Məlumat

Kartof dekstroz aqarında bakteriya yetişdirə bilərəmmi?

Kartof dekstroz aqarında bakteriya yetişdirə bilərəmmi?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Kartof dekstroz ağarının bakteriyalar üçün uyğun bir mühit olub-olmadığı ilə maraqlanırdım. Bakteriyaların ehtiyac duyduğu bütün tələblərə malikdirmi, yoxsa məhduddur? Konkret olaraq: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecium, Pseudomonas aeruginosa.


Sorğuladığım bakteriyalar haqqında spesifikasiyaları bilmədən bu qeyri-müəyyən saxlanılacaq.

Ümumiyyətlə, bəli, bəzi bakteriyalar PDA boşqabından istifadə etməklə yetişdirilə bilər. Plitədə kartof nişastası agar və dekstroza var. Bəzən arzuolunmaz bakteriya koloniyalarının əmələ gəlməsini dayandırmaq üçün tartarik turşusu əlavə edilir ki, bu da onların boşqabda əmələ gəlməsinin nə dərəcədə mümkün olduğunu bir daha vurğulayır. Tartar turşusunun təsir mexanizmi əksər bakteriyaların fizioloji diapazonundan kənarda pH-ı aşağı salmaqdır.


Sabouraud Dextrose Agar (SDA) – Tərkibi, Prinsip, İstifadəsi, Hazırlanması və Koloniya Morfologiyası

Sabouraud Dextrose Agar (SDA) patogen olmayan və patogen növlərin təcrid edilməsi, becərilməsi və saxlanması üçün istifadə olunur. göbələklərmayalar. SDA 1892-ci ildə Sabouraud tərəfindən dermatofitlərin becərilməsi üçün hazırlanmışdır. Xüsusilə göbələklərin böyüməsini artırmaq üçün pH təxminən 5.6-a düzəldilir dermatofitlərvə klinik nümunələrdə bakteriya artımını bir qədər maneə törətmək.


Potato Dextrose Agar (PDA) – Hazırlanması, Prinsip, Tərkibi və İstifadəsi

Göbələklərin becərilməsi üçün istifadə edilən xüsusi bir agar növüdür. Maya və kif yetişdirmək üçün istifadə olunan ümumi təyinatlı mühitdir. Böyüməni maneə törətmək üçün müəyyən bir növ turşu və ya antibiotik istifadə olunur. Müxtəlif məqsədlər üçün istifadə olunur, məsələn:

  • Hazırlanmış qidalarda və süd məhsullarında kif və maya varlığını aşkar etmək üçün istifadə olunur.
  • Klinik nümunədən maya və kif yetişdirmək üçün istifadə olunur.
  • PDA, tartarik turşusu ilə qarışdırıldıqda, süd və qida məhsullarının mikrobioloji müayinəsi üçün faydalıdır.
  • PDA, xloramfenikol ilə birlikdə istifadə edildikdə, qarışıq nümunədən göbələklərin selektiv becərilməsi üçün istifadə olunur.
  • PDA, xlortetrasiklinlə qarışdırıldıqda, kosmetik məhsullardakı kif və mayaların mikrobial siyahıya alınmasında faydalıdır.
  • Xlortetrasiklinli Potato Dextrose Agar kosmetikadan olan maya və kalıbın mikrobial siyahıya alınması üçün tövsiyə olunur.
  • O, patogen və qeyri-patogen göbələklərin yetişdirilməsinə və fərqləndirilməsinə kömək edir. (1, 2, 3, 4 və 5)

Şəkil 1: Soldakı şəkildə kartof dekstroz ağarında A. flavus böyüməsi, sağdakı isə P.chrysogenum göstərilir.

Şəkil Mənbəsi:encrypted-tbn0.gstatic.com

Şəkil 2: Yuxarıdakı fotoşəkil standart kartof dekstroz agar boşqabıdır.

Şəkil Mənbəsi:encrypted-tbn0.gstatic.com

Kartof dekstroz aqarının prinsipi nədir?

Tərkibində dekstroz və susuzlaşdırılmış kartof infuziyası var ki, bu da gur göbələk böyüməsini təşviq edir. Möhkəmləşdirici agent agardır. Bakteriyaların böyüməsini maneə törətmək üçün mühitin pH səviyyəsi müəyyən bir miqdarda 10% steril tartarik turşusu istifadə edərək aşağı salınır.

Qarışıq nümunədən rəqabət aparan mikroorqanizmlərin həddindən artıq böyüməsini maneə törətmək üçün xloramfenikol şəklində selektiv agent istifadə olunur. Həddindən artıq böyüməni maneə törədir və eyni zamanda göbələklərin təcrid olunmasına imkan verir. Turşulaşdırılmış mühit yenidən qızdırılmamalıdır, çünki bu, agarı hidrolize edəcək və bu, agarın bərkiməsinə səbəb olacaqdır. (5, 6)

Kartof dekstroz aqarının tərkib hissələri hansılardır?

  • Dekstroz
  • Kartof ekstraktı
  • Ağar
  • Əlavə tartar turşusu, xlortetrasiklin və xloramfenikol şəklində əlavə edilə bilər. (5, 6 və 7)

Kartof dekstroz agar mediasını necə hazırlayırsınız?

  1. Kartof dəmləməsi – qabığı soyulmuş və dilimlənmiş kartofu bir litr distillə edilmiş suda təxminən 30 dəqiqə qaynatmaq lazımdır.
  2. Bir cuna istifadə edərək, kartof infuziyasını süzün və tullantıları saxlayın.
  3. İnfüzyonu agar, dekstroza və su ilə qarışdırın və həll etmək üçün qaynadək gətirin.
  4. 121 dərəcə Selsi temperaturunda 15 dəqiqə avtoklavda saxlayın.
  5. Steril petri qabına təxminən 25 ml tökün.
  6. Son pH 5,6 ± 0,2-dir.
  7. Ticari orta tozdan istifadə edəcəksinizsə, bir litr distillə edilmiş suya 39 qram kartof dekstroz agar tozu əlavə etməlisiniz. Qaynamağa gətirin və tozu həll etmək üçün davamlı qarışdırın. Eyni temperaturda və eyni vaxtda avtoklav.
  8. Əlavələr əlavə edilərsə, onlar nəzarət olunan miqdarda olmalıdır - xlortetrasiklin 40 mq, xloramfenikol 25 mq, tartarik turşusu 1,4 mq.
  9. Nümunəni emal etmək üçün tədqiq olunan nümunəni steril peyvənd dövrəsindən istifadə edərək mühitə axın.
  10. Plitə 25-30 dərəcə Selsi temperaturunda ters çevrilmiş vəziyyətdə inkubasiya edilməlidir.
  11. Mədəniyyət hər həftə göbələk inkişafı üçün yoxlanılmalıdır. Mənfi nəticə əldə edilməzdən əvvəl mədəniyyət ən azı altı həftə saxlanılmalıdır. (1, 5, 9 və 10)

Şəkil 3:Kartof dekstroz ağarında Aspergillus böyüməsi.

Şəkil Mənbəsi:encrypted-tbn0.gstatic.com

Kartof dekstroz ağarında koloniyanın xüsusiyyətləri.

  • Yuxarı səthdə toz kimi görünən sarı-yaşıl sporlar, alt səth isə qırmızı-qızıl rəngdədir. – Aspergillus flavus.
  • Üst səth steril ağ kənar ilə zeytun-yaşıl görünür. Aşağı səth narıncıdan qırmızıya qədər olan qırışmış görünür. – Penicillium chrysogenum.
  • Koloniya qalın və məxmər kimi görünür. Səthdə krem ​​ağ görünür və aşağı səthdə radial şırımlı görünür. - Candidus.
  • Koloniya səthində ağ və qara sporlarla məxmər kimi görünür. Aşağı səthi sarı və ağır şırımlıdır. - Niger.
  • Koloniya, mərkəzdə sarımtıl məsamələri olan çirkli ağdır. Məxmər kimi görünür və alt səthi narıncıdan şokolad rənginə qədər fərqlənir. - Kükürd.
  • Səthi ağdan narıncı-krem rənginə qədər yaşıl rəngli flokoz toxumasına malikdir. Aşağı səth parlaq narıncı və güclü qırışlı görünür. - Versirəngli.
  • Səth rəngi məxmər toxuması ilə tünd yaşıldır. Aşağı səthi rəngsizdən krem ​​rəngə qədər, dayaz mərkəz və şırımlı qaldırılmış kənardır. – Penicillium corylophilum.
  • Tünd yaşıl səthə malik məxmərli teksturaya malikdir. Aşağı səth sarı və radial şırımlı görünür. – P. expansum.
  • Koloniya flokoz toxumasına malikdir və səthdə çəhrayı görünür. Aşağı səth qırmızı-bənövşəyi rəngdədir. - Fusarium oxysporum. (2, 4, 7 və 10)

Kartof dekstroz agar selektivdir, yoxsa diferensial?

