Məlumat

MHC sinif I qeyri-peşəkar APC-lər tərəfindən hüceyrədənkənar mənşəli peptidlərin təqdim edilməsi üçün istifadə edilə bilərmi?

MHC sinif I qeyri-peşəkar APC-lər tərəfindən hüceyrədənkənar mənşəli peptidlərin təqdim edilməsi üçün istifadə edilə bilərmi?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Vikipediyada deyilir: “Təqdim etdiyi antigenlər MHC sinif II -dən qaynaqlanır hüceyrədənkənar zülallar (yox sitozolik kimi MHC sinif I)."

Yəni bu o deməkdir MHC sinif I istifadə edilə bilməz əldə edilən peptidlər üçün faqositoz qeyri-peşəkar BTR tərəfindən? (yəni hüceyrədənkənar mənşəli peptidlər?).

Məsələn, faqositoza məruz qala bilən qeyri-peşəkar APC-lər (eozinofil, neytrofil, dendritik hüceyrə) bakteriyaları udduqda, peptidlərin hüceyrədənkənar mənşəli olmasına baxmayaraq, MHC I istifadə edərək antigenlərini təqdim edəcəklərmi? yoxsa heç bir MHC təqdim etməyəcəklər? təşəkkürlər!


faqositoz (eozinofil, neytrofil, dendritik hüceyrə) keçirə bilən qeyri-peşəkar APClər bakteriyaları udduqda

Dendritik hüceyrələr və ehtimal ki, neytrofillər peşəkar APC-dir, buna görə də sualın bu hissəsi bir az qarışıqdır.

Siz çarpaz təqdimat haqqında soruşursunuz, bu, hüceyrədənkənar antigenin MHC sinif I-də CD8 T hüceyrələrinə təqdim oluna biləcəyi prosesdir. Çarpaz təqdimat əsasən dendritik hüceyrənin müəyyən alt sinifləri tərəfindən həyata keçirilir. Bir sıra digər hüceyrə növlərinin buna qadir olduğu göstərilmişdir, lakin onların in vivo nə qədər əhəmiyyətli olduğu aydın deyil.

Çarpaz təqdimatın layiqli nəzərdən keçirilməsi Xərçəngə Qarşı Vaksinlərin Dizaynı üçün Antigen Çarpaz Təqdimatının Biologiyasını Anlamaqdır. Əlaqədar, lakin bir qədər fərqli konsepsiyanın nəzərdən keçirilməsi (MHC recycling) Qeyri-peşəkar Antigen Təqdim edən və Dendritik Hüceyrələrdə MHC I Sinif Molekullarının Endositik Təkrar İstifadəsidir.


MHC sinif I

Lina Lu,. Shiguang Qian, Təbii Qatil Hüceyrələrdə, 2010

Eksik özünü tanıma hipotezi

MHC sinif I molekulları inhibitor NK-hüceyrə reseptorları üçün klassik liqandları təmsil edir. Demək olar ki, bütün nüvəli hüceyrələr MHC sinif I molekullarını ifadə edir ki, bu da onları özünün ən yüksək markerinə çevirir. İllərdir ki, öz-hüceyrələrin NK hüceyrələrinin səthindəki inhibitor reseptorlar tərəfindən tanınan MHC-sinif-I molekullarını ifadə etdikləri üçün NK hüceyrələrindən qorunduğu və beləliklə də NK hüceyrələrinin cavabsız qaldığı düşünülür. Bunun əksinə olaraq, inhibitor reseptorların effektiv əlaqəsi üçün MHC-sinif I molekullarının kifayət qədər səviyyələrini ifadə etməyən yoluxmuş və ya transformasiya olunmuş hüceyrələr NK hüceyrələri tərəfindən öz-özünə olmayan kimi tanınır və öldürülür (Karre et al., 1986 Ljunggren). və Karre, 1990). Bu, NK hüceyrələrinin bəzi və ya bütün MHC sinif I molekullarının ifadəsini itirən və ya aşağı tənzimləyən hüceyrələrə hücum etmək qabiliyyəti olan "özünü itirmiş özünü tanıma"nın əsasını təşkil edir. Bu, yalnız viral yolla yoluxmuş və ya transformasiya olunmuş hüceyrələrlə məhdudlaşmır, çünki normal hüceyrələr kifayət qədər öz MHC sinif I molekullarını ifadə edə bilmirlərsə, NK hüceyrələri tərəfindən öldürülə bilərlər. Bu fərziyyənin klassik nümunəsi, ev sahibinin MHC sinif I alleli olmayan donor sümük iliyi hüceyrələrinin adətən NK hüceyrələri tərəfindən rədd edilməsidir (Ohlen et al., 1989).


Əsas Histouyğunluq Kompleksinin (MHC) İdentifikasiyasının Qısa Tarixi

MHC immun sisteminin əsas komponentidir və özünü identifikasiya sistemi kontekstində T limfositlərinə xarici antigenləri xüsusi olaraq aşkar etməyə imkan verir. MHC genlərinin immun cavabı idarə edən genetik lokuslar kimi kəşfi orqan transplantasiyası təcrübələrindən yaranıb və 1940-1970-ci illərdə bu kəşflərə görə 1980-ci ildə Nobel mükafatı ilə təltif edilmiş George D. Snell, Jean Dausset və Baruj Bernacerraf tərəfindən həyata keçirilib ( 1). 1975-ci ildə siçanların viruslara qarşı immun reaksiyasını öyrənərkən Doherty və Zinkernagel MHC tərəfindən T hüceyrələrinin məhdudlaşdırılmasının aktuallığını nümayiş etdirdilər. Onlar göstərdilər ki, T hüceyrələri virus peptidlərini yalnız bu peptidlər MHC-yə bağlandıqda tanıya bilir və ilk dəfə olaraq CMHC məhdudlaşdırılması fenomenini vurğulayır (2). Bu böyük kəşflər də 1996-cı ildə Nobel mükafatı ilə təltif edilmişdir. Həm özünü, həm də özünü olmayan molekulların paralel tanınması prinsipi hüceyrə immun cavabının spesifikliyi haqqında indiki anlayışımız üçün əsas idi. Paralel olaraq, inbred anadangəlmə heyvan modellərində antikor reaksiyasının öyrənilməsi MHC II-nin kəşfinə gətirib çıxardı və MHC I və MHC II arasında fərq yaratdı [MHC II kəşfinə dair hərtərəfli araşdırma üçün baxın. (3)].

MHC antigeninin təqdimatı üzrə sonrakı tədqiqatlar müəyyən etdi ki, MHC I endogen antigenlərdən əldə edilən antigen peptidləri bağlayır və onları CD8 + T hüceyrələrinə təqdim edir, MHC II isə ekzogen antigenlərdən antigen peptidləri bağlayır və onları CD4 + T hüceyrələrinə təqdim edir. Bu dixotomiya mütləq deyil və bir neçə səviyyədə istisnalar mövcuddur. Ən son və eyni zamanda ən təəccüblü istisnalardan biri, simian immun çatışmazlığı virusundan antigenləri ifadə edən sitomeqalovirus vektoru ilə meymun peyvəndi zamanı MHC II məhdudlaşdırılan effektiv CD8 + T sitotoksik reaksiyasının aşkar edilməsidir. 4).

CD8 + T-hüceyrələrinin yalnız MHC I tərəfindən məhdudlaşdırıldığı konsepsiyası yalnız bu yaxınlarda yenidən qiymətləndirilsə də, MHC I-in yalnız endogen antigenləri təqdim etməsi fikri təxminən 40 il əvvəl, Bevan CD8 + fenomenini kəşf edəndə yenidən nəzərdən keçirildi. T hüceyrələrinin çarpaz astarlanması (5). O göstərdi ki, köçürülmüş hüceyrələrdən kiçik histouyğunluq antigenləri ev sahibi MHC I molekulları tərəfindən məhdudlaşdırılan sitotoksik T hüceyrə reaksiyasını yarada bilər ki, bu da MHC I tərəfindən təqdim edilən antigen peptidlərin mənbəyinin təkcə hüceyrə daxilində sintez edilən bir antigen deyil, həm də ekzogen antigen ola biləcəyini ortaya qoydu. təqdim edən hüceyrə.


Deşifrə mexanizmi

Çarpaz təqdimat mexanizminin müəyyənləşdirilməsinə xas olan bir çox çətinliklər var. Biri antigen mənbəyidir. Peyvənd tədqiqatlarında istilik şoku zülalları (məsələn, gp96), apoptotik cisimlər, gec endosomların tərkibi (ekzosomlar), hüceyrə lizatları, bütöv hüceyrələr, peptidlər, antikorlar və muncuqla əlaqəli zülallar antigen mənbəyi kimi istifadə edilmişdir (3). ). Bu antigenlərin əksəriyyəti hüceyrədənkənardır, lakin hüceyrədaxili mənbədən (infeksiyaya yoluxmuş hüceyrə) əmələ gəlir və çox güman ki, hüceyrə lizisi nəticəsində sərbəst buraxılır. Lakin bütöv hüceyrələrdən olan hüceyrədaxili antigenlər də çarpaz təqdim edilə bilər. Bunun baş verməsinin bir yolu hüceyrədaxili peptidlərin boşluq qovşaqları vasitəsilə dəyişdirilməsidir (6). Uzun müddətdir ki, əksər toxuma hüceyrələrinin elektriklə qonşu hüceyrələri ilə bitişik hüceyrələrin sitozollarını birləşdirən boşluq qovşaqları, kiçik kanallar vasitəsilə birləşdiyi məlumdur. Dendritik hüceyrələr və aktivləşdirilmiş monositlər digər hüceyrələrlə, o cümlədən yoluxmuş hüceyrələrlə boşluq qovşaqları yarada bilər və beləliklə çarpaz təqdimat üçün antigen fraqmentləri əldə edə bilər (6). Qeyd edək ki, şişlər adətən tək həyat tərzi keçirərək boşluq qovşaqlarını bağlayırlar. Bu, şişlərin niyə tez-tez zəif CTL reaksiyalarına səbəb olduğunu izah edə bilər. Yenə də boşluq qovşaqları vasitəsilə bu immunoloji birləşmə, antigeni ifadə edən hüceyrənin antigeni hüceyrədənkənar mühitə buraxmadığı şəraitdə çarpaz təqdimatı izah edə bilər.

Antigen ehtiva edən hüceyrələrin və APC-lərin boşluq qovşaqları ilə birləşməsi peyvənd tədqiqatlarında istifadə olunanlar kimi hüceyrədənkənar antigenlərin necə çarpaz təqdim edildiyini izah etmir. Müxtəlif hüceyrədənkənar antigenlərlə əvvəlki tədqiqatlar çarpaz təqdimatda TAP (7) və proteazom (8, 9) üçün mühüm rolları nümayiş etdirmişdir. Bu nəticələrin bir şərhi budur ki, bu antigenlər (və ya onlardan əldə edilən peptidlər) bir şəkildə DC-lərin sitozoluna daxil olur və onları proteazomal deqradasiya, ER-yə daşımaq və MHC sinif I molekullarında təqdim etmək üçün əlçatan edir. Digər bir ehtimal, MHC sinif I molekullarının endositik MHC sinif II yolu boyunca hüceyrə səthindən təkrar emal oluna bilməsi və yolda ekzogen peptidlərlə endogen mübadiləsinin mümkün olması müşahidəsidir (10). Xüsusilə, TAP və proteazom fəaliyyətləri MHC sinif I molekullarının (11) səthi ifadəsi üçün tələb olunur, onlar olmadan təkrar emal hovuzu mövcud ola bilməz. Beləliklə, TAP və ya proteazomların çarpaz təqdimata cəlb edilməsi ekzogen antigenlərin DC-lərin sitozoluna daxil olması üçün mütləq sübut deyil, lakin bu ehtimalı da istisna etmir. Son tədqiqatlar MHC sinif I (12) və endosomal proteazların (13) təkrar emal yolu üçün rolunu dəstəkləyən çarpaz təqdimatda ehtimal olunan endositoz siqnalının rolunu aşkar etdi. Bu modeldə antigenlər proteazom deyil, endositik proteazlar tərəfindən parçalanacaq və beləliklə, normal olaraq klassik yolda təqdim ediləcək bəzi antigenlər çarpaz təqdim olunmaq üçün sağ qalmaya bilər.

Təkrar emal yolundan başqa digər mexanizmlər də çarpaz təqdimatla nəticələnə bilər (Şəkil 1). Məsələn, bir çox hüceyrə tipləri tərəfindən sərbəst buraxılan endositik strukturların daxili hissəsindən əldə edilən veziküllər - ekzosomlar da çarpaz təqdimat yolu ilə CTL reaksiyalarına səbəb ola bilər (14). MHC sinif I-peptid komplekslərini ehtiva edən bu kiçik veziküllərin DC-lərin plazma membranına sadə bir şəkildə bağlanmasının CTL aktivləşməsini tetiklemek üçün kifayət edib-etməməsi aydın deyil və mexanizm hələ də zəif müəyyən edilmişdir. Bundan əlavə, müxtəlif təcrübələr göstərdi ki, hüceyrədənkənar zülallar endosomlardan DC-lərin sitozoluna köçürülə bilər (9), baxmayaraq ki, bunun necə baş verdiyi aydın deyil. Bu, endosomlardan və/və ya lizosomlardan antigeni pompalayan endositik membranın və ya xüsusi zülal daşıyıcılarının əriməsini əhatə edə bilər. Qeyd edək ki, antigen tərkibli endositik strukturun həll edilməsi endosomal proteazları azad edəcək və ehtimal ki, çarpaz təqdim edən hüceyrənin ölümü ilə nəticələnəcək.


İstinadlar

Gell, P. G. H. & amp Benacerraf, B. Həddindən artıq həssaslıq üzrə tədqiqatlar II. Qvineya donuzlarında denatürləşdirilmiş zülallara qarşı gecikmiş yüksək həssaslıq. İmmunologiya 2, 64–70 (1959).

Call, M. E. və Wucherpfennig, K. W. T hüceyrə reseptoru: reseptorların yığılmasında və funksiyasında membran mühitinin kritik rolu. Ann. Rev. İmmunol. 23, 101–125 (2005).

Martin, F. & amp Chan, Xəstəlikdə A. C. B hüceyrə immunobiologiyası: klinikadan inkişaf edən konsepsiyalar. Ann. Rev. İmmunol. 24, 467–496 (2006).

Jensen, P. E. Antigenin işlənməsi və təqdim edilməsində son nailiyyətlər. Təbiət immunol. 8, 1041–1048 (2007).

Bryant, P. & Ploegh, H. Class II MHC peptidinin peşəkarlar tərəfindən yüklənməsi. Curr. Rəy. İmmunol. 16, 96–102 (2004).

Lemaitre, B., Nicolas, E., Michaut, L., Reichhart, J.-M. & amp Hoffmann, J. A. Dorsoventral tənzimləyici gen kaseti spatzle / Toll / kaktusda güclü antifungal reaksiyaya nəzarət edir. Drosophila böyüklər. Hüceyrə 86, 973–983 (1996).

Reis e Sousa, C. Toll-bənzər reseptorlar və dendritik hüceyrələr: kimin üçün səhv tolls. Semin. İmmunol. 16, 27–34 (2004).

Garrett, W. S. et al. Cdc42 ilə dendritik hüceyrələrdə endositozun inkişaf nəzarəti. Hüceyrə 102, 325–334 (2000).

West, M. A. və b. Toll-bənzər reseptorun səbəb olduğu aktin remodelingi vasitəsilə təkmilləşdirilmiş dendritik hüceyrə antigeninin tutulması. Elm 305, 1153–1157 (2004). Bu yazı göstərir ki, TLR stimullaşdırılması zamanı DC-lər əvvəlcə dramatik aktinin yenidən qurulmasına səbəb olan makropinositozu artırır.

Trombetta, E. S., Ebersold, M., Garrett, W., Pypaert, M. & amp Mellman, I. Dendritik hüceyrə olgunlaşması zamanı lizosomal funksiyanın aktivləşdirilməsi. Elm 299, 1400–1403 (2003).

Kleijmeer, M. et al. Multivezikulyar orqanların yenidən təşkili dendritik hüceyrələr tərəfindən MHC sinif II antigen təqdimatını tənzimləyir. J. Cell Biol. 155, 53–64 (2001).

Boes, M. et al. Dendritik hüceyrələrin T-hüceyrə ilə əlaqəsi MHC sinif II nəqliyyatını sürətlə yenidən təşkil edir. Təbiət 418, 983–988 (2002).

