Məlumat

İnsan sperma başındakı DNT sıxlığını necə qiymətləndirmək olar?

İnsan sperma başındakı DNT sıxlığını necə qiymətləndirmək olar?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Mən internetdən sperma başının həcmini təxmin etmişəm. Onu 4-5 µm-lik bir disk kimi hesab edirəm. İndi sperma başındakı DNT sıxlığını tapmaq istədim. Bunu necə tapmaq olar?


Sperma başının həcmi üçün bir dəyər tapın və ya hesablayın.

İnsan genomunun ölçüsü üçün bir dəyər tapın (haploid və ya diploid?)

Yəqin ki, Giga baza cütlərində olacaq genom ölçüsünü kütləyə çevirin (pikoqramları təklif edirəm).

Sıxlığı əldə etmək üçün kütləni həcmə bölün, pg μm-3

Təmizləmə - sperma nüvəsi bütün baş həcmini tutur? Bunu nəzərə almaq lazımdırmı?


İnsan Spermatozoasının Mitoxondrial DNT tərkibi 1

Bu iş İspaniyanın Fondo de Investigaciones Sanitarias (98/1033 və 01/0192) qrantları ilə dəstəkləndi.

Carmen Díez-Sánchez, Eduardo Ruiz-Pesini, Ana Cristina Lapeña, Julio Montoya, Acisclo Pérez-Martos, José Antonio Enríquez, Manuel J. López-Pérez, İnsan Spermatozoasının Mitoxondrial DNT tərkibi, Çoxalmanın biologiyası, Cild 68, Buraxılış 1, 1 yanvar 2003, Səhifələr 180–185, https://doi.org/10.1095/biolreprod.102.005140


İçindəkilər

İnsanlarda laboratoriya sperma analizinin ən çox görülən səbəbləri cütlük sonsuzluq araşdırmasının bir hissəsidir və prosedurun uğurlu olduğunu yoxlamaq üçün vazektomiyadan sonra. [4] O, həmçinin sperma donorluğu üçün insan donorlarını sınamaq üçün istifadə olunur və heyvanlar üçün sperma analizi damazlıq və təsərrüfat heyvanlarının yetişdirilməsində geniş istifadə olunur.

Bəzən kişi adi hamiləlikdən əvvəl testin bir hissəsi kimi sperma analizi aparacaq. Laboratoriya səviyyəsində bu nadir haldır, çünki tibbi tarixdə və ya fiziki müayinə zamanı aşkar edilən bu sahələrdən birində patoloji şübhəsi olmadıqda və ya xüsusi olaraq tələb edilmədikcə, əksər tibb işçiləri sperma və spermanı sınaqdan keçirməyəcəklər. Bu cür sınaqlar çox bahalı və vaxt aparır və ABŞ-da sığorta ilə əhatə oluna bilməz. Digər ölkələrdə, məsələn, Almaniyada sınaq bütün sığortalarla əhatə olunur.

Sperma analizi ilə ölçülən xüsusiyyətlər sperma keyfiyyətinə təsir edən amillərdən yalnız bəziləridir. Bir mənbə bildirir ki, normal sperma analizi olan kişilərin 30%-nin əslində anormal sperma funksiyası var. [5] Əksinə, sperma analizinin nəticələri zəif olan kişilər uşaq atasına keçə bilərlər. [6] NICE təlimatlarında, yüngül kişi amili sonsuzluğu 2 və ya daha çox sperma analizində 1 və ya daha çox dəyişənin 5-ci faizdən aşağı olması və yüngül endometriozlu insanlar kimi 2 il ərzində vaginal əlaqə ilə təbii yolla hamiləlik şansı verməsi kimi müəyyən edilir. [7]

Sperma toplanması üsullarına mastürbasyon, prezervativ toplama və epididimin çıxarılması daxildir. Nümunə heç vaxt cinsi əlaqənin kəsilməsi ilə alınmamalıdır, çünki eyakulyasiyanın bir hissəsi itə bilər, bakterial çirklənmə baş verə bilər və ya turşu vaginal pH sperma hərəkətliliyinə zərər verə bilər. Sperma nümunəsi üçün optimal cinsi abstinent 2 ilə 7 gündür. Sperma nümunəsi əldə etməyin ən çox yayılmış yolu mastürbasyondur və onu əldə etmək üçün ən yaxşı yer bəzi spermatozoidlər üçün ölümcül ola biləcək daşınma zamanı temperatur dəyişikliklərinin qarşısını almaq üçün analizin aparılacağı klinikadadır. Nümunə alındıqdan sonra, o, birbaşa steril plastik qaba qoyulmalıdır (heç vaxt ənənəvi konservantda deyil, çünki onlar nümunəyə zərər verə biləcək sürtkü yağları və ya spermisidlər kimi kimyəvi maddələrə malikdirlər) və öyrənilməsi üçün klinikaya təhvil verilməlidir. saat ərzində.

Retrograd boşalma, nevroloji zədə və ya psixoloji inhibə kimi xüsusi bir əldə edilməsi lazım olan bəzi vəziyyətlər var. Vəziyyətdən asılı olaraq müxtəlif üsullardan istifadə edə bilərik, məsələn, xüsusi konservantlar, elektrostimulyasiya, vibrostimulyasiya və s.

Sperma analizində ölçülən parametrlərə nümunələr bunlardır: sperma sayı, hərəkətlilik, morfologiya, həcm, fruktoza səviyyəsi və pH.

Sperma sayı redaktə edin

Sperma sayı və ya sperma konsentrasiyası ilə qarışmamaq üçün ümumi sperma sayı, kişi boşalmasında sperma konsentrasiyasını ölçür, fərqləndirir ümumi sperma sayı, bu, sperma sayının həcmi ilə vurulmasıdır. ÜST-nin 2010-cu ildə verdiyi məlumata görə, millilitrdə 15 milyondan çox sperma normal hesab olunur. [8] Köhnə təriflər 20 milyonu bildirir. [5] [6] Daha az sperma sayı oliqozoospermiya hesab olunur. Nümunə azoospermikdirsə (hər hansı bir sperma tapılmadısa) vazektomiya uğurlu sayılır. Nümunə bir mililitrdə 100.000-dən az spermatozoid ehtiva edərsə, biz kriptozoospermiyadan danışırıq. Bəziləri müvəffəqiyyəti nadir/təsadüfi qeyri-hərəkətli sperma müşahidə edildiyi zaman (millilitrdə 100.000-dən az) müəyyən edir. [9] Digərləri sayların artmadığını yoxlamaq üçün ikinci sperma analizinin alınmasını müdafiə edir (yenidən kanalizasiya zamanı baş verə bilər) və digərləri yenə də bu vəziyyət üçün təkrar vazektomiya edə bilərlər.

Müxtəlif günlərdə götürülmüş üç nümunədən sonra sperma sayının dəqiq qiymətləndirilməsini təmin edən evdə istifadə üçün çiplər ortaya çıxır. Belə bir çip sperma nümunəsindəki spermanın konsentrasiyasını polistirol muncuqları ilə doldurulmuş nəzarət mayesinə qarşı ölçə bilər. [10] [ etibarsız tibbi mənbə? ]

Hərəkətlilik Redaktəsi

Ümumdünya Səhiyyə Təşkilatının 40 [11] % dəyəri var və bu, toplanandan sonra 60 dəqiqə ərzində ölçülməlidir. ÜST-nin də bir parametri var dirilik, 60% canlı spermatozoidin aşağı istinad limiti ilə. [8] Kişidə millilitrdə 15 milyondan çox sperma hüceyrəsinin ümumi sayı ola bilər, lakin hələ də keyfiyyətsizdir, çünki onların çox az hissəsi hərəkətlidir. Ancaq sperma sayı çox yüksəkdirsə, aşağı hərəkətlilik (məsələn, 60% -dən az) əhəmiyyətli olmaya bilər, çünki fraksiya hələ də millilitrdə 8 milyondan çox ola bilər. Əksinə, kişidə sperma sayı millilitrdə 20 milyon sperma hüceyrəsindən çox az ola bilər və bu müşahidə edilən sperma hüceyrələrinin 60%-dən çoxu yaxşı irəliyə doğru hərəkət edərsə, yenə də yaxşı hərəkətliliyə malik ola bilər - bu faydalıdır, çünki təbiət keyfiyyətə üstünlük verir. kəmiyyət.

Daha dəqiq bir ölçüdür hərəkətlilik dərəcəsi, burada ümumi hərəkətlilik (PR+NP) və hərəkətsiz [12]

Proqressiv olaraq hərəkətli- İrəli istiqamətdə hərəkət edən sperma Proqressiv Hərəkətlidir Tədricən Hərəkətlidir-Bu sperma dairəvi hərəkət edir, Proqressiv Hərəkətlidir Hərəkətsizdir- Həmin spermalar hərəkət edə bilmir və ya ölü spermadır.

32%-dən çox mütərəqqi hərəkətliliyə malik sperma nümunələri normozoospermiya hesab olunur. Bu dəyərdən aşağı olan nümunələr ÜST meyarlarına görə astenozoospermiya kimi təsnif edilir.

Morfologiyaya düzəliş

Sperma morfologiyasına gəldikdə, 2010-cu ildə təsvir olunduğu kimi ÜST meyarları müşahidə edilən spermaların 4%-də (və ya 5-ci sentildə) və ya daha çoxunda normal morfologiya varsa, nümunənin normal olduğunu (son 12 ayda partnyorları hamiləlik keçirmiş kişilərdən alınan nümunələr) bildirir. [8] [13] Əgər nümunədə morfoloji cəhətdən normal spermatozoidlərin sayı 4%-dən azdırsa, bu, teratozoospermiya kimi təsnif edilir.

Normal sperma morfologiyasını təsnif etmək çətindir, çünki məsələn, obyektivliyin olmaması və təfsirdə dəyişikliklər var. Spermatozoanı normal və ya anormal olaraq təsnif etmək üçün müxtəlif hissələri nəzərə almaq lazımdır. Spermanın başı, orta hissəsi və quyruğu var.

