daxil olan şiş hüceyrələri tək CTC-lərlə müqayisədə sağ qalma üstünlüyünə malikdir və ağciyər metastazlarının əmələ gəlməsində daha effektivdir (89). Eynilə, metastatik döş, prostat və mədəaltı vəzi xərçəngi olan xəstələrin dövran edən xərçənglə əlaqəli makrofaqlara bənzər hüceyrələri dövriyyəyə yayıla və CTC-lərlə qarşılıqlı əlaqədə ola bilər (90), bəzilərinin CTC-lərə bağlı miqrasiya etdiyi müşahidə edilir, bu da potensial olaraq uzaq kolonizasiya və neovaskulyarizasiyanı asanlaşdırır. CTC klasterləri trombosit transkriptləri və/və ya toxumadan əldə edilən makrofaqlarla əlaqəli markerləri ifadə edə bilər, lakin T/B/təbii öldürücü (NK) hüceyrələri deyil (85). CTC-ləri və əlaqəli hüceyrələri sorğulamaq qabiliyyətimizdəki təkmilləşdirmələr metastatik kaskada təsir göstərə bilən hədəf agentlərin daha sürətli klinik inkişafına imkan verə bilər.


Sirkulyasiya edən şiş hüceyrəsi və sirkulyasiya edən şiş DNT-si - Biologiya

MDPI tərəfindən nəşr olunan bütün məqalələr açıq giriş lisenziyası altında dərhal bütün dünyada əlçatan edilir. MDPI tərəfindən dərc edilmiş məqalənin, o cümlədən rəqəmlər və cədvəllər də daxil olmaqla, hamısının və ya bir hissəsinin təkrar istifadəsi üçün xüsusi icazə tələb olunmur. Açıq giriş Creative Common CC BY lisenziyası altında dərc olunan məqalələr üçün məqalənin hər hansı bir hissəsi orijinal məqaləyə aydın şəkildə istinad etmək şərti ilə icazəsiz təkrar istifadə edilə bilər.

Feature Papers sahədə yüksək təsir üçün əhəmiyyətli potensiala malik ən qabaqcıl tədqiqatları təmsil edir. Bədii məqalələr elmi redaktorlar tərəfindən fərdi dəvət və ya tövsiyə əsasında təqdim olunur və dərc edilməzdən əvvəl ekspert rəyindən keçir.

Bədii məqalə ya orijinal tədqiqat məqaləsi, tez-tez bir neçə texnika və ya yanaşmanı özündə cəmləşdirən əsaslı yeni tədqiqat işi, ya da elmi sahədə ən maraqlı nailiyyətləri sistematik şəkildə nəzərdən keçirən sahədəki ən son irəliləyişlərə dair qısa və dəqiq yenilikləri olan hərtərəfli icmal sənədi ola bilər. ədəbiyyat. Bu tip kağız tədqiqatın gələcək istiqamətləri və ya mümkün tətbiqlər haqqında dünyagörüşünü təqdim edir.

Redaktorun Seçimi məqalələri dünyanın hər yerindən MDPI jurnallarının elmi redaktorlarının tövsiyələrinə əsaslanır. Redaktorlar jurnalda bu yaxınlarda dərc edilmiş az sayda məqaləni seçirlər ki, onlar müəlliflər üçün xüsusilə maraqlı və ya bu sahədə vacib olacaq. Məqsəd jurnalın müxtəlif tədqiqat sahələrində dərc edilmiş ən maraqlı işlərdən bəzilərinin şəklini təqdim etməkdir.


Nəticə

Biz ctDNA-da erkən dəyişikliklərin sonrakı radioloji şiş reaksiyaları ilə əlaqəli olduğunu və ardıcıl ctDNA ölçülməsinin dərhal klinik təsirə səbəb olan standart RECIST əsaslı xəstəliyin qiymətləndirilməsini qabaqcadan keçirmək üçün əhəmiyyətli potensiala malik olduğunu nümayiş etdirdik. Üstəlik, 30-cu gündə ctDNA aşkarlanması və dinamikası PFS üçün proqnostik amillərdir. Bu kəşfiyyat işində əldə edilən nəticələr daha böyük qruplarda təsdiqlənməlidir. Böyük bir randomizə edilmiş sınaq, PADA-1 (NCT03079011), hazırda palbosiklib və aromataza inhibitoru ilə işlənmiş ER+ HER2− MBC-dən ctDNA-da real vaxtda davamlı subklonların aşkarlanmasının faydasını sınaqdan keçirir. Beləliklə, bu perspektivli biomarkerin daha etibarlı qiymətləndirilməsini təmin etmək üçün ctDNA analizi üçün seriya nümunələri gələcək klinik sınaqlara daxil edilməlidir.