Kartof dekstroz aqar həm seçici mühitdir. Bununla belə, bir neçə məhdudiyyət var. Tam identifikasiya üçün əvvəlcə təmiz kulturadan alınan koloniyalarda biokimyəvi, molekulyar, kütləvi spektrometriya və immunoloji testlər aparılmalıdır.


Kartof dekstroz aqarında bakteriya yetişdirə bilərəmmi? - Biologiya

Yazan: Jasalavich, C.A. və G.L. Schumann. 2001. Bunu Kim Etdi? Yaxud mənim gavalimdəki qəhvəyi qeyri-səlis şey nədir? Bitki Sağlamlığı Təlimçisi.
DOI: 10.1094/PHI-K-2001-1128-01

Dəyişdirən: Rachel Hughes və Kirstin Bittel

• Protokol Vərəqi
• daş meyvə (şaftalı, nektarin, gavalı, albalı)
• kartof dekstroza agar boşqabları (3 seçim):

1) əvvəlcədən hazırlanmış lövhələr alın (əlavə materiallara ehtiyac yoxdur)
2) alınmış susuzlaşdırılmış kartof dekstroz agar mühitindən lövhələr hazırlayın
3) kartof, dekstroz və agardan boşqab hazırlayın

• (2) və (3) variantları üçün kolbalar, distillə edilmiş su, avtoklav və Petri lövhələri tələb olunacaq.

• kəsici iynələr
• skalpellər və ya bir kənarlı ülgüclər
• 95% spirt
• uyğun gəlir
• forseps
• Spirt lampası və ya şam alovu diseksiyon iynələri və bıçaqları sterilizasiya etmək üçün
• 10% (v/v) kommersiya ağartıcı məhlulu
• steril distillə edilmiş su
• kağız dəsmallar
• plastik qapaqlı qutu
• plastik torbalar bükülmüş bağlarla
• kəsici mikroskop
• mürəkkəb mikroskop
• mikroskop slaydları
• qapaq sürüşmələri
• damcılı şüşə distillə edilmiş su

mücərrəd
Laboratoriya təcrübəsi vasitəsilə tələbələr daş meyvələrdə xəstəliyin səbəbini müəyyən etmək üçün Koch'un postulatlarından istifadə edirlər. Şagirdlər həm meyvələrdə xəstəliyin kök səbəbini, həm də səbəbin necə aşkar edildiyini izah edirlər.

Məqsədlər
Tələbələr aşağıdakıları edə biləcəklər:

i. Spesifik bir orqanizmin spesifik xəstəliyin əsas səbəbi olduğunu müəyyən etmək üçün Koch'un Postulatlarından istifadə edin və Koch'un Postulatlarının protokol daxilində nə olduğunu müəyyənləşdirin.
ii. Xəstə meyvələrin əlamətlərini və əlamətlərini təsvir edin. Mantar patogenini qidalı mühitdə təcrid edin.


Milli Elm Təhsili Standartı:
Məzmun Standartı G
• Elm insan səyi kimi
• Elmi Biliyin Təbiəti


Müəllim fonu
Həm bitkilər, həm də heyvanlar patogenlər səbəbindən xəstələnə bilər. Bu xəstəliyə səbəb olan patogenlər canlı orqanizmlər (bakteriyalar, viruslar və ya göbələklər), həmçinin abiotik agentlər (məsələn, havanın çirklənməsi) ola bilər. Robert Koch (1843-1910) xəstəliyin bir mikrob tərəfindən törədilməsini təsdiqləmək üçün elmi üsul hazırladı. Onun meyarlarına Koch'un postulatları deyilir. Hələ də geniş istifadə olunsa da, molekulyar üsullar xəstəliyin identifikasiyasına yeni ölçü əlavə etmişdir. Koch'un postulatları ilə müəyyən edilə bilməyən bəzi xəstəliklərin agentləri indi molekulyar üsullarla müəyyən edilə bilər.

Monilinia fructicola, daş meyvələrin (çuxurlu meyvələr, yəni gavalı, şaftalı və s.) qəhvəyi çürüməsinə səbəb olan, asanlıqla əldə edilə bilən bir göbələk patogenidir və mədəniyyət lövhələrinə və ya bir neçə həftəlik müalicəyə ehtiyac olmadan Xəstəliyin Mikrob Nəzəriyyəsinin sadə nümayişi üçün istifadə edilə bilər. dərs vaxtı. Koch'un Postulatları və onların nəticələrinin müzakirəsi daxil edilə bilər. Yoluxmuş meyvələri supermarketlərdə və ya fermer bazarlarında əldə etmək olar və ya yuxarıda təsvir olunduğu kimi təzə yoluxmuş meyvələr istehsal oluna bilər.

Şagirdlər sağlam meyvələri aşılamaq üçün yoluxmuş meyvənin sporlarından istifadə edə bilərlər. Onlar həmçinin nəzarət kimi dezinfeksiya edilmiş, yaralı meyvələr hazırlamalıdırlar. Hər iki meyvə otaq temperaturunda beş-yeddi gün ərzində ayrı-ayrı plastik torbalarda inkubasiya edilməlidir. Mümkün olduqda, albalı eyni sayda gavalı və ya digər daş meyvələrdən daha az qiymətə çoxlu meyvə təmin etmək üçün istifadə edilə bilər. Təcrübə üçün sağlam meyvə seçməyə diqqət yetirin. Bir az yetişməmiş meyvələrin xəstəlikdən azad olma ehtimalı daha yüksəkdir.


Əlaqədar və Resurs Vebsaytları

Səbəb olan sakit infeksiyalar Monilinia fructicola gavalı meyvələrində kiçik ləkələr şəklində göstərilir.
(Orijinal şəkil Oqava və İngilis dilinə aiddir, 1991).

Laboratoriyadan əvvəl hazırlıq

Kartof dekstroz agar boşqablarının hazırlanması

1. Kartof dekstroz aqar plitələri və ya kartof dekstrozunun susuzlaşdırılmış mühitini Carolina Biological Supply Co. (http://www.carolina.com) və Ward's Natural Science Establishment, Inc. (http://www.wardsci. com). Susuzlaşdırılmış mühit alınarsa, plitələrin hazırlanması üçün təlimatlar daxil ediləcək.
2. Aşağıdakı istiqamətlərə uyğun olaraq kartofdan, dekstrozadan və agardan kartof dekstrozlu agar boşqabları hazırlana bilər:
3. 200 qram qabığı soyulmuş və dilimlənmiş kartofu 1 litr suda kartof yumşalana qədər qaynadın. Dəzdən süzün və filtratı daha çox distillə edilmiş su ilə 1 litrə tənzimləyin.
4. 10-20 qram dekstroza və 12-17 qram agar əlavə edin. Avtoklavda 15 dəqiqə 121°C-də.
5. Otoklavlanmış mühiti steril Petri plitələrinə tökün. Təxminən 40 boşqab hazırlayır.

10% (v/v) ağartıcı məhlulun hazırlanması

Sinifdə istifadə üçün qəhvəyi çürüklü meyvələrin hazırlanması

1. Mədəniyyətləri saxlamaq və ya satın almaq istəməyən müəllimlər üçün bu göbələyi yalnız daş meyvələr (şaftalı, nektarin, gavalı, albalı) alıb otaq temperaturunda plastik və ya kağız torbada saxlamaqla tapmaq asandır. Onlar tez-tez artıq yoluxmuş olurlar və infeksiya bir həftə ərzində inkişaf edəcək, nəticədə meyvə səthində açıq qəhvəyi sporlar görünür. Bu meyvələrdən olan təcridlər bakteriya və digər göbələklərlə çirklənə bilər, buna görə də qəsdən aşılanmış meyvələrdən istifadə etməklə tələbələr üçün daha uğurlu bir laboratoriya həyata keçirilə bilər.

2. Meyvələri ehtiyacdan təxminən 1 həftə əvvəl hazırlayın. Möhkəm, sağlam daş meyvələri 30 dəqiqə ərzində dezinfeksiya edin (səthi sterilizasiya edin). 10% (v/v) ağartıcı məhlulda. Steril, distillə edilmiş su ilə yuyun.

3. Steril bir parçalayıcı iynədən istifadə edərək, kulturadan sporları çıxarın Monilinia fructicola və ya qəhvəyi çürüklü bir meyvə və hər meyvəni dörd-altı dəfə bıçaqlayın.