Birincisi, baş oval formalı, hamar və müntəzəm konturlu olmalıdır. Üstəlik, akrosomal bölgə başın 40-70% sahəsini təşkil etməli, müəyyən edilməli və böyük vakuolları ehtiva etməməlidir. Vakuolların miqdarı baş sahəsinin 20% -dən çox olmamalıdır. Uzunluğu 4-5μm və eni 2,5-3,5μm olmalıdır.

İkincisi, orta hissə və boyun nizamlı olmalıdır, maksimum eni 1 μm və uzunluğu 7-8 μm olmalıdır. Orta hissənin oxu başın əsas oxuna uyğun olmalıdır.

Nəhayət, quyruq orta hissədən daha incə olmalı və uzunluğu təxminən 45 μm və uzunluğu boyunca sabit bir diametrə sahib olmalıdır. Onun yuvarlanmaması vacibdir.

Anormallıqlar tez-tez qarışıq olduğundan, teratozoospermiya indeksi (TZI) həqiqətən faydalıdır. Bu indeks anormal sperma başına anormallıqların orta sayıdır. Onu hesablamaq üçün 200 spermatozoid sayılır (bu yaxşı rəqəmdir). Bu saydan baş, orta hissə və quyruqdakı anormallıqlar, həmçinin ümumi anormal spermatozoidlər hesablanır. Bu tapşırıq yerinə yetirildikdən sonra TZI aşağıdakı kimi hesablanır:

  • x = anormal spermatozoidlərin sayı.
  • h = baş anomaliyaları olan spermatozoidlərin sayı.
  • m = orta hissənin anomaliyaları olan spermatozoidlərin sayı.
  • t = quyruq anomaliyaları olan spermatozoidlərin sayı.

Digər maraqlı bir indeks isə TZI ilə eyni şəkildə hesablanan spermatozoidlərin deformasiya indeksidir (SDI), lakin anormal spermatozoidlərin sayına bölmək əvəzinə, bölünmə hesablanan spermatozoidlərin ümumi sayına görə aparılır. TZI 1-dən (hər sperma üçün yalnız bir anormallıq) 3-ə qədər (hər spermada üç növ anormallıq var) dəyərlər qəbul edir.

Morfologiya, in vitro gübrələmə zamanı oositlərin mayalanmasında uğurun göstəricisidir.

Bütün spermatozoidlərin 10%-ə qədəri müşahidə edilə bilən qüsurlara malikdir və bu səbəbdən oositlərin mayalanması baxımından əlverişsizdir. [14]

Həmçinin, quyruq ucu şişkinlik nümunələri olan sperma hüceyrələrində ümumiyyətlə anevloidiya tezliyi daha az olur. [15]

A hərəkətli sperma orqanoidlərinin morfologiyasının müayinəsi (MSOME) xüsusi morfoloji araşdırmadır, burada yüksək güclü optika ilə təchiz edilmiş və rəqəmsal görüntüləmə ilə təkmilləşdirilmiş tərs işıq mikroskopundan x6000-dən yuxarı böyütmə əldə etmək üçün istifadə olunur ki, bu da embrioloqların intrasitoplazmik sperma üçün spermatozoid seçimində adətən istifadə etdiyi böyütmədən xeyli yüksəkdir. inyeksiya (x200 - x400). [16] MSOME ilə bağlı potensial tapıntı sperma xromatinin yetişməməsi ilə əlaqəli olan sperma vakuollarının olmasıdır, xüsusən də böyük vakuollar vəziyyətində. [17]

Həcmi redaktə etmək

Bir laboratoriya test təlimatına əsasən 2,0 ml və 5 ml arasında olan sperma həcmi normaldır [6] ÜST 1,5 ml-i aşağı istinad limiti kimi qəbul edir. [8] Hipospermiya adlanan aşağı həcm, seminal veziküllərin qismən və ya tam tıxanmasını və ya kişinin seminal veziküllər olmadan doğulduğunu göstərə bilər. [5] Klinik praktikada sonsuzluq şəraitində 0,5 ml-dən az həcm çox güman ki, natamam boşalma və ya nümunənin qismən itirilməsi ilə bağlıdır, bundan başqa, xəstə hipoandrogenizm və obstruktiv azospermiya üçün qiymətləndirilməlidir. sonuncu boşalmadan nümunənin toplanması vaxtına qədər ən azı 48 saat.

İnsan boşalması əsasən sudan ibarətdir, spermanın 96-98%-i sudur. Kişinin daha çox boşalma [18] istehsal etməsini təmin etməyin bir yolu daha çox maye içməkdir. Kişilər də uzun cinsi stimullaşdırma və oyanmadan sonra daha çox seminal maye istehsal edirlər. Seks və mastürbasyon tezliyinin azaldılması sperma həcmini artırmağa kömək edir. Cinsi yolla keçən xəstəliklər də sperma istehsalına təsir göstərir. İnsan immunçatışmazlığı virusuna (HİV) yoluxmuş [19] kişilər daha az sperma istehsal edirlər.

Spermanın həcmi də artırıla bilər, bu vəziyyət hiperspermiya kimi tanınır. 6 ml-dən çox həcm prostatın iltihabını göstərə bilər. Həcm olmadıqda, vəziyyət retrograd boşalma, anatomik və ya nevroloji xəstəliklər və ya antihipertenziv dərmanlar nəticəsində yarana bilən aspermiya adlanır.

Rəng Redaktəsi

Sperma adətən ağımtıl-boz rəngə malikdir. Kişi yaşlandıqca sarımtıl rəng almağa meyllidir. Spermanın rənginə yediyimiz qida da təsir edir: sarımsaq kimi kükürddə yüksək olan qidalar kişidə sarı sperma əmələ gətirə bilər. [20] Spermada qan olması (hematospermiya) qəhvəyi və ya qırmızı rəngli boşalmaya səbəb olur. Hematospermiya nadir bir vəziyyətdir.

Tünd sarı rəngə malik olan və ya yaşılımtıl görünüşlü sperma dərmana görə ola bilər. Qəhvəyi sperma, əsasən, prostat vəzinin, uretranın, epididimin və seminal veziküllərin infeksiyası və iltihabı nəticəsində yaranır. [ sitat lazımdır ] Qeyri-adi sperma rənginin digər səbəbləri arasında gonoreya və xlamidiya kimi cinsi yolla ötürülən infeksiyalar, cinsiyyət orqanlarının əməliyyatları və kişi cinsi orqanlarının zədələnməsi daxildir.

Fruktoza səviyyəsini dəyişdirin

Spermada fruktoza səviyyəsi, spermanın hərəkəti üçün mövcud olan enerjinin miqdarını müəyyən etmək üçün təhlil edilə bilər. [6] ÜST hər nümunə üçün 13 μmol normal səviyyəni təyin edir. Fruktoza olmaması seminal veziküllərlə bağlı problemi göstərə bilər. [5]

PH Edit

Bir laboratoriya test təlimatına əsasən normal pH diapazonu 7,1-8,0-dır [6] ÜST meyarları normalı 7,2-7,8 ​​olaraq təyin edir. [5] Asidik boşalma (aşağı pH dəyəri) seminal veziküllərdən birinin və ya hər ikisinin bloklandığını göstərə bilər. Əsas boşalma (daha yüksək pH dəyəri) infeksiyanı göstərə bilər. [5] Normal diapazondan kənar pH dəyəri sperma üçün zərərlidir və onların yumurtaya nüfuz etmə qabiliyyətinə təsir edə bilər. [6] Son pH, köməkçi vəzi ifrazatları, qələvi seminal vezikulyar ifrazat və asidik prostat sekresiyalarının pH dəyərləri arasındakı tarazlıq nəticəsində yaranır. [21]

Mayeləşdirmə Redaktəsi

Mayeləşmə seminal veziküllərdən zülalların əmələ gətirdiyi gelin parçalanması və spermanın daha maye olması prosesidir. Nümunənin qalın geldən mayeyə çevrilməsi üçün adətən 20 dəqiqədən az vaxt lazımdır. NICE təlimatlarında 60 dəqiqə ərzində mayeləşmə vaxtı normal diapazonlar daxilində hesab olunur. [22]

MOT Edit

MOT hər ml-də neçə milyon sperma hüceyrəsinin yüksək hərəkətli olduğunun ölçüsüdür, [23] yəni, təxminən a dərəcəsi (otaq temperaturunda 5 sek. üçün >25 mikrometr) və b dərəcəsi (otaq temperaturunda 25 sek. üçün >25 mikrometr). ). Beləliklə, sperma sayı və hərəkətliliyin birləşməsidir.

Bir saman [24] və ya 0,5 millilitrlik flakonun həcmi ilə ümumi təlimat ondan ibarətdir ki, intraservikal mayalanma (ICI) üçün cəmi 20 milyon hərəkətli sperma olan saman və ya flakon tövsiyə olunur. Bu, MOT5-li 0,5 ml-lik 8 saman və ya flakona və ya 2 saman və ya MOT20 flakonuna bərabərdir. İntrauterin mayalanma (IUI) üçün 1-2 MOT5 saman və ya flakon kifayətdir. [25] ÜST baxımından, beləliklə, ICI-də təxminən 20 milyon a+b dərəcəli sperma və IUI-də 2 milyon a+b dərəcəli spermadan istifadə etmək tövsiyə olunur.

DNT zədələnməsi Redaktə edin

Sonsuzluqla əlaqəli sperma hüceyrələrində DNT zədələnməsi istilik və ya turşu müalicəsinə cavab olaraq denatürasiyaya DNT həssaslığının təhlili [26] və/yaxud iki zəncirli qırılmaların olması ilə aşkar edilən DNT fraqmentasiyasının aşkarlanması ilə yoxlanıla bilər. TUNEL analizi. [27] [28] DNT fraqmentasiyasını ölçmək üçün həyata keçirilən digər üsullar bunlardır: SCD (sperma xromatinin dispersiya testi), ISNT (yerində nik tərcüməsi), SCSA (sperma xromatinin struktur analizi) və kometa analizi.

Ümumi hərəkətli spermatozoidlər Edit

Tam hərəkətli spermatozoid (TMS) [29] və ya ümumi hərəkətli sperma sayı (TMSC) [30] bütün boşalmada neçə milyon sperma hüceyrəsinin hərəkətli olduğunu ölçən sperma sayı, hərəkətliliyi və həcminin birləşməsidir.