Proqnoz məlumatı

CTC-lər müxtəlif xərçənglərin uzaq yayılması üçün toxum kimi qəbul edilə bilər. Bildirilir ki, CTC-lərin yalnız 2,5%-i mikrometastazla nəticələnəcək və 0,01%-dən az hissəsi nəhayət xəstəliyin təkrarlanmasına və ölümünə səbəb olan makrometastazlara çevriləcək [81, 82]. Buna görə də irəliləyişsiz sağ qalma bu CTC-lərin funksiyasının birbaşa göstəricisi olardı [83].Bəzi tədqiqatlar CTC siyahıyaalması ilə mədəaltı vəzi xərçənginin proqnostik məlumatı arasında əlaqə tapdı [31, 32, 63, 84], bəziləri isə [57, 60, 62]. 623 mədəaltı vəzi xərçəngi xəstəsini əhatə edən son meta-analiz, müsbət CTC olan xəstələrin daha pis irəliləyişsiz sağ qalma (HR=1.23, 95% CI=0.88-2.08, Pɘ.001) və ümumi sağ qalma (HR=1.89, 95%) olduğunu ortaya qoydu. CI=1,25-4,00, Pɘ,001) [85]. Proqnoz məlumatındakı uyğunsuzluqlar, bu təcrid olunmuş hüceyrələrin bədxassəli bioloji xüsusiyyətlərə malik olub-olmaması və ya aysberqin görünən hissəsi olub-olmaması məsələsini gündəmə gətirir [10]. Məsələn, kiçik bir pilot tədqiqat EpCAM + CTC-lərin xərçəng xəstələri arasında zəif nəticə göstərdiyini təsdiqlədi, halbuki EpCAM - CTC-lərin ümumi sağ qalma qabiliyyətinin aşağı olması ilə əlaqəli deyildi, buna görə də bu təcrid olunmuş hüceyrələrin şiş əmələ gəlməsini öyrənmək üçün bir sıra təhlillər aparılmalıdır. proqnostik məlumatların dərin izahatlarını təmin etmək üçün müxtəlif səviyyələr [86, 87].


1. GİRİŞ

Baş və boyun xərçəngi əhəmiyyətli qlobal xəstəlik yükünü daşımağa davam edir. 1, 2 İnkişaf etməkdə olan ölkələrdə daha çox artım və inkişaf etmiş ölkələrdə orofaringeal xərçəngin təzadlı artması ilə baş və boyun xərçənginin artması halları və ölüm halları narahatlıq doğurur. 1, 2 Bir neçə xərçəngin xəstəliyi diaqnoz edə və müalicədən əvvəl və müalicədən sonrakı şiş yükünü izləyə bilən biomarkerlərə malik olmasına baxmayaraq, məsələn, prostat xərçəngində prostata spesifik antigen və ya pankreas xərçəngində karsinoma antigeni (CA19-9), baş və boyun xərçəngində belə bir test yoxdur. . Beləliklə, baş və boyun xərçənginə nəzarət klinik və radioloji tapıntılara əsaslanır. 3 Xəstələr tez-tez inkişaf etmiş bir xəstəliklə müraciət edirlər və erkən invaziyanın və metastazın xüsusiyyətləri əhəmiyyətli bir xəstəliyə səbəb olur və həyat keyfiyyətinə təsir göstərir. 4 Bu səbəblərə görə, müalicədəki irəliləyişlərə baxmayaraq, baş və boyun xərçənginin 5 illik sağ qalma müddəti son bir neçə onillikdə yalnız bir qədər yaxşılaşan 60% bölgədə qalır. 5

Qan testindən istifadə edərək, baş və boyun xərçəngində dövr edən biokimyəvi molekulyar markerlər diaqnostika, planlaşdırma, müalicə monitorinqi və nəzarəti təkmilləşdirmək vəd edir. 6 Qan testi az xəstəliyə səbəb olur, müalicə zamanı müxtəlif vaxtlarda təkrarlana bilər və sərfəli qiymətə malikdir. Belə təklif olunan biomarkerlərdən biri sirkulyasiya edən şiş DNT-sinin (ctDNA) səviyyəsidir. 7 Xərçəngli xəstələrdə dövran edən DNT-nin bir hissəsinin şişdən qaynaqlı ola biləcəyinin kəşfi, şişin genetik xüsusiyyətlərini xarakterizə etmək üçün toxuma biopsiyasına alternativ olaraq “maye biopsiyası” adlanan potensial yaradıb. 8, 9

Bu icmal dövran edən DNT-nin bioloji quruluşu və funksiyası ilə tanış olur. Biz onun şiş yükünün biomarkeri kimi istifadəsini və şişin genetik heterojenliyini müəyyən etmək üçün baş və boyun skuamöz hüceyrəli karsinomada (HNSCC) maye biopsiyası kimi ctDNA-nın potensial istifadəsini müzakirə edirik. Biz qəsdən HNSCC və ctDNA əsaslı maye biopsiyasına diqqət yetiririk. Bu məqalənin əhatə dairəsindən kənarda olsa da, müəlliflər baş və boyun xərçəngində potensial maye biopsiyası kimi istifadə üçün araşdırılan digər dövriyyədə olan komponentlərdən xəbərdar olmalıdırlar. Məsələn, dövran edən şiş hüceyrələri (CTCs) 8 və ya dövran edən viral DNT, məsələn, orofaringeal karsinoma 10-da plazma insan papillomavirusu DNT və nazofaringeal karsinomada plazma Epstein-Barr virus DNT-si. 11