Chow, A., Toomre, D., Garrett, W. & amp Mellman, I. Dendritik hüceyrə yetişməsi lizosomlardan plazma membranına retrograd MHC sinif II nəqlini tetikler. Təbiət 418, 988–994 (2002).

Savina, A. & amp Amigorena, S. Faqositoz və dendritik hüceyrələrdə antigen təqdimatı. İmmunol. Rev. 219, 143–156 (2007).

Henry, R. M., Hoppe, A. D., Joshi, N. & Swanson, J. A. Makrofaqlarda faqosom yetişməsinin vahidliyi. J. Cell Biol. 164, 185–194 (2004).

Blander, J. M. & amp Medzhitov, R. Faqosom yetişməsinin və antigen təqdimatının tənzimlənməsi haqqında. Təbiət immunol. 7, 1029–1035 (2006).

Stuart, L. M. & amp Ezekowitz, R. A. Faqositoz və müqayisəli fitri toxunulmazlıq: sürətlə öyrənmək. Təbiət Rev. İmmunol. 8, 131–141 (2008).

Blander, J. M. & amp Medzhitov, R. Dendritik hüceyrələr tərəfindən təqdim etmək üçün mikrob antigenlərinin tolldan asılı seçimi. Təbiət 440, 808–812 (2006). Bu yazı göstərir ki, TLR liqandları ilə kompleksləşmiş antigenlər T hüceyrələrinə daha effektiv şəkildə təqdim olunur.

Artavanis-Tsakonas, K., Love, J. C., Ploegh, H. L. & Vyas, J. M. CD63-ün işə götürülməsi Cryptococcus neoformans faqosomlar turşulaşma tələb edir. Proc. Natl akad. Sci. ABŞ 103, 15945–15950 (2006).

Meresse, S. et al. Patogen tərkibli vakuolların yetişməsinə nəzarət: həyat və ölüm məsələsi. Təbiət Hüceyrə Biol. 1, E183–E188 (1999).

van der Wel, N. et al. M. vərəmM. leprae miyeloid hüceyrələrdə faqolizosomdan sitozola köçür. Hüceyrə 129, 1287–1298 (2007)). Bu yazı göstərir ki, mikobakteriya gen məhsulları CFP-10 və ESAT-6 üçün tələb olunur. M. vərəm M. leprae insan DC-lərdə və makrofaqlarda faqolizosomlardan qaçmaq.

Kaqan, J. C. və Roy, C. R. Legionella faqosomlar endoplazmik retikulumun çıxış yerlərindən vezikulyar trafiki kəsirlər. Təbiət Hüceyrə Biol. 4, 945–954 (2002).

Mordue, D. G. & Sibley, L. D. Tərkibində olan vakuolların hüceyrədaxili taleyi Toxoplasma gondii formalaşması zamanı müəyyən edilir və daxil olma mexanizmindən asılıdır. J. İmmunol. 159, 4452–4459 (1997).

Yap, G. S., Shaw, M. H., Ling, Y. & amp Sher, A. Hüceyrədaxili patogenlərə host müqavimətinin genetik təhlili: tədqiqatlardan dərslər Toxoplasma gondii infeksiya. Mikroblar yoluxdurur. 8, 1174–1178 (2006).

Geijtenbeek, T. B. et al. DC-SIGN, T hüceyrələrinin trans-infeksiyasını gücləndirən dendritik hüceyrəyə xas HİV-1 bağlayıcı zülal. Hüceyrə 100, 587–597 (2000).

Geijtenbeek, T. B. et al. İlkin immun cavabları dəstəkləyən yeni dendritik hüceyrəyə xas ICAM-3 reseptoru olan DC-SIGN-in identifikasiyası. Hüceyrə 100, 575–585 (2000).

Jancic, C. et al. Rab27a faqosomal pH və NADPH oksidazın dendritik hüceyrə faqosomlarına cəlb edilməsini tənzimləyir. Təbiət Hüceyrə Biol. 9, 367–378 (2007). Bu yazı göstərir ki, DC-lərdə faqolizosomlarda turşulaşmanın məhdudlaşdırılması, faqosomların turşuluğunu və antigenin deqradasiyasını artıran RAB27A çatışmazlığı olan siçanlar tərəfindən göstərildiyi kimi antigen çarpaz təqdimatına imkan verir və antigen çarpaz təqdimatında qüsurdur.

Asagiri, M. et al. Eksperimental artritdə Cathepsin K-dan asılı Toll-bənzər reseptor 9 siqnalı aşkar edilmişdir. Elm 319, 624–627 (2008). Bu tədqiqat göstərir ki, katespin K DC-lərdə TLR9-dan asılı siqnal üçün tələb olunur.

Xie, Z. & amp Klionsky, D. J. Otofaqosom formalaşması: əsas mexanizmlər və uyğunlaşmalar. Təbiət Hüceyrə Biol. 9, 1102–1109 (2007).

Schmid, D. & amp Munz, C. Otofagiya vasitəsilə anadangəlmə və adaptiv immunitet. İmmunitet 27, 11–21 (2007).

Huang, J. & Klionsky, D. J. Autofagiya və insan xəstəliyi. Hüceyrə dövrü 6, 1837–1849 (2007).

Levine, B. & Deretic, V. Anadangəlmə və adaptiv toxunulmazlıqda otofagiyanın rollarının açılması. Təbiət Rev. İmmunol. 7, 767–777 (2007).

Schmid, D., Pypaert, M. & Munz, C. Əsas histouyğunluq kompleksi II sinif molekulları üçün antigen yükləmə bölmələri davamlı olaraq autofaqosomlardan giriş alır. İmmunitet 26, 79–92 (2007). DC-lərdə makroautofagiya nəticəsində əmələ gələn autofaqosomlar MHC sinif II tərkibli bölmələrlə birləşir. Bu modeldə qripdən əldə edilən peptidlər MHC sinif II molekulları tərəfindən təqdim olunur.

Xu, Y. və başqaları. Toll-bənzər reseptor 4 anadangəlmə toxunulmazlıqla əlaqəli autofagiya üçün sensordur. İmmunitet 27, 135–144 (2007). Bu tədqiqat göstərir ki, TLR4 liqandları makrofaqlarda otofagiyaya səbəb olur, lakin hüceyrələrin apoptoza keçməsi üçün siqnal kimi xidmət etmir.

Delqado, M. A., Elmaoued, R. A., Davis, A. S., Kyei, G. və Deretic, V. Toll kimi reseptorlar autofagiyaya nəzarət edir. EMBO J. 27, 1110–1121 (2008).

Sanjuan, M. A. və başqaları. Makrofaqlarda toll kimi reseptor siqnalı otofagiya yolunu faqositozla əlaqələndirir. Təbiət 450, 1253–1257 (2007).

Lee, H. K., Lund, J. M., Ramanathan, B., Mizushima, N. & amp Iwasaki, A. Plazmositoid dendritik hüceyrələr tərəfindən autofagiyadan asılı viral tanınması. Elm 315, 1398–1401 (2007).

Stuart, L. M. et al. Sistem biologiyasının təhlili Drosophila faqosom. Təbiət 445, 95–101 (2007). Bu yazı indiyə qədər faqosoma ilə əlaqəli zülalların ən əhatəli siyahısını təqdim edir. Sistem analizində zülalların maraqlı əlaqələri göstərilir.

Garin, J. et al. Faqosom proteomu: faqosom funksiyaları haqqında fikir. J. Cell Biol. 152, 165–180 (2001).

Jutras, I. et al. İnterferon-γ ilə faqosom proteomunun modulyasiyası. Mol. Hüceyrə. Proteomika 7, 697–715 (2008).

Burlak, C., Whitney, A. R., Mead, D. J., Hackstadt, T. & Deleo, F. R. İnsan neytrofil faqosomlarının yetişməsi molekulyar şaperonların və endoplazmatik retikulum keyfiyyətinə nəzarət mexanizmlərinin daxil edilməsini əhatə edir. Mol. Hüceyrə. Proteomika 5, 620–634 (2006).

Liou, W., Geuze, H. J., Geelen, M. J. & amp Slot, J. W. Otofagik və endositik yollar yaranan avtofagik vakuollarda birləşir. J. Cell Biol. 136, 61–70 (1997).

Berg, T. O., Fengsrud, M., Strømhaug, P. E., Berg, T. & Seglen, P. O. Siçovul qaraciyər amfisomlarının təcrid edilməsi və xarakteristikası. Otofaqosomların həm erkən, həm də gec endosomlarla birləşməsinə dair sübutlar. J. Biol. Kimya. 273, 21883–21892 (1998).

Paludan, C. et al. Otofagiyadan sonra viral nüvə antigeninin endogen MHC sinif II emalı. Elm 307, 593–596 (2005). Bu yazı göstərir ki, Epstein-Barr virusunun gen məhsulu EBNA1 autofagiya yolu ilə MHC sinif II yolunu kəsdiyi lizosoma çatdırılır.

Braziliya, M. I., Weiss, S. & amp Stockinger, B. Makrofaqlarda hüceyrədaxili zülalın həddindən artıq deqradasiyası əsas histouyğunluq kompleksi II sinif molekulları kontekstində təqdimatın qarşısını alır. Avro. J. İmmunol. 27, 1506–1514 (1997).

Dorfel, D. et al. HLA sinif I və II epitoplarının transfeksiyadan sonra dendritik hüceyrələr tərəfindən işlənməsi və təqdim edilməsi in vitro- transkripsiya edilmiş MUC1 RNT. qan 105, 3199–3205 (2005).

Nimmerjahn, F. et al. Əsas histouyğunluq kompleksi II sinif - autofagiya ilə sitozolik antigenin məhdud təqdimatı. Avro. J. İmmunol. 33, 1250–1259 (2003).

Chicz, R. M. və başqaları. HLA-DR allellərinə bağlı təbii şəkildə işlənmiş peptidlər arasında spesifiklik və qeyri-adilik. J. Exp. Med. 178, 27–47 (1993).

Donqre, A. R. və başqaları. In vivo Sürətli avtomatlaşdırılmış tandem kütlə spektrometriyası və funksional analizlərlə aşkar edilən sitozolik zülalların MHC sinif II təqdimatı. Avro. J. İmmunol. 31, 1485–1494 (2001).

Muntasell, A. et al. Neyroendokrin epitel hüceyrələrində HLA-DR4 molekulları sitoplazmik və səthi öz peptidlərinin heterojen repertuarına assosiasiya olunur. J. İmmunol. 169, 5052–5060 (2002).

Dengjel, J. et al. Autofagiya hüceyrədaxili mənbə zülallarından peptidlərin MHC sinif II təqdimatını təşviq edir. Proc. Natl akad. Sci. ABŞ 102, 7922–7927 (2005).

Zhou, D. et al. Lamp-2a sitoplazmik antigenlərin MHC sinif II təqdimatını asanlaşdırır. İmmunitet 22, 571–581 (2005).

Zwickey, H. L., Unternaehrer, J. J. & amp Mellman, I.Dendritik hüceyrə yetişməsi zamanı MHC II sinif molekullarında öz-özünə antigenlərin təqdimatı. Int. İmmunol. 18, 199–209 (2006).

Boes, M. et al. T hüceyrələri dendritik hüceyrələrdə Toll kimi reseptordan asılı şəkildə genişləndirilmiş II sinif MHC bölmələrini induksiya edir. J. İmmunol. 171, 4081–4088 (2003).

Vyas, J. M. və başqaları. II sinif MHC bölmələrinin borulanması mikrotubuldan asılıdır və ilkin dendritik hüceyrələrdə çoxlu endolizosomal membran zülallarını əhatə edir. J. İmmunol. 178, 7199–7210 (2007).

Jordens, I. et al. Rab7 effektor zülalı RILP, dynein-dinactin mühərriklərinin işə salınmasını stimullaşdırmaqla lizosomal daşınmaya nəzarət edir. Curr. Biol. 11, 1680–1685 (2001).

Bloom, O. et al. Spinofilin immunoloji sinapslarda məlumat ötürülməsində iştirak edir. J. Cell Biol. 181, 203–211 (2008).

Hiltbold, E. M., Poloso, N. J. & Roche, P. A. MHC sinif II-peptid kompleksləri və APC lipid salları immunoloji sinapsda toplanır. J. İmmunol. 170, 1329–1338 (2003).

Shin, J.-S. və b. Dendritik hüceyrələrdə MHC sinif II-nin səthi ifadəsi tənzimlənən ubiquitinasiya ilə idarə olunur. Təbiət 444, 115–118 (2006). Bu tədqiqat göstərir ki, MHC sinif II molekullarının hüceyrə səthi ifadəsinin DC-lər tərəfindən tənzimlənməsi qismən MHC sinif II β-zəncirinin sitoplazmik quyruğunun ubiquityasiyası ilə əldə edilir. DC olgunlaşmasından sonra bu post-translational modifikasiyanın sürəti azaldı, nəticədə hüceyrə səthində MHC sinif II molekullarının toplanması baş verdi.

Hsu, S. C., TerBush, D., Abraham, M. & amp Guo, W. Qütbləşmiş ekzositozda ekzosit kompleksi. Int. Rev. Cytol. 233, 243–265 (2004).

Yeaman, C., Grindstaff, K. K. & amp Nelson, W. J. Epitel hüceyrələrinin qütbləşməsi zamanı Sec6/8 (ekzosit) kompleksinin apikal birləşmə kompleksinə cəlb edilməsi mexanizmi. J. Cell Sci. 117, 559–570 (2004).

Albert, M. L., Sauter, B. & Bhardwaj, N. Dendritik hüceyrələr apoptotik hüceyrələrdən antigen alır və sinif I-məhdud CTL-lərə səbəb olur. Təbiət 392, 86–89 (1998).

Bevan, M. J. Sitotoksik analizdə çarpaz reaksiya verməyən H-2 anadangəlmə hüceyrələri ilə kiçik H antigenlərinə ikincili sitotoksik cavab üçün çarpaz hazırlıq. J. Exp. Med. 143, 1283–1288 (1976).

Bevan, M. J. H-2 müxtəlif stimullaşdırıcı hüceyrələrə daxil edilən Minor H antigenləri, sitotoksik T hüceyrə səviyyəsində çarpaz reaksiya verir. in vivo astarlama. J. İmmunol. 117, 2233–2238 (1976).

Guermonprez, P. & Amigorena, S. Antigen çarpaz təqdimatı üçün yollar. Springer Semin. İmmunopatol. 26, 257–271 (2005).

Hill, A. et al. Herpes simplex virusu ev sahibi toxunulmazlığından yayınmaq üçün TAP-ı söndürür. Təbiət 375, 411–415 (1995).

Galocha, B. et al. Antigen emalı (TAP) ilə əlaqəli əsas histouyğunluq kompleksinin (MHC) kodlu peptid daşıyıcısının herpes simplex virusu ilə kodlanmış inhibitoru olan ICP47-nin aktiv Saytı NH2-terminal 35 qalıqlarına xəritə verir. J. Exp. Med. 185, 1565–1572 (1997).

Ackerman, A. L., Giodini, A. və Cresswell, P. Dendritik hüceyrələr tərəfindən çarpaz təqdimat zamanı endoplazmik retikulum zülalının retrotranslokasiya mexanizmləri üçün rol. İmmunitet 25, 607–617 (2006). Bu tədqiqat göstərir ki, ER dislokasiya maşınları DC-lərdə çarpaz təqdimatda iştirak edir. Hüceyrəsiz bir modeldən istifadə edərək, p97, ER dislokasiyasında iştirak edən bir protein, təcrid olunmuş faqosomlardan protein ixracı üçün tələb olunan yeganə sitozolik kofaktor idi.

Loureiro, J. & amp Ploegh, H. L. Antigen təqdimatı və ev sahibi-patogen qarşılıqlı təsirlərində ubiquitin-proteasome sistemi. Adv. İmmunol. 92, 225–305 (2006).

Desjardins, M. ER vasitəçiliyi ilə faqositoz: yeni funksiyalar üçün yeni membran. Təbiət Rev. İmmunol. 3, 280–291 (2003).

Gagnon, E. et al. Endoplazmik retikulum vasitəsilə faqositoz makrofaqlara daxil olma mexanizmidir. Hüceyrə 110, 119–131 (2002). Bu tədqiqatda ER komponentlərinin faqosomların səthində tapıldığını göstərmək üçün elektron mikroskopiyadan istifadə edilir ki, bu da ER-nin faqosomların formalaşmasında və yetişməsində birbaşa iştirak etdiyini göstərir.