ICI-də hərəkətlilik dərəcəsi c və ya d olan təxminən 20 milyon sperma və IUI-də 5 milyon spermanın istifadəsi təxmini tövsiyə ola bilər.

Digərləri Redaktə edin

Nümunə ağ qan hüceyrələri üçün də sınaqdan keçirilə bilər. Spermada ağ qan hüceyrələrinin yüksək səviyyəsi leykospermiya adlanır və infeksiyanı göstərə bilər. [5] Kəsmələr fərqli ola bilər, lakin misal olaraq bir millilitr sperma başına 1 milyondan çox ağ qan hüceyrəsi var. [5]

    : spermanın olmaması : spermanın olmaması : spermanın az olması : yüksək sperma həcmi : Çox aşağı sperma sayı : zəif sperma hərəkətliliyi : sperma adi haldan daha çox morfoloji qüsurlar daşıyır : boşalmada olan bütün spermalar ölüdür
  • Leykospermiya: spermada ağ qan hüceyrələrinin yüksək səviyyəsi

Spermanın keyfiyyətindən başqa, nəticələrə təsir edə biləcək müxtəlif metodoloji amillər var ki, bu da üsullararası dəyişkənliyə səbəb olur.

Mastürbasyondan alınan nümunələrlə müqayisədə, toplama prezervativlərindən alınan sperma nümunələri daha yüksək ümumi sperma sayına, sperma hərəkətliliyinə və normal morfologiyalı sperma faizinə malikdir. sitat lazımdır ]. Bu səbəblə sperma analizi üçün istifadə edildikdə daha dəqiq nəticələr verəcəyinə inanılır.

Kişinin ilk nümunəsinin nəticələri subfertildirsə, onlar ən azı daha iki analizlə təsdiqlənməlidir. Hər analiz arasında ən azı 2-4 həftə vaxt verilməlidir. [31] [ tibbi sitat lazımdır ] Tək kişi üçün nəticələr zamanla böyük miqdarda təbii dəyişkənliyə malik ola bilər, yəni tək bir nümunə kişinin ortalama sperma xüsusiyyətlərini təmsil edə bilməz. [ tibbi sitat lazımdır ] Bundan əlavə, sperma fizioloqu Coanna Ellinqton hesab edir ki, müayinə üçün boşalma nümunəsi istehsal etmək stressi, çox vaxt naməlum şəraitdə və heç bir yağlama olmadan (sürtkülərin çoxu sperma üçün bir qədər zərərlidir) kişilərin ilk nümunələrinin tez-tez zəif nəticələr göstərdiyini izah edə bilər. sonrakı nümunələr normal nəticələr göstərir. [ tibbi sitat lazımdır ]

Kişi öz nümunəsini klinikada deyil, evdə hazırlamağa üstünlük verə bilər. Sperma toplanması saytı edir yox sperma analizinin nəticələrinə təsir edir.. [32] Əgər evdə istehsal edilərsə, nümunə mümkün qədər bədən istiliyinə yaxın saxlanılmalıdır, çünki soyuq və ya isti şəraitə məruz qalma sperma hərəkətliliyinə təsir göstərə bilər.

Nümunə qabının çəkisini ölçməklə, boş qabın kütləsini bilməklə həcmi müəyyən etmək olar. Sperma sayı və morfologiyası mikroskopla hesablana bilər. Sperma sayı, sperma ilə əlaqəli zülalın miqdarını ölçən və evdə istifadə üçün uyğun olan dəstlərlə də təxmin edilə bilər. [33] [ etibarsız tibbi mənbə? ]

Kompüter dəstəkli sperma analizi (CASA) avtomatik və ya yarı avtomatik sperma analizi üsulları üçün hər şeyi əhatə edən ifadədir. Əksər sistemlər görüntü təhlilinə əsaslanır, lakin rəqəmsallaşdıran planşetdə hüceyrə hərəkətini izləmək kimi alternativ üsullar mövcuddur. [34] [35] Kompüter dəstəkli üsullar ən çox sperma konsentrasiyasının və sürət və xətti sürət kimi hərəkətlilik xüsusiyyətlərinin qiymətləndirilməsi üçün istifadə olunur. Hal-hazırda, görüntü analizinə əsaslanan və yeni texnikalardan istifadə edərək, mükəmməl nəticələrə yaxın olan və bir neçə saniyə ərzində tam analiz edən CASA sistemləri mövcuddur. Bəzi üsullarla sperma konsentrasiyası və hərəkətliliyin ölçülməsi ən azı cari əl üsulları qədər etibarlıdır. [36]

Raman spektroskopiyası sperma nüvə DNT zədəsinin xarakteristikasını, identifikasiyasını və lokalizasiyasını yerinə yetirmək qabiliyyətində irəliləyiş əldə etmişdir. [37]


AP Biologiyası

Hal-hazırda elmə məlum olan bütün elementlər - və mövcud olacağı proqnozlaşdırılan, lakin hələ də kəşf edilməmiş bir neçə element - dövri cədvəl adlanan cədvəldə təşkil edilmişdir. Elementlərin təşkili təsadüfi deyil, elm adamları elementlərin kimyəvi xassələrini dövri cədvəldə harada düşdüklərinə görə proqnozlaşdıra bilərlər.

Hər bir element bir kvadratla təmsil olunur. Hər bir element üçün bir və ya iki hərfli abbreviatura da kvadratda verilmişdir. Bundan əlavə, hər bir element nüvədə olan protonların sayına uyğun gələn atom nömrəsi kimi tanınan bir nömrəyə malikdir.

Diqqət yetirin ki, nömrələr cədvəlin yuxarı sol küncündə 1-dən başlayır və sətirlər boyu soldan sağa artır. Sətirdə boşluqlar varsa, rəqəmlər hələ də birbaşa keçəcək.

Yerdəki civənin çoxu qayalarda ilişib qalır və geoloji proseslər nəticəsində təbii olaraq buraxılır. Bununla belə, insan fəaliyyəti atmosferə çoxlu miqdarda civə buraxılmasına səbəb olur. Bu çirkləndiricilərin artan hasilatı həm ətraf mühiti, həm də insanları daha böyük risk altında qoyur.

1) YÜKSƏK ASİDLİ VƏ ƏSAS ŞƏRTLƏR: - Yüksək turşu və ya yüksək əsas vəziyyət zülalın açılmasına səbəb ola bilər ki, bu da onun strukturunu pozaraq denaturasiyaya səbəb ola bilər.

2)YÜKSƏK DUZ KONsentrasiyası:- Yüksək duz konsentrasiyası su təbəqəsini zülal molekullarından ayıraraq onun denatürasiyasına səbəb ola bilər.

3) YÜKSƏK İSTİLİK:- Yüksək istilik zülal zəncirlərini silkələyir və mürəkkəb zülalın qırılmasına səbəb olur və açılmamış zülal yapışaraq daha mürəkkəb bir quruluş əmələ gətirir.

Bu lipid bir fosfat qrupuna bağlanmış iki yağ turşusu quyruğundan ibarətdir.
lipid növü: fosfolipid.

Bu lipid su itkisinin qarşısını almaq və zərərvericilərdən qorunmaq üçün bir çox bitki səthini əhatə edir.
lipid növü: mum.

Hüceyrələr fərdi olaraq canlıdır və həyatın əsas struktur və funksional vahidləridir.

Membran zülalının növü: yapışma zülalı

Membran zülalının funksiyası: Hüceyrə xaricində müəyyən bir maddə ilə birləşir

Membran zülalının növü: reseptor zülalı

Membran zülalının funksiyası: Aktiv və ya passiv nəqliyyat vasitəsilə xüsusi ionların və ya molekulların membrandan keçməsinə kömək edir.


Müzakirə

Bu işdə, dərc edilmiş proteomik məlumatlardan başlayaraq, ehtimal olunan İnsan Spermatozoa İnteraktomunu (HSIN3.0 və HSIN3.0_MC) təmsil edən şəbəkələri həyata keçirdik. Şəbəkə modelini əldə etdikdən sonra mühüm bioloji məlumatları çıxarmaq üçün onun topologiyasını qiymətləndirdik. Birincisi, aydındır ki, HSIN3.0 və HSIN3.0_MC xüsusi topologiya ilə xarakterizə olunur: onlar Barabasi-Albert (BA) modelinə uyğun olaraq miqyassız şəbəkələrdir. Onlar düyünlərin düyün dərəcəsinin geniş heterojenliyi ilə xarakterizə olunur. Xüsusilə, BA şəbəkələrində aşağı sayda yüksək əlaqəli qovşaqlar (“hublar”) daha çox sayda çətin bağlanan qovşaqlarla birlikdə mövcuddur [18]. Dinamik nöqteyi-nəzərdən bu şəbəkələr zaman keçdikcə yeni qovşaqların qovşaqlara üstünlük verməsi hesabına böyüyür: bir qovşaq nə qədər çox birləşdirilirsə, onun yeni qovşağı (imtiyazlı əlavə) cəlb etmə ehtimalı bir o qədər yüksəkdir [19] ]. Beləliklə, ehtimal səh i yeni node node ilə bağlıdır i edir:

harada k i node dərəcəsidir i və cəmi əvvəlcədən mövcud olan bütün qovşaqlar üzərində edilir j [19, 20]. Nəhayət, şəbəkə daxilində qovşaqların qovşaq dərəcəsi güc qanunu paylanmasına, yəni bir düyünün olması ehtimalına uyğundur. k keçidlər aşağıdakılardır P(k)

k − γ , burada γ dərəcə göstəricisi adətən 2 ilə 3 arasında dəyişir. İerarxik şəbəkələr kimi miqyassız şəbəkələrin digər modellərindən fərqli olaraq, BA şəbəkələrində klasterləşmə əmsalı, C(k), müstəqildir k və orta yolun uzunluğu izlənir l

Bu kontekstdə biz bioloji cəhətdən uyğun molekulları müəyyən etmək üçün ən çox əlaqəli qovşaqları axtardıq. Hubların təhlili çox maraqlı məlumatlar və çox düşündürücü məlumatlar təqdim edir. Həqiqətən də, hər yerdə olan hüceyrə komponentləri (ATP vəziyyətində olduğu kimi) və ya sperma fiziologiyasının modulyatorları kimi tanınan molekullarla (məsələn, Ca 2+ bax) bir neçə şübhəsiz düyün tapdıq. Onlar hüceyrə dövrünə nəzarət, zülal sintezi, nüvə alveri və immun reaksiya kimi sperma hüceyrələrində mövcud olmadığı və ya aktiv olmadığı düşünülən funksiyalarda xüsusi olaraq iştirak edən molekulları təmsil edir. Bütün bu hallarda, bu nəticənin həqiqi bioloji mənasını yoxlamaq üçün spermatozoidlərdə bu funksiyaları araşdırmaq çox vacib olacaqdır. Hər halda, bu tədqiqat digər proteomik tədqiqatlarla (istinad üçün bax [7]) sperma biologiyasının öyrənilməsinə potensial olaraq yeni perspektivlər aça bilər.