1.1 Sirkulyasiya edən şiş DNT-si

Sirkulyasiya edən DNT ilk dəfə 1948-ci ildə müəyyən edilmiş dövr edən qanda aşkar edilmiş hüceyrədənkənar DNT-dir. 12 Bu DNT həm patogen, həm də fizioloji mexanizmlər, o cümlədən apoptoz, hüceyrə nekrozu, faqositoz və ya ekzositoz vasitəsilə dövriyyəyə buraxılır. 13 Bir qayda olaraq, dövran edən DNT qan nükleazları tərəfindən sürətlə parçalanır və qaraciyər, dalaq və böyrəklər tərəfindən xaric edilir və təxminən 10-15 dəqiqəlik qısa yarı ömrü var. 13 Buna görə də, qaraciyər və ya böyrək xəstəliyi kimi sistem xəstəlikləri ctDNA səviyyələrinə təsir edə bilər və qan nəticələrinin təfsirini poza bilər. 14 CtDNA bir çox formada ya sərbəst DNT-də, zülal kompleksləri ilə birləşmiş, hüceyrə səthi ilə əlaqəli və ya veziküllərdə (apoptotik cisimlər, mikroveziküllər və ekzosomlar) mövcuddur. 13

1977-ci ildə Leon və başqaları 15 ilk dəfə xərçəng xəstələrinin dövran edən DNT fraqmentlərinin səviyyəsinin artdığını müəyyən etdilər və bununla da şişlərin DNT-ni qan dövranına buraxdığı fərziyyəsini irəli sürdülər. 1989-cu ildə Stroun və digərləri 16 bu DNT fraqmentlərinin bir hissəsinin genomun qeyri-sabitliyinin olması səbəbindən əslində şiş mənşəli olduğunu göstərə bildilər və sonra 1994-cü ildə Sorenson və digərləri 17 şişə xüsusi nöqtənin mövcudluğunu nümayiş etdirdilər. da mutasiyalar KRAS ctDNA-da gen. Xərçəngə xas genomik dəyişikliklərin olması (məsələn, nöqtə mutasiyaları) normal sağlam hüceyrələrdən ctDNT və DNT-ni fərqləndirməyə imkan verir. 9, 13 Əlavə ayrı-seçkilik faktoru DNT fraqmentinin əsas cüt uzunluğundakı fərqdir. Hüceyrə apoptozu təxminən 100-200 əsas cütdən ibarət DNT fraqmentləri yaradır, nekroz isə daha nizamsız həzm səbəbindən daha böyük fraqmentlər yaradır, bəzən bir çox kilo-baza cütlüyünə malikdir. 13, 18

Sağlam nəzarətdə olan xəstələrdə dövran edən DNT-nin konsentrasiyası ümumiyyətlə <5 ng/ml bölgəsində çox aşağıdır, halbuki xərçəngli xəstələrdə bir neçə yüz ng/mL yüksək səviyyələr ola bilər. 13, 18 Xərçəngli xəstələrdə ctDNA-nın artması və ctDNA-nın dəqiq mənşəyi mübahisəli olaraq qalır. Şiş ölçüsü artdıqca, metabolik tədarükdən üstün olan toxuma hipoksiyası hüceyrə nekrozuna, şiş hüceyrələrinin çökməsinə və beləliklə, ctDNT-nin sərbəst buraxılmasına səbəb olur. 13, 18 Bu icmalda CTC-lər müzakirə edilmir, lakin nəzəriyyədə bu hüceyrələrin dövriyyədə lizis də ctDNA-ya kömək edə bilər, baxmayaraq ki, sübutlar qarışıqdır. 10

ctDNA-nın kanserogenezdə aktiv rolu olub-olmaması və ya onun şiş tökülməsinin yan məhsulu olub-olmadığı aydın deyil. García-Olmo və digərləri 19 ctDNA-nın sağlam hüceyrələri transfeksiya edərək xərçəng metastazlarına səbəb ola biləcəyi konsepsiyasını təsvir edən ilk qruplardan biri idi. Onlar şiş daşıyan siçovulların plazmasından istifadə edərək sağlam siçovullarda şiş əmələ gətirə bildilər. Eyni qrup daha sonra kolorektal xərçəngi olan xəstələrin serumunun in vitro kultura hüceyrələrində şiş əmələ gəlməsinə səbəb olduğunu nümayiş etdirdi. 20