Ackerman, A. L., Kyritsis, C., Tampe, R. & Cresswell, P. Dendritik hüceyrələrdə erkən faqosomlar ekzogen antigenlərin çarpaz təqdimatı üçün kifayət qədər hüceyrə bölməsi təşkil edir. Proc. Natl akad. Sci. ABŞ 100, 12889–12894 (2003).

Guermonprez, P. et al. ER-faqosom birləşməsi dendritik hüceyrələrdə MHC sinif I çarpaz təqdimat bölməsini təyin edir. Təbiət 425, 397–402 (2003). Çarpaz təqdimat ER və faqosom komponentlərinin qarışığından ibarət ixtisaslaşdırılmış bölmədə baş verir. Bu tədqiqat peptidlərin TAP kompleksi vasitəsilə daşındığını və MHC sinif I molekullarına daxil olduğunu göstərir.

Houde, M. et al. Faqosomlar antigenin çarpaz təqdimatı üçün səlahiyyətli orqanoidlərdir. Təbiət 425, 402–406 (2003). Bu yazı göstərir ki, faqosoma CD8-i cəlb etmək üçün MHC sinif I molekullarını peptidlərlə yükləmək qabiliyyətinə malikdir. + T hüceyrələri.

Touret, N. et al. ER-nin faqosom formalaşmasına töhfəsinin kəmiyyət və dinamik qiymətləndirilməsi. Hüceyrə 123, 157–170 (2005). Biokimyəvi, flüoresan görüntüləmə və elektron mikroskopiya üsullarından istifadə edərək, bu tədqiqat müəyyən etdi ki, plazma membranı membranın böyük hissəsini yeni yaranmış faqosomlara bağışlayır ki, bu da 71-ci istinadın nəticələri ilə kəskin ziddiyyət təşkil edir.

Wiertz, E. J. et al. İnsan sitomeqalovirusu US11 gen məhsulu MHC sinif I ağır zəncirlərini endoplazmatik retikulumdan sitozola doğru çıxarır. Hüceyrə 84, 769–779 (1996).

Koopmann, J. O. və başqaları. Endoplazmik retikulumdan antigen peptidlərin ixracı Sec61p kanalı vasitəsilə retrograd protein translokasiyası ilə kəsişir. İmmunitet 13, 117–127 (2000).

Bernardi, K. M., Forster, M. L., Lencer, W. I. & Tsai, B. Derlin-1 vəba toksininin retro-translokasiyasını asanlaşdırır. Mol. Biol. Hüceyrə 19, 877–884 (2008).

Mueller, B., Lilley, B. N. & Ploegh, H. L. SEL1L, maya Hrd3p-nin homoloqu, məməlilərin ER-dən protein dislokasiyasında iştirak edir. J. Cell Biol. 175, 261–270 (2006).

Loureiro, J. et al. Endoplazmik retikulumdan dislokasiya üçün siqnal peptid peptidaza tələb olunur. Təbiət 441, 894–897 (2006).

Mueller, B., Klemm, E. J., Spooner, E., Claessen, J. H. & amp Ploegh, H. Glikoproteinin dislokasiyasına vasitəçilik edən genişlənmiş məməli membran zülal kompleksi. Proc. Natl akad. Sci. ABŞ (mətbuatda).

Latz, E. et al. TLR9 lizosomda ER-dən CpG DNT-yə köçdükdən sonra siqnal verir. Təbiət immunol. 5, 190–198 (2004).

Kim, Y. M., Brinkmann, M. M., Paquet, M. E. və Ploegh, H. L. UNC93B1 endolizosomlara nukleotid hiss edən Toll-bənzər reseptorları çatdırır. Təbiət 452, 234–238 (2008).

Ploegh, H. L. Endoplazmik retikulumdan qaçış lyukunun yaradılması üçün lipid əsaslı bir model. Təbiət 448, 435–438 (2007).

Barba, G. et al. Hepatit C virusunun əsas proteini sitoplazmik lokalizasiya göstərir və hüceyrə lipidlərinin saxlanması damlacıqları ilə əlaqələndirilir. Proc. Natl akad. Sci. ABŞ 94, 1200–1205 (1997).

Ohsaki, Y., Cheng, J., Fujita, A., Tokumoto, T. & Fujimoto, T. Sitoplazmik lipid damcıları apolipoprotein B-nin proteazomal və autofagik deqradasiyasının yaxınlaşdığı yerlərdir. Mol. Biol. Hüceyrə 17, 2674–2683 (2006).

Herce, H. D. & amp Garcia, A. E. Molekulyar dinamika simulyasiyaları HİV-1 TAT peptidinin lipid membranları arasında köçürülməsi mexanizmini təklif edir. Proc. Natl akad. Sci. ABŞ 104, 20805–20810 (2007).

Smith, A. E. & Helenius, A. Viruslar heyvan hüceyrələrinə necə daxil olur. Elm 304, 237–242 (2004).

Peisajovich, S. G., Epand, R. F., Epand, R. M. & Shai, Y. Sendai virusu N-terminal füzyon peptidi iki oxşar təkrardan ibarətdir, hər ikisi membranın birləşməsinə kömək edir. Avro. J. Biochem. 269, 4342–4350 (2002).

Rosenbluh, J. et al. Histon zülallarının lipid billayerləri və mikoplazma membranları arasında köçürülməsi. J. Mol. Biol. 345, 387–400 (2005).

Darji, A., Chakraborty, T., Wehland, J. & Weiss, S. Listeriolizin istifadə edərək həll olunan zülalların TAP-dan asılı əsas histouyğunluq kompleksi I sinif təqdimatı. Avro. J. İmmunol. 27, 1353–1359 (1997).

Lilley, B. N., Gilbert, J. M., Ploegh, H. L. & Benjamin, T. L. Murine polyomavirus infeksiyanı başlatmaq üçün endoplazmik retikulum protein Derlin-2 tələb edir. J.Virol. 80, 8739–8744 (2006).

Daniels, R., Rusan, N. M., Wadsworth, P. & Hebert, D. N. SV40 VP2 və VP3-ün ER membranlarına daxil edilməsi kapsid Proteini VP1 tərəfindən idarə olunur: ER-dən DNT translokasiyasına təsirlər. Mol. Hüceyrə 24, 955–966 (2006).

Tucker, S. C. & amp Casadeval, A. Replikasiya Cryptococcus neoformans makrofaqlarda faqosomal keçiricilik və sitoplazmada polisaxarid olan veziküllərin toplanması ilə müşayiət olunur. Proc. Natl akad. Sci. ABŞ 99, 3165–3170 (2002).

Alvarez, M. & amp Casadeval, A. Faqosom ekstruziyası və sonra ev sahibi hüceyrənin sağ qalması Cryptococcus neoformans makrofaglar tərəfindən faqositoz. Curr. Biol. 16, 2161–2165 (2006).

Ma, H., Croudace, J. E., Lammas, D. A. və May, R. C. Canlı patogen mayaların makrofaqlar tərəfindən çıxarılması. Curr. Biol. 16, 2156–2160 (2006).

De Duve, C. & Wattiaux, R. Lizosomların funksiyaları. Annu. Rev. Physiol. 28, 435–492 (1966).

Van Dyke, R. W. Siçovul qaraciyər lizosomlarının asidifikasiyası: kəmiyyət və endosomlarla müqayisə. am. J. Physiol. 265, C901–C917 (1993).

Carbone, F. R. & Bevan, M. J. Sinif I-məhdud emalı və ekzogen hüceyrə ilə əlaqəli antigenin təqdimatı in vivo. J. Exp. Med. 171, 377–387 (1990).

Werneburg, N. W., Guicciardi, M. E., Bronk, S. F. & Gores, G. J. Şiş nekrozu faktoru-α ilə əlaqəli lizosomal keçiricilik katepsin B-dən asılıdır. am. J. Physiol. Mədə-bağırsaq. Qaraciyər fiziol. 283, G947–G956 (2002).

Luke, C. J. et al. Hüceyrədaxili Serpin lizosomal zədələnmənin induksiyasını və nəticələrini maneə törətməklə nekrozu tənzimləyir. Hüceyrə 130, 1108–1119 (2007).

Pfeifer, J. D. və başqaları. T hüceyrələrinə sinif I MHC təqdimatı üçün bakterial antigenlərin faqositik işlənməsi. Təbiət 361, 359–362 (1993).

Bachmann, M. F. et al. Ekzogen viral zülallar tərəfindən sinif I molekulların TAP1-dən müstəqil yüklənməsi. Avro. J. İmmunol. 25, 1739–1743 (1995).

Liu, T. və başqaları. MHC sinif I molekullarında dalaq antigenini təqdim edən hüceyrələr tərəfindən istiliklə öldürülmüş Sendai virus antigeninin TAP peptid daşıyıcısından müstəqil təqdimatı. J. İmmunol. 159, 5364–5371 (1997).

Schirmbeck, R., Bohm, W. & amp Reimann, J. Stress zülalı (hsp73) vasitəçiliyi ilə, D b-məhdud peptid təqdimatı üçün endogen, kəsilmiş SV40 böyük T antigeninin TAP-dan asılı olmayan işlənməsi. Avro. J. İmmunol. 27, 2016–2023 (1997).

Lizee, G. et al. Əsas histouyğunluq kompleksi sinif I sitoplazmik domen tərəfindən dendritik hüceyrə çarpaz təqdimatına nəzarət. Təbiət immunol. 4, 1065–1073 (2003).

Yeager, M. & Harris, A. L. 21-ci əsrin əvvəllərində Gap qovşağının kanal quruluşu: faktlar və fantaziyalar. Curr. Rəy. Hüceyrə Biol. 19, 521–528 (2007).

Neijssen, J., Pang, B. & amp Neefjes, J. Gap qovşağı vasitəsilə immun sistemində hüceyrələrarası əlaqə. Prog. Biofiz. Mol. Biol. 94, 207–218 (2007). Bu tədqiqat göstərir ki, boşluq qovşaqları qonşu hüceyrələrə təxminən 1800 dalton qədər nisbi molekulyar kütlənin peptidlərini təmin edir.

Neijssen, J. et al. Boşluq qovşaqları vasitəsilə hüceyrələrarası peptidlərin ötürülməsi ilə çarpaz təqdimat. Təbiət 434, 83–88 (2005).

Sykulev, Y., Joo, M., Vturina, I., Tsomides, T. J. & Eisen, H. N. Hədəf hüceyrədəki tək peptid-MHC kompleksinin sitolitik T hüceyrə reaksiyası yarada biləcəyinə dair sübut. İmmunitet 4, 565–571 (1996).

Mizushima, N., Levine, B., Cuervo, A. M. & Klionsky, D. J. Autofagiya hüceyrə özünü həzm yolu ilə xəstəliklərlə mübarizə aparır. Təbiət 451, 1069–1075 (2008).

Komatsu, M. et al. Atg7 çatışmazlığı olan siçanlarda aclığın səbəb olduğu və konstitutiv otofagiyanın pozulması. J. Cell Biol. 169, 425–434 (2005).

Komatsu, M. et al. Mərkəzi sinir sistemində autofagiyanın itirilməsi siçanlarda neyrodegenerasiyaya səbəb olur. Təbiət 441, 880–884 (2006).

Hara, T. və başqaları. Sinir hüceyrələrində bazal otofagiyanın yatırılması siçanlarda neyrodegenerativ xəstəliyə səbəb olur. Təbiət 441, 885–889 (2006).

Pierre, P. Dendritik hüceyrələr, DRiPs və DALIS antigenin işlənməsinə nəzarət. İmmunol. Rev. 207, 184–190 (2005).

Szeto, J. et al. ALIS proteazom və otofagiyanın substratları üçün streslə bağlı zülal saxlama bölmələridir. Otofagiya 2, 189–199 (2006).

Rodgers, J. R. & amp Cook, R. G. MHC sinif Ib molekulları anadangəlmə və qazanılmış toxunulmazlığı bağlayır. Təbiət Rev. İmmunol. 5, 459–471 (2005).

Gutierrez, M. G. və başqaları. Autofagiya BCG-ni inhibə edən bir müdafiə mexanizmidir Mycobacterium tuberculosis yoluxmuş makrofaglarda sağ qalma. Hüceyrə 119, 753–766 (2004). Faqosomları ehtiva edir M. vərəm lizosomlarla birləşmədən qaçın. Bu yazı göstərir ki, otofagiya yolları bu bloku aşır və APC-lərdə patogenə nəzarət üçün ümumi bir yol göstərə bilər.

Yorimitsu, T. & Klionsky, D. J. Endoplazmik retikulumun yeyilməsi: otofagiya ilə keyfiyyətə nəzarət. Trends Cell Biol. 17, 279–285 (2007).

Mijaljica, D., Prescott, M. & Devenish, R. J. Endoplazmik retikulum və Golgi kompleksi: otofagiyaya töhfələr və dövriyyə. Trafik 7, 1590–1595 (2006).

Yorimitsu, T., Nair, U., Yang, Z. & Klionsky, D. J. Endoplazmik retikulum stressi autofagiyaya səbəb olur. J. Biol. Kimya. 281, 30299–30304 (2006).

Bernales, S., McDonald, K. L. & amp Walter, P. Autofagiya, açılmamış zülal reaksiyası zamanı endoplazmik retikulumun genişlənməsinə qarşı tarazlıq yaradır. PLoS Biol. 4, e423 (2006).

Ogata, M. et al. Autofagiya endoplazmik retikulum stresindən sonra hüceyrənin sağ qalması üçün aktivləşdirilir. Mol. Hüceyrə. Biol. 26, 9220–9231 (2006).

Dorn, B. R., Dunn, W. A. ​​Jr və Progulske-Fox, A. Otofagik yol ilə bakterial qarşılıqlı əlaqə. Hüceyrə. Mikrobiol. 4, 1–10 (2002).

Ling, Y. M. et al. Vakuolyar və plazma membranının soyulması və otofagik aradan qaldırılması Toxoplasma gondii astarlanmış effektor makrofaqlarda. J. Exp. Med. 203, 2063–2071 (2006).

Zhao, Y., Wilson, D., Matthews, S. & Yap, G. S. Tez aradan qaldırılması Toxoplasma gondii γ-interferonla hazırlanmış siçan makrofaqları CD40 siqnalından müstəqildir. Yoluxdurmaq. İmmun. 75, 4799–4803 (2007).

Andrade, R. M., Wessendarp, M., Gubbels, M. J., Striepen, B. & amp Subauste, C. S. CD40, makrofaqlara qarşı mübarizə aparır.Toxoplasma gondii patogen tərkibli vakuolların və lizosomların autofagiyadan asılı birləşməsini tetikleyerek fəaliyyət. J. Clin. İnvestisiya edin. 116, 2366–2377 (2006).

Luder, C. G. və Seeber, F. Toxoplasma gondii və MHC ilə məhdudlaşdırılmış antigen təqdimatı: deqradasiya, nəql və modulyasiya haqqında. Int. J. Parazitol. 31, 1355–1369 (2001).

Nakagawa, I. et al. Otofagiya hüceyrələri A qrupunun işğalından qoruyur Streptokokk. Elm 306, 1037–1040 (2004).

Birmingem, C. L., Smith, A. C., Bakowski, M. A., Yoshimori, T. & Brumell, J. H. Autophagy nəzarətləri Salmonella zədələnməsinə cavab olaraq infeksiya Salmonella- tərkibində vakuol. J. Biol. Kimya. 281, 11374–11383 (2006).

Orvedahl, A. & amp Levine, B. Viral otofagiyadan yayınma. Otofagiya 4, 280–285 (2008).

Ogawa, M. & amp Sasakawa, C. Autofagik müdafiə sisteminin bakteriyadan yayınması. Curr. Rəy. Mikrobiol 9, 62–68 (2006).

Orvedahl, A. et al. HSV-1 ICP34.5, Beclin 1 otofagiya zülalını hədəf alaraq neyrovirulentlik verir. Hüceyrə Host Mikrob 1, 23–35 (2007). Bu tədqiqat göstərir ki, herpes simplex virusu tip 1 protein ICP34.5 məməlilərin otofagiya zülalı beclin-1 ilə birləşir və onun autofagiya funksiyasını maneə törədir, bu da mikroorqanizmlərin toxunulmazlıqdan yayınmaq üçün autofagiyada əsas molekulları hədəfə ala biləcəyini göstərir.

Ogawa, M. et al. Hüceyrədaxili qaçış Şigella autofagiyadan. Elm 307, 727–731 (2005).