4. Qapağı möhkəm bağlanmamış nəm kamerada (steril, distillə edilmiş su ilə nəmlənmiş kağız dəsmallarla örtülmüş plastik qutu) otaq temperaturunda inkubasiya edin. Laboratoriyada temperatura və meyvənin yetişməsinə/həssaslığına görə dəyişən göbələk inkişafı üçün gündəlik yoxlayın. Tələbələrin istifadəsi üçün xəstəliyin yaxşı inkişafını qorumaq üçün lazım gələrsə, yoluxmuş daş meyvə qutusunu soyuducuya qoyun (yəni, qəhvəyi çürük meyvəni tamamilə məhv etməsinə imkan verməyin).

5. Baxmayaraq ki, yuxarıda təsvir olunduğu kimi nəm kamera tamamilə steril mühit kimi fəaliyyətə başlamaz, çünki siz plastik qutu və ya kağız dəsmalları sterilizasiya etmirsinizsə, o, patogenin digər orqanizmlərə nisbətən inkişafı üçün adekvat mühit təmin edir. Təmiz plastik qutu və təzə kağız dəsmallar adətən problem yaratmır.

6. Yoluxmuş meyvələrin otaq temperaturunda qurumasına icazə verilə bilər ki, “mumiya”. Başqa bir sinif üçün lazım olanda xəstəliyə yenidən başlamaq üçün, yəqin ki, mumiyadan alınan qırıntılardan istifadə etmək mümkün olacaq.

Bu dərslərdən dərhal əvvəl:

1. Tələbələr otağa daxil olan kimi, şagirdlərin cavablandırması üçün lövhədə aşağıdakı sual olsun: “Bitkilər xəstələnə bilərmi? Niyə və ya niyə olmasın?”

2. Şagirdlərə öz fikirlərini qeyd etmək və sinifin qalan hissəsi ilə bölüşmək üçün bir neçə dəqiqə vaxt verin.

3. Laboratoriya qruplarında tələbələrə əvvəllər hazırladığınız xəstə meyvələri müşahidə edin. Onlardan xəstə gavalıların (və ya digər daş meyvələrin) əlamətlərini və əlamətlərini təsvir etmələrini xahiş edin. Onlardan şübhəli patogeni həm makroskopik, həm də mikroskopik olaraq diqqətlə araşdırmalarını və gördükləri haqqında qeydlər və təsvirlər vermələrini xahiş edin. Onlar sonrakı addımlarda bu qeydə alınmış müşahidələrə yenidən müraciət etmək istəyəcəklər.

4. Şagirdlərdən xəstə gavalı sağlam gavalı ilə müqayisə etmələrini xahiş edin. Gavalıda nəsə böyüyür? Gavalının bəzi hissələri daha yumşaq və ya bərkdir? Miselyumun (saç kimi, reproduktiv olmayan göbələk böyüməsi) və sporların rəngi nədir? Mikroskopik olaraq, miselyumun xüsusiyyətləri hansılardır? Bu septadır, yəni hifləri bölmələrə ayıran daxili çarpaz divarları varmı? Yoxsa miselyum daxili çarpaz divarları olmayan uzun borulara bənzəyir? Hər hansı sporlar görürsən? Onların forması, rəngi və ölçüsü nədir? Bir daha görsəniz, bu göbələyi tanıyardınızmı? (Aşağıya baxın.)

5. Şagirdlərdən xəstəliyə səbəb olanın həqiqətən göbələk olduğuna əmin olmaq üçün necə sınaqdan keçirəcəklərini soruşun. Onlar hansı dəyişənləri və nəzarətləri nəzərə almalı ola bilər? Tələbələrdən bu ilkin fikirləri yazmasını xahiş edin. Sonra tələbələrdən öz qruplarında nəzərə alınmalı olan vacib amillər haqqında danışmağı xahiş edin. Sinif olaraq, tələbələrin sınaq üçün mərkəzi olacağını düşündükləri bəzi fikirləri müzakirə edin.

6. Şagirdlərə izah edin ki, Robert Kox (1843-1910) xəstəliyin mikrob tərəfindən törədilməsini təsdiqləmək üçün elmi yanaşma işləyib. Onun meyarlarına Koch'un postulatları deyilir. [Tələbələr, ehtimal ki, xəstəliyin kökü kimi göbələklərin səbəbini necə aradan qaldırmaq barədə fikirlərində Koch'un bəzi postulatlarına istinad etmişlər.]

7. Kochun Postulatlarını tələbələrlə paylaşın:

I. Xəstə ev sahibi səbəbkar orqanizmin əlamətlərinə görə müşahidə edilir və xəstəliyin simptomlarına səbəb olan orqanizmin bütün xəstə fərdlərlə əlaqəli olduğu göstərilir.
II. Səbəbkar orqanizm təmiz kulturaya ayrılır və təsvir edilir.
III. Şübhəli patogenin bu təmiz kulturası sağlam ev sahibinə aşılanır və ilkin mərhələdə 1-ci addımda müşahidə edilən eyni xəstəlik simptomları və əlamətlərinə səbəb olduğu göstərilir.
IV. Eyni səbəbkar orqanizm aşılanmış xəstə sahibdən təmiz kulturaya yenidən təcrid olunur və 2-ci addımda təsvir edilən orqanizmlə eyni olduğu göstərilir.

8. Şagirdlərə daş meyvədə xəstəliyin səbəbini müəyyən etmək üçün Koch'un postulatlarından istifadə edəcəklərini izah edin. (Vaxt məhduddursa, 4-cü addım aradan qaldırıla bilər). Bununla belə, Koch'un postulatları protokolda aydın şəkildə müəyyən edilməmişdir. Protokolu yerinə yetirərkən, hər bir addımın hansı Koch postulatına aid olduğunu müəyyən etməlidirlər.

1. Ehtimal edilən patogeni qidalı mühitdə təcrid etmək üçün, məs. kartof dekstroz agar (PDA):

a) Dörd kiçik (2 mm x 2 mm) yoluxmuş meyvə toxumasını kəsin.

b) Dörd toxuma parçasını 15, 30, 45 və ya 60 saniyə ərzində 10% (h/v) ağartıcı məhlulda batıraraq qısa müddətə dezinfeksiya edin.

Qeyd: Bu, patogeni toxumada daha dərindən öldürmədən hər hansı səth çirkləndiricilərini çıxarmaq üçün edilir. Bunun nə qədər vaxt aparacağı dəqiq bilinmədiyi üçün patogenin uğurla təcrid olunmasını təmin etmək üçün bir neçə fərqli vaxt seçilir. Hər hansı bir çirkləndirici orqanizmin toxumasını dezinfeksiya etmək istəyirsən, ancaq mantar patogenini öldürmə.

c) Forsepsləri qısa müddətə alovdan keçirərək sterilizasiya edin və soyumağa icazə verin. Steril forsepslərdən istifadə edərək, toxumanı ağartıcıdan çıxarın və kağız dəsmalın üzərinə qurutun.

d) Hər bir parçanı Petri boşqabında PDA agarın səthinə qoyun. Plitədəki mühitin havadakı sporlardan mümkün çirklənməyə məruz qalma müddətini minimuma endir.

e) Beş-yeddi gün otaq temperaturunda inkubasiya edin.

2. Kulturada təcrid olunmuş patogeni həm makroskopik, həm də mikroskopik olaraq təsvir edin. Bu müşahidələri sözlər və rəsmlər kimi qeyd edin. Sizcə, bu, 1-ci addımda xəstə meyvədə müşahidə etdiyiniz eyni orqanizmdir?


3. Sağlam gavalıları aşılamaq üçün təcrid olunmuş patogendən aşağıdakı kimi istifadə edin:

a) 2 sağlam gavalı təxminən iki dəqiqə 10% (v/v) ağartıcı məhlulda batırın. Bu, istənilən səthi çirkləndiricilərin meyvələrini dezinfeksiya edir. PDA üzərindəki orijinal göbələk izolyasiyasında, toxumada daha dərindən patogenin öldürülməməsi üçün kiçik kəsilmiş meyvə parçaları ağartma məhluluna daha qısa müddətə yerləşdirildi. Bütün meyvələr üçün 2 dəqiqəlik vaxtdan istifadə etmək olar, çünki meyvənin bütöv qabığı daxili ətini xlordan qoruyur. Kağız dəsmal ilə çıxarın və qurudun. İlk gavalı səthində steril bir bıçaqla V formalı kəsiklər edin. Nəmlənmiş kağız dəsmal ilə plastik bir torbaya sərbəst qoyun, bükülmüş bağ və etiketlə bağlayın. Bu nəzarət gavalı.

b) Bu dəyişikliyi ikinci gavalı ilə təkrarlayın: steril iynədən istifadə edərək izolyatınızdan sporlarla yaraya peyvənd edin.

c) Bir həftə inkubasiya edin və hər bir meyvədə yaranan hər hansı simptom və əlamətlərə dair müşahidələrinizi qeyd edin.