Son bir neçə onillikdə yeni nəsil rəqəmsal ardıcıllığın (NGS) inkişafı ilə ctDNA aşkarlanması və təhlilinin laboratoriya üsulları çox dəyişdi. CtDNA-nın təhlili üçün üstünlük təşkil edən üsul ctDNA gen hədəflərinin polimeraza zəncirvari reaksiya (PZR) gücləndirilməsi və sonra aşağı axın analizidir. Nöqtə mutasiyalarının həssas aşkarlanması üçün real vaxt rejimində PCR, rəqəmsal damcı PCR və Sanger tipli ardıcıllıqla müxtəlif üsullardan istifadə olunur. Sirkulyasiya edən şiş genomunun daha əhatəli molekulyar profili üçün bütün genomun gücləndirilməsi üsullarından (məsələn, çox yerdəyişmə gücləndirilməsi və ya təsadüfi heksamer gücləndirilməsi) məhdud ctDNA girişini gücləndirmək üçün istifadə oluna bilər, ardınca kitabxananın hazırlanması və ardıcıllığı. 21 Göründüyü kimi, maye biopsiya analizinin toplanması və təhlili üçün protokol həm mürəkkəbdir, həm də yanaşma baxımından hələ standartlaşdırılmayıb, əsas maneə CTDNA üçün NGS-nin həssaslığı və səhv dərəcəsidir. 14, 21

1.2 Sirkulyasiya edən şiş DNT-nin klinik tətbiqləri

CtDNA tədqiqatlarında təsvir edilən çoxsaylı məlumat son nöqtələri ilə bunların hər birinin klinik təcrübəyə necə təsir edəcəyini aydınlaşdırmaq faydalıdır. Əvvəlki ədəbiyyatda “biomarker” və “maye biopsiyası” terminləri bəzən bir-birini əvəz edən mənada istifadə edilmişdir. Bu araşdırmada qarışıqlığın qarşısını almaq üçün biomarker və maye biopsiya terminlərini qəsdən ayırırıq. Şişin xüsusiyyətlərini təyin edən statik biopsiyadan fərqli olaraq, biomarker xəstəliyin gedişatının və nəticəsinin obyektiv və kəmiyyət testi olmalıdır. 22 Biz ctDNA analizinin klinik tətbiqini 2 geniş kateqoriyada müzakirə edirik: (1) şiş yükünü qiymətləndirmək üçün biomarker və (2) şişin genetik heterojenliyini təyin etmək üçün maye biopsiya (Cədvəl 1).

Biomarker Maye biopsiyası
Əvvəlcədən müalicə
Diaqnostik müayinə vasitəsi Sürücü mutasiyalarını təyin etmək və hədəflənmiş molekulyar antikanser terapiyasını asanlaşdırmaq üçün şiş genotiplənməsi
Qeyri-müəyyən hallarda diaqnoz
Müalicə protokolunun əsaslandırılması (yəni, düyün mənfi boyunda boyun diseksiyası)
Müalicə sonrası müqayisə üçün şiş yükünün ilkin qiymətləndirilməsi
Müalicə sonrası
Dərhal müalicədən sonrakı mərhələdə qalıq xəstəliyi qiymətləndirin Klonal təkamülü izləyin və təkrarlanan xərçəngdə müqavimət sürücüsü mutasiyalarını qiymətləndirin
Adjuvant kemoradioterapiya vermək qərarı üçün risk analizini təmin edin
Lokoregional təkrarlanmaya nəzarət

1.3 Şiş yükünün biomarkeri

Bu günə qədər HNSCC şiş yükünü qiymətləndirmək üçün ctDNA-nın istifadəsi 2 sahəyə yönəlmişdir: ümumi ctDNA konsentrasiyası və ctDNA-nın diaqnozda bir vasitə və proqnoz marker kimi aşkarlanması. ctDNA maye biopsiyasının qeyri-invaziv skrininq vasitəsi kimi istifadəsi maraqlı təklifdir və hazırda araşdırılır. Bütün skrininq alətlərində olduğu kimi, həssas və spesifik ctDNA əsaslı testin yaradılması üçün texniki və klinik tələblər böyükdür. Bununla belə, aşağı qiymətli NGS texnologiyasının inkişafı və mürəkkəb bioinformatika məlumatlarının təhlili bu konsepsiyanı potensial gələcək reallığa çevirir. 23 Müalicədən əvvəlki mərhələdə biomarker kimi ctDNA-nın dərhal tətbiqi çox güman ki, yüksək risk və ya diaqnostik qeyri-müəyyənlik olan xəstələr üçün olacaq. Məsələn, ən yaxşı müalicə kursunun hələ də müzakirə olunduğu və ya biopsiyanın ağır displastik lezyonda potensial bədxassəli şişləri qaçıra biləcəyi premalign lezyonların monitorinqi. 24 Müalicədən sonrakı mərhələdə ctDNA-nın yüksək həssaslığı HNSCC-də ilk biomarker üçün qalıq xəstəliyi və ya lokal residivləri qiymətləndirmək üçün real imkan yaradır.