Mizushima, N., Yamamoto, A., Matsui, M., Yoshimori, T. & Ohsumi, Y. In vivo flüoresan otofaqosom markerini ifadə edən transgen siçanlardan istifadə edərək qida aclığına cavab olaraq otofagiyanın təhlili. Mol. Biol. Hüceyrə 15, 1101–1111 (2004).

Kyewski, B. & Klein, L. Mərkəzi tolerantlıq üçün mərkəzi rol. Annu. Rev. İmmunol. 24, 571–606 (2006).

Lee, J. W. et al. Limfa düyünlərinin stroması ilə periferik antigenin göstərilməsi T hüceyrələrinin bağırsaqlara qarşı dözümlülüyünü artırır. Təbiət immunol. 8, 181–190 (2007).

Hampe, J. et al. Sinonim olmayan SNP-lərin genom miqyasında assosiasiya taraması ATG16L1-də Crohn xəstəliyi üçün həssaslıq variantını müəyyən edir. Təbiət Genet. 39, 207–211 (2007).

Rioux, J. D. və başqaları. Genom miqyaslı assosiasiya tədqiqatı Crohn xəstəliyi üçün yeni həssaslıq lokuslarını müəyyən edir və xəstəliyin patogenezində otofagiyaya səbəb olur. Təbiət Genet. 39, 596–604 (2007).

Parkes, M. et al. Otofagiya genindəki ardıcıllıq variantları IRGM və bir çox digər replikasiya edən lokuslar Crohn xəstəliyinə həssaslığa kömək edir. Təbiət Genet. 39, 830–832 (2007).

Harris, J. et al. T helper 2 sitokinləri hüceyrədaxili otofagik nəzarəti maneə törədir Mycobacterium tuberculosis. İmmunitet 27, 505–517 (2007).


Materiallar və metodlar

Reagentlər və antikorlar

Əgər başqa cür göstərilməyibsə, laboratoriya reagentləri Sigma-Aldrich-dən alınıb. Lentiviral transduksiya üçün U-dibli 96 quyulu lövhələr (Kat. No 650185) Dutscherdən (Fransa) alınıb. OVA anticisimləri (dovşanda istehsal edilən bütün antiserum, ref. C6534) Sigma-Aldrichdən alınmışdır, IgG fraksiya yaxınlıq xromatoqrafiyası ilə daha da təmizlənmişdir. MAb siçanı anti H-2K b klonu AF6-88.5-biotin, təmizlənmiş siçan əleyhinə CD64 (klon X54-5/7.1), təmizlənmiş siçan əleyhinə CD16/32 (klon 93) və streptavidinlə birləşdirilmiş APC-Cy7 idi. BioLegend-dən. MAb siçan əleyhinə CD206 (klon MR5D3) Bio-Rad-dan idi. MAb erməni hamsteri anti-siçan CD11c (klon N418), BV421 ilə konyuqasiya edilmiş, təmizlənmiş siçovul əleyhinə IL-2 (klonu JES6-1A12), biotinləşdirilmiş siçan əleyhinə IL-2 (klonu JES6-5H4), siçan əleyhinə CD107a (LAMP-1, klon 1D4B) və 7-aminoaktinomisin D (7-AAD) canlı/ölü boyama məhlulu BD Biosciences-dən idi. Poliklonal keçi anti-siçan EEA-1 (N19) Santa Cruzdan idi. Poliklonal dovşan anti-siçan Rab11a (#2413) Cell Signaling Technology-dən idi. Alexa Fluor 488 ilə birləşdirilmiş poliklonal eşşək anti-siçan, Alexa Fluor 594 ilə birləşdirilmiş eşşək anti-siçovul, Alexa Fluor 594 ilə birləşdirilmiş eşşək anti-keçi, Alexa 647 ilə birləşdirilmiş keçi siçovul əleyhinə, DQ-OVA və Ovalbumin Alexa-Fluor idi. Life Technologies-dən alınıb. N418 hibridoma ifraz edən erməni hamsteri siçan əleyhinə CD11c Amerika Tipi Mədəniyyət Kolleksiyasından alınıb. Hibridoma 30.5.7 və 64.3.7 Ulm Universitetinin J Reimann hədiyyəsi idi. MAb siçanı anti H-2K b klonu B8.24.3 astsitləri F Lemonnier, Pasteur İnstitutunun hədiyyəsidir. Anti-ekson-8 antikoru Jack Benninkdən (NIH) hədiyyə idi. 3,3′,5,5′-tetrametilbenzidin (TMB) substrat reagent dəsti (BD OptEIA) BD Biosciences-dən alınıb. Yumurta ağından təmizlənmiş OVA (dializləşdirilmiş, liyofilləşdirilmiş toz) Worthington Biochemical Corporation-dan alınmışdır. Peptidlər SL8 (>80% təmizlik) və GS20 (GLEQLESIINFEKLTEWTSS, 85,8% təmizlik) Schafer-N tərəfindən xüsusi olaraq sintez edilmişdir.

Siçanlar və hüceyrələr

C57BL/6 və RAG-1 çatışmazlığı olan OT-I T hüceyrə reseptoru-transgen siçanlar heyvan müəssisəmizdə saxlanıldı. BALB/c siçanları Janvierdən alınıb. BM-DC-lər əvvəllər təsvir edildiyi kimi (Lawand et al, 2016) GM-CSF mənbəyi kimi 3% J558 hibridom supernatantından istifadə edilərək istehsal edilmişdir. BM-DC-lər fərqləndirmənin 7-ci günündə təcrübələr üçün istifadə edilmişdir. DC 2.4 hüceyrələri (Shen və digərləri, 1997) Roswell Park Memorial İnstitutunda (RPMI) -1640 (orta) 10% istiliklə təsirsizləşdirilmiş FBS (Eurobio Abcys), 100 U/ml penisilin, 100 μg/ml streptomisin, 2 mmM ilə becərildi. L-qlutamin, 50 μM β-merkaptoetanol, GM-CSF olmadan və hər gün bölünür.

Plazmidlər, lentivirusların istehsalı və ötürülməsi

Arf6 üçün spesifik shRNA ardıcıllığını daşıyan pLK0.1 plazmid Sigma-Aldrichdən alınıb (shArf6 MISSION klonu NM_007481.3-769s21c1, TRCN0000324934, ardıcıllıq 5′-CCGGGGCATTTTGCT3-CCGACGGCATTGCTGCT3-CCGACGGCATTGCTGGGT). Hədəfsiz shRNA (shNT SHC002H Sigma-Aldrich) nəzarət kimi istifadə edilmişdir. Hər iki plazmiddə puromisin müqavimət geni var idi. Plazmid DNT hasil edilmiş və Nucleobond Xtra Maxi EF dəsti (Macherey-Nagel) ilə təmizlənmiş və orta titri 10 9 TU/ml olan lentivirusların istehsalı üçün istifadə edilmişdir. Fərqlənmənin 2-ci günündə BM hüceyrələri yığıldı və spin-infeksiyaya məruz qaldı (90 dəq, 931g, 37°C) polibrenin iştirakı ilə 8 μg/ml, infeksiyanın çoxluğunda 2,5.2 gün sonra mühit dəyişdirildi və 5 μg/ml yekun konsentrasiyada puromisin əlavə edildi. Hüceyrələr fərqləndirmənin 7-ci günündə istifadə edilmişdir. Lentiviral ifadə konstruksiyasının pLVX Arf6-mCherry yaratmaq üçün Arf6-nın kodlaşdırma ardıcıllığı Fw: 5′-GCCACCATGGGGAAGGTGCTA-3′ və Rv: 5′-TCACTTGTACAGCTCGTCCAT-3′ primerlərindən istifadə etməklə gücləndirildi. mCherry Fw: 5′-GTGAGCAAGGGCGAGGAGGAT-3′ və Rv: 5′-TCACTTGTACAGCTCGTCCAT-3′ primerləri ilə gücləndirildi. Lentiviral vektor pLVX-EF1α-IRES-puro SpeI və BamHI istifadə edərək xəttiləşdirilmişdir. Üç fraqment istehsalçının göstərişlərinə uyğun olaraq In-Fusion HD Cloning Plus Kit (Takara Bio Europe) istifadə edilməklə yığılmışdır. Daha sonra plazmid DNT-dən titri 5 × 10 9 TU/ml olan lentivirus istehsal etmək üçün istifadə edilmişdir. DC 2.4 hüceyrələri beş MOI-də BM-DC-lərlə eyni şəkildə transduksiya edildi və puromisinin çıxarılmasından əvvəl beş keçid üçün 5 μg/ml puromisinin iştirakı ilə genişləndirildi. Transduksiyanın effektivliyi axın sitometriyası və ya mikroskopiya ilə təsdiq edilmişdir.

Kəmiyyət real vaxt PCR (qPCR)

Fərqlənmənin 7-ci günündə BM-DC-lər yığıldı, qranullar toplandı və RNT NucleoSpin RNT XS dəsti (Macherey-Nagel) istifadə edərək çıxarıldı. cDNA təsadüfi heksamerlər və 1 μg ümumi RNT ilə ImProm-II Reverse Transkripsiya Sistemi dəsti (Promega) istifadə edərək əldə edilmişdir. qPCR Takyon ROX qPCR SYBR MasterMix mavi dTTP (Eurogentec) və aşağıdakı primerlərdən istifadə edərək SYBR Green metodu ilə yerinə yetirildi: GAPDH Fw: 5′-CCGTAGACAAAATGGTGAAGG-3′, GAPDH Rv: 5′-CGTGAGTGGAGTCATACTGGA-63′′ ′-AGATCTTCGGGAACAAGGAAAT-3′ və Arf6 Rv: 5′-CACACGTTGAACTTGACGTTTT-3′. Arf6-nın nisbi gen ifadəsi 2 (−ΔΔCT) metoduna uyğun olaraq GAPDH ev təsərrüfatı genindən istinad kimi istifadə edilərək müəyyən edilmişdir.

Axın sitometriyası

Fərqlənmənin 7-ci günündə BM-DC-lər yığılmış və bütün rəngləmə prosesi boyunca buzlu suda saxlanılmışdır. Göstərilən yerlərdə, BM-DC-lər 300 mM PBS-glisin pH 2.8 ilə 120 saniyə ərzində turşudan təmizləndi, ardınca soyuq mühitin əlavə edilməsi ilə zərərsizləşdirildi və müvafiq olaraq mühit və PBS ilə daha iki yuyuldu. Hüceyrələr daha sonra FACS tamponunda (PBS-də 2% FBS) əsas birləşməmiş antikorlarla boyandı, bir dəfə FACS tamponunda yuyuldu, ikincili antikorların müvafiq qarışığı (eşşək anti-siçan Alexa Fluor 488 və ya Streptavidin APC-Cy7) və Bv42 ilə boyandı. DC hüceyrələrinin identifikasiyası üçün birləşdirilmiş CD11c antikorları axın sitometri analizindən əvvəl yenidən yuyuldu və FACS tamponunda yenidən dayandırıldı. Alma FACSCanto II (BD Biosciences) üzərində həyata keçirilib. Ölü hüceyrələr 7-AAD boyanması ilə xaric edilmişdir. Məlumatların təhlili FlowJo (V10.1) istifadə edərək həyata keçirilib. CD11c + hüceyrələrinin həndəsi orta floresan intensivliyi və müvafiq marker hesablanmışdır. Hüceyrədaxili boyama üçün istehsalçının göstərişlərinə uyğun olaraq FIX & PERM Kit (Life Technologies) istifadə edilmişdir. BFA çürüməsi təcrübələri əvvəllər təsvir edildiyi kimi edildi (Montealegre et al, 2015). Anterograd nəqlini ölçmək üçün transduksiya edilmiş C57BL/6 BM-DC-lər buz üzərində turşudan təmizləndi, turşu söndürüldü və hüceyrələr 5 μg/ml BFA-nın mövcudluğu və ya olmaması ilə göstərilən müddət ərzində 37°C-də əvvəlcədən isidilmiş mühitdə yenidən inkubasiya edildi. . Hüceyrələr daha sonra AF6-biotin və ardınca streptavidin-Alexa488 ilə boyandı.

Konfokal mikroskopiya

Fərqlənmənin 6-cı günündə BM-DC-lər gecə ərzində fibronektinlə əvvəlcədən örtülmüş şüşə örtüklərə səpildi. Ertəsi gün hüceyrələr 2% paraformaldehidlə fiksasiya olundu, 300 mM qlisinlə söndürüldü və PBS-də 0,2% saponin və 0,2% BSA istifadə edərək keçiriciləşdirildi. Birincil antikorlar keçiricilik tamponunda (hibridoma supernatantları üçün 1:2, 1:100 EEA-1, 1:400 LAMP-1, 1:50 Rab11) və ikincil antikorlar 1:200 nisbətində seyreltildi. 4% formaldehid ilə postfiksasiya edildikdən sonra söndürmə 50 mM NH ilə aparıldı.4Nüvələrin DAPI (100 ng/ml) ilə boyanmasından əvvəl Cl. Sabit vəziyyətdə olan təcrübələr üçün, lazer skan edən konfokal mikroskop (TCS SP8-3X STED Leica Microsystems) vasitəsilə 63 × yağa batırma obyekti (NA 1.4) ilə görüntü əldə edildi. Kinetik təcrübələr üçün Yokogawa CSU-X1 fırlanan disk skanerindən ibarət fırlanan diskli konfokal mikroskop və Zeiss Observer Z1 tərs mikroskopla birləşdirilmiş fırlanan disk konfokal mikroskopla sahədəki hüceyrələrin bütün həcmini vizuallaşdırmaq üçün 2 mkm-lik Z yığınları götürüldü. və Zen Blue proqramı ilə idarə olunur. Kafel şəkilləri Hamamatsu Orca Flash 4.0 sCMOS kamerası vasitəsilə Plan Apochromat 63× yağa batırma obyekti (NA 1.46) ilə əldə edilmişdir. Canlı hüceyrə təsviri üçün hüceyrələr, 37°C-də nəmləndirilmiş kamerada və 5% CO2 tədarükü ilə 1 saata qədər hər 30 saniyədən bir şəkil əldə etmə müddəti ilə qeyd vaxtı ərzində tək z-stack vasitəsilə vizuallaşdırıldı. Şəkillər FIJI ilə işlənmişdir. Kolokalizasiya təhlili, başqa cür göstərilmədiyi təqdirdə, hər bir hüceyrənin bütün həcmi boyunca ImageJ-dən JACoP ilə aparılmışdır. Məlumatlar Mander əmsalı kimi bildirilir.

Antikor vasitəçiliyi ilə daxililəşdirmə analizi

Qapaqlara toxumlanmış transduksiya edilmiş BM-DC-lər 1 × PBS ilə yuyuldu, buzlu suyun üzərinə qoyuldu və sonra 30 dəqiqə ərzində müvafiq antikorla inkubasiya edildi. Hüceyrələr turşu ilə müalicə olunduqda, müvafiq antikor əlavə edilməzdən əvvəl hüceyrələr geniş şəkildə yuyuldu. Həddindən artıq antikorlar yuyuldu və sonra hüceyrələr əvvəlcədən bağlanmış hüceyrə səthi antikorlarını çıxarmadan, göstərilən müddət ərzində 37 ° C-də inkubasiya edildi. Hüceyrələr daha sonra yuxarıda göstərildiyi kimi sabitləndi, keçiriciləşdirildi və boyandı.

Daxililəşdirmə zamanı 64-reaktiv MHC-I-nin kəmiyyətinin müəyyən edilməsi

Qapaqlara toxumlanmış transduksiya edilmiş BM-DC-lər 1 × PBS ilə yuyuldu və 37 ° C-də 20 nM konkanamisin B (ConB) (ab144228 Abcam) ilə 45 ′ inkubasiya edildi. Hüceyrələr yuxarıdakı kimi yuyuldu və turşudan təmizləndi. Geniş yuyulduqdan sonra hüceyrələrə 30 dəqiqə buz üzərində mAb 64 əlavə edildi, artıq antikorlar yuyuldu və təqib zamanı hüceyrələr 20 nM ConB olan tam mühitlə qidalandı. Nəhayət, hüceyrələr LAMP1, EEA-1-ə qarşı antikorlarla və daxililəşdirilmiş 64-ə qarşı ikincili antikorla boyandı. Şəkillərin alınması həm shNT, həm də shArf6 hüceyrələri üçün eyni lazer gücü və qazancla həyata keçirildi. Rutin görüntü emalından sonra hər bir hüceyrə z-proyeksiyasına çevrildi, 64-ün qiymətləndirildiyi rəng üçün eyni hədd tətbiq edildi və nəhayət maskaya çevrildi. FIJI-nin daxili funksiyalarından istifadə edərək, sahə, orta boz dəyər və inteqrasiya olunmuş sıxlıq dəyərləri hər hüceyrə üçün hesablanmışdır. Orta boz dəyər 64 flüoresan intensivliyini, inteqrasiya olunmuş sıxlıq isə sahənin məhsuludur və hüceyrələrin ölçüsündə potensial dəyişikliyi düzəldən orta boz dəyərdir.