4. Koxun postulatları patogenin ilk xəstələnmiş meyvədə müşahidə edilən eyni orqanizm olub-olmadığını müəyyən etmək üçün 9-cu addımda olduğu kimi (tələbə protokol vərəqində 1-ci addım) aşılanmış meyvədən təcrid olunmasını tələb edir.

5. Tələbələr xəstəliyin sağlam meyvədə böyüməsinə icazə vermək və xəstəliyin səbəbini təsdiqləmək üçün vaxt tapdıqdan sonra nəticələri müzakirə etmək və Koch'un postulatlarının protokolda necə həll edildiyini düşündüklərini müəyyən etmək üçün sinfi bir araya gətirin.

6. Tələbələr xəstəliyə təsir edən amilləri daha çox araşdırmaq üçün təcrübələr tərtib etmək istəyə bilərlər. Misal üçün:

1) Temperaturun infeksiyaya və xəstəliyin inkişafına necə təsiri var?

Sadə bir müqayisə üçün aşılanmış meyvələr otaq temperaturunda və soyuducuda yerləşdirilə bilər. Nə üçün biz meyvə və tərəvəzlərin əksəriyyətini aldıqdan sonra soyuducuda saxlayırıq?

2) Yaralanmanın infeksiyaya və xəstəliyin inkişafına təsiri nədir?

Sadə bir müqayisə üçün yaralı və yarasız meyvələrə sporlar tətbiq oluna bilər. Kommersiya meyvə istehsalı, məhsul yığımı və daşınmasında bəzi potensial yara mənbələri hansılardır?

3) Host diapazonu nədir Monilinia fructicola?

Şagirdlər hansının qəhvəyi çürüməyə həssas olduğunu müəyyən etmək üçün sağlam meyvə və tərəvəzləri peyvənd üçün gətirə bilərlər. Daş meyvələr bu göbələyin ümumi sahibləridir, lakin yetişmiş alma və armud bəzən xəstəliyi inkişaf etdirir. Hansı növlər aşılandıqda qəhvəyi çürük əmələ gəlir Monilinia fructicola və hansılarda xəstəlik inkişaf etmir?

Daxili Qiymətləndirmə

  • Şagirdlər xəstəliyin səbəbini müəyyən etməyə çalışarkən nəzərə almalı olduqları dəyişənləri və nəzarəti müəyyən edə bilirlərmi?
  • Tələbələr protokolda hansı addımların Koch'un postulatlarından hansı ilə əlaqəli olduğunu müəyyən edə bilərmi?
  • Şagirdlər patogeni təcrid edə bilirlərmi və yoxsa, prosedurlarında nəyin səhv ola biləcəyini müəyyən edə bilirlərmi?

Elm dəftərlərində şagirdlərdən əks nəticə yazmağı tapşırın. Nə öyrəndilər? Onların hansı yeni sualları var? Laboratoriya “real həyata necə qoşulur?”

Daxili Qiymətləndirmə

İcma ilə əlaqə və təhsil proqramı Cənub-Qərb Ekoloji Sağlamlıq Elmləri Mərkəzinin bir hissəsidir: NIEHS Mükafatı


Sabouraud Dextrose Agar (SDA) Hazırlanması

Sabouraud dekstroz agar həm klinik, həm də qeyri-klinik nümunələrdən göbələklərin selektiv becərilməsi və təcrid edilməsi üçün istifadə olunan mikoloji mədəniyyət mühitidir. Sabouraud dekstroz agar (SDA) unikaldır və çoxlarından fərqlidir bakterioloji mədəniyyət mühiti (bakteriyaların becərilməsi və təcrid edilməsi üçün istifadə olunur), çünki SDA adətən antimikrobiyal agentlərlə, xüsusən də antibiotiklərlə əlavə olunur. xloramfenikol - bakteriyaların böyüməsini maneə törədir. Sikloheksamid hazırlanması zamanı SDA-ya əlavə olaraq da daxil edilir və sikloheksimid yalnız nümunədə axtarılan patogen göbələklərin böyüməsinə imkan verməklə saprofit göbələklərin böyüməsini maneə törətməyə kömək edir. Sabouraud dekstroz agar mikrobiologiya laboratoriyasında ümumiyyətlə göbələklərin becərilməsi üçün tövsiyə olunur. SDA ilə oxşar funksiyanı yerinə yetirən başqa bir mikoloji media kartof dekstroz agar PDA), SDA yerinə də istifadə edilə bilər.

ÜMUMİ MİKROBİOLOGİYA DƏRSLİKİNİ ALMAQ ÜÇÜN BURAYA TIKLAYIN

Prinsipcə və ya praktikada görəcəksiniz: SDA+Xloramfenikol SDA+ Gentamisin SDA+Xloramfenikol+Sikloheksamid SDA+Xloramfenikol+Tetrasiklin və s. SDA-nın bu müxtəlif adları SDA-nın müxtəlif formulunu göstərir və tədqiqatçı tərəfindən hazırlanması zamanı əlavə olaraq daxil edilmiş antimikrob agentlərin növlərini də göstərir. Beləliklə, istifadə etmək üçün antibiotik seçiminizdən asılı olaraq, hazırlıqdan sonra SDA-nın adını müəyyən etmək sizə bağlıdır. Bu bölmədə Sabouraud dekstroza agarının hazırlanması ətraflı izah ediləcək.

Bu belədir Sabouraud dekstroz agar sonra kimi görünür hazırlıq

Sabouraud dekstroz ağarının komponentləri

Komponentləri Sabouraud dekstroz agar üçün tələb olunan baza Sabouraud dekstroz agar preparatı daxildir:

  1. Ağar – bərkidici maddədir
  2. Soya paxlasının həzmi
  3. Dekstroza / qlükoza – enerji və karbon mənbəyidir
  4. Pepton – azot və vitamin mənbəyidir
  5. pH - adətən 25 °C-də (və ya 77 °F) 7.0-a tənzimlənir.

Əlavə tələblər: Bunlara antibiotiklər daxildir, məsələn:

Sabouraud dekstroz ağarınızı hazırlamaq üçün sizə bu materiallar lazımdır:

  • Sabouraud dekstroz agar tozu (adətən 500 qr-da gəlir),
  • Xloramfenikol flakonu (5 mq),
  • Sikloheksamid flakonu (5 mq),
  • Avtoklav, konusvari kolba, ölçmə silindri, stəkan, qarışdırma çubuğu,
  • Bunsen burner, inkubator, soyuducu, məftilli doka, spatula,
  • Çəkisi, taymer, pambıq yun, alüminium folqa, distillə edilmiş su, Petri qabı

HAZIRLAMAQ ÜÇÜN ADDIM-ADDIM PROTOKOL SABURAUD DEKSTROZ AQAR


Penicillium Antibiotik Təsiri

Bu dərsdə tələbələr istifadə edəcəklər Penicillium chrysogenum təbii olaraq antibiotik penisilin istehsal edən göbələk, təbii olaraq istehsal edilən antibiotiklərin tarixi əhəmiyyətini göstərmək üçün. Şagirdlər birgə mədəniyyət edəcəklər P. chrysogenum və penisillinə davamlı və penisillinə həssas bakteriyalar arasında fərqləri müşahidə etmək üçün üç növ bakteriya. Onlar birgə becərmədən əvvəl həm göbələk, həm də bakterial konsentrasiyaları normallaşdıracaq və maye mədəniyyətdə və bərk mühitdə antibiotik təsirini müəyyən etmək üçün bakteriyaların miqdarını təyin edəcəklər. Bu, tələbələrə təbii məhsul antibiotikləri, eləcə də eksperimental dizayn və tətbiq haqqında məlumat verəcəkdir.

Bu təcrübə tələbələrə biologiya elmlərində karyera üçün vacib olan bir neçə laboratoriya texnikasını tətbiq etməyə imkan verir. Onlar mikrobioloji orqanizmləri yetişdirəcək və kəmiyyətini müəyyənləşdirəcək, bir neçə alətdən istifadə edərək dəqiq ölçmə üsullarını tətbiq edəcək, eksperimental dizaynı konseptuallaşdıracaq və laboratoriya təcrübələrini özləri və tibb anlayışları ilə birləşdirəcəklər.

Fəaliyyət bir həftə (beş gün) dərs vaxtı tələb edir. Şagirdlər iki-dörd nəfərdən ibarət qruplara bölünməlidir. Qruplar təcrübələr üçün tam məlumat dəstini tərtib etmək üçün əməkdaşlıq edəcəklər.