1.4 Sirkulyasiya edən şiş DNT səviyyələri və xərçəngli xəstələrdə aşkarlanması

Müzakirə edildiyi kimi, xərçəngli xəstələrdə ümumi dövriyyədə olan DNT konsentrasiyasının artdığına dair tapıntı bu DNT-nin bir hissəsinin şiş mənşəli ola biləcəyi fərziyyəsinin əsasını təşkil edirdi. Bununla belə, sonrakı ctDNA genomik analizindən asılı olmayaraq ümumi ctDNA konsentrasiyası diaqnostik və proqnoz aləti kimi də istifadə edilə bilər. Mazurek və digərləri 25 HNSCC olan 200 xəstədə ümumi dövran edən DNT səviyyələrini 15 xəstədən ibarət nəzarət qrupu ilə müqayisədə qiymətləndirdilər. Orta ümumi DNT səviyyələri HNSCC qrupunda daha yüksək idi, lakin əhəmiyyətli səviyyələrə qədər deyildi. Maraqlıdır ki, orofaringeal SCC-lərdə ctDNA əhəmiyyətli dərəcədə yüksək idi (P = .011) digər HNSCC-lərdən (nazofarenks, hipofarenks və qırtlaq). Onlar həmçinin artan ctDNA konsentrasiyası ilə nodal status (N0-1 vs N2-3), mərhələ (I-III vs IV) və yaş (<63 və >63) arasında əhəmiyyətli əlaqə nümayiş etdirdilər.

Biomarker kimi istifadə edilmək üçün ctDNA aşkarlanması HNSCC üçün həssas test olmalı və xəstəliyin şiddəti ilə əlaqələndirilməlidir. Bu günə qədər aparılan ən böyük araşdırmada Bettegowda et al 26 15 müxtəlif xərçəng növü olan 359 xəstədə ctDNA aşkarlanmasını qiymətləndirdi. Xəstələri lokallaşdırılmış xəstəliyi olanlara (n = 136) və metastatik xəstəliyi olanlara (n = 223) böldülər, təəssüf ki, baş və boyun xərçəngi hallarının sayı nisbətən az idi (n = 12). Metastatik xəstəlik qrupunda ctDNA xəstələrin 82% -də, lokallaşdırılmış xəstəlik qrupunda isə 55% -də aşkar edilmişdir. Proqnostik vasitə kimi ctDNT qiymətləndirilərkən, kifayət qədər sayda (kolorektal, mədə-ezofaqal, mədəaltı vəzi və döş) xərçənglərdə metastatik və lokallaşdırılmış qrupları müqayisə edərək, əhəmiyyətli bir əlaqə var idi (P < .001) və həmçinin xəstəliyin irəliləmə mərhələsi və ctDNT miqdarının artması ilə bağlı aydın tendensiya.

1.5 Müalicədən sonrakı müşahidə

Müalicədən sonrakı müşahidə mərhələsində xəstəliyin təkrarlanmasının biomarkeri kimi ctDNA-dan istifadə etmək qabiliyyəti onun diaqnostik üstünlüklərindən daha qiymətlidir. 27 Zəif həssas klinik və rentgenoqrafik testlərə güvənməyi nəzərə alsaq, müalicədən sonrakı şiş yükünün biomarkeri qiymətli alət olardı. 3 Van Ginkel və digərləri tərəfindən aparılan araşdırma 27 baş və boyun xərçənginə nəzarətdə ctDNA-nın rolunu müzakirə etdi və bunun klinik praktikaya necə tətbiq olunacağına dair iş axını təklif etdi. Döş, kolorektal, ağciyər və bir sıra digər xərçənglərdə aparılan tədqiqatlar ctDNA-nın klinik tətbiqini nümayiş etdirdi. 8, 9, 13 Kolorektal xərçəngi olan 18 xəstə üzərində aparılan bir araşdırmada Diehl və digərləri ctDNA aşkarlanması və dalğalanan səviyyələri residivsiz sağ qalma əməliyyatdan sonrakı müalicə ilə birbaşa əlaqələndirə bildilər.P = .006). Əməliyyatdan sonra aşkar edilə bilən ctDNA olan xəstələrin 1-i istisna olmaqla, hamısında residiv baş verdi və aşkar edilə bilməyən ctDNA olan xəstələrin heç birində residiv yaşanmadı. Onlar “şəxsi şiş dinamik yükünün” dəqiq təsvirini təmin etmək üçün zamanla ctDNT səviyyələrinin qrafik təsvirlərini zərif şəkildə tərtib edə bildilər. Bənzər bir araşdırmada, Dawson və digərləri 29 metastatik döş xərçəngi müalicəsi alan 30 xəstədə ctDNA-nı CTC-lər və karsinoma antigeni (CA15-3) ilə müqayisə etdilər. ctDNT müalicə cavabını ölçmək üçün statistik olaraq CTC-lərdən və ya karsinoma antigenindən (CA15-3) daha həssas idi (P < .002) və sağ qalmanın əhəmiyyətli göstəricisi idi (P < .001).