Nokadazol müalicəsi

Arf6-mCherry ilə transduksiya edilmiş DC2.4 hüceyrələri 5 μg/ml nokodozale (Ref 487928 Sigma-Aldrich) 30 dəqiqə 37°C-də və ya DMSO həlledicisi ilə müalicə olundu. Hüceyrələr fiksasiya edilmiş və göstərilən markerlər üçün rənglənmişdir. Golgi pozulmasını təsdiqləmək üçün müsbət nəzarət olaraq, təsvir edilən nokodazol ilə müalicə olunan hüceyrələrə GM130 üçün boyama daxil edilmişdir.

Təkrar emal analizi

Fərqlənmənin 7-ci günündə C57BL/6 BM-DC-ləri buz üzərində 30 dəqiqə ərzində mAb AF6-biotin ilə inkubasiya edilmişdir. Yuyulduqdan sonra hüceyrələr, əvvəllər təsvir edildiyi kimi, göstərilən müddətdə 220 μM primaquin ilə 37 ° C-də inkubasiya edildi (Ma et al, 2016). Daxililəşdirmədən sonra hüceyrələr 4 ° C-yə qədər soyudulmuş, yuyulmuş və turşudan təmizlənmişdir. Sonra alikotlar 37°C-də yenidən inkubasiya edildi və hüceyrələr nəhayət streptavidin-AlexaFluor 488 ilə etiketləndi. Daxililəşdirilmiş H-2K b faizi belə hesablandı (Buz üzərində bağlandıqdan sonra GeoMean - t = x daxililəşdirmədən sonra GeoMean)/(GeoMean) buz üzərində bağlandıqdan sonra) × 100. K b təkrar emal faizi (t = x təkrar emaldan sonra GeoMean − Turşu soyulduqdan sonra GeoMean)/(Buz üzərində bağlandıqdan sonra GeoMean − t = x daxililəşdirmədən sonra GeoMean) × 100 kimi hesablanmışdır.

Deqradasiya analizi

OVA-647 və bir OVA antikoru arasındakı IC-lər onları ekvimolyar nisbətdə qarışdırmaqla və 4°C-də 1 saat inkubasiya etməklə hazırlanmışdır. Transduksiya edilmiş BM-DC-lər daha sonra yığıldı və IC-lər və ya həll olunan OVA-647-dən ibarət məhlulda, sonuncusu IC-də olduğu kimi eyni konsentrasiyada, 20 dəqiqə ərzində buzlu suda yenidən dayandırıldı. Hüceyrələr üç dəfə soyuq PBS 1 × ilə yuyuldu və sonra göstərilən vaxt nöqtələri üçün tam mühitdə 37 ° C-də inkubasiya edildi. Hər bir zaman nöqtəsində hüceyrələr yuyuldu və son vaxta qədər buz üzərində yerləşdirildi. Nəhayət, fluoressensiya axını sitometriyası ilə aşkar edilmişdir. OVA-647-nin yüksək dərəcədə öz-özünə söndürüldüyü bildirilməsə də, onun deqradasiyasının flüoresan parlaqlığını artırdığını aşkar etdik. Məlumatlar 4°C-də inkubasiya edilmiş hüceyrələrə nisbətən flüoresansın dəfələrlə artması kimi təqdim olunur.

Antigen təqdimat testləri

Antigen çarpaz təqdimat təhlilləri əsasən əvvəllər təsvir edildiyi kimi aparılmışdır (Merzougui et al, 2011). Qısaca olaraq, OVA və anti-OVA, P3UO və anti-CD11c və ya P3UO və anti-CD206 arasında əmələ gələn komplekslər iki müvafiq komponenti ekvimolyar nisbətdə qarışdırmaqla və 4°C-də 1 saat inkubasiya etməklə hazırlanmışdır. Sonra komplekslər BM-DC-lərə 6 saat ərzində əlavə edildi, ardınca 0,001% glutaraldehid ilə fiksasiya edildi, PBS-glisin 200 mM ilə yuyuldu və DC başına 5 OT-I nisbətində OT-I T hüceyrələri ilə inkubasiya edildi. Sakkaromislər cerevisiae Hüceyrə səthində tam uzunluqda OVA ifadə edən hüceyrələr (OVA-maya) (Merzougui et al, 2011) UV şüası ilə şüalanmış və hər DC başına beş maya hüceyrəsindən başlayaraq bir seyreltmədə hüceyrələrə verilmişdir. SL8 və ya GS-20 peptidləri BM-DC-lərlə 4 saat ərzində inkubasiya edildi, sonra yuxarıdakı kimi müalicə edildi. Hüceyrədənkənar antigenin işlənməsini istisna etmək üçün 0,004% qlutaraldehid istifadə edərək prefiks edilmiş hüceyrələr müntəzəm olaraq nəzarət elementləri kimi daxil edilmişdir. OT-I hüceyrələri tərəfindən IL-2 ifrazı eksperimentlərin oxunuşu kimi istifadə edildi və ELISA ilə ölçüldü. Məlumatlar antigenin maksimal seyreltilməsi zamanı shNT transduksiya edilmiş hüceyrələrə nisbətdə faiz olaraq bildirilir.

Statistika

Müstəqil eksperimentlər arasında mütləq məlumatların dəyişməsinin nəzarət və sınaq nümunələri arasında qat dəyişikliklərini gizlətdiyi təcrübələrdə məlumatlar nəzarət NT-yə nisbətən 100% normallaşdırıldı. Nəzarət elementlərinə nisbətdə faiz olaraq bildirilən məlumatlar, nümunənin sütun ortalamalarının 100%-ə bərabər olduğu sıfır fərziyyəsi altında GraphPad Proqramında həyata keçirilən bir nümunə testi ilə qiymətləndirilmişdir. Hər bir əfsanədə fərdi təcrübələrin sayı göstərilir. Tipik təcrübələr əlavə rəqəmlərdə göstərilmişdir. Mikroskopiya məlumatları cütləşməmiş qeyri-parametrik Mann-Whitney testi ilə qiymətləndirilib, hər bir zaman nöqtəsi/marker üzrə müstəqil təcrübələrdən əldə edilən fərdi hüceyrələri birləşdirdi. Data əhəmiyyətli dərəcədə fərqlidirsə P ≤ 0.05 (*), P ≤ 0,01 (**), və ya P ≤ 0.001 (***).


Materiallar və metodlar

Ardıcıllığın axtarışı və təhlili

Yarasalardan 56 MHC sinif I geninin ardıcıllığı (proqnozlaşdırılan genlər daxil olmaqla) NCBI verilənlər bazasından əldə edilmişdir (S1 Cədvəl). Yüksək məməli MHC I ağır zəncir ardıcıllığı İmmunopolimorfizm Məlumat Bazasından (IPD) (www.ebi.ac.uk/ipd/mhc) və UniProt verilənlər bazasından (www.uniprot.org) əldə edilmişdir. Əvvəllər yatırılmış marsupial (opossum, tammar wallabi, koala, Tasmaniya iblisi) və platypus MHC I transkriptləri bu analizlərə daxil edilmişdir (S1 Cədvəl). ClustalX [48] və ESPript [49] ilə ardıcıl düzülmələr yaradıldı. Oxşarlıqlar DNAMAN (https://www.lynnon.com/) istifadə edərək hesablanıb.

GenBank-dan müvafiq olaraq 1000 MERS-CoV genomunun və 1000 SARS-CoV genomunun proteomları götürülüb. MAFFT ilə ardıcıllıqla uyğunlaşdırıldıqdan sonra hər bir sahə üçün dominant amin turşusu istinad ardıcıllığı olaraq seçildi. Mutasiya tezliyi = hər bir amin turşusu üçün ümumi mutasiyaların sayı/(istinad ardıcıllığında amin turşusunun baş vermə sayı × ardıcıllıqların ümumi sayı).

Peptid sintezi və ifadə konstruksiyalarının hazırlanması

Potensial peptidlərin Ptal-N*01:01 ilə bağlanması üçün skrininq etmək üçün yarasa ilə əlaqəli virusların proteomları EBOV (NP: GenBank № AF054908.1 GP: GenBank no. AKG65250.1), MERS-CoV (GenBank no. AXN92228.1), H17N10 qripəbənzər virus (A/az sarı çiyinli yarasa/Qvatemala/060/2010(H17N10)) və H18N11 qripəbənzər virus (A/düz üzlü yarasa/Peru/033/0112N )) namizəd peptidləri proqnozlaşdırmaq üçün istifadə edilmişdir. Namizəd peptidlər proqnozlaşdırıldı və bu yaxınlarda bildirilmiş motivə uyğun olaraq seçildi, bunun vasitəsilə HeV-dən əldə edilən iki Ptal-N*01:01 bağlayıcı peptid, HeV1 və HeV2 də sintez edildi (S2 Cədvəl) [30]. Seçilmiş peptidlərin potensial bağlanma balları onlayn NetMHCpan 4.0 serveri (http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCpan/) [50] və struktur modelləşdirməyə əsaslanan Rosetta FlexPepDock [51] vasitəsilə də proqnozlaşdırılıb. ,52], belə ki, biz Ptal-N*01:01 [30] motivinə uyğun peptidləri seçməyə üstünlük veririk. Analitik HPLC və kütlə spektrometriyası ilə peptidin saflığı >95% müəyyən edilmişdir. Peptidlər dondurularaq qurudulmuş tozlar şəklində -80 ° C-də saxlanıldı və istifadə etməzdən əvvəl DMSO-da həll edildi.

Ağır zəncir üçün cDNA-lar P. alekto MHC I Ptal-N*01:01 (GenBank nömrəsi KT987929) [30] və bat β2m (GenBank no. XP_006920478.1) sintez edilmişdir (Genewiz, Pekin, Çin). Ptal-N*01:01 ardıcıllığı Wynne və həmkarları tərəfindən GenBank-a depozit edildi və Ptal-N*01:01-bağlayıcı peptidlər HeV1 və HeV2 onların tədqiqatında müəyyən edildi [30]. Ng və həmkarları ilk Ptal-N*01:01 [29] haqqında məlumat versələr də, ardıcıllıq onlayn olaraq mövcud deyil. Met 52 Asp 53 Leu 54-ün Ptal-N*01:01-də funksiyasını araşdırmaq üçün bu üç amin turşusunun silinməsi ilə Ptal-N*01:01(-3aa) adlı mutant quruldu. Ptal-N*01:01 və yarasa β-nın hüceyrədənkənar domenini (qalıqlar 1-277) ifadə edən gücləndirilmiş məhsullar2m (qalıqlar 1-98) pET28a vektoruna (Novagen) klonlaşdırıldı. İnsan β üçün plazmid ifadəsi2m (qalıqlar 1–99) əvvəllər laboratoriyamızda qurulmuşdu [53].

Yarasa I sinif komplekslərinin yenidən qatlanması və təmizlənməsi

Peptidlərlə yığılmış Ptal-N*01:01-in renaturasiyası və təmizlənməsi əvvəllər təsvir edildiyi kimi həyata keçirilmişdir [54,55]. Ümumiyyətlə, yarasa MHC I Ptal-N*01:01 ağır zəncir və yarasa β2m BL21(DE3) ştammına daxiletmə orqanları kimi həddindən artıq ifadə edilmişdir Escherichia coli, və zülalların təmizlənmiş daxiletmə orqanları 30 mq/mL konsentrasiyası ilə 6 M guanidin-HCl tamponunda həll edildi. Sonra MHC ağır zəncirinin enjeksiyonu və seyreltilməsi, β2m və peptid yenidən qatlanan tamponda 1:1:3 mol nisbətində meydana gəldi (100 mM Tris-HCl [pH 8], 2 mM EDTA, 400 mM L-Arg, 0,5 mM oksidləşmiş glutatyon və 5 mM azaldılmış glutatyon) [34]. Zülalın yenidən qatlanması üçün 24 saatdan sonra Ptal-N*01:01 kompleksləri konsentrasiya edildi və 20 mM Tris-HCl (pH 8) və 50 mM NaCl buferinə dəyişdirildi və sonra Superdex 200 16/60 HiLoad (GE) istifadə edərək təmizləndi. Səhiyyə, Pekin, Çin) ölçü-istisna sütunu.

Kristallaşma, məlumatların toplanması və işlənməsi

Kristallaşma oturan damcı buxar diffuziya texnikasından istifadə etməklə həyata keçirilmişdir. Ptal-N*01:01/peptid kompleksləri Kristal Ekran dəsti I/II, İndeks Ekran dəsti, PEGIon dəsti I/II və PEGRx dəsti (Hampton Araşdırma) vasitəsilə yoxlanılmışdır. Plitələr 291 K və 277 K-də inkubasiya edildi və 1-2 həftədən sonra kristal böyüməsi üçün qiymətləndirildi. Ptal-N*01:01/HeV1 kristalları 0,2 M NaCl, 0,1 M Bis-Tris (pH 5,5) və 25% (v/v) polietilen qlikol 3,350-də 7,5 mq/mL konsentrasiyada müşahidə edilmişdir. Ptal-N*01:01/HeV1(insan β2m) kristallar 0,1 M HEPES, pH 7,0, 2% w/v polietilen qlikol 3,350-də müşahidə edilmişdir. Monomer yarasa β2m 0,1 M BIS-TRIS, pH 6,5, 8% w/v polietilen qlikol monometil eter 5000-də yetişdirilib. Ptal-N*01:01/HeV2 monokristalları 10 mq protein konsentrasiyasında 0,075 M HEPES (pH 7,5), 15% (v/v) polietilen qlikol 10,000 və 25% (v/v) qliserində yetişdirildi. /ml. Ptal-N*01:01/EBOV-NP1 monokristalları 0,1 M süksin turşusu (pH 7,0) və 15% (ağırlıq/həc) polietilen qlikol 3,350-də yetişdirilmişdir. Ptal-N*01:01/EBOV-NP2 monokristalları 0,2 M ammonium asetat, 0,1 M Tris (pH 8,0) və 16% (ağırlıq/həc) polietilen qlikol 10,000-də yetişdirildi. Ptal-N*01:01(-3aa)/HeV1 monokristalları 0,2 M natrium formatda və 20% (ağırlıq/həc) polietilen qlikol 3,350-də yetişdirilmişdir. Ptal-N*01:01/H17N10-NP monokristalları 0,075 M HEPES (pH 7,5), 15% (v/v) polietilen qlikol 10,000 və 25% (h/v) qliserolda yetişdirilmişdir. Ptal-N*01:01/MERS-CoV-S3 monokristalları 0,2 M natrium asetat trihidrat və 20% (ağırlıq/həc) polietilen qlikol 3,350-də yetişdirilib. Kriomühafizə üçün kristallar tərkibində 20% qliserol olan rezervuar məhlullarına köçürüldü və sonra 100 K-də qaz halında azot axınında flaş soyudulub. Şanxay Sinxrotron Radiasiya Mexanizminin BL19U şüa xəttində rentgen şüalarının difraksiya məlumatları toplandı. Məlumatların toplanması statistikası Cədvəl 1-də göstərilmişdir.

Strukturun təyini və təhlili

Toplanmış intensivliklər sonradan Denzo proqramı və HKL2000 proqram paketindən (HKL Research) istifadə edilərək işlənmiş və miqyaslaşdırılmışdır. Quruluşlar CCP4 [56]-da Phaser MR proqramı ilə molekulyar əvəzlənmədən istifadə etməklə müəyyən edilmişdir. İstifadə olunan model Zülal Məlumat Bankı (PDB) kodu 5F1I [35] ilə struktur koordinatları idi və məhdudlaşdırılmış dəqiqləşdirmə CCP4-dən REFMAC5 istifadə edərək həyata keçirildi. Geniş model qurulması COOT [57] istifadə edərək əl ilə həyata keçirilmişdir. Son modelin stereokimyəvi keyfiyyəti Phenix və ya CCP4-də REFINE proqramı ilə qiymətləndirilmişdir (Cədvəl 1). Strukturla əlaqəli rəqəmlər PyMOL (http://www.pymol.org/) və COOT istifadə edərək yaradılıb.