Bu günə qədər bütün tədqiqatçılar hubların tərifində razılaşmırlar və onların topoloji və funksional xüsusiyyətlərinə dair birmənalı rəy mövcud deyildir [22]. Hər halda, məlumatlarımız sperma Interactome şəbəkəsində müxtəlif funksiyaların idarə edilməsində iştirak edən qovşaqları və müəyyən bir funksiyaya nəzarət etməyə həsr olunmuş qovşaqları fərqləndirmək mümkün olacağını göstərir. Han və başqalarına uyğun olaraq. [23] nüvə sıxlığının təxminini apararaq şəbəkə daxilində ən çox bağlı olan qovşaqların (hublar) klasterləşmə əmsalı qiymətlərini təhlil etdik. Nəticədə biz qovşaqların müxtəlif alt populyasiyalarını müəyyən etdik (bax. Əlavə fayl 3). Böyük olanı bu parametrin çox aşağı qiymətləri ilə xarakterizə olunur, 0-dan təxminən 0,17-yə qədər, digəri isə kiçikdir və onun klaster əmsalı əhəmiyyətli dərəcədə yüksəkdir, 0,83-dən 0,89-a qədər. Qovşaqların müxtəlif klasterləşməsinin sperma fiziologiyasında müvafiq molekulun fərqli funksional mənası ilə bağlı ola biləcəyini fərz etmək olar. Görünür, bu fərq Han və həmkarlarının iki müxtəlif tipli qovşaqları “partnyorlarının əksəriyyəti ilə eyni vaxtda qarşılıqlı əlaqədə olan [və klasterləşmə əmsalının aşağı qiymətləri ilə xarakterizə olunan] “partiya” mərkəzlərini müəyyən edən fərziyyəsi ilə uyğun gəlir. Fərqli partnyorlarını müxtəlif vaxtlarda və ya yerlərdə birləşdirən [və klasterləşmə əmsalının daha yüksək dəyərlərini göstərən] “tarix” mərkəzləri” [23].

Məsələn, burada ən vacib (düyün dərəcəsi baxımından) partiya mərkəzi ATP-dir, o, açıq-aydın müxtəlif vaxtlarda və hüceyrəaltı yerlərdə saysız-hesabsız kimyəvi reaksiyalarda iştirak edir və beləliklə, ümumi mərkəz kimi davranır. Enerji substratı olaraq, kişi cinsi hüceyrələrində ATP qlikoliz və mitoxondrial oksidləşdirici fosforlaşma ilə istehsal olunur, spermatozoidlərdə ifadə olunan iki əsas metabolik yol fərqli hüceyrə alt bölmələrində lokallaşdırılmışdır: qlikoliz əsasən qlikolizlərin olduğu flagellumun lifli qabığında baş verir. sıx bağlanır, oksidləşdirici fosforlaşma isə mitoxondriyada, spermanın orta hissəsində baş verir [24]. Bir yolun üstünlüklü istifadəsi yüksək növlərə xasdır [25].

İkinci subpopulyasiya (tarix mərkəzləri) az klasterləşmə və interferon ailəsinin üzvlərinin olması ilə xarakterizə olunur. Somatik hüceyrələrdə məlum olduğu kimi, interferon immun reaksiyada iştirak edir, viruslar, bakteriya və parazitlər kimi patogenlərin iştirakı ilə sərbəst buraxılır. Bundan əlavə, interferon təbii öldürücü hüceyrələr və makrofaqlar kimi immun hüceyrələri aktivləşdirir və antigen təqdimatını tənzimləməklə ev sahibi müdafiəsini artırmağa qadirdir. Spermatozoadakı funksiyası zəif öyrənilmişdir və yetkin kişi cinsi hüceyrələrində onun bioloji aktivliyi haqqında yalnız bir neçə məlumat var. Spermatogenez zamanı, Hibi və başqalarının təklif etdiyi kimi, INF-nin əsas rol oynaya biləcəyi güman edilirdi. [26] α-IFN tətbiqinin testis spermatogenezini yaxşılaşdırdığını və siçovulda epididimal sperma konsentrasiyasını artırdığını aşkar etdilər. Maraqlıdır ki, onlar həmçinin aşkar etdilər ki, spermatozoidlərin mütərəqqi hərəkətliliyi α-IFN müalicəsi ilə təsirsizdir, serum LH səviyyələri azalıb və serum testosteron və FSH səviyyələri əhəmiyyətli dərəcədə artıb. Bu yaxınlarda Satie et al. [27] IFN_(Tg10) üçün transgenik siçan ştammı və IFNAR(Tg10-)-nin IFNAR1 alt vahidi olmayan bacı ştamını müqayisə etdi.İfnar1 _/_ ), testisdə transgeni ifadə edən hər iki suş. Tg10 siçanları, lakin ikiqat mutant Tg10- deyilİfnar1 _/_ , dəyişdirilmiş spermatogenez göstərdi. IFNAR-dan asılı olan ən mühüm histoloji dəyişiklik IFN istehsalının başlamasından 3 həftə sonra, postnatal 20-ci gündə baş verən bütün cinsi hüceyrə kateqoriyalarında daha yüksək apoptoz indeksi olmuşdur. Tg10 Sertoli hüceyrələrində və prepaxiten mikrob hüceyrələrində tənzimlənir. 60-cı gündə Tg10 erkəkləri steril idi və Sertoli hüceyrələri anti-Müllerian hormonun konsentrasiyasının artdığını və inhibin B istehsalının azaldığını göstərdi. Bu tapıntılara əsasən, onlar belə nəticəyə gəldilər ki, I tip interferon siqnalı kişi idiopatik sonsuzluğun etiopatogenezində iştirak edə bilər. germ hüceyrələri və Sertoli hüceyrələri arasında qarşılıqlı əlaqə.

Tarix və partiya mərkəzləri arasındakı fərq klinik andrologiyada dərmanların və ya diaqnostik vasitələrin dizaynı üçün vacib ola bilər [28].

Güclü nəzarəti həyata keçirən qovşaqların ikinci sinfi, əsasən şəbəkə daxilində informasiya axınına nəzarətlə məşğul olan darboğazlardır. Qovşaqlara gəldikdə, sperma fiziologiyasında iştirak etdiyi bilinən bir neçə molekul darboğazları təmsil edir (bax. Əlavə fayllar 1 və 2). Maraqlıdır ki, qovşaqlarla müqayisədə, darboğazlarda daha az təmsil olunan zülallar (müvafiq olaraq 28-ə qarşı 59) və daha çox təmsil olunan reaksiyalar (müvafiq olaraq 81-ə qarşı 9) olur, beləliklə, məlumat axınına nəzarətin daha güclü aktuallığını göstərir (yuxarıya bax, KO siçanlarının analizinin nəticələri).

Nəzəri məlumatlarımızın etibarlılığını qiymətləndirmək üçün biz KO siçanlarının reproduktiv fenotiplərinin təhlilinin nəticələrini qiymətləndirdik. Başqa sözlə, biz müvafiq genlər və onların məhsuldarlığa təsirindən sonra HSIN3.0_MC mərkəzləri və darboğazları ilə bağlı məlumatları müqayisə etdik. Çox maraqlıdır ki, biz hublarda və qeyri-hub qovşaqlarında məhsuldarlıq fenotiplərinin tezliyinin faizinin əhəmiyyətli dərəcədə fərqlənmədiyini aşkar etdik (səh = 0,21991) (Cədvəl 3-ə bax), halbuki 100% hallarda darboğaz zülalını kodlaşdıran genlərin silinməsi sonsuzluğa səbəb olur.

Bu tapıntı bizi şəbəkəmizdə darboğazların mərkəzlərdən daha vacib rol oynadığı qənaətinə gətirir. Bu fərqli bioloji funksiyanın səbəbini şəbəkənin xüsusi topologiyasında tapmaq olar. Həqiqətən də HSIN3.0_MC birbaşa bağlantılardan ibarətdir (bir neçə yolun birliyidir) ona görə də onu tənzimləyici şəbəkə hesab etmək olar. Yu et al tərəfindən zərif şəkildə nümayiş etdirildiyi kimi. [29] bu halda darboğaz hublardan daha vacibdir, qarşılıqlı əlaqə şəbəkələrində isə mərkəz şəbəkələrin əsas nəzarətçisidir.

Aydındır ki, bu eksperimentdə darboğazların azlığı, spesifik fərqlər və zülal olmayan düyünləri sınamağın qeyri-mümkün olması səbəbindən əhəmiyyətli məhdudiyyətlər var. Hər halda, fikrimizcə, bu tapıntı mühüm nəticələrə malik ola bilər, çünki o, tənzimləyici və qarşılıqlı əlaqə şəbəkələri arasında funksiya müddətindəki fərqi təsdiqləyir və daha ümumi nöqteyi-nəzərdən, silico-dan istifadə etməklə mürəkkəb bioloji funksiyanı tədqiq etməyə imkan verir. şəbəkə)-in vivo (KO siçanları) onların mürəkkəbliyinə nəzarət edərək [30].