HNSCC olan 47 xəstənin tədqiqatında Wang və digərləri 30 9 xəstədən əməliyyatdan sonrakı müalicə nümunələrini toplaya bildilər. Təkrarlanan xəstəliyi inkişaf etdirən 3 xəstədə plazmada ctDNT-nin olması residivin klinik/radioqrafik sübutundan 15 ay, 9 ay və lt1 ay əvvəl idi. Mənfi ctDNA nəticələri olan 5 xəstənin hamısı orta hesabla 12 aylıq təqibdə residivdən azad idi. 30 Hamana və digərləri 31 əməliyyatdan əvvəl və əməliyyatdan sonrakı mərhələdə oral SCC olan 64 xəstədə ctDNA-nın aşkar edilməsini müqayisə etdilər. Xəstələrin 44 faizi (28/64) əməliyyatdan əvvəl şişə xas mikrosatellit dəyişiklikləri ilə ctDNT nümayiş etdirdi və bu, əməliyyatdan sonra 20%-ə (13/64) düşdü. Əməliyyatdan əvvəl aşkar edilə bilən ctDNA olan 28 xəstədən 20-də əməliyyatdan sonra aşkar edilə bilən ctDNA yox idi və bu xəstələrin hamısı xəstəlikdən azad idi və təkrarlanmadı. Dərhal əməliyyatdan sonrakı mərhələdə 4 həftədə aşkar edilə bilən ctDNA olan xəstələrdən dördü uzaq metastazları inkişaf etdirdi. Bu tədqiqatda cDNT-nin mövcudluğu erkən mərhələ (I/II) ilə gec mərhələ (III/IV) xəstəliklə statistik olaraq korrelyasiya edilmişdir.P = .0378).

1.6 Şişin genetik heterojenliyini qiymətləndirmək üçün maye biopsiyası

Sürücü mutasiyalarını və şişin epigenetik modifikasiyalarını müəyyən etmək bacarığı baş və boyun xərçəngi olan xəstələrdə məqsədyönlü terapiyanın həyata keçirilməsində və nəticələrin yaxşılaşdırılmasında mühüm addımdır. HNSCC şişin əhəmiyyətli genetik heterojenliyini göstərdiyinə görə, bu, şişin müxtəlif hissələrində fərqli mutasiyalar ola bilər. 32 Şişin məqsədyönlü müalicəsini təmin etmək üçün şişin bütün mühüm “sürücü” mutasiyalarını bilmək lazımdır. Hazırda toxuma biopsiyasının diaqnostik üsul kimi istifadəsi bu baxımdan böyük çatışmazlıqdır. Toxuma biopsiyası şişin 1 və ya 2 hissəsini tutur və buna görə də intratumoral heterojenlik, həmçinin prosedurun özünün invazivliyi və morbidliyi səbəbindən qərəzlilik və əhəmiyyətli sürücü mutasiyalarının olmaması riski yüksəkdir. 27 Toxuma nümunələrindən əldə edilən “statik biopsiya”dan fərqli olaraq, müalicə zamanı müxtəlif vaxt nöqtələrində çoxlu maye biopsiya toplamaq qabiliyyəti şişin klonal təkamülünü aşkar etmək və residiv və ya müalicə müqavimətini müəyyən etmək üçün “dinamik biopsiya” reallığını yaradır. Bu, xərçəngin genetik mutasiya irəliləməsinin real vaxt rejimində monitorinqinə və fərdi hədəflənmiş molekulyar terapiyanın uyğunlaşdırılmasına imkan verəcəkdir. Baş və boyun xərçəngində son tədqiqatlar ctDNA-da şişə xas genomik dəyişikliklərin müəyyən edilməsinə yönəlmişdir. Hər bir tətbiq olunan genomik dəyişikliyi öz növbəsində müzakirə edirik.

1.7 Mutasiyalar

Lebofsky və digərləri 33 metastatik xərçəngin 18 müxtəlif növü (baş və boyun xərçəngi = 5) olan 34 xəstənin ctDNA-sında şişə spesifik mutasiyaları araşdırdılar. 27 xəstədə ctDNT mutasiyaları bərk şiş biopsiyalarından alınan mutasiyalara uyğun gəldi. Wang və digərləri tərəfindən HNSCC olan 47 xəstənin yuxarıda qeyd olunan tədqiqatında, 30 onlar 87% hallarda plazma ctDNA-nı şişə xas nöqtə mutasiyaları ilə aşkar edə bildilər. Onlar 6 gendə mutasiyaların mövcudluğunu qiymətləndiriblər (TP53, PIK3CA, CDKN2A, FBXW7, HRAS, NRAS, və E7 [insan papillomavirusu] DNT) tez-tez HNSCC ilə əlaqələndirilir (>85% TP53 mutasiyalarına malikdir). Xəstələrin əksəriyyətində xəstəlik inkişaf etmiş (III və ya IV mərhələ) olmuşdur. Onlar plazmadan əldə edilən tapıntıları tüpürcəkdə kəsilmiş DNT fraqmentinin aşkarlanması ilə birləşdirdikdə, bu, diaqnostik həssaslığı 96%-ə qədər artırdı. Qeyd edək ki, yerlər arasında plazma aşkarlama dərəcələrində az fərq var idi (80% ağız boşluğu, 91% orofarenks, 86% qırtlaq və 100% hipofarenks). Gözlənildiyi kimi, ağız boşluğunun şişlərində tüpürcək DNT aşkarlanması digər yerlərlə müqayisədə (47-70%) əhəmiyyətli dərəcədə yüksək olmuşdur (100%). İrəli mərhələdəki xəstəlikdə mutasiya tezliyi daha yüksək olsa da (70%-ə qarşı 92%) bunun statistik əhəmiyyəti yox idi. Onlar 2 bölmədə (plazma və tüpürcək) DNT aşkarlanmasının birləşməsinin həssaslığı artırmaq üçün dəyərli vasitə olduğu qənaətinə gəliblər.