CD spektroskopiyasından istifadə edərək zülalın termostabilliyinin təyini

Ptal-N*01:01-in iki qrup açar peptidləri ilə termostabillikləri CD spektroskopiyası ilə sınaqdan keçirilmişdir. Bütün komplekslər yenidən qatlanmış, təmizlənmiş və 20 mM Tris (pH 8) və 50 mM NaCl məhlulunda 0,2 mq/mL-də ölçülmüşdür. 218 nm-də CD spektrləri Chirascan spektrometrində (Tətbiqi Fotofizika) 20 ilə 90°C arasında 1°C/dəqiqəlik artım sürəti ilə 0,2°C temperatur intervalında termostatik idarə olunan kyuvetdən istifadə etməklə ölçüldü. Qatlanmamış kəsr (%) (θ−θ) kimi ifadə edilira)/(θa−θb), burada θa və θb tam qatlanmış və tam açılmamış vəziyyətdə orta qalıq elliptiklik qiymətləridir. Denatürasiya əyriləri OriginPro 8.0 (OriginLab) [58] ilə qeyri-xətti uyğunlaşma yolu ilə yaradılmışdır. The Tm məlumatların denaturasiya əyrilərinə uyğunlaşdırılması və əyilmə təyin edən törəmələrdən istifadə etməklə hesablanmışdır.


Olivier P. Joffre və Elodie Segura: Bu müəlliflər bu işə bərabər töhfə verdilər.

Əlaqələr

INSERM U932, 26 Rue d'Ulm, Paris, 75005, Fransa

Olivier P. Joffre, Elodie Segura, Ariel Savina və Sebastian Amigorena

Institut Curie, Section Recherche, 26 Rue d'Ulm, Paris, 75005, Fransa

Olivier P. Joffre, Elodie Segura, Ariel Savina və Sebastian Amigorena

Siz həmçinin bu müəllifi PubMed Google Scholar-da axtara bilərsiniz

Siz həmçinin bu müəllifi PubMed Google Scholar-da axtara bilərsiniz

Siz həmçinin bu müəllifi PubMed Google Scholar-da axtara bilərsiniz

Siz həmçinin bu müəllifi PubMed Google Scholar-da axtara bilərsiniz

Müəllif


İstinadlar

Thery, C., Zitvogel, L. & Amigorena, S. Exosomes: tərkibi, biogenez və funksiyası. Təbiət Rev. İmmunol. 2, 569–579 (2002). Bu, ekzosomların quruluşu və funksiyasının əla erkən nəzərdən keçirilməsidir.

Andaloussi, S. E. L., Mager, I., Breakefield, X. O. və Wood, M. J. Hüceyrədənkənar veziküllər: biologiya və ortaya çıxan terapevtik imkanlar. Nature Rev. Drug Discov. 12, 347–357 (2013).

Thery, C., Ostrowski, M. & amp Segura, E. Membran vezikülləri immun cavabların konveyerləri kimi. Təbiət Rev. İmmunol. 9, 581–593 (2009).

Yang, C. & amp Robbins, P. D. İmmunosupressiv ekzosomlar: artritin müalicəsi üçün yeni bir yanaşma. Int. J. Revmatol. 2012, 573–528 (2012).

Booth, A. M. et al. Ekzosomlar və T hüceyrə plazma membranının endosoma bənzər domenlərindən HİV Gag qönçəsi. J. Cell Biol. 172, 923–935 (2006). Bu hesabatda plazma membranından 30-100 nm-lik kiçik veziküllərin, ekzosomlara bənzər ölçüdə buraxılması təsvir edilir.

Balaj, L. və başqaları. Şiş mikroveziküllərində retrotranspozon elementləri və gücləndirilmiş onkogen ardıcıllığı var. Təbiət kommunası. 2, 180 (2011). Bu əlyazma yalnız kiçik RNT-lərin deyil, həm də dəyişdirilə bilən və gücləndirilmiş elementlərin mövcudluğunu təsvir edir MYC hüceyrədənkənar veziküllərdə ardıcıllıq.

Raiborg, C. & Stenmark, H. Ubiquitylated membran zülallarının endosomal çeşidlənməsi üçün ESCRT maşın. Təbiət 458, 445–452 (2009).

Hurley, J. H. & amp Hanson, P. I. ESCRT aparatı ilə membranın qönçələnməsi və kəsilməsi: hamısı boyundadır. Təbiət keşişi Mol. Hüceyrə Biol. 11, 556–566 (2010).

Stuffers, S., Sem Wegner, C., Stenmark, H. & Brech, A. ESCRT-lərin olmaması ilə multivesikulyar endozom biogenezi. Trafik 10, 925–937 (2009).

Traykovic, K. et al. Seramid ekzosom veziküllərinin multivezikulyar endosomlara qönçələnməsinə səbəb olur. Elm 319, 1244–1247 (2008).

Buschow, S. I. və başqaları. Dendritik hüceyrələrdə MHC II fərqli multivezikulyar bədən yolları vasitəsilə lizosomlara və ya T hüceyrəsi ilə induksiya olunan ekzosomlara yönəldilir. Trafik 10, 1528–1542 (2009).

Raposo, G. & Stoorvogel, W. Extracellular vesicles: exosomes, microvesicles, and friends. J. Cell Biol. 200, 373–383 (2013).

Ostrowski, M. və b. Rab27a və Rab27b ekzosom ifrazat yolunun müxtəlif mərhələlərini idarə edir. Təbiət Hüceyrə Biol. 12, 19–30 (2010). Bu, hüceyrədənkənar vezikül sekresiyasında iki xüsusi RAB zülalının mühüm rolunu göstərən ilk sənəddir.

Peinado, H. et al. Melanoma ekzosomları MET vasitəsilə sümük iliyinin progenitor hüceyrələrini pro-metastatik fenotipə doğru öyrədir. Təbiət Med. 18, 883–891 (2012). Bu əlyazma göstərir ki, melanoma şiş hüceyrələrindən ayrılan hüceyrədənkənar veziküllər hepatositlərin böyümə faktorunun reseptorunu əhatə edən mexanizm vasitəsilə şiş yuvasının yaradılmasında mühüm rol oynayır.

Savina, A., Fader, C. M., Damiani, M. T. və Colombo, M. I. Rab11, kalsiumdan asılı olaraq multivezikulyar cisimlərin birləşməsini və birləşməsini təşviq edir. Trafik 6, 131–143 (2005).

Fader, C. M., Sanchez, D. G., Mestre, M. B. & Colombo, M. I. TI-VAMP/VAMP7 və VAMP3/cellubrevin: autofagiya/multivikulyar bədən yollarının xüsusi mərhələlərində iştirak edən iki v-SNARE zülalı. Biokim. Biofiz. Akta 1793, 1901–1916 (2009).

Montecalvo, A. et al. T-hüceyrə alloregnition zamanı dendritik hüceyrələr arasında alloantigeni yaymaq üçün qısa diapazonlu mexanizm kimi ekzosomlar. J. İmmunol. 180, 3081–3090 (2008).

Nolte-'t Hoen, E. N., Buschow, S. I., Anderton, S. M., Stoorvogel, W. və Wauben, M. H. Aktivləşdirilmiş T hüceyrələri LFA-1 vasitəsilə dendritik hüceyrələr tərəfindən ifraz olunan ekzosomları işə götürür. qan 113, 1977–1981 (2009).

Muntasell, A., Berger, A. C. & amp Roche, P. A. B hüceyrəsi ekzosomlarında MHC sinif II peptid komplekslərinin PA T hüceyrəsi tərəfindən törədilən sekresiyası. EMBO J. 26, 4263–4272 (2007).

Blanchard, N. et al. İnsan T hüceyrələrinin TCR aktivləşməsi TCR/CD3/ζ kompleksini daşıyan ekzosomların istehsalına səbəb olur. J. İmmunol. 168, 3235–3241 (2002).

Vincent-Schneider, H. et al. HLA DR1 molekullarını daşıyan ekzosomlar xüsusi T hüceyrələrini effektiv şəkildə stimullaşdırmaq üçün dendritik hüceyrələrə ehtiyac duyur. Int. İmmunol. 14, 713–722 (2002).

Yu, X., Harris, S. L. və Levine, A. J. Ekzosom sekresiyasının tənzimlənməsi: p53 zülalının yeni funksiyası. Xərçəng Res. 66, 4795–4801 (2006).

Raposo, G. et al. B-limfositlər antigen təqdim edən veziküllər ifraz edirlər. J. Exp. Med. 183, 1161–1172 (1996).

Zitvogel, L. və başqaları. Yeni hüceyrəsiz peyvənddən istifadə edərək qurulmuş siçan şişlərinin aradan qaldırılması: dendritik hüceyrədən əldə edilən ekzosomlar. Təbiət Med. 4, 594–600 (1998). Bu, şiş antigenlərini ehtiva edən DC mənşəli hüceyrədənkənar veziküllərin antitümör immun reaksiyasını stimullaşdırmaq qabiliyyətinə dair ilk hesabatdır.

Admyre, C. et al. B hüceyrəsindən əldə edilən ekzosomlar allergen peptidlərini təqdim edə və TH2-yə bənzər sitokinləri çoxaltmaq və istehsal etmək üçün allergenə xas T hüceyrələrini aktivləşdirə bilər. J. Allergiya Klinikası. İmmunol. 120, 1418–1424 (2007).

Admyre, C., Johansson, S. M., Paulie, S. & Gabrielsson, S. ELISPOT tərəfindən aşkar edilən periferik insan T hüceyrələrinin birbaşa ekzosom stimullaşdırılması. Avro. J. İmmunol. 36, 1772–1781 (2006).

Thery, C. et al. Sadəlövh CD4 + T hüceyrələrinin dendritik hüceyrədən əldə edilən ekzosomlar tərəfindən dolayı aktivləşdirilməsi. Təbiət immunol. 3, 1156–1162 (2002).

Hsu, D. H. və başqaları. Bir şiş peyvəndi kimi ekzosomlar: antigen peptidlərin birbaşa yüklənməsi ilə potensialın artırılması. J. İmmunother. 26, 440–450 (2003).

Qazi, K. R., Gehrmann, U., Domange Jordo, E., Karlsson, M. C. & Gabrielsson, S. Antigenlə yüklənmiş ekzosomlar yalnız B hüceyrəsindən asılı mexanizm vasitəsilə TH1 tipli yaddaşı induksiya edir. qan 113, 2673–2683 (2009).

Andre, F. et al. Ekzosomlar güclü hüceyrəsiz peptid əsaslı peyvənd kimi. I. Dendritik hüceyrədən alınan ekzosomlar funksional MHC sinif I/peptid komplekslərini dendritik hüceyrələrə köçürür. J. İmmunol. 172, 2126–2136 (2004).

Segura, E. et al. Yetkin dendritik hüceyrələrdən olan ekzosomlarda ICAM-1 effektiv sadəlövh T-hüceyrəsinin hazırlanması üçün vacibdir. qan 106, 216–223 (2005).

Mallegol, J. et al. T84-bağırsaq epitelial ekzosomları dendritik hüceyrələr tərəfindən antigen təqdimatını gücləndirən MHC sinif II/peptid komplekslərini daşıyır. Qastroenterologiya 132, 1866–1876 (2007).

Giri, P. K. & Schorey, J. S. Alınan ekzosomlar M. Bovis BCG ilə yoluxmuş makrofaqlar antigenə xas CD4+ və CD8+ T hüceyrələrini aktivləşdirir. in vitroin vivo. PLoS BİR 3, e2461 (2008).

Wakim, L. M. & amp Bevan, M. J. Çarpaz geyimli dendritik hüceyrələr viral infeksiyadan sonra yaddaş CD8 + T-hüceyrə aktivləşdirilməsini idarə edir. Təbiət 471, 629–632 (2011).

Tian, ​​T. et al. Ekzosomların daxililəşdirilməsi və alverinin dinamikası. J. Hüceyrə. Fiziol. 228, 1487–1495 (2013).

Morelli, A. E. və başqaları. Endositoz, hüceyrədaxili çeşidləmə və dendritik hüceyrələr tərəfindən ekzosomların işlənməsi. qan 104, 3257–3266 (2004).

Hao, S. və başqaları. Ekzosomlarla impulslanan yetkin dendritik hüceyrələr effektiv sitotoksik T-limfosit reaksiyalarını və antitümör toxunulmazlığını stimullaşdırır. İmmunologiya 120, 90–102 (2007).

Rieu, S., Geminard, C., Rabesandratana, H., Sainte-Marie, J. & Vidal, M. Retikulositlərin yetişməsi zamanı buraxılan ekzosomlar inteqrin α4β1 vasitəsilə fibronektinə bağlanır. Avro. J. Biochem. 267, 583–590 (2000).

Clayton, A. et al. B hüceyrəsindən əldə edilən ekzosomlar tərəfindən yapışma və siqnal: inteqrinlərin rolu. FASEB J. 18, 977–979 (2004).

Segura, E., Guerin, C., Hogg, N., Amigorena, S. & Thery, C. CD8 + dendritik hüceyrələr ekzosomlardan MHC-peptid komplekslərini tutmaq üçün LFA-1-dən istifadə edirlər. in vivo. J. İmmunol. 179, 1489–1496 (2007).

Utsugi-Kobukai, S., Fujimaki, H., Hotta, C., Nakazawa, M. & Minami, M. MHC sinif I vasitəçiliyi ilə yetişməmiş və yetkin sümük iliyindən əldə edilən dendritik hüceyrələrdən ifraz olunan ekzosomlar tərəfindən ekzogen antigen təqdimatı. İmmunol. Lett. 89, 125–131 (2003).

Thery, C. et al. Dendritik hüceyrədən alınan ekzosomların molekulyar xarakteristikası. İstilik şoku zülalının seçici yığılması hsc73. J. Cell Biol. 147, 599–610 (1999).

Hanayama, R. et al. Apoptoz hüceyrələrini faqositlərlə əlaqələndirən amilin müəyyən edilməsi. Təbiət 417, 182–187 (2002).

Veron, P., Segura, E., Sugano, G., Amigorena, S. & Thery, C. Yetişməmiş dendritik hüceyrələrdən olan ekzosomlarda MFG-E8/laktadherinin yığılması. Qan Hüceyrələri Mol. Dis. 35, 81–88 (2005).

Miyanishi, M. et al. Tim4-ün fosfatidilserin reseptoru kimi müəyyən edilməsi. Təbiət 450, 435–439 (2007).

Kobayashi, N. et al. TIM-1 və TIM-4 qlikoproteinləri fosfatidilserini bağlayır və apoptotik hüceyrələrin udulmasına vasitəçilik edir. İmmunitet 27, 927–940 (2007).

Barres, C. et al. Qalektin-5 siçovulların retikulosit ekzosomlarının səthinə bağlanır və veziküllərin makrofaglar tərəfindən tutulmasını modullaşdırır. qan 115, 696–705 (2010).

Feng, D. et al. Ekzosomların hüceyrə daxililəşməsi faqositoz yolu ilə baş verir. Trafik 11, 675–687 (2010).

Fitzner, D. et al. Ekzosomların oliqodendrositlərdən mikrogliyaya makropinositozla seçici köçürülməsi. J. Cell Sci. 124, 447–458 (2011).

Smyth, L. A., Afzali, B., Tsang, J., Lombardi, G. & Lechler, R. I. MHC və immunoloji molekulların hüceyrələrarası transferi: molekulyar mexanizmlər və bioloji əhəmiyyəti. am. J. Transplantasiya 7, 1442–1449 (2007).

Coppieters, K. et al. Sıçanların lenfositik xoriomeningit virusu infeksiyası zamanı dendritik hüceyrədən əldə edilən ekzosomlar tərəfindən əhəmiyyətli CTL çarpaz astarlama yoxdur. J. İmmunol. 182, 2213–2220 (2009).

Wolfers, J. et al. Şişdən əldə edilən ekzosomlar CTL çarpaz astarlanması üçün paylaşılan şiş rədd antigenlərinin mənbəyidir. Təbiət Med. 7, 297–303 (2001).

Andre, F. et al. Bədxassəli efüzyonlar və immunogen şişdən qaynaqlanan ekzosomlar. Lancet 360, 295–305 (2002).