Şəkil 1. A) Penicillium Yığılmış açıq yaşıl sporların ideal sahəsini və tamponda sporların sıxlığının qaranlığını göstərən PDA-da qazon. B) 1,7 ml mikro sentrifuqa borusunda LB/sporların rənginə görə ideal sıxlığı göstərən spor süspansiyonu. C) Dörd günlük inkubasiyadan sonra ideal artım göstərən 50ml LB-də təmiz göbələk kulturları. D) 24 saat inkubasiyadan sonra peyvənddən və ideal sıxlıqdan pipet ucunu göstərən bakteriya kulturası boruları.

Şəkil 2. LB agarda göbələk zolağına perpendikulyar bakterial zolaqların yerləşdirilməsini göstərən şaquli zolaqlı birgə kultivasiya. Bakterial kulturalar göbələk tərəfindən agara diffuziya edilmiş penisillinə differensial həssaslıq göstərir.

Şəkil 3. Kofe filtrlərindən, konusvari borulardan, hunidən və konusvari boruları dik tuta bilən rəfdən ibarət bakteriya və göbələklərin birgə kulturasını süzmək üçün aparat. Bakteriyalar asanlıqla qəhvə filtrindən keçərək konusvari boruya axacaq. Göbələk qəhvə filtrində sıxılmış vəziyyətdə qalacaq.

Penicillium Mantarı və Antibiotik Təsiri.

Penisilinin kəşfi təbabətdə o dərəcədə inqilab etdi ki, penisilin 20-ci əsrin təbabətinə ən böyük töhfə adlandırıldı. Penisilin və sonrakı digər antibiotiklərin kəşfindən əvvəl bakterial infeksiyalar bütün dünyada ümumi ölüm səbəbləri idi. Antibiotiklərdən əvvəlki dövrdə bakterial infeksiyalar ürək xəstəliyi və xərçəngin birləşdiyindən daha çox insanı öldürürdü. Bu gün bakterial infeksiyalar əhəmiyyətsiz hesab olunur və tez-tez sadə, ucuz həblər və ya məlhəmlərlə müalicə olunur.

Penisilin 1928-ci ildə doktor Alexander Fleming tərəfindən kəşf edilmiş ilk əsl antibiotik idi. Tətildən qayıtdıqdan sonra doktor Fleminq onun bakteriya lövhələrindən birini çirkləndirən yaşılımtıl bir kif gördü. O, bakteriyaların kalıbın ətrafındakı bir zonada öləcəyini və şəffaf bir halqa buraxdığını müşahidə etdi. Kalıbı təmiz mədəniyyətdə təcrid etdi və bunun adi yaşıl çörək kalıbı olduğunu müəyyən etdi, Penicillium. Bir çox elm adamı bunu məhv edilmiş bir təcrübə kimi rədd edərdi, lakin Dr. Fleming diqqətli idi. Onun marağı onu müşahidələri haqqında qısa elmi məqalə yazmağa vadar etdi.

Bir neçə il sonra Fleminqin qeydi Dr.Hovard Florinin, Dr.Norman Heatlyin və Dr.Ernst Chain-in diqqətini çəkdi. Bu tədqiqatçılar penisilinin canlı orqanizmdə (in vivo) bakterial infeksiyaları müalicə etmək üçün istifadə oluna biləcəyini və siçanlarda və nəhayət insanlarda istifadə üçün uyğun olduğunu göstərmək üçün təcrübələr apardılar.

Təcrübəmiz

Erkən tədqiqatçıların nəyin şahidi ola biləcəyini başa düşmək üçün bir növ antibiotik təsirini yoxlamaq üçün bir təcrübə hazırlaya bilərik. Penicillium.

Sinif olaraq maye mədəniyyətlərdə göbələk kolbaları yetişdirəcəyik. Biz göbələyi penisillinə qarşı həssaslığın müxtəlif səviyyələrinə malik üç bakteriya növünə qarşı penisilin antibiotik fəaliyyəti üçün sınaqdan keçirəcəyik: Staphylococcus epidermidis, Micrococcus luteus,Enterobacter aerogenes. Göbələk ilə bir gecədə böyüdükdən sonra hər kolbadakı bakteriyaların konsentrasiyasını ölçəcəyik.

adlı bir texnikadan istifadə edərək bakteriyaların konsentrasiyasını ölçə bilərik optik sıxlığın ölçülməsi (OD600). Göbələkləri mədəniyyətdən süzgəcdən keçirməli olacağıq, sonra isə hər bir süzülmüş ko-mədəniyyətlə bakteriyaların konsentrasiyasını müqayisə edəcəyik.

Eksperimental Məqsədlər:

  • Dəqiq ölçmə üsullarını tətbiq edin.
  • Seyreltmələri hesablayın.
  • Bakteriyaların penisillinə həssaslığını müşahidə edin.
  • Dəqiq nəticələr üçün eksperimentlər tərtib etməyi düşünün.

Materiallar (aşağıdakı reseptlər)

Sinif olaraq paylaşıldı

  • P. chrysogenum mədəniyyət lövhəsi, Kartof Dekstroz Ağarında (PDA) 7 gün yetişdirilir
  • S. epidermidis 30-37°C-də 48 saat yetişdirilən LB agar boşqabını 4°C-də £1 ay saxlamaq olar
  • M. luteus 25-30°C temperaturda 48 saat yetişdirilən LB agar boşqabını 4°C temperaturda £1 ay saxlamaq olar
  • E. aerogenlər 25-37°C temperaturda 24 saat yetişdirilən LB agar boşqabını 4°C temperaturda £1 ay saxlamaq olar
  • Orbital çalkalayıcı
  • 1x spektrofotometr (və ya 590-610nm-də kolorimetr)
  • 1x steril 2ml mikrosentrifuqa boruları 1.8ml LB (Miller)
  • 3x steril pambıq uclu aplikatorlar
  • 1x steril qutu p1000 ucları
  • 1x steril qutu p200 ucları
  • 6x küvet
  • Hər biri 25ml LB (Miller) olan 6x steril 125ml Erlenmeyer flakonları
  • 1x LB agar boşqabları
  • 3x steril 5ml kultura boruları
  • 3x steril 50ml ölçülü silindr və ya şahin borusu
  • Hər biri 75ml 2xLB (Lennox) olan 3x steril 250ml Erlenmeyer flakonları
  • 3x steril 1ul aşılama ilmələri və ya təkrar istifadə edilə bilən metal ilmə
  • 3x steril olmayan 50ml Falcon toplama borusu
  • 1x huni (musluğun toplama borusuna uyğun olduğundan əmin olun)
  • 7x steril olmayan qəhvə filtrləri

(İş mədəniyyətləri təzə olmalıdır)

  • Əgər anbardan başlayırsınızsa: Aktivliyə iki həftə qalmış anbardan kartof dekstroz aqarına (PDA) göbələk yetişdirməyə başlayın. Bir həftə 25 ° C-də inkubasiya edin.
  • Fəaliyyətdən 1 həftə əvvəl ilkin (ehtiyatdan) plitələrdən sporları ikincil PDA-ya yayaraq alt mədəniyyət göbələyi və bir həftə 25°C-də inkubasiya edin (Şəkil 1a).
  • Birgə becərmə təcrübəsindən iki həftədən çox olmayaraq və ən azı iki gün əvvəl LB agarda qliserol ehtiyatlarından bakterial kulturalara başlayın. İnkubasiya edin M. luteus və S. epidermidis 30 ° C-də 48 saat və E. aerogenlər 30°C-də 24 saat. Bakterial mədəniyyət lövhələri aktivliyə qədər 4°C temperaturda saxlanıla bilər.
  • 25 ml LB bulyonu (Miller) 125 ml kolbalarda (hər qrup üçün 6) və 75 ml 2xLB bulyonu (Lennox) 250 ml kolbalarda (hər qrup üçün 3) serilizasiya edin.
  • Hər qrup üçün 1 ədəd 1,8 ml LB (dəyirmançı) bulyonu ilə 2 ml mikro sentrifuqa boruları hazırlayın

Penicillium (göbələk) spor süspansiyonları

(Termo üçün Spektronik 200):

  1. Qoşun və yandırın. “Küveti çıxarın və ok düyməsini basın…” görünənə qədər gözləyin. Spesifikasiyanın boş olduğunu yoxlayın və ↵ düyməsini basın. Menyu seçimlərindən OD600 seçin və növbəti ekran görünəndə ↵ düyməsini basın
  2. Küveti 900 ml LB ilə doldurun. Xüsusiyyətdəki tutucuya qoyun. Küvetin şəffaf pəncərələrinin işıq şüasına uyğun olduğundan əmin olun (Spec 200-də sola və sağa baxır). Qapağı bağlayın və “0.00” düyməsini basın. Bu küveti 5-ci addımda saxlayın. (Hər bir küvetin ölçüyə bir qədər fərqli təsiri var, ona görə də təcrübələrin qalan hissəsi üçün istifadə etməzdən əvvəl hər küveti bu şəkildə boşaltdığınızdan əmin olun.)
  3. WPA CO7500 kolorimetrindən istifadə edirsinizsə: Aləti yandırın, 900ul LB kyuvetanı tutucuya düzgün istiqamətdə (pəncərələr öndən arxaya) yerləşdirin və boşluq üçün “Z” düyməsini basın.
  1. Tərkibində 1,8 ml LB bulyonu olan 2 ml santrifüj borularını spora dayandırılması üçün “SS” və qrup nömrənizi etiketləyin. (Məsələn, “SS1”) LB borusuna steril pambıq çubuq batırın.
  1. Steril texnikadan istifadə edərək, sporları toplayın P. chrysogenum boşqab üzərinə LB bulyon isladılmış pambıq çubuq sürtünərək boşqab. Təxminən çəhrayı barmağınızın ölçüsündə bir sahə toplayın. Sürtünərkən möhkəm basın, amma agarı qırmaq üçün o qədər də möhkəm deyil.