1.8 Mikropeyk dəyişiklikləri

Mikrosatellit dəyişikliklərinə mikropeyk qeyri-sabitliyi (MSI) və heterozigotluq itkisi (LOH) daxildir. Mikrosatellitlər DNT-nin 5-100 dəfə təkrarlanan qısa əsas cüt motivləri (adətən 1-6 əsas cüt uzunluğu) olan hissələridir. Qısaca olaraq, onlar qüsurlu uyğunsuzluq təmir sistemini ifadə edir, bu da öz növbəsində DNT təmir genlərindəki mutasiyaların markeridir. 34 MSI-nin kolorektal xərçəngdə proqnoz və sağ qalma göstəricisi kimi roluna dair güclü sübutlar var, lakin baş və boyun xərçəngində MSI-nin rolu aydın deyil. 34 Bəzi tədqiqatlar heç bir əlaqə olmadığını bildirir, digərləri isə daha yaxşı proqnoz verən müsbət MSI-ni bildirdilər. LOH diploid genin bir nüsxəsinin itirilməsinin nəticəsidir və şiş bastırıcı genlərin aktivləşdirilməsinin ümumi mexanizmidir. De Schutter və digərlərinin son araşdırmasında, 34 onlar LOH-ni MSI-dən daha faydalı proqnostik proqnozlaşdırıcı marker kimi vurğuladılar, bunun səbəbi qismən HNSCC-də MSI ilə müqayisədə LOH tezliyinin artmasıdır. LOH inkişaf etmiş yüksək dərəcəli xəstəliklə əlaqələndirilir və sağ qalmanın mənfi proqnostik göstəricisidir, 35 kimyaterapiya müqaviməti ilə əlaqənin sübutu ilə. 36

ctDNA-da HNSCC şişinə xas genomik dəyişiklikləri müəyyən etmək üçün ən erkən işlərdən bəziləri Nawroz et al. 37 21 xəstədən ibarət kohortda HNSCC olan 6 xəstənin ctDNA-sında mikrosatellit dəyişiklikləri müəyyən etdilər. 6 xəstənin hamısında inkişaf etmiş (III-IV mərhələ) xəstəlik və 5-də nodal metastaz var idi. Eyni qrup bu ilkin tapıntıları HNSCC olan 152 xəstə üzərində daha geniş bir araşdırma ilə izlədi. 38 Xəstələrin 45 faizində (68/152) ctDNA-da şişə xas mikrosatellit dəyişiklikləri var idi, kohortun 84%-də isə qabaqcıl mərhələdə və ya təkrarlanan xəstəlik var (127/152). Qabaqcıl mərhələdə xəstəliyi və nodal metastazları olanlarda, erkən mərhələdə xərçəng olanlara nisbətən daha yüksək müsbət mikrosatellit dəyişiklikləri var. Qeyd edək ki, III və IV mərhələlərlə (52% və 44%) müqayisədə I mərhələdən II xəstəliyin aşkarlanmasında (17% -ə qarşı 47%) aşkar bir sıçrayış var.27 aylıq orta təqib müddəti ilə müsbət ctDNA aşkarlama qrupunda xəstəliksiz sağ qalma azaldı, lakin statistik əhəmiyyət kəsb etmədi.

1.9 Şiş supressor geninin hipermetilasiyası

Şiş supressor genlərinin promotor bölgələrinin hipermetilasiyası yolu ilə susdurulması kanserogenezdə iştirak edən gen supressiyasının mexanizmlərindən biridir. 39 Hipermetilasiyanın bu epigenetik fenomeni HNSCC-də tədqiq edilmiş və təsdiqlənmişdir və potensial hədəflər kimi bir çox şiş bastırıcı genlər iştirak edir. 39 ctDNA-nın hipermetilasiyasının aşkarlanması, buna görə də HNSCC-də başqa bir potensial proqnostik tətbiqdir.

Mydlarz et al 40 HNSCC olan 100 xəstənin metilasiya vəziyyətini 50 xəstədən ibarət nəzarət qrupu ilə müqayisədə qiymətləndirdi. Xüsusilə hipermetilasiyanı araşdırdılar EDNRB, DCC, və p16 (CDKN2A) genlər. On xəstə (10%) nümayiş etdirildi EDNRB Bu xəstələrin 2-sində hipermetilasyon var idi DCC hipermetilasiya və bu 2 xəstədən 1-də də p16 hipermetilasiyası var idi. HNSCC nümunələrinin olması statistik cəhətdən əhəmiyyətli idi EDNRB nəzarət qrupu ilə müqayisədə gücləndirmə (P = .02) lakin ilə deyil DCC və ya p16 genləri. Bu məlumatların klinik faydasını müəyyən etmək çətindir. CtDNA-da hipermetilləşdirilmiş bölgələrin aşkarlanması HNSCC diaqnozu üçün yüksək spesifikdir, lakin həssaslıq zəifdir. Üstəlik, HNSCC-də iştirak edən onlarla şiş supressor geni ilə, 39 diaqnostik skrininq vasitəsi kimi istifadə olunacaq diaqnostik spesifikliyi olan bir analiz bu genlərin hər birini ayrı-ayrılıqda qiymətləndirməlidir. Çözümlərdən biri, araşdırılan bir üsul olan DNT metilasiyasının genom üzrə təhlilini aparmaqdır. 41