Beauvillain, C., Ruiz, S., Guiton, R., Bout, D. & Dimier-Poisson, I. Dendritik hüceyrə xətti tərəfindən ifraz olunan ekzosomlara əsaslanan peyvənd qarşı qorunma təmin edir. T. gondii singenik və allogenik siçanlarda infeksiya. Mikroblar yoluxdurur. 9, 1614–1622 (2007).

Walker, J. D., Maier, C. L. və Pober, J. S. Sitomeqalovirusla yoluxmuş insan endotel hüceyrələri antigenik ekzosomları buraxaraq allogen CD4 + yaddaş T hüceyrələrini stimullaşdıra bilər. J. İmmunol. 182, 1548–1559 (2009).

Keryer-Bibens, C. et al. EBV ilə yoluxmuş nazofarengeal karsinoma hüceyrələri tərəfindən buraxılan ekzosomlar viral gizli membran zülalı 1 və immunomodulyator zülal galektin 9-u daşıyır. BMC Xərçəng 6, 283 (2006).

Testa, J. S., Apcher, G. S., Comber, J. D. & amp Eisenlohr, L. C. MHC sinif II təqdimatı üçün ekzosoma əsaslanan antigenin ötürülməsi qrip hemaglutininin reseptor bağlama fəaliyyəti ilə asanlaşdırılır. J. İmmunol. 185, 6608–6616 (2010).

Skokos, D. et al. Mast hüceyrələrindən əldə edilən ekzosomlar dendritik hüceyrələrin fenotipik və funksional yetkinləşməsinə səbəb olur və spesifik immun reaksiyalar yaradır. in vivo. J. İmmunol. 170, 3037–3045 (2003).

Zeelenberg, I. S. et al. Şiş antigenlərinin ifraz olunmuş membran veziküllərinə yönəldilməsi in vivo effektiv antitümör immun cavabları yaradır. Xərçəng Res. 68, 1228–1235 (2008).

Alvarez-Erviti, L. et al. Hədəflənmiş ekzosomların sistemli yeridilməsi ilə siRNA-nın siçan beyninə çatdırılması. Təbiət biotexnologiyası. 29, 341–345 (2011).

Delcayre, A. et al. Exosome displey texnologiyası: yeni diaqnostika və terapevtikanın inkişafı üçün tətbiqlər. Qan Hüceyrələri Mol. Dis. 35, 158–168 (2005).

El Shikh, M. E. & Pitzalis, C. Sağlamlıq və xəstəlikdə follikulyar dendritik hüceyrələr. Ön. İmmunol. 3, 292 (2012).

Denzer, K. et al. Follikulyar dendritik hüceyrələr səthində MHC sinif II ifadə edən mikroveziküllər daşıyır. J. İmmunol. 165, 1259–1265 (2000).

Kranich, J. et al. Follikulyar dendritik hüceyrələr Mfge8 ifraz etməklə apoptotik cisimlərin udulmasına nəzarət edir. J. Exp. Med. 205, 1293–1302 (2008).

Papp, K. et al. B limfositləri və makrofaqlar hüceyrə membranında yatırılmış C3 fraqmentlərini T hüceyrə reaksiyasını gücləndirən ekzosomlara buraxırlar. Mol. İmmunol. 45, 2343–2351 (2008).

Clayton, A., Harris, C. L., Court, J., Mason, M. D. & Morgan, B. P. Antigen təqdim edən hüceyrə ekzosomları CD55 və CD59 ifadəsi ilə komplement vasitəçili lizisdən qorunur. Avro. J. İmmunol. 33, 522–531 (2003).

Arita, S. et al. B hüceyrələrinin aktivləşdirilməsi ekzosomal HLA istehsalını tənzimləyir. Avro. J. İmmunol. 38, 1423–1434 (2008).

Ohno, S. et al. EGFR-yə yönəlmiş sistemli şəkildə enjekte edilmiş ekzosomlar döş xərçəngi hüceyrələrinə antitümör mikroRNT verir. Mol. Orada. 21, 185–191 (2013).

Skog, J. et al. Qlioblastoma mikrovezikülləri RNT və zülalları nəql edir ki, bu da şişin böyüməsini təşviq edir və diaqnostik biomarkerləri təmin edir. Təbiət Hüceyrə Biol. 10, 1470–1476 (2008).

Valadi, H. və b. mRNA-ların və mikroRNA-ların ekzosom vasitəçiliyi ilə ötürülməsi hüceyrələr arasında genetik mübadilənin yeni mexanizmidir. Təbiət Hüceyrə Biol. 9, 654–659 (2007). Bu əlyazma hüceyrədənkənar veziküllərdə olan mRNA və ncRNA-ların, o cümlədən miRNA-ların hüceyrələr arasında funksional mübadilə edilə biləcəyini bildirən ilk əlyazmadır.

Luo, S. S. və başqaları. İnsan villöz trofoblastları plasentaya xas mikroRNT-ləri eksozomlar vasitəsilə ana dövriyyəsinə çıxarır və ifraz edir. Biol. Reprod. 81, 717–729 (2009).

Michael, A. et al. MikroRNT biomarkerlərinin mənbəyi kimi insan tüpürcəyindən olan ekzosomlar. Oral Dis. 16, 34–38 (2010).

Nolte-'t Hoen, E. N. et al. İmmun hüceyrədən əldə edilən veziküllərdən RNT-nin dərin ardıcıllığı potensial tənzimləyici funksiyaları olan kiçik kodlaşdırmayan RNT biotiplərinin seçici birləşməsini aşkar edir. Nuklein turşuları Res. 40, 9272–9285 (2012).

Rabinowits, G., Gercel-Taylor, C., Day, J. M., Taylor, D. D. & Kloecker, G. H. Exosomal microRNT: ağciyər xərçəngi üçün diaqnostik marker. Clin. Ağciyər xərçəngi 10, 42–46 (2009).

Ohshima, K. et al. Let-7 mikroRNT ailəsi metastatik mədə xərçəngi hüceyrə xəttindəki ekzosomlar vasitəsilə hüceyrədənkənar mühitə selektiv şəkildə ifraz olunur. PLoS BİR 5, e13247 (2010).

Huan, J. et al. Kəskin miyelogen lösemi ekzosomları ilə RNT ticarəti. Xərçəng Res. 73, 918–929 (2013).

Mittelbrunn, M. et al. MikroRNT yüklü ekzosomların T hüceyrələrindən antigen təqdim edən hüceyrələrə bir istiqamətli köçürülməsi. Təbiət kommunası. 2, 282 (2011).

Montecalvo, A. et al. Siçan dendritik hüceyrələri arasında funksional mikroRNT-lərin ekzosomlar vasitəsilə ötürülməsi mexanizmi. qan 119, 756–766 (2012). Bu əlyazma, DC-lərin yetişməsindən asılı olaraq fərqli miRNA-ları olan ekzosomları buraxdığını göstərir. Üstəlik, ekzosomların öz ekzosom məzmununu DC sitozoluna buraxmaq üçün hədəf DC-lərlə birləşdiyini göstərir.

Parolini, I. et al. Mikromühit pH şiş hüceyrələrində ekzosom hərəkəti üçün əsas amildir. J. Biol. Kimya. 284, 34211–34222 (2009).

Pegtel, D. M. və başqaları. Ekzosomlar vasitəsilə viral miRNA-ların funksional çatdırılması. Proc. Natl akad. Sci. ABŞ 107, 6328–6333 (2010).

Bhatnagar, S., Shinagawa, K., Castellino, F. J. & Schorey, J. S. Hüceyrədaxili patogenlərlə yoluxmuş makrofaqlardan ayrılan ekzosomlar proinflamatuar reaksiyanı stimullaşdırır. in vitroin vivo. qan 110, 3234–3244 (2007).

MacKenzie, A. et al. Mikroveziküllərin tökülməsi ilə interleykin-1β-nin sürətli ifrazı. İmmunitet 15, 825–835 (2001).

Pizziran, C. və başqaları. P2 reseptorlarının stimullaşdırılması insan dendritik hüceyrələrindən IL-1β yüklü mikroveziküllərin sərbəst buraxılmasına səbəb olur. qan 109, 3856–3864 (2007).

Qu, Y., Franchi, L., Nunez, G. & amp Dubyak, G. R. P2X7 reseptorları tərəfindən stimullaşdırılan qeyri-klassik IL-1β sekresiyası iltihabın aktivləşməsindən asılıdır və fare makrofaqlarında ekzosomların sərbəst buraxılması ilə əlaqələndirilir. J. İmmunol. 179, 1913–1925 (2007).

Peters, P. J. et al. Sitotoksik T-limfosit qranulları həm perforin, həm də qranzimləri ehtiva edən sekretor lizosomlardır. J. Exp. Med. 173, 1099–1109 (1991).

Monleon, I. et al. İnsan T hüceyrələrinin aktivləşməsi ilə bağlı ölümü zamanı Fas liqandının və ya APO2 liqandının/TNF ilə əlaqəli apoptoza səbəb olan ligand daşıyan mikrovesiküllərin diferensial sekresiyası. J. İmmunol. 167, 6736–6744 (2001).

Zuccato, E. et al. Fas liqandının sekretor lizosomlara çeşidlənməsi mono-ubiqutilizasiya və fosforlaşma ilə tənzimlənir. J. Cell Sci. 120, 191–199 (2007).

Munich, S., Sobo-Vujanovic, A., Buchser, W. J., Beer-Stolz, D. & Vujanovic, N. L. Dendritik hüceyrə ekzosomları birbaşa şiş hüceyrələrini öldürür və TNF superfamily liqandları vasitəsilə təbii öldürücü hüceyrələri aktivləşdirir. Onkoimmunologiya 1, 1074–1083 (2012).

Andreola, G. et al. FasL daşıyan mikroveziküllərin şiş hüceyrə sekresiyası ilə limfosit apoptozunun induksiyası. J. Exp. Med. 195, 1303–1316 (2002).

Frangsmyr, L. et al. İnsanın erkən plasentasında Fas liqandının sitoplazmik mikrovezikulyar forması: toxuma immun imtiyaz fərziyyəsinin hüceyrə səviyyəsindən vezikulyar səviyyəyə keçməsi. Mol. zümzümə. Reprod. 11, 35–41 (2005).

Skokos, D. et al. Mast hüceyrəsindən asılı B və T limfositlərinin aktivləşdirilməsi immunoloji aktiv ekzosomların ifrazı ilə həyata keçirilir. J. İmmunol. 166, 868–876 (2001).

Sprague, D. L. et al. Adaptiv toxunulmazlığın trombosit vasitəçiliyi ilə modulyasiyası: trombositlərdən əmələ gələn membran vezikülləri ilə CD154 siqnalının unikal çatdırılması. qan 111, 5028–5036 (2008).

Esser, J. et al. İnsan makrofaqlarından və dendritik hüceyrələrdən olan ekzosomlar leykotrienlərin biosintezi üçün fermentləri ehtiva edir və qranulositlərin miqrasiyasını təşviq edir. J. Allergiya Klinikası. İmmunol. 126, 1032–1040. e1–4 (2010).

Zhang, H. G. və başqaları. Ekzosomlar tərəfindən təqdim olunan TNFα-nın membran forması T hüceyrələrinin aktivləşməsi nəticəsində yaranan hüceyrə ölümünü gecikdirir. J. İmmunol. 176, 7385–7393 (2006).

Skriner, K., Adolph, K., Jungblut, P. R. & Burmester, G. R. Sinovial ekzosomlarla sitrulinləşdirilmiş zülallar birliyi. Artrit Rheum. 54, 3809–3814 (2006).

Anderson, H. C., Mulhall, D. & amp Garimella, R. Xərçəng, böyrək xəstəlikləri, ateroskleroz və artrit daxil olmaqla müxtəlif xəstəliklərin patogenezində hüceyrədənkənar membran veziküllərinin rolu. Laboratoriya İnvestisiya. 90, 1549–1557 (2010).

Ostman, S., Taube, M. & amp Telemo, E. Tolerosoma səbəb olan oral tolerantlıq MHC-dən asılıdır. İmmunologiya 116, 464–476 (2005).

Kim, S. H., Bianco, N. R., Shufesky, W. J., Morelli, A. E. & Robbins, P. D. MHC sinif II + plazmadakı ekzosomlar iltihabı antigenə xüsusi və Fas liqand/Fasdan asılı şəkildə yatırır. J. İmmunol. 179, 2235–2241 (2007). Bu yazı göstərir ki, plazmada dövr edən APC-dən qaynaqlanan ekzosomlar antigenə spesifik immun cavabları tənzimləyə bilir.

Prado, N. et al. Tolerant siçanların bronxoalveolyar mayesindən olan ekzosomlar allergik reaksiyanın qarşısını alır. J. İmmunol. 181, 1519–1525 (2008).

Dai, S. et al. HLA-A*0201-məhdud və karsinoembrionik antigenin (CEA) spesifik CTL cavabının istiliklə stresli CEA-müsbət şiş hüceyrələrindən hazırlanmış ekzosomlarla immunizasiya yolu ilə daha səmərəli induksiyası. Clin. Xərçəng Res. 11, 7554–7563 (2005).

Huber, V. et al. İnsan kolorektal xərçəng hüceyrələri proapoptotik mikroveziküllərin sərbəst buraxılması ilə T-hüceyrəsinin ölümünə səbəb olur: immun qaçışda rol. Qastroenterologiya 128, 1796–1804 (2005).

Klibi, J. et al. Epstein-Barr virusu ilə yoluxmuş nazofaringeal karsinoma hüceyrələri tərəfindən buraxılan galektin-9 ehtiva edən ekzosomların qan diffuziyası və TH1-bastırıcı təsiri. qan 113, 1957–1966 (2009).

Taylor, D. D., Gercel-Taylor, C., Lyons, K. S., Stanson, J. & Whiteside, T. L. T-hüceyrə apoptozu və T-hüceyrə reseptorunun/CD3ζ-nin yumurtalıq şişlərindən tökülən Fas liqand tərkibli membran vezikülləri tərəfindən bastırılması. Clin. Xərçəng Res. 9, 5113–5119 (2003).

Valenti, R. et al. İnsan şişindən ayrılan mikroveziküllər, T-limfositlər üzərində transformasiya edən böyümə faktoru-β-vasitəçiliyi ilə supressiv fəaliyyətlə miyeloid hüceyrələrin diferensiasiyasını təşviq edir. Xərçəng Res. 66, 9290–9298 (2006).

Xiang, X. et al. MDSC-lərin TLR2 vasitəçiliyi ilə genişlənməsi şiş ekzosomlarının mənbəyindən asılıdır. am. J. Pathol. 177, 1606–1610 (2010).

Chalmin, F. et al. Şişdən əldə edilən ekzosomlardan membranla əlaqəli Hsp72, siçan və insan miyeloid mənşəli supressor hüceyrələrinin STAT3-dən asılı immunosupressiv funksiyasına vasitəçilik edir. J. Clin. İnvestisiya edin. 120, 457–471 (2010).

Liu, Y. et al. MyD88-in miyeloid törəmə supressor hüceyrələrinin şişin ekzosom vasitəçiliyi ilə induksiyasına töhfəsi. am. J. Pathol. 176, 2490–2499 (2010).

Yu, S. və başqaları. Şiş ekzosomları sümük iliyinin dendritik hüceyrələrinin diferensiasiyasını maneə törədir. J. İmmunol. 178, 6867–6875 (2007).

Yang, C., Kim, S. H., Bianco, N. R. & amp Robbins, P. D. Şişdən alınan ekzosomlar, siçanların gecikmiş tipli hiperhəssaslıq modelində antigenə xüsusi immunosupressiya verir. PLoS BİR 6, e22517 (2011).

Yang, C., Ruffner, M. A., Kim, S. H. & amp Robbins, P. D. Plazmadan əldə edilən MHC sinif II + şiş daşıyan siçanlardan alınan ekzosomlar şiş antigeninə xas immun cavabları boğur. Avro. J. İmmunol. 42, 1778–1784 (2012).

Castellana, D. et al. Membran mikrovezikülləri əlverişli prostatik şiş yuvasının qurulmasında aktyor kimi: aktivləşdirilmiş fibroblastlar və CX3CL1-CX3CR1 oxu üçün rol. Xərçəng Res. 69, 785–793 (2009).

Jung, T. et al. Ekzosomlar tərəfindən premetastatik niş hazırlığının CD44v6 asılılığı. Neoplaziya 11, 1093–1105 (2009).