Bu lövhələr bir neçə qrup arasında paylaşıla bilər. Hər dəfə məhsul yığmaq üçün mədəniyyətin təzə sahəsini seçin.

  1. Sporları olan pambıq çubuqunu yenidən SS borusuna qoyun və sporları qarışdırmaq üçün onu çevirin. Süspansiyon buludlu, yaşıl və homojen görünənə qədər təxminən 10 saniyə davam edin.
  1. 1-ci addımdan etibarən küvetinizdə 1/10 seyreltmə edin:
    1. Spora suspenziyasını qarışdırmaq üçün yuxarı və aşağı pipetlə.
    2. 100 ml spora suspenziyanızı 5a hissəsində olduğu kimi eyni küvetə pipetlə çəkin. SS borusunu yenidən bağlayın və kənara qoyun.
    3. Pipetlə yuxarı və aşağı küvetdə seyreltməni yaxşıca qarışdırın.
    4. Getdiyinizə əmin olun hamısı qarışdırdıqdan sonra küvetdəki süspansiyon.
    5. Place the cuvette in the instrument and measure the absorbance.
    6. Make sure that the OD600 reading on the spec is above 1.0. If not, you need to add more spores from the plate to the 2mL tube
    1. Measure the spore concentration with the spec and record the result in Table 1 below (Absorbance values have no units like milliliters or grams)
    1. Yadda saxla the spec reading is 1/10 the Actual OD of the spores in your tube because you made a dilution. Multiply your Spec Readings by 10 to get the Actual OD.

    Table 1: Spore suspension optical density data

    P. chrysogenum sopre suspension

    1. We want to make sure we are working with the same starting concentrations for each of our experimental conditions. To do this we need to “normalize” the concentration of spores we add to each flask to the same amount. To normalize the volume of fungal spores you add to each culture, you will need to calculate the volume of SS we need to add to the culture flasks of LB broth for the ideal culture starting concentration.

    a. For the dilution use the calculation equation C1 x V1=C2 x V2

    (Actual OD in your 5ml tube) x (Volume of SS to add in ml) =

    (0.05 ideal concentration in culture flask) x (25ml LB broth in culture flask)

    c. (Volume of SS to add) = (0.05 x 25ml)/ (Actual OD in your 5mL tube)

    d. Multiply answer by (1000ml /1ml) to convert to ml

    V1 = (0.05 x 25ml)/13.6 = 0.092ml or 92μl

    0.092ml x10=

    1. Inoculate the liquid media flasks
      1. Mix the “SS” tube containing the spore suspension by inverting the tube 3 times.
      2. Loosen the foil on the flask before pipetting the volume from step d into three of the flasks containing 25ml LB.
      3. Use tape to label these flasks with the P. chrysogenum, your group number and initials, and the date.

      (3 of your 6 flasks will be sterile LB that you will use it as a bacteria control in step 16.)

      1. Finally, we will use some of the remaining spores to make a vertical stripe on an LB agar plate.
        1. Label your LB agar plate “P. chrysogenum” with the date, and your initials
        2. Dip a new sterile cotton swab into the “SS” tube.
        3. Make one swipe across the center of the LB agar plate.

        Streak example

        Culturing Bacteria (DAY 3)

        1. Inoculate 5ml LB broth (Miller) broth in a culture tube with each bacterial species.
          1. Label 3 culture tubes containing 5ml LB broth (Miller) each with your group number and the following:

          1. Using sterile technique, attach a sterile 20 – 200ul pipette tip to a p20 or p200 pipette.
          2. Collect

          1. Incubate your tube with the rest of the class by shaking at 180 rpm bir gecədə (until class the next day) at 30°C.

          Co-cultivation (DAY 4)

          On the 4 th day of the experiment, the cultures are ready to be co-cultivated. (bacteria added to fungus)


          Potato dextrose broth medium NIKOORAEE

          The Potato dextrose broth culture medium is used for the cultivation and counting of yeasts and molds, many microalgae and bacteria. Dextrose Agar potato is a product of Nikooraee company.

          What is Brass Culture?

          The potato dextrose agar medium is a general culture medium for yeast and mold. It can be supplemented with acid or antibiotics to prevent the growth of bacteria. The counting method is used when testing food, dairy and cosmetics. The USP cites potato dextrose agar as one of the recommended culture media for use in microbial counting experiments when testing unnecessary medicinal products. Dextrose potatoes are also used to stimulate spore formation (slide preparation), maintain cultures of specific dermatophytes, and differentiate atypical dermatophytes with pigment production. A general purpose watery medium for yeasts and molds that does not use agar, which is a solid.

          Ingredients of PDB medium

          Ingredients of Potato dextrose NIKOORAEE based on potato starch, potato extract and dextrose cause significant growth of fungi. Decreasing the pH of the medium to approximately 3.5 with sterile tartaric acid inhibits bacterial growth. However, it is important to avoid warming the medium after acidification as this will hydrolyze the agar and impair its ability to be strong. In general, to reduce material degradation, it is advisable to reduce the number of heat sterilization steps.

          Instructions for preparation of potato dextrose broth medium

          ۱٫ Pour 24 grams of broth medium powder in 1 liter of distilled or purified water. If you want to use this medium by adding solid agar instead of 24 grams, you should use 39 grams per liter.

          ۲٫ While stirring repeatedly, heat it and simmer for 1 minute until the powder is completely dissolved. As a general guideline for the culture medium when your medium is completely dissolved when the solution boils.
          ۳٫ Autoclave at 121 ° C for 15 minutes.
          ۴- To change the reaction of potato dextrose agar medium to pH 3.5, cool the base to 45-50 ° C. Then add a decent amount of 10% sterile tartaric acid to the medium. Yaxşı qarışdır. Do not reheat the agar-containing medium as the gelatinizing property of the agar may decrease or even disappear.
          ۵- Testing end-product samples for performance using stable and conventional control culture.

          How to fill test tubes with potato dextrose broth

          If you use test tubes or petri or any autoclavable container and similar tubing for cultivating your microorganism, it is best to add the potato dextrose into them before autoclaving, which will save a lot of time. Also, there is no possibility of contamination of the medium and container when transferring the autoclaved medium to the container.
          ۱- Wash and dry the test tubes first.
          ۲٫ Pour the warm potato dextrose NIKOORAEE medium (if it is broth , you can use it cool) to a third of the tube into the tube.
          Close the pipe door using cotton or aluminum. If you are using aluminum, let the lid loose to allow heat and steam pressure into the tube when autoclaving.
          ۴- This stage is the autoclaving stage of the culture medium. The tubes should be positioned in an autoclave tank properly so that they do not overturn. You can put them into special pipes or even autoclavable containers like Besher the one with openings.
          ۵٫ After the autoclave is finished, place the tubes on a supine position, but beneath them, resting on a slope. However, this step is not required in the liquid-based Potato dextrose culture medium. But for solid media you should allow the medium to cool and solid.

          Nümunə kolleksiyası

          For standard food, dairy and cosmetics, there are standard methods that can include disinfection before or without this stage. Note that too wet samples can increase bacterial growth.

          Microorganism cultivation

          Specimens can be placed on the potato dextrose culture medium in different ways. In the case of fragmented samples, you can place them with a forceps. For watery samples you can create small holes in the environment (by any means of sterile sharpening) and pour the liquid into these holes, but you can do this by circulating the liquid over the medium.

          keeping place

          Place containers containing microorganisms on the potato dextrose broth medium at the desired temperature in light or dark conditions. If you are using petri, it is best to put them in a clean plastic and شnd fasten the door to close it to reduce environmental pollution.

          Broth medium in tissue culture

          The potato dextrose NIKOORAEE culture medium of Potito dextrose is based on a suitable medium for tissue culture of many plants. Many tissue culture and laboratory mass production companies are unaware of this environment and the possibility that it can be used as a public environment for many plants to grow. If you use Potito dextrose based media in tissue culture, you should adjust the pH of the plant before autoclaving.