1.10 Sirkulyasiya edən şiş DNT ilə bağlı cavab veriləcək gələcək suallar

ctDNA-nın biomarker və maye biopsiyası kimi istifadə edilməsi üçün genomik dəyişikliklərin aşkarlanması vasitəsilə ctDNA səviyyələrinin kəmiyyəti HNSCC-də standartlaşdırılmalı və təsdiqlənməlidir. Qızıl standart tədqiqatda xəstə, şiş, prosedur və müalicə faktorları nəzərə alınmalıdır ki, proqnozun və şişin heterojenliyinin riskə uyğun müəyyən edilməsi (Şəkil 1). Təəssüf ki, bu amillərin hər birinin cavabsız tədqiqat sualları var.

Əhəmiyyətli bir problem ctDNA-nın aşkarlanması və təhlili üçün istifadə olunan metodologiyanın uyğunlaşdırılmasıdır. 8, 9 Burada müxtəlif qurumlar tərəfindən təkrarlana bilən müəyyən parametrlərə malik təsdiqlənmiş və hamı tərəfindən qəbul edilmiş biomarker/maye biopsiyası analizinin yaradılması problemi var. Bundan əlavə, mutasiya ctDNA yükü şiş növü və yeri, 18, 26, 33 və xəstəlik və ya terapiya mərhələsi arasında çox fərqli görünür. 18 Məsələn, Mazurek və digərləri 25 qeyd etdilər ki, orofaringeal SCC digər HNSCC sahələrinə nisbətən əhəmiyyətli dərəcədə daha yüksək ctDNA səviyyələrinə malikdir, bunun səbəbi bilinmir, lakin ehtimal ki, fərdi şiş biologiyası təsir göstərir. Thierry və digərləri 13 qeyd etdilər ki, şiş böyüməsi kinetikası və hüceyrə proliferasiyası və hüceyrə itkisi amillərindəki variasiya ctDNA səviyyələrinə təsir edəcəkdir. Bundan əlavə, sistem amillərinin (komorbid xəstəlik, yaş və siqaret) sirkulyasiya edən DNT-nin səviyyəsinə və təmizlənməsinə təsiri tam başa düşülmür. Yuxarıda göstərilən amillərin kəmiyyətini müəyyən etmək və bu hesablamaları fərdi xəstə nümunələrinə tətbiq etmək bacarığı cavabsız bir vəzifə olaraq qalır.


Müəllif töhfələri

Konsepsiya/Dizayn: Melodiya J. Xu, Jay F. Dorsey, Ravi Amaravadi, Giorgos Karakousis, Charles B. Simone II, Xiaowei Xu, Linn Schuchter, Gary D. Kao

Tədqiqat materialının və ya xəstələrin təmin edilməsi: Melodiya J. Xu, Jay F. Dorsey, Lynn Schuchter

Məlumatların toplanması və/və ya yığılması: Melodiya J. Xu, Jay F. Dorsey, Ravi Amaravadi, Charles B. Simone II, Xiaowei Xu, Wei Xu, Erica L. Carpenter, Lynn Schuchter, Gary D. Kao

Məlumatların təhlili və şərhi: Melodiya J. Xu, Jay F. Dorsey, Ravi Amaravadi, Giorgos Karakousis, Charles B. Simone II, Xiaowei Xu, Wei Xu, Erica L. Carpenter, Lynn Schuchter, Gary D. Kao

Əlyazma yazısı: Melodiya J. Xu, Ravi Amaravadi, Giorgos Karakousis, Charles B. Simone II, Xiaowei Xu, Erica L. Carpenter, Gary D. Kao

Əlyazmanın yekun təsdiqi: Melodiya J. Xu, Jay F. Dorsey, Ravi Amaravadi, Giorgos Karakousis, Charles B. Simone II, Xiaowei Xu, Wei Xu, Erica L. Carpenter, Lynn Schuchter, Gary D. Kao


Videoya baxın: Bu Qadın 4cü Dərəcəli Xərçəngi Bununla Sağaltdı! (Iyul 2022).


Şərhlər:

  1. Wambli Waste

    Səhv edirsən. PM-də mənə yaz.

  2. Nochehuatl

    təsdiq edirəm. Yuxarıda deyilənlərin hamısı doğrudur. Bu mövzuda ünsiyyət qura bilərik.

  3. Northrop

    Salam! Bu səhifəni oxuyan ilk gün deyil. Ancaq əlaqə sürəti topaldır. RSS yeminizə necə abunə ola bilərsiniz? Sizi daha da oxumaq istərdim.



Mesaj yazmaq