HSIN3.0_MC-də qovşaqları və darboğazları müəyyən etdikdən sonra, Advanced Network Merge (Cytoscape Tools menyusunda) funksiyasının “kəsişməsi” funksiyasından istifadə edərək, biz əksər qovşaqların şəbəkəsinin darboğaz şəbəkəsi ilə kəsişməsini hesabladıq, onların hər ikisi cytoHubba ilə əldə edilir. Bu yolla biz spermatozoidlərin fiziologiyasında iştirak edən nəzarət mexanizminin əsasını təmsil edən şəbəkəni (Human Sperm Interactome Control Network, HSICN, bax. Şəkil 3) əldə etdik. Onun təhlili bir neçə qovşaqın bütün şəbəkənin nəzarətçisi rolunu oynaması fikrini vurğuladı və iki mühüm bioloji nəticə çıxarmağa imkan verdi. Birincisi, biz sperma fiziologiyası və patologiyasının öyrənilməsində böyük potensial tətbiqləri olan kişi gametlərinin funksiyasının nəzarət mexanizmlərinin xəritəsini yaratmaq mümkün olduğunu nümayiş etdirdik. Sonra, bir neçə hallarda, nəzarətçilər spermatozoidlərdə zəif və ya ümumiyyətlə öyrənilməyən molekullardır. Bu, bir tərəfdən çoxlu sayda xəstələrdə etioloji diaqnozun aparılmasının mümkünsüzlüyünü (kişi mənşəli açıqlana bilməyən sonsuzluq) izah edə, digər tərəfdən isə yeni tədqiqatlar üçün bir neçə yeni hədəf təklif edə bilər.

HSICN. Şəbəkələr məkan olaraq Cytoscape Prefuse Force Directed Layout istifadə edərək təqdim edildi. Bu proqram "qüvvəyə yönəldilmiş" "paradiqmaya əsaslanır. Şəbəkə qovşaqları elektronlar kimi bir-birini itələyən fiziki obyektlər kimi qəbul edilir. Düyünlər arasındakı əlaqələrə cüt qovşaqlara bərkidilmiş metal yaylar kimi baxılır. Bu yaylar dəf edir və ya onların son nöqtələrini funksional qüvvədə olan funksiyaya uyğun olaraq cəlb edir. Düzəliş alqoritmi qovşaqların mövqelərini şəbəkədəki qüvvələrin cəmini minimuma endirəcək şəkildə təyin edir "(Cytoscape 3.4.0 İstifadəçi Təlimatı http://manual.cytoscape.org/) en/stabil/index.html)). Düyün diametri dərəcə nodu ilə birbaşa mütənasibdir və node rəng qradiyenti qırmızıdan (daha yüksək) yaşıldan (aşağı) qruplaşma əmsalından asılı idi.

Hələ də aparıcı sperma fiziologiyasında aktiv mexanizmlərə baxsaq, Uniprot istifadə edərək həyata keçirilən protein xüsusiyyətlərinin təhlilinin nəticələri çox maraqlıdır. Axtarış parametrləri olaraq, şəbəkə daxilində tənzimləyici qovşaqları müəyyən etmək məqsədi ilə sperma fiziologiyası və biokimyası ilə bağlı məlum və ya ehtimal edilən amillərdən istifadə etdik. HSIN3.0_MC-də mövcud olan zülalın metal bağlanması (12.3%), kalsiumun bağlanması (2.12%), pH (1.29%) və temperatur (0.32%) ilə tənzimləndiyini aşkar etdik (bax. Əlavə fayllar 4, 5, 6 və 7). ) (biz Uniprot tərəfindən göstərilən, aşağı qiymətləndirilən faizləri bildirdik).

Metal bağlama və kalsium bağlama

Məlumdur ki, spermatozoidlərin biokimyəvi mexanizmləri metal ionlarının nəzarəti altındadır. Burada biz tapdıq ki, Mg 2+, Ca 2+, Zn 2+ və Fe 2+ 41, 37, 21 və 14 keçidləri olan HSIN3.0_MC mərkəzləridir. Bu məlumat yumurta kanalında metalların (ya fizioloji şəraitdə və ya neyroendokrin siqnallara cavab olaraq) olması fonunda çox maraqlıdır, əslində onların hamısı ferment kofaktorlarıdır, beləliklə spermatozoidlər tərəfindən ifadə edilən bütün biokimyəvi mexanizmlərin modulyasiyasında razılaşırlar. Məsələn, məlumdur ki, ovulyasiyadan dərhal əvvəl məməlilərin yumurta kanalı mayesində Ca 2+ konsentrasiyası hormonal nəzarət altındadır və homeostazın modulyasiyasında və sperma hərəkətliliyinin hiperaktivliyində iştirak edir [31], həmçinin Ca 2+ sperma tutumunda və akrozom reaksiyasında əsas element [13, 16]. Həqiqətən, spermatozoidlər neyronlar kimi həyəcanlı hüceyrələr, yəni bioloji funksiyası kalsiumdan çox asılı olan hüceyrələr kimi təsnif edilir.

Üstəlik, sink müxtəlif məməli və məməli olmayan modellər üzərində müxtəlif təcrübələrdə tədqiq edilmişdir. İnsan andrologiyasında seminal plazma sink konsentrasiyasının kişi sonsuzluğu ilə mənfi əlaqəli olduğu aşkar edilmişdir [32] və onun faydalı fəaliyyətinin antioksidan xüsusiyyətlərinə görə ola biləcəyi irəli sürülür [33,34,35]. Bundan əlavə, bu ion akrosin kimi bir neçə fermentlə qarşılıqlı əlaqədə olur və beləliklə onların funksiyasını modulyasiya edir.

pH: sperma hüceyrədaxili pH hüceyrə funksiyasının mühüm nəzarətçisidir. Bu yaxınlarda nəzərdən keçirildiyi kimi, "spermatozoidlərin funksiyası üçün vacibdir. Xüsusilə, aradan qaldırılması sonsuzluğa səbəb olan bir neçə unikal sperma ionu daşıyıcısı və fermenti ya pHi-dən asılıdır, ya da bir şəkildə pH ilə əlaqəlidir.i tənzimlənməsi” [36]. Xüsusilə pH-da iştirak edən molekullari nəzarət CatSper, Ca 2+ kanalı Slo, K+ kanalı sperma xüsusi Na + /H + dəyişdiricisi və həll olunan adenilil siklazadır və hərəkətlilik, tutum və akrozom reaksiyası kimi əsas sperma funksiyalarında aktivdir.

Temperatur

Spermatozoa qadın cinsiyyət orqanlarında səyahət edərkən, temperatur gradientini yaradan ətraf mühitin temperaturunda sahəyə xas fərqlər yaşayır. Bu günə qədər insanın uşaqlıq borusundakı temperaturla bağlı məlumatlar mövcud deyil, halbuki məməli modellərində (xüsusilə də dovşan və cücərtilərdə) yumurta kanalında mayalanma yerinin sperma anbarından 1-2 °C daha isti olduğu aşkar edilmişdir [37] . Dovşanda bu temperatur fərqinin zamandan asılı olduğu və ovulyasiyadan əvvəl 0,8 ± 0,2 °C-dən ovulyasiyadan sonra 1,6 ± 0,1 °C-ə qədər yüksəldiyi göstərilmişdir [38].

Bu fenomendə iştirak edən mexanizmlər hələ tam başa düşülməmişdir, lakin üç fərqli determinant təklif edilmişdir:

Geniş endotermik nəmlənməyə məruz qalan makromolekulun, turşu mucus qlikoproteinin hormondan asılı sərbəst buraxılması [39]

Qanın əks cərəyan istilik mübadiləsi: yumurtalıq venasından gələn soyuq qan yumurtalıq kanalına yönəlmiş qanı soyuyur (bu, testis pampiniform pleksusunda olduğu kimi) [40]

Qan təchizatı mənbəyində dəyişiklik: yumurtlamadan əvvəl daha isti yumurtalıq arteriyası və yumurtlamadan sonra daha soyuq uşaqlıq arteriyası [41].

Maraqlıdır ki, bu günə qədər spermatozoidlərin termotaksisində iştirak edən spesifik siqnal yolları məlum deyil, halbuki bu sübutun tutumdan asılı olduğu başa düşülür: yalnız tutumlu spermatozoidlər termotaktik reaksiya verir [37].


Maqnitlə aktivləşdirilmiş hüceyrə çeşidlənməsindən sonra insan spermasında DNT fraqmentasiyası

Seçilməmiş apoptotik spermatozoidlərlə gübrələmə köməkçi reproduktiv üsulların uğursuzluğuna səbəb ola biləcəyi üçün, müvəffəqiyyət nisbətlərini artırmaq üçün bu növ spermanın çıxarılması vacib hala gəldi. Maqnetik aktivləşdirilmiş hüceyrə çeşidlənməsi (MACS) apoptotik spermanın membranında fosfatidilserinin ifadəsinə əsaslanaraq apoptotik olmayan spermatozoidləri təcrid edən sperma hazırlama üsuludur. Buna görə də, sperma DNT parçalanmasında (sDNAfrag) əhəmiyyətli bir azalma olub-olmadığını qiymətləndirməyi və hansı protokolun ən effektiv olduğunu yoxlamağı hədəflədik.

Metodlar

Yüz sperma nümunəsi beş fərqli qrupa bölündü və sıxlıq qradiyenti sentrifuqasiyası (DGC) və üzmə (SU) üsulları ilə MACS birləşməsinə uyğun olaraq emal edildi.Sperma DNT fraqmentasiyası terminal deoksinukleotidil transferaz dUTP nick-end labeling (TUNEL) analizi ilə qiymətləndirilib.

Nəticələr

DGC-SU (73,4%), DGC-MACS-SU (78,9%), DGC-SU-MACS (53,8%) və MACS-SU (73,5%) qrupları sDNAfragda əhəmiyyətli azalma göstərdi, lakin ən yüksək azalma nisbəti ilə əldə edildi. MACS-DGC-SU (83,3%). Daha sonra da spermanın canlılığı, membranın bütövlüyü və mütərəqqi hərəkətliliyi ilə mənfi əlaqədə idi. Bundan əlavə, teratozoospermik xəstələrdə astenozoospermik və astenoteratozoospermik xəstələrə nisbətən daha az sDNAfrag azalma dərəcəsinə malik olmaq meyli müşahidə edilmişdir.