          Liquid media for mass production

          The use of agar in the potato dextrose broth medium can pose many limitations, such as the transfer of material to seedlings and microorganisms in the liquid medium, but is restricted to the agar medium. It is also much easier to move microorganisms and seedlings into a new environment in a liquid environment and to add specific substances to them, but not in a solid environment.

          Use of PDB medium for enzyme production and microorganism production

          Many enzyme-producing plants and microbial products use potato dextrose-based media. The fluidity of this environment makes extraction of microbial products very easy and possible.


          Can i grow bacteria on potato dextrose agar? - Biologiya

          Produced by Jim Deacon
          Institute of Cell and Molecular Biology, The University of Edinburgh


          Temperature ranges of microorganisms

          Microorganisms can be grouped into broad (but not very precise) categories, according to their temperature ranges for growth.

          • Psychrophiles (cold-loving) can grow at 0 o C, and some even as low as -10 o C their upper limit is often about 25 o C.
          • Mesophiles grow in the moderate temperature range, from about 20 o C (or lower) to 45 o C.
          • Thermophiles are heat-loving, with an optimum growth temperature of 50 o or more, a maximum of up to 70 o C or more, and a minimum of about 20 o C.
          • Hyperthermophiles have an optimum above 75 o C and thus can grow at the highest temperatures tolerated by any organism. An extreme example is the genus Pyrodictium, found on geothermally heated areas of the seabed. It has a temperature minimum of 82 o , optimum of 105 o and growth maximum of 110 o C.

          It must be stressed that the temperature ranges for the groupings above are only approximate. For example, we would use different criteria to classify prokaryotes and eukaryotes. The upper temperature limit for growth of any thermophilic eukaryotic organism is about 62-65 o C. And the upper limit for any photosynthetic eukaryote is about 57 o - for the red alga Cyanidium caldarium, which grows around hot springs and has a temperature optimum of 45 o C. In contrast to this, some unicellular cyanobacteria can grow at up to 75 o C, and some non-photosynthetic prokaryotes can grow at 100 o C or more.

          Below, we consider two major types of thermophile - the microbes that grow in geothermal sites, and those that grow in "self-heating" materials such as composts. However, some very recent reports suggest that these different types of environment can share some common organisms.

          The study of extreme environments has considerable biotechnological potential. For example, the two thermophilic species Termus aquaticusThermococcus litoralis are used as sources of the enzyme DNT polimeraza, for the polymerase chain reaction (PCR) in DNA fingerprinting, etc. The enzymes from these organisms are stable at relatively high temperatures, which is necessary for the PCR process which involves cycles of heating to break the hydrogen bonds in DNA and leave single strands that can be copied repeatedly. Another thermophile, Bacillus stearothermophilus (temperature maximum 75 o C) has been grown commercially to obtain the enzymes used in 'biological' washing powders.

          Hot springs and geothermal vents are found in several parts of the world, but the largest single concentration is in Yellowstone National Park, USA. The images below show how some thermophilic prokaryotes (bakteriyaarchaea) are specially adapted to grow in these environments. In each case we find a zonation of microorganisms according to their temperature optima. Often these organisms are coloured, due to the presence of photosynthetic pigments (blue-green of siyanobakteriyalar, red of red algae və ya purple bacteria) or carotenoid pigments (yellows and browns of some archaea).

          MT Madigan, JM Martinko & J Parker (1997) Brock Biology of Microorganisms. Eighth edition.. Prentice Hall. (see http://www.prenhall.com/brock/ )

          MT Madigan & BL Marrs (1997) Punishing Environments: Extremophiles. Elmi amerikalı issue 4 ( http://www.sciam.com/0497issue/0497marrs.html )

          M.W.W. Adams and R.M. Kelly. (1995) Enzymes Isolated from Microorganisms That Grow in Extreme Environments. Kimya və Mühəndislik Xəbərləri 73, 32-42.

          Extremophiles. Special issue of Federation of European Microbiological Societies (FEMS) Microbiology Reviews 18, Nos. 2-3 May 1996.

          K. O.Stetter (1996) Hyperthermophiles in the History of Life. in Evolution of Hydrothermal Ecosystems on Earth (and Mars?). Edited by GR Bock & JA Goode. John Wiley & Sons.

          A compost consists of any readily degradable organic matter that is kept in a heap with sufficient mineral nutrients (e.g. nitrogen) and sufficient aeration to enable rapid microbial growth. The most familiar example is the garden compost heap, but more important examples are the composting plants used to process municipal wastes, and the composts used for commercial mushroom production.

          The typical composting process is illustrated in Şəkil E aşağıda. There is an initial phase of rapid microbial growth (a) on the most readily available sugars and amino acids. This phase is initiated by mesophilic organisms, which generate heat by their metabolism and raise the temperature to a point where their own activities are suppressed. Then a few thermophilic fungi (e.g. Rhizomucor pusillus, Figure F) and several thermophilic bacteria (e.g. Bacillus stearothermophilus) continue the process, raising the temperature of the material to 70-80 o C within a few days. Bu peak heating phase (b) has a profound effect on the microbial population, because it destroys or inactivates all the mesophilic organisms (and the initial thermophilic fungi such as Rhizomucor pusillus) and leads to a prolonged high-temperature phase that favours other thermophilic species.

          Figure E. Changes in temperature (solid line) and populations of mesophilic fungi (broken line) and thermophilic fungi (dotted line) in a wheat straw compost. Based on data in Chang & Hudson, 1967. The left axis shows fungal populations (logarithm of colony forming units per gram of compost plated onto agar) the right axis shows temperature in the centre of the compost. Stages a-d are referred to in the text.

          Eventually the temperature declines and mesophilic organisms then recolonise the compost and displace the thermophiles (d in Fig. E). However, some heat-tolerant species such as Aspergillus fumigatus can continue to grow. This fungus can grow at temperatures ranging from 12 o to about 52-55 o . Strictly speaking, it is not a thermophile because its temperature optimum is below 50 o , but it is a very common and important member of the high-temperature compost community.

          All the thermophilic fungi shown below were obtained by plating small particles of garden compost on potato-dextose agar containing antibacterial agents (streptomycin plus chlortetracycline) at 45 o C.

          Figure F. Rhizomucor pusillus. Typical grey coloured colony on a plate of potato-dextrose agar at 45 o C (left-hand image). This fungus produces abundant "fluffy" aerial hyphae and spore-bearing stalks (sporangiophores) which are branched (centre and right images) and have sporangiya at the tips of the branches. The delicate sporangial walls break to release numerous spores, leaving only a central bulbous region (the columella, c) and remains of the sporangial wall (arrowhead in right-hand image).

          With a temperature range of 20-55 o C, this fungus is a typical early coloniser of composts, exploiting simple sugars, amino acids etc. that are present initially in the plant material. It is inactivated during peak-heating, and it does not recolonise afterwards.

          Figure G. Humicola (və ya Thermomyces) lanuginosus. Colonies growing on potato-dextrose agar (top left) and malt extract agar (top right) at 45 o C. This fungus produces single spores by a balloon-like swelling process at the tips of short hyphal branches (bottom, left). At maturity (bottom right) the spores have brown, ornamented walls.

          H. lanuginosus grows from 30 to 52-55 o C. It is extremely common in all types of self-heating material and also in birds' nests and sun-heated soils. It colonises composts after peak-heating and persists throughout the high-temperature phase. However, it cannot degrade cellulose and it seems to live as a commensal with cellulose-decomposing species, sharing some of the sugars released from the plant cell walls by their cellulolytic activities.


          Figure H. Thermoascus aurantiacus colony (left) growing on malt-extract agar at 45 o C. The orange-brown colour is caused by the presence of many small (about 1 millimetre) fruiting bodies (ascocarps), which are seen at higher magnification (top right). These ascocarps are closed bodies, termed cleistothecia, containing many asci, each with 8 ascospores. The cleistothecia and the ascus walls break down at maturity to release the ascospores. Four asci containing ascospores are shown in the composite image at bottom right. They were released when a cleistothecium was crushed on a slide, and they show ascospores in various stages of maturity - the brown spores are nearly mature.

          This fungus grows from about 25 to 55 o C and is a vigorous cellulose degrader.

          Figure I. Paecilomyces species growing on malt extract agar at 45 o C (left image). The yellow-buff colour of the colony is caused by the presence of asexual sporing structures on the aerial hyphae. The sporing stages of the genus Paecilomyces (right-hand image) superficially resemble those of Penicillium, because the spores (conidia, c) are formed from flask-shaped cells (phialides, p) borne at the tips of short, brush-like branching structures. But the branching pattern of these "brushes" is less regular than in Penicillium .