Grange, C. et al.İnsan böyrək xərçənginin kök hüceyrələrindən ayrılan mikroveziküllər angiogenezi və ağciyərin premetastatik nişinin formalaşmasını stimullaşdırır. Xərçəng Res. 71, 5346–5356 (2011).

Hood, J. L., San, R. S. & Wickline, S. A. Melanoma hüceyrələri tərəfindən buraxılan ekzosomlar, şiş metastazı üçün gözətçi limfa düyünlərini hazırlayır. Xərçəng Res. 71, 3792–3801 (2011).

Syed, B. A. & amp Evans, J. B. Kök hüceyrə terapiyası bazarı. Nature Rev. Drug Discov. 12, 185–186 (2013).

Pittenger, M. Sleuthing, MSC-lər tərəfindən regenerasiya mənbəyidir. Hüceyrə Kök Hüceyrə 5, 8–10 (2009).

Kaplan, A. I. və Correa, D. MSC: zədə aptekləri. Hüceyrə Kök Hüceyrə 9, 11–15 (2011).

van Koppen, A. et al. İnsan embrion mezenximal kök hüceyrədən əldə edilən kondisioner mühit müəyyən edilmiş xroniki böyrək xəstəliyi olan siçovullarda böyrək funksiyasını xilas edir. PLoS BİR 7, e38746 (2012).

Timmers, L. et al. İnsan mezenximal kök hüceyrə kondisioner mühiti ilə miokard infarktının ölçüsünün azaldılması. Kök Hüceyrə Res. 1, 129–137 (2007).

Lai, R. C. və başqaları. MSC tərəfindən ifraz olunan ekzosom miokard işemiyası/reperfuziya zədəsini azaldır. Kök Hüceyrə Res. 4, 214–222 (2010).

Lai, R. C., Yeo, R. W., Tan, K. H. və Lim, S. K. Mezenximal kök hüceyrə ekzosomu proteomik tamamlama vasitəsilə reperfuziya zədələnməsini yaxşılaşdırır. Regen. Med. 8, 197–209 (2013).

Bruno, S. et al. Mezenximal kök hüceyrələrdən əldə edilən mikroveziküllər kəskin böyrək zədəsinin ölümcül modelində sağ qalmağı artırır. PLoS BİR 7, e33115 (2012).

Cantaluppi, V. et al. Endotelial progenitor hüceyrələrdən əldə edilən mikroveziküllər rezident böyrək hüceyrələrinin mikroRNT-dən asılı olaraq yenidən proqramlaşdırılması ilə böyrəyi işemiya-reperfuziya zədəsindən qoruyur. Böyrək Int. 82, 412–427 (2012).

Arslan, F. və b. Mezenximal kök hüceyrədən əldə edilən ekzosomlar ATP səviyyələrini artırır, oksidləşdirici stressi azaldır və miokardın canlılığını artırmaq və miokard işemiyası/reperfuziya zədələnməsindən sonra mənfi remodelin qarşısını almaq üçün PI3K/Akt yolunu aktivləşdirir. Kök Hüceyrə Res. 10, 301–312 (2013).

Tomson, A. W. və Robbins, P. D. Otoimmün xəstəlik və transplantasiya üçün tolerogen dendritik hüceyrələr. Ann. Reum. Dis. 67 (Əlavə 3), 90–96 (2008).

Kim, S. H. və başqaları. IL-4-ü ifadə etmək üçün genetik olaraq dəyişdirilmiş dendritik hüceyrələrin sistemli tətbiqi ilə qurulmuş siçan kollageninin səbəb olduğu artritin effektiv müalicəsi. J. İmmunol. 166, 3499–3505 (2001).

Kim, S. H., Kim, S., Oligino, T. J. & amp Robbins, P. D. FasL-ni ifadə etmək üçün genetik olaraq dəyişdirilmiş dendritik hüceyrələrin sistemli tətbiqi ilə qurulmuş siçan kollageninin səbəb olduğu artritin effektiv müalicəsi. Mol. Orada. 6, 584–590 (2002).

Ruffner, M. A. və Robbins, P. D. İnterlökin 4-ü ifadə etmək üçün ötürülən dendritik hüceyrələr həm normoqlikemik, həm də obez olmayan diabetik siçanlarda diabetin başlanğıcını azaldır. PLoS BİR 5, e11848 (2010).

Kim, S. H. və başqaları. IL-10 ilə müalicə olunan dendritik hüceyrələrdən əldə edilən ekzosomlar iltihabı və kollagenin səbəb olduğu artriti yatıra bilər. J. İmmunol. 174, 6440–6448 (2005).

Ruffner, M. A. və başqaları. B7-1/2, lakin PD-L1/2 molekulları deyil, IL-10 ilə müalicə olunan tolerogen DC və DC-dən alınan ekzosomlarda tələb olunur. in vivo funksiyası. Avro. J. İmmunol. 39, 3084–3090 (2009).

Kim, S. H. və başqaları. FasL ifadə edən genetik cəhətdən dəyişdirilmiş DC-dən əldə edilən ekzosomlar iltihab əleyhinə və immunosupressivdir. Mol. Orada. 13, 289–300 (2006).

Bianco, N. R., Kim, S. H., Ruffner, M. A. & amp Robbins, P. D. Kollagenin səbəb olduğu artrit və gecikmiş tipli hiperhəssaslıq xəstəliyi modellərində indoleamin 2,3-dioksigenaz-pozitiv dendritik hüceyrələrdən olan ekzosomların terapevtik təsiri. Artrit Rheum. 60, 380–389 (2009).

Peçe, H. və başqaları. Tamamilə MHC ilə uyğun olmayan siçovulların ürək alloqraft modelində ekzosomlar və qısamüddətli immunosupressiya ilə tolerantlığın induksiyası. am. J. Transplantasiya. 6, 1541–1550 (2006).

Li, X. və başqaları. Siçan ürək alloqreft modelində yetişməmiş dendritik hüceyrələrdən və rapamisindən olan ekzosomlar tərəfindən tolerantlıq induksiyası. PLoS BİR 7, e44045 (2012).

Admyre, C. et al. İnsan BAL mayesində əsas histouyğunluq kompleksi II sinif və birgə stimullaşdırıcı molekullara malik ekzosomlar mövcuddur. Avro. Tənəffüs. J. 22, 578–583 (2003).

Zhou, Q. et al. İmmunitetlə əlaqəli mikroRNT-lər ana südü ekzosomlarında boldur. Int. J. Biol. Sci. 8, 118–123 (2012).

Admyre, C. et al. İmmun modulator xüsusiyyətləri olan ekzosomlar insan ana südündə mövcuddur. J. İmmunol. 179, 1969–1978 (2007).

Sabapatha, A., Gercel-Taylor, C. & amp Taylor, D. D. Hamilə qadınların dövranından plasentadan əldə edilən ekzosomların xüsusi təcrid edilməsi və onların immunorequlyasiya nəticələri. am. J. Reprod. İmmunol. 56, 345–355 (2006).

Morse, M. A. və başqaları. İnkişaf etmiş qeyri-kiçik hüceyrəli ağciyər xərçəngi olan xəstələrdə deksosome immunoterapiyasının I mərhələsi. J. Tərcümə. Med. 3, 9 (2005).

Escudier, B. et al. Otolog dendritik hüceyrə (DC) törəmə-ekzosomları olan metastatik melanoma xəstələrinin peyvəndi: birinci faza I klinik sınaqların nəticələri. J. Tərcümə. Med. 3, 10 (2005).

Bu, N. et al. Ekzosom yüklü dendritik hüceyrələr gliomalı xəstələrdə şişə xas CD8 + sitotoksik T hüceyrələrini meydana gətirir. J. Neurooncol. 104, 659–667 (2011).

Viaud, S. et al. Klinik dərəcəli yüksək immunogenik dendritik hüceyrədən alınan ekzosomların istehsalı üçün yenilənmiş texnologiya: interferon-γ-nın kritik rolu. J. İmmunother. 34, 65–75 (2011).

Zhang, Y. et al. IL-12-lə bağlanmış böyrək xərçəngi hüceyrələrindən əldə edilən ekzosomlar spesifik antitümör reaksiyasının induksiyasını artırır. in vitro: böyrək hüceyrəli karsinoma üçün yeni bir peyvənd. Int. J. Oncol. 36, 133–140 (2010).

Yang, Y. et al. İnterleykin-2 genlə modifikasiya olunmuş şiş hüceyrələrindən əldə edilən ekzosomlar tərəfindən antitümör reaksiyasının artması. J. Xərçəng Res. Clin. Oncol. 133, 389–399 (2007).

Xiu, F. et al. Superantigen SEA-nın səthi ankrajı şişdən əldə edilən ekzosomlar tərəfindən spesifik antitümör immun cavabının induksiyasına kömək edir. J. Mol. Med. (Berl.) 85, 511–521 (2007).

Chen, W. et al. İstilik şokuna məruz qalmış lenfoma hüceyrələrindən əldə edilən ekzosomlar tərəfindən antitümör T hüceyrə toxunulmazlığının effektiv induksiyası. Avro. J. İmmunol. 36, 1598–1607 (2006).

Cho, J. A., Lee, Y. S., Kim, S. H., Ko, J. K. və Kim, C. W. MHC müstəqil anti-şiş immun reaksiyaları Hsp70 ilə zənginləşdirilmiş ekzosomlar tərəfindən induksiya edilən siçan modellərində şiş reqressiyasını yaradır. Xərçəng Lett. 275, 256–265 (2009).

Bobrie, A. et al. Rab27a şiş mikromühitini dəyişdirən və şişin inkişafını təşviq edə bilən ekzosomdan asılı və müstəqil mexanizmləri dəstəkləyir. Xərçəng Res. 72, 4920–4930 (2012).


MÜZAKİRƏ

MHC sinif I və II sinif yükləmə yollarının ciddi şəkildə ayrılması MHC sinif I molekullarının ekzogen antigenlərdən əldə edilən peptidləri əldə edə biləcəyini göstərən son hesabatlarla etiraz edilmişdir (res. 2, 3 və 26-da nəzərdən keçirilir). Ekzogen antigenlər aşağı pH-da aktiv olan proteazlar tərəfindən endositik bölmələrdə daxililəşdirilir və parçalanır. Endosomal/lizosomal deqradasiya nəticəsində yaranan belə peptidlərin I sinif molekullarına harada və necə yükləndiyi sualı hələ də müzakirə mövzusudur. Burada biz göstəririk ki, stabil sinif I-peptid kompleksləri adətən MHC II sinif molekullarını yükləmək üçün nəzərdə tutulmuş MIIC kimi tanınan endositik bölmələrə daxil ola bilir.

HLA-A2 ağır zəncirini GFP ilə işarələməklə biz bu sinif I molekulların kiçik bir hissəsinin CD63 və MHC sinif II molekullarını ehtiva edən turşu bölmələrində tapıla biləcəyini göstərə bildik. II sinif molekullarından fərqli olaraq, bu bölmələrdəki HLA-A2-GFP molekulları birbaşa biosintetik yoldan əldə edilmir, çünki periferik flüoresan veziküllər BFA ilə 4 saat ərzində inkubasiya edildikdən sonra hələ də aşkar edilə bilər. Bu tapıntı onu göstərir ki, bu MHC sinif I molekulları hüceyrə səthindən MHC sinif II hüceyrədaxili yolu ilə kəsişdiyi endositik yola yönəldilir. Bu MHC sinif I molekulları beləliklə endosomların turşu mühitinə məruz qalırlar. Biz göstəririk ki, pH 5.0 MHC sinif I kompleksləri öz peptidlərini buraxırlar, bu isə o deməkdir ki, bu pH-da bəzi peptidlər yüksək yaxınlıqla bağlana bilən peptid-qəbuledici MHC sinif I molekulları əmələ gəlir (27). Buna görə də belə nəticəyə gəlirik ki, bu peptid-qəbuledici MHC sinif I molekullarının endo/lizosomal bölmələrdə və/yaxud plazma membranında yenidən görünməsindən sonra yenidən yüklənməsi baş verə bilər. Bu fərziyyə sabit MHC sinif I komplekslərinin DGE fraksiyaları ilə MIIC-lərdə aşkar oluna bilməsi ilə təsdiqlənir. 5.0-dən aşağı pH-da, β2m MHC sinif I ağır zəncirindən ayrılır. Yaranan sərbəst ağır zəncir çox güman ki, fraksiyalaşdırma tədqiqatlarımızda onu aşkar edə bilmədiyimiz üçün sürətlə parçalanır, halbuki MIIC veziküllərində mövcud olan MHC sinif I-peptid kompleksləri plazma membranına təkrar emal edilə bilər.

HLA-B27-nin yüksək hüceyrə səthi səviyyələrini ifadə edən TAP çatışmazlığı olan hüceyrələr TAP-dan asılı olmayan şəkildə MV-F protein peptidini təqdim edə bilər. HLA-B27-nin aşağı hüceyrə səthi ifadəsi olan TAP çatışmazlığı olan hüceyrələrdə bu fenomen müşahidə edilmir (5). Bu tapıntı göstərir ki, yüksək hüceyrə səthi ifadəsi, yəqin ki, kifayət qədər miqdarda HLA-B27-nin endosomal bölmələrə keçməsinə və sağ qalmasına imkan verir, burada MV epitopunun bağlanması baş verir, sonra hüceyrə səthində təqdim olunur. Bundan əlavə, MV-F protein epitoplarının bir neçə B hüceyrə xətti ilə I sinif təqdimatının NH tərəfindən ciddi şəkildə maneə törədildiyini müşahidə etdik.4Cl. Son zamanlarda viral infeksiyalara CTL cavablarının başlaması üçün MHC sinif I tərəfindən ekzogen antigenlərin təqdim edilməsinin əhəmiyyəti göstərilmişdir (26). Müəlliflər TAP-dan asılı ekzogen MHC sinif I yolunu təklif etdilər. Nəticələrimiz hüceyrə səthi MHC sinif I molekullarının endositozlaşdırıldığı və MHC sinif II bölmələrinə gəldiyi alternativ modeli dəstəkləyir. Bu bölmələrdə MHC sinif I molekulları öz peptidlərini buraxırlar və ekzogen peptidlər burada və ya hüceyrə səthində yenidən göründükdən sonra bağlana bilər. Maraqlıdır ki, təqdimatı hsp73-əlaqəli peptidlər TAP müstəqil və NH-dir4Cl həssas (28). Alınması hsp73-görüntülədiyimiz təkrar emal MHC sinif I yolunda əlaqəli peptidlər inandırıcı mexanizm kimi görünür.

Çarpaz astarlama zamanı immunogen hüceyrələrdən antigen materialı sahibinin peşəkar antigen təqdim edən hüceyrələrinə köçürülür və bununla da CTL reaktivliyini induksiya edir. Antigen fraqmentlərinin I sinif yoluna çatma mexanizmi çox aydın deyil, lakin MHC sinif I molekullarını təkrar emal etməklə mənimsənilməsi səmərəli mexanizm olardı. Dendritik hüceyrələr və makrofaqlar üçün gözlənildiyi kimi yüksək plazma membran dövriyyəsi olan hüceyrələr apoptotik cismin qəbulu zamanı bir çox səth sinif I molekullarını birləşdirəcəklər (29). Antigen qəbul edildikdən sonra peşəkar antigen təqdim edən hüceyrələrin aktivləşdirilməsi yolu ilə MIIC-lərin pH-nin tənzimlənməsi (B hüceyrələri üçün təsvir 30) bu mexanizmi daha da səmərəli edə bilər. Əksinə, NH kimi lizosomotrofik agentlər tərəfindən aşağı pH-ın pozulması4Cl və ya xlorokin lizosomlardakı MHC sinif I komplekslərindən peptidlərin salınmasının qarşısını ala bilər, nəticədə bu bölmələrdə peptid qəbuledici MHC sinif I kompleksləri yoxdur. Ola bilər ki Mikobakteriya faqosomların turşulaşmasının qarşısını alaraq hüceyrədaxili yaşamaq üçün oxşar strategiyadan istifadə edir (31). Buna görə də, ekzogen antigenləri təqdim edən MHC sinif I komplekslərinin təkrar emal hissəsi endosomal pH-a təsir edən amillərə yüksək həssas ola bilər, çünki peptid mübadiləsi, göstərdiyimiz kimi, yalnız müvafiq aşağı pH-da səmərəli şəkildə baş verə bilər.


Videoya baxın: IMMUNOLOGY CLASS: MHC Major Histocompatability Complex - PART III (BiləR 2022).