Nəticələr

Nəticələrə əsasən, MACS, DGC və SU-dan əvvəl xam spermaya tətbiq edildikdə, xüsusilə mütərəqqi hərəkətlilik, canlılıq və hipoosmotik şişkinlik testinin aşağı dəyərləri olan nümunələrdə sDNAfrag azalma sürətini optimallaşdırmaq potensialı göstərdi.


Müzakirə

Əvvəllər aşkar etdik ki, PRM1 və ya PRM2 üçün kifayət qədər haploin sperma nəsil doğura bilmədi. SDS lizis tamponunda PRM1 və ya PRM2 çatışmazlığı olan spermanın nüvələrindən DNT reduksiyaedici maddə olmadıqda sərbəst buraxıldı, halbuki vəhşi tipli sperma nüvələrindən DNT-ni azad etmək üçün disulfid bağının parçalanması lazım idi [2]. Protaminlərin DNT-nin kiçik yivində molekullararası və molekuldaxili disulfid bağları ilə bağlanmış sıx yığılmış massivlərə yığılaraq sperma xromatinini sabitləşdirdiyinə inanılır. Bundan əlavə, 1) protamin çatışmazlığı kişilərdə sonsuzluqla əlaqələndirilir [5, 6, 12], 2) DNT zədəsi ilə insan spermasının tezliyi ICSI-dən sonra embrion inkişafın uğursuzluğu ilə əlaqələndirilir [7], 3) sperma DNT-sinin zədələnməsi ata tərəfindən siklofosfamidə məruz qalması siçovullarda 80%-dən çox peri-implantasiya nəslinin itirilməsi ilə nəticələndi [13] və 4) artan miqdarda qamma şüalanmasına məruz qalan siçan spermasından yaranan blastosistlərin faizi DNT zədələnmə dərəcəsi artdıqca azaldı [ 14]. Bu müşahidə bizi fərz etməyə vadar etdi ki, kimeraların 129 genotipini nəsillərə ötürməməsi, protaminlərin haploinçatışmazlığının sperma DNT-nin təşkili və bütövlüyündə dəyişikliklə nəticələnməsi ilə bağlıdır. Hazırkı araşdırmanın nəticələri bu hipotezi dəstəkləyir.

İşıq mikroskopu səviyyəsində aparılan müşahidələr protamin çatışmazlığı olan bəzi spermaların başlarının anormal formasına malik olduğunu göstərdi [2]. Skan edən elektron mikroskopiyadan istifadə edərək, plazma membranı ilə sərbəst şəkildə bağlanmış kiçik və ya anormal formalı başları olan sperma tezliyini PRM2 çatışmazlığı olan sperma faizi ilə əlaqələndirdik. Transmissiya elektron mikroskopiyası aşkar etdi ki, PRM2 çatışmazlığı olan spermadakı xromatin vəhşi tip siçanların spermadakı xromatindən daha az kompaktdır və gec uzanan spermatidlərdəki kondensasiya kromatinə bənzəyir. Bu fərqlər PRM2 səviyyəsinin azalması nəticəsində yaranan struktur dəyişiklikləri ilə bağlı ola bilər, çünki protaminlərdəki müsbət yüklü arginin qruplarının DNT-də mənfi yüklü fosfat qruplarını neytrallaşdırdığına inanılır [15, 16]. Buna görə də, protaminin miqdarının azalması yalnız xromatinin əsas komponentlərinin stoxiometriyasını deyil, həm də sperma nüvəsindəki xalis yükü dəyişdirəcək və bununla da xromatinin kondensasiyasına və sabitliyinə təsir edəcəkdir.

Digər tədqiqatlarla yanaşı, bizim nəticələrimiz ICSI-dən sonra PRM2 çatışmazlığı və inkişaf uğursuzluğu arasındakı əlaqəyə dair fikirlər verir. Bu günə qədər, funksional ata genomunun embriogenezdə iştirak etməsi üçün minimal tələb struktur olaraq bütöv nüvə matrisi olan sperma nüvəsidir. Sitoplazmik komponentlərdən təmizlənmiş və ICSI üçün istifadə edilən sperma nüvələri canlı nəsillər üçün inkişaf edən embrionlar istehsal etmişdir [17]. Bununla belə, ICSI-dən əvvəl proteaz və ya disulfid bağını azaldan agent ilə müalicə inkişaf uğursuzluğu ilə nəticələndi [18]. Biz əvvəllər PRM2 çatışmazlığı olan spermaların hərəkətsiz olduğunu aşkar etmişik [2]. Sperma hərəkətliliyinin pozulması spermanın həyat qabiliyyətinin itirilməsi ilə əlaqədar ola bilər ki, bu da xromatinin pozulmasına səbəb olur. Bu tədqiqatda sperma ICSI-dən əvvəl başları və quyruqları ayırmaq üçün yüngül şəkildə sonikləşdirildi. Ola bilsin ki, sonikasiya PRM2 çatışmazlığı olan spermanın dəyişdirilmiş xromatin bütövlüyünə əlavə ziyan vurur. Beləliklə, PRM2 çatışmazlığı olan sperma ilə enjekte edilmiş bəzi yumurtaların inkişaf uğursuzluğu ölü spermada mövcud olan və/və ya sonikasiya nəticəsində yaranan zədələrə görə dolayı təsir ola bilər. Buna baxmayaraq, aberrant nüvə forması və PRM2 çatışmazlığı olan spermanın xromatin sıxlığının azalması bu nüvələrin struktur bütövlüyünün pozulduğunu, embrion inkişafının uğursuzluğuna səbəb olduğunu qəti şəkildə göstərir.

PRM2-nin natamam işlənməsi heterozigot mutasiyaları olan siçanların spermalarında görüldü. Prm1Prm2 [2] və PRM1 və ya PRM2 və ya digər nüvə komponentlərinin səviyyəsində dəyişikliklər olduqda tez-tez müşahidə olunur. Bu, null mutasiyaları olan siçanların spermasında müşahidə olunub Tp1 [ 19], Tp2 [20] və Camk4 [21, 22] bastırılması ilə Prm1 Transgenik siçanlarda [24] və sonsuz kişilərin spermasında [6, 25] PRM1-in vaxtından əvvəl tərcüməsi ilə MSY4 funksiyasını artıran transgen siçanlarda [23] tərcümə. Bu tədqiqatların bəzilərində sonsuzluq baş versə də [23, 24], digərlərində [19-21] görülməmişdir ki, bu da PRM-2-nin natamam işlənməsinin PRM2 çatışmazlığı ilə ICSI-dən sonra baş verən inkişaf uğursuzluğunun əsas səbəbi olmadığını göstərir. sperma.

Heterozigot mutasiyaları olan siçanlarda müşahidə edilən sperma xromatinin kondensasiyasında qüsurlar Prm1Prm2 [2] transgen ifadə edən quş protamininin spermatidlərdə [26] sıfır mutasiyalarında ifadə edildiyi zaman da baş vermişdir. Tp1 [ 19], Tp2 [20] və Csnk2a2 [27] yatırılması ilə Prm1 MSY4 funksiyasını artıran transgen siçanlarda [23] və bəzi sonsuz kişilərin spermasında [28] tərcümə. Yalnız natamam DNT kondensasiyasını müşahidə edən bəzi tədqiqatlarda sonsuzluq müşahidə edildiyindən [2, 23] qüsurlu xromatin kondensasiyası tək başına kişi genomunun inkişafda iştirakının qarşısını almaq üçün kifayət olmaya bilər. Bununla belə, nüvə matrisinin pozulmasını ehtiva edən xromatin kondensasiyasında daha ciddi qüsurlar DNT bütövlüyünə təsir göstərə bilər.

PRM2, müxtəlif məməli növlərinin spermadakı ümumi protamininin 0%-dən təxminən 80%-ə qədərini təşkil edir ki, bu da PRM1, PRM2 və DNT-nin bir-birindən xeyli fərqli stexiometriyaları olan müxtəlif növlərdə komplekslər yaratmaq üçün qarşılıqlı əlaqədə olduğunu göstərir [1]. Baxmayaraq ki, məməli sperma DNT-si nukleosomlardan əhəmiyyətli dərəcədə böyük olan toroidal subunitlərdə qablaşdırılır [29], protaminlər bir-biri ilə ardıcıl şəkildə qarşılıqlı əlaqədə olmur və onların DNT-yə bağlanması ardıcıllıqla müstəqildir [1]. Bununla belə, müəyyən bir növ üçün protamin və DNT-nin komplekslərə yığılması çox güman ki, dəqiq stokiometriyaya malikdir. Siçanlardakı spermatidlər PRM1-in [30] həddindən artıq ifadəsini və yüksək səviyyəli quş protamininin [26] ifadəsini kompensasiya edə bilsələr də, PRM1 və ya PRM2 miqdarının azalmasını kompensasiya edə bilmirlər [2, 21, 23]. Bu onu göstərir ki, PRM1 və PRM2 ifadəsi üçün təyin olunmuş nöqtələr kompleks formalaşma və DNT mühafizəsi üçün tələb olunan minimuma yaxındır.

PRM2 çatışmazlığı olan sperma PRM1-in azaldılmış miqdarına malikdir, bu da PRM1-in sperma xromatinə daxil olması üçün normal miqdarda PRM2 tələb etdiyini göstərir. Baxmayaraq ki, PRM1/PRM2 çatışmazlığı olan spermada DNT zədələnməsinə cavabdeh olan mexanizm hələ müəyyən edilməmişdir, biz inanırıq ki, ehtimal olunan ssenari PRM2-nin haploinçatışmazlığının xromatinin əsas komponentləri tərəfindən kompleks əmələ gəlməsinin stoikometriyalarını pozmasıdır. Bu, nüvə matrisinin struktur bütövlüyünü pozan natamam xromatin kondensasiyası ilə nəticələnir. Bu vəziyyət PRM1 və PRM2 miqdarının azalması səbəbindən disulfid bağının formalaşmasının azalması ilə daha da ağırlaşır. Bu dəyişikliklər nəticəsində DNT, PRM1/PRM2 çatışmazlığı olan sperma ilə deyil, tam nüvə komponentləri olan sperma tərəfindən dözülə bilən şərtlərlə reproduktiv sistemdə zədələnmələrə çox həssasdır.

Xülasə olaraq, biz tapdıq ki, 1) kometa analizi ilə görünən zədələnmiş DNT-yə malik sperma faizi, 2) elektron mikroskopiya ilə görülən anormal formalı başlı sperma tezliyi, 3) və uğursuz olan metafaza II-də həbs edilmiş siçan yumurtalarının faizi. ICSI-dən sonra blastosist mərhələsinə qədər inkişafı təhlil edilən nümunələrdə PRM2 çatışmazlığı olan sperma faizi ilə müqayisə edilə bilər. Bənzər nəticələr digər tədqiqatlarda ayrı-ayrılıqda görülsə də, inanırıq ki, bu, onların birlikdə baş verdiyini nümayiş etdirmək üçün heyvan modelindən istifadə edən ilk araşdırmadır. Bu tapıntılar spermadakı protamin səviyyələrinin orta dərəcədə azalmasının kişi genomunun gələcək nəslə ötürülməsi ilə uyğun olmayan DNT-nin zədələnməsi ilə nəticələndiyini göstərir.


Tədqiqatçılar balinaları çəkmək üçün dronlardan istifadə edirlər

Tədqiqatçılar dronlarla fotoşəkilləri çəkilmiş sərbəst yaşayan cənub sağ balinalarının bədən uzunluğunu, enini və hündürlüyünü ölçərək, balinaların bədən həcmini və kütləsini dəqiq hesablayan model hazırlaya biliblər.

Böyük ölçüləri və suda yaşaması səbəbindən, əvvəllər balinaların bədən kütləsi haqqında məlumat əldə etməyin yeganə yolu ölü və ya qapalı fərdləri çəkmək idi.

Yenilikçi metoddan balinaların fiziologiyası və ekologiyası haqqında daha çox məlumat əldə etmək üçün istifadə oluna bilər, "Sərbəst yaşayan balinaların bədən kütləsini bilmək yeni tədqiqat yolları açır. İndi biz hesablamaq üçün məlum yaşlı fərdlərin böyüməsinə baxa biləcəyik. zaman keçdikcə onların bədən kütləsi və böyümək üçün enerji tələbləri artır.Biz balinaların gündəlik enerji tələbatına da baxa və onların nə qədər yırtıcı istehlak etmələri lazım olduğunu hesablaya biləcəyik." Danimarkadakı Orhus Qabaqcıl Tədqiqatlar İnstitutundan köməkçi professor Fredrik Kristiansen və tədqiqatın aparıcı müəllifi dedi.

Woods Hole Okeanoqrafiya İnstitutunun baş alimi və həmmüəllifi Dr. Michael Moore dedi: "Dənizdə canlı balinaların çəkisi ölçülməsi xroniki stress amillərinin onların sağ qalmasına və məhsuldarlığına necə təsir etdiyini bildirir, həmçinin balıq ovu zamanı qarışmış heyvanların dəqiq sakitləşdirici dozasını təyin etməyə imkan verir. sökülmə cəhdlərinə mane olan qurğular."

Model artıq cənub sağ balina balalarının sağlamlığına və sağ qalmasına yosun qağayılarının təcavüzünün təsirlərini qiymətləndirmək üçün istifadə olunur. Cənub Sağ Balina Sağlamlığının Monitorinqi Proqramından Dr. Mariano Sironi və Dr. Marcela Uhart və həmmüəlliflər vurğuladılar: “Balinaların çəkisini və vəziyyətini təxmin etmək, eləcə də analarının yanında böyüdükdə balaları fərdi olaraq izləmək üçün dronlardan istifadə, araşdırmamızda əsl sıçrayış oldu”.

"Keçmişdə biz tədqiqatlarımıza hər cür qeyri-müəyyənlik əlavə edən qapalı cəsədlərə etibar etməli olduq."

Model həmçinin tədqiqatçılara ABŞ-ın Massaçusets Universitetində Rəqəmsal Həyat Layihəsi ilə əməkdaşlıq edərək əvvəlcə balinanın 3D şəbəkəsini yenidən yaratmağa, sonra isə CG rəssamı Robert Qutierrezlə birlikdə sağın tam rəngli 3D modelini yenidən yaratmağa imkan verdi. balina. Bu modellər həm elmi məqsədlər üçün, məsələn, hərəkəti öyrənmək, həm də təhsil məqsədləri üçün istifadə edilə bilər.

Modelin parametrlərini tənzimləməklə, yanaşma alternativ, daha invaziv metodların mümkün və ya arzuolunmaz olduğu digər dəniz məməlilərinin ölçüsünü qiymətləndirmək üçün istifadə edilə bilər.

Mavi balina kimi növlərin daxil olduğu balina balinaları bu planetin ən böyük heyvanlarıdır və bədən kütləsi onların bir heyvan qrupu kimi uğurlarının əsasını təşkil edir. Bununla belə, onların ölçüsü ilə bağlı məlumatlar tarixən ölü nümunələrlə məhdudlaşmışdır, nümunələrin əksəriyyəti balina ovlama əməliyyatları, təsadüfi balıq ovu və ya çimərlik sahillərindən əldə edilir.

Ölü balinalar haqqında məlumatların toplanması, balinanın ömrü boyu uzununa məlumat toplaya bilməmək və şişkinlik və deflyasiya nəticəsində cəsədlərin fiziki təhrifindən yaranan qeyri-dəqiqlik kimi məhdudiyyətlərə malikdir.

Dosent Kristiansen izah etdi ki, "Sərbəst yaşayan balinalarda bədən kütləsini etibarlı şəkildə ölçməkdə çətinlik, bədən kütləsinin ekologiya, fiziologiya və bioenergetikada bir çox tədqiqatlara daxil edilməsinə mane oldu. Bu yeni yanaşma indi nəhayət bu mərkəzi dəyişəni daxil etməyə imkan verəcəkdir. azad yaşayan balinaların gələcək tədqiqatlarına.

Cənub sağ balinalarının bədən həcmini və kütləsini hesablamaq üçün tədqiqatçılar əvvəlcə Argentinanın Península Valdés sahillərində 86 nəfərin havadan fotolarını çəkiblər. Təmiz sular və çoxalmaq üçün hər qış oraya toplaşan çoxlu sayda balinalar onu balinaların həm dorsal, həm də yan tərəflərinin yüksək keyfiyyətli şəkillərini toplamaq üçün ideal yerə çevirdi. Bunlardan uzunluq, en və hündürlük ölçülərini əldə edə bildilər.

Bu ölçmələr daha sonra balinaların bədən formasını və həcmini dəqiq şəkildə modelləşdirmək üçün istifadə edilə bilər. "Biz elmi balina ovlama əməliyyatlarında tutulan balinaların bədən həcmini qiymətləndirmək üçün bu modeldən istifadə etdik, bunun üçün bədən dairəsi və kütləsi məlum idi. Bədən həcminə dair bu təxminlərdən sonra biz balinaların sıxlığını hesablaya bildik ki, biz də öz növbəsində istifadə edə bilərik. dronlarımız tərəfindən çəkilmiş sərbəst yaşayan balinaların kütləsini təxmin etmək. Kristiansen dedi.

Model bədən kütləsi təxminlərini yüksək səviyyəli dəqiqliklə versə də, balina balinalarında fərqli toxumaların nisbi nisbəti səbəbindən bəzi məhdudiyyətlər var idi. Kristiansen dedi: "Biz balinaların sabit bədən sıxlığını qəbul etməli olduq, bu real deyil, çünki balinalar çökdükcə və ya bədən vəziyyətini itirdikcə müxtəlif bədən toxumalarının nisbəti (yağ, əzələ və s.) mövsümi olaraq dəyişir".


Nəticələr

Bütün sperma nümunələri ilk qiymətləndirmədə normozoospermik (konsentrasiya > 15 x l0 6 sperm/ml, proqressiv hərəkətlilik > 32%, canlılıq > 58% və normal formalar > 4%) idi (3-4 gün abstinensasiyadan sonra).

Gözlənildiyi kimi, DE dövründə seminal həcmi azalmışdır. Eynilə, ilkin qiymətləndirmə ilə müqayisədə eyakulyasiya başına spermatozoidlərin ümumi sayı da azalmışdır (p <0.05). Bu müşahidələr artıq 2-ci gündə özünü büruzə verdi. Maraqlıdır ki, sperma konsentrasiyası, hərəkətliliyi, mütərəqqi hərəkətliliyi və morfologiyası Cədvəl 1-də göründüyü kimi bütün DE dövrü ərzində ilk qiymətləndirmədən əhəmiyyətli dərəcədə fərqlənməmişdir. Bununla belə, geniş bir fərddaxili variasiya müşahidə edilmişdir. bu parametrlərin hər birində. Hərəkətlilik və sperma canlılığında incə dəyişikliklər diqqətə layiqdir, ilkin qiymətləndirmə ilə müqayisədə təcrübənin 13-cü günündə canlı spermatozoidlərin sayı faktiki olaraq artmışdır (60,2 ± 3,1 %, p < 0,05). Bundan əlavə, bütün bu əsas parametrlər 4-cü gündə (53.7 ± 7.4%) həyat qabiliyyəti istisna olmaqla, 58%-lik istinad dəyərindən aşağı düşmüş (Cədvəl 1-ə baxın) istisna olmaqla, bütün DE dövrü ərzində ÜST-nin 2010-cu il istinad dəyərlərindən yuxarıda qalmışdır.

Funksional parametrlərin heç biri iki həftəlik DE-dən əhəmiyyətli dərəcədə təsirlənməmişdir. Sperma plazma membranının (≈ 50%-dən çox canlı hüceyrələr) və MMP-nin bütövlüyü bütün dövr ərzində sabit qaldı. DNT parçalanma faizi ilkin ölçmədən əhəmiyyətli dərəcədə fərqlənmədi. DFI məqbul səviyyələrdə qaldı (<29%). Hüceyrədaxili ROS istehsalına gəldikdə, zamanla azalma tendensiyası müşahidə edildi (statistik cəhətdən əhəmiyyətli deyil). DE dövründə həm şərti, həm də funksional seminal parametrin daxili və fərdi dəyişməsi Şek. 1 və 2.

Ənənəvi sperma parametrlərinin daxili və fərdi dəyişməsi. Gündəlik tez-tez boşalmanın qiymətləndirilməsi dövründə şərti parametrlərin (spermanın həcmi, sperma konsentrasiyası, hərəkətlilik və canlılıq) paylanması. n = hər parametr üçün 6 fərd (A-F).

Funksional sperma parametrlərinin fərdi və daxili dəyişməsi. Gündəlik boşalma dövründə funksional parametrlərin (DNT parçalanma indeksi, mitoxondrial membran potensialı, plazma membranının bütövlüyü, reaktiv oksigen növləri) paylanması. Hər bir parametr üçün n = 6 fərd (A-F) (DFI: DNT Fragmentation Index, MMP: Mitoxondrial Membran Potensial, membranın bütövlüyü faizi və hüceyrədaxili ROS istehsalı: Reaktiv Oksigen Növləri)


İnsan spermasının dondurulması: Texnikaların yenilənməsi, DNT bütövlüyünə təsiri və ART üçün təsirləri

1960-cı illərdə tətbiq edilən insan spermatozoalarının dondurulması bədxassəli xəstəliklərin terapiyası, vazektomiya və ya cərrahi sonsuzluğun müalicəsindən əvvəl kişilərin fertilliyinin idarə edilməsi, köməkçi reproduksiya müalicələrindən əvvəl donor və partnyor spermatozoidləri saxlamaq və bərpasını təmin etmək üçün effektiv prosedur kimi tanınıb. ağır kişi amili sonsuzluğunda az sayda spermatozoid. Faydalı olmasına baxmayaraq, kriokonservasiya sperma strukturunda və funksiyasında zərərli dəyişikliklərə səbəb ola bilər: dondurulmuş konservasiyanın hüceyrələrə təsiri yaxşı sənədləşdirilmiş olsa da, bu günə qədər ədəbiyyatda kriokonservasiyanın sperma xromatinin bütövlüyünə təsir edib-etməməsi ilə bağlı heç bir razılaşma yoxdur. dondurma-ərimə proseduru üçün unikal və funksional protokolun istifadəsi. Buna görə də, spermanın dondurulması məhsuldarlığın idarə edilməsinin mühüm komponentidir və onun uğurlu tətbiqinin çox hissəsi köməkçi reproduksiya texnologiyalarının (ART) reproduktiv nəticələrinə təsir göstərir: kriokonservasiyadan əvvəl kriyoprotektorlardan düzgün istifadə və sonra sperma seçmə texnologiyaları, görünür, profilaktikaya ən böyük təsir göstərir. DNT-nin parçalanması, beləliklə spermanın kriosurvival nisbətlərini yaxşılaşdırır.

1. Giriş

Hüceyrələri kriogen temperaturda sabitləşdirməyə imkan verən prosedur kriokonservasiya adlanır ki, bu da kriobiologiyanın tətbiqi aspekti və ya aşağı temperaturda həyatın öyrənilməsi kimi tanınır. Dondurma texnologiyasındakı bir çox irəliləyişlər kişi və qadın gametləri, kiçik çoxhüceyrəli orqanizmlər və embrionlar kimi daha mürəkkəb orqanizmlər də daxil olmaqla müxtəlif hüceyrə növlərinin aşağı temperaturda saxlanmasına imkan verən metodların inkişafına səbəb olmuşdur. 1960-cı illərdə [1] tətbiq edilən insan spermatozoidlərinin dondurulmuş konservasiyası bir çox məkan və zaman məhdudiyyətlərini dəf etdi və hazırda köməkçi reproduksiya texnologiyalarının (ART) tərkib hissəsini təşkil edir.

Bu üsul, radioterapiya və ya kimyaterapiyadan [2] əvvəl kişi reproduktivliyinin qorunub saxlanması hallarında xüsusi əhəmiyyət kəsb edir ki, bu da testis çatışmazlığına və ya boşalma disfunksiyasına səbəb ola bilər. Əslində, spermanın kriostorasiyası bu cütlüklərə gələcəkdə uşaq sahibi olmaq şansı verə biləcək yeganə sübut edilmiş üsul kimi görünür: xərçəng müalicəsi əslində zədələnməyə səbəb ola bilər, cinsiyyət bezlərinin çıxarılması və ya mikrob hüceyrələrinin daimi zədələnməsi səbəbindən subfertilite və ya sterilliyə səbəb ola bilər. adjuvan terapiya nəticəsində yaranır. Xüsusilə, terapiya ilə bağlı risk bir neçə amildən asılıdır: müalicə zamanı xəstənin yaşı, dozası, yeri və müalicə növü [3]. Həmçinin şəkərli diabet və otoimmün xəstəliklər kimi bəzi bədxassəli xəstəliklər xayaların zədələnməsinə səbəb ola bilər. Bu şərtlərdə də dondurulmuş konservasiya məsləhətdir [4]. Heteroloji mayalanmaya qanunla icazə verilən ölkələrdə və donor mayalanma proqramlarında donorlarda donorların immunçatışmazlığı (HİV) və hepatit B virusları kimi infeksion agentləri yoxlamaq üçün kifayət qədər vaxt lazımdır ki, donor konservləşdirilmiş sperma kliniki tədqiqatlar üçün istifadə olunsun. məqsədləri [5]. Testis sperma ekstraksiyasından və ya perkutan epididimal sperma aspirasiyasına məruz qalmış azospermik xəstələrdə təkrar biopsiya və ya aspirasiyaların qarşısını almaq üçün sperma kriostorajından da istifadə olunur [6]. Bundan əlavə, kriokonservasiya mütəmadi olaraq köməkçi reproduksiya müalicəsinə başlamalı olan xəstələrdə tez-tez “sperma toplama stressi”, müəyyən emosional vəziyyətlər və ya digər öhdəliklərlə əlaqəli uğursuz boşalma səbəbindən narahatlığın qarşısını almaq üçün sperma nümunəsini qabaqcadan dondurmağa qərar verən xəstələrdə həyata keçirilir. oositlərin toplanması vaxtı [7]. Nəhayət, kişi gametlərinin dondurulması bu və ya digər səbəbdən gametogenezə mane ola biləcək potensial zəhərli maddələrə məruz qalan subyektlərdə məhsuldarlığı qorumaq üçün tövsiyə olunur [7].

2.Kriyokonservasiya üçün üsullar

Spermanın dondurulmasında iki əsas şərti dondurma texnikası istifadə olunur: yavaş dondurma və sürətli dondurma

2.1. Yavaş Dondurma

Behrman və Sawada [8] tərəfindən təklif olunan yavaş dondurma texnikası spermanın 2-4 saat ərzində iki və ya üç addımda, ya əllə, ya da avtomatik olaraq yarı proqramlaşdırıla bilən dondurucudan istifadə edərək mütərəqqi soyudulmasından ibarətdir.

Əl üsulu, mərhələli şəkildə krioprotektor əlavə edilərkən və nümunələr maye azotun içinə salındıqdan sonra spermanın temperaturu eyni vaxtda aşağı salınmaqla həyata keçirilir [9]. Nümunənin otaq temperaturundan 5°C-yə qədər optimal ilkin soyutma sürətinin 0,5-1°C/dəq olduğu göstərilmişdir [10]. Sonra nümunə 1-10°C/dəq sürətlə 5°C-dən -80°C-yə qədər dondurulur. Sonra nümunə −196°C-də maye azotun içinə salınır [11].

Əl üsulları ilə müvəffəqiyyətli sperma dondurulduğunu göstərən hesabatlara baxmayaraq, bu prosedurun təkrarlanması bəzi problemlər yarada bilər. Bu səbəbdən proqramlaşdırıla bilən dondurucular tədqiq edilmişdir [12]. Dondurucular samanları saxlamaq üçün boşqabdan istifadə edirlər, bunlar boşqabın altındakı saxlama çənində saxlanılan maye azotla soyudulur. Maye azot tanka tökülür və maşın proqramlaşdırıldıqdan sonra 1,5°C/dəq sürətlə 20°C-dən -80°C-ə qədər soyutma əldə etmək üçün proqram məlumatlarının qeydindən istifadə edir və başa çatdıqdan sonra 6°C/dəq. Dondurulduqdan sonra saman çıxarılır və maye azotda -196°C-də saxlanılır. Bu, təxminən 40 dəqiqə çəkir [12]. Proqramların istifadəsi sadədir və operatorun davamlı müdaxiləsini tələb etməyən və dondurma əməliyyatlarının təkrar istehsalını artırmaq üçün istifadə edilən soyutma birləşməsinə imkan verir [12].

Bəzi müəlliflər adi yavaş dondurmanın da olduğunu iddia edirlər təlimat və ya avtomatlaşdırılmış, ehtimal ki, buz kristallaşması səbəbindən spermaya geniş kimyəvi-fiziki ziyan vurur [13].

2.2. Sürətli Dondurma

Sürətli dondurma ilk dəfə Şerman tərəfindən təklif edilmişdir [14]. Bu texnika 8-10 dəqiqə ərzində samanlarla azot buxarları arasında birbaşa təması və -196°C-də maye azotda batırılmasını tələb edir. Azot buxarlarının içərisində məsafədən və aşağıdakı mayenin həcmindən asılı olaraq istilik gradienti var. Nümunə əvvəlcə bərabər həcmdə soyuq krioprotektor ilə damcı şəkildə qarışdırılır və qarışıq samanlara yüklənir və 4°C-də 10 dəqiqə inkubasiyaya buraxılır. Sonra samanlar maye azot səviyyəsindən (-80°C) 15-20 sm məsafədə, bu mərhələdən sonra 15 dəqiqə ərzində yerləşdirilir, samanlar maye azotda batırılır. Soyutma zamanı iki uc arasındakı istilik fərqini minimuma endirmək üçün samanları üfüqi vəziyyətdə yerləşdirməyə üstünlük verilir. Bu texnikanın bəzi çatışmazlıqları var ki, bunlar arasında, məsələn, aşağı təkrar istehsal, həqiqətən də, temperatur düşmə əyrisi idarə oluna bilməz