          Figure J. Aspergillus fumigatus. This common fungus of composts and mouldy grain has a grey-green colour on agar plates (left image), in contrast to the brighter green colour of several other Aspergillus növlər. The typical asexual sporing stage of Aspergillus consists of a spore-bearing hypha (conidiophore, centre image) which swells into a vesicle at the tip, and the vesicle bears flask-shaped cells (phialides) that produce the spores (konidiya). In A. fumigatus the vesicle typically is club-shaped, the phialides arise only from the upper part of the vesicle, and the phialides all point upwards. Together with the grey-green colour and temperature range of about 12-52 o C, these features distinguish A. fumigatus from all other Aspergillus növlər.

          A. fumigatus is an extremely common, interesting and dangerous fungus because of its nutritional opportunism. It is strongly cellulolytic, but it also can grow on hydrocarbons in aviation kerosene, and it can enter the lungs as inhaled spores, causing allergies or growing in the lung cavities, causing aspergillomas (see Airborne Microorganisms ). Its ability to grow readily at 37 o C has made this fungus a significant problem in operating theatres, where it can establish infections of the internal organs via surgical wounds, especially during transplant surgery when the patient's immune system is suppressed.

          Although the thermophilic fungi play a major role in degrading cellulose and other major polymers in composts, the activities of bacteria also are important. Two recent discoveries highlight this point.

          • In 1996 it was reported that composts of many different types (garden and kitchen wastes, sewage sludge, industrial composting systems) contain high numbers of bacteria of the genus Termus which grow on organic substrates at temperatures from 40-80 o C, with optimum growth between 65 and 75 o C. The numbers were as high as 10 7 to 10 10 per gram dry weight of compost. Spore-forming Bacillus species were also found, but they were unable to grow above 70 o C. Thus, it seems that Termus species, previously known only from geothermal sites, have probably adapted to the hot-compost system and play a major role in the peak-heating phase. [T. Beffa və b., 1996. Applied & Environmental Microbiology62, 1723-1727].
          • Also in 1996, a number of avtotrof (self-feeding) bacteria were isolated from composts. These non-sporing bacteria grew at 60-80 o C, with optima of 70-75 o C, and closely resembled Hidrogenobakter strains that previously were know only from geothermal sites. They obtain their energy by oxidising sulphur or hydrogen, and synthesise their organic matter from CO2. [T. Beffa və b., 1996. Archives of Microbiology165, 34-40]

          There is much to be learned about the interactions of microorganisms in composting systems. Work in this field is driven largely by commercial needs to produce composts for high mushroom yields (Agaricus species) and for rapid, efficient processing of municipal (domestic) and industrial wastes.

          In contrast to the typical "natural" composting sequence (Figure E), commercial mushroom composts are produced by a truncated, two-phase process, designed to minimise the loss of cellulosic materials that Agaricus can use for growth. Phase I involves peak-heating of straw compost to 70-80 o C for several days. Then the compost is pasteurised at 70 o C and held at about 45 o C for a further few days (Phase II). Finally, the temperature is lowered and the compost is inoculated with Agaricus. Both of the preliminary phases are essential for high mushroom yields. Recent work suggests that the thermophilic fungus Scytalidium thermophilum becomes dominant in phase II and its presence can almost double the mushroom yield [G. Straatsma və b., 1995. Canadian Journal of Botany 73, S1019-1024]. The reason for this is still unknown.

          Other work has shown that Agaricus bisporus (the commercial mushroom) can use either living or heat-killed bacteria as its sole source of nitrogen for growth. Like many other members of the fungal group basidiomycota, this fungus does not thrive on inorganic nitrogen sources such as ammonium or nitrate, but readily utilises organic nitrogen, which it can degrade by releasing protease enzymes. Thus, an initial high bacterial activity in the compost might provide the fungus with its favoured nitrogen source.


          Can i grow bacteria on potato dextrose agar? - Biologiya

          Mücərrəd

          Antibiotics are the organic secretion produced by micro &ndash organisms, which in low concentrations are antagonistic to the growth of other micro &ndash organisms (mostly pathogens). Antibiotics have proved very useful in combating several bacterial diseases in man an animal. Antibiotics are commonly obtained from actinomycetes and some eubacteria. Some of the important antibiotics are streptomycin, Aureomycin, teramycin, Chloromycetin, erythromycin, neomycin etc.

          Soil is a natural medium that harbors several types of micro &ndash organism .These micro- organisms can be frown on culture media. The effect of different types of antibiotics can be studied on the growth of micro - organism growing in culture medium. This is an important subject, therefore the study of effect of antibiotics on micro - organism has been taken for the present project.

          Objective of Project

          The aim of this project is to study the effect of antibiotics on micro &ndash organisms.

          Experiment

          To study the effect of antibiotics on micro-organisms

          Tələblər

          Potato ,agar, dextrose , distilled water , four different types of antibiotics (such as penicillin , streptomycin , aureomycin , teramycin ) , syringe , oven sterilized petridish , flasks , beakers , pipettes , garden soil , glass marker pen , etc

          Prosedur

          A. Preparation of culture Medium

          1. Potato Dextrose Agar (PDA) Medium.

          Take 200 g of peeled potato chips. Boil them with 500 ml of water in a beaker for 15 minutes.

          Squeeze the potato pulp thus obtained through a muslin cloth and keep it in a flask.

          Take 20 g of agar in a beaker and warm it with 500 ml of water .

          Mix both the solution of potato and agar and add 20 g dextrose to it.

          Thus one litre of PDA medium is prepared.

          Autoclave the medium at 15 pounds pressure for 15 minutes.

          B. Effects of antibiotics on soil micro0 organisms

          i) Take 2 g of soil and dissolve it in 10 ml of water in a beaker. Let the soil particle settle down.

          ii) Take 5 oven sterilized petridishes and pour 1 ml of soil suspension in each of the plates. Now pour 1ml of the four antibiotics separately in four petridishes with the help of syringe, and mark them with marker pen. Leave the fifth petridish without antibiotic to serve as control.

          iii) Pour PDA in each of the petridishes and mix the suspension by rotating the petridishes. Leave the petridishes undisturbed at a warm place

          Observation

          The effect of different antibiotics on the micro &ndash organisms can be assessed by counting the number and size of the colonies growing in the petridishes.

          CONCLUSIONS

          Pencillin and Terramycin was most effective antibiotic against microorganism in soil.


          Sabouraud agar

          Sabouraud agar və ya Sabouraud dextrose agar (SDA) is a type of agar growth medium containing peptones. [1] It is used to cultivate dermatophytes and other types of fungi, and can also grow filamentous bacteria such as Nokardiya. [2] [3] [4] It has utility for research and clinical care.

          It was created by, and is named after, Raymond Sabouraud in 1892. In 1977 the formulation was adjusted by Chester W. Emmons when the pH level was brought closer to the neutral range and the dextrose concentration lowered to support the growth of other microorganisms. The acidic pH (5.6) of traditional Sabouraud agar inhibits bacterial growth. [5]

          Sabouraud agar is commercially available and typically contains: [6]

          Clinical laboratories can use this growth medium to diagnose and further speciate fungal infections, allowing medical professionals to provide appropriate treatment with antifungal medications. Histoplasma and other fungal causes of atypical pneumonia can be grown on this medium.

          1. ^"Omnipresence of Microorganisms in the Environment". Archived from the original on 2008-10-06 . Retrieved 2008-10-24 .
          2. ^
          3. Sandven P Lassen J (November 1999). "Importance of selective media for recovery of yeasts from clinical specimens". Klinik Mikrobiologiya Jurnalı. 37 (11): 3731–2. PMC85742 . PMID10523586.
          4. ^
          5. Guinea J Peláez T Alcalá L Bouza E (December 2005). "Evaluation of Czapeck agar and Sabouraud dextrose agar for the culture of airborne Aspergillus conidia". Diaqnostik Mikrobiologiya və Yoluxucu Xəstəliklər. 53 (4): 333–4. doi:10.1016/j.diagmicrobio.2005.07.002. PMID16263232.
          6. ^About Modified Sabouraud Agar
          7. ^
          8. Hare, Janelle M. (9 December 2012). "15. Sabouraud agar for fungal growth". In Gupta, Vijai Kumar Tuohy, Maria G. Ayyachamy, Manimaran Turner, Kevin M. O’Donovan, Anthonia (eds.). Laboratory Protocols in Fungal Biology: Current Methods in Fungal Biology. Springer. səh. 212. ISBN978-1-4614-2355-3 .
          9. ^University of Sydney, Reseptlər.

          This microbiology-related article is a stub. You can help Wikipedia by expanding it.


          Videoya baxın: KARTOFUN ƏKİNİ TEXNİKA İLƏ APARILIR (Iyun 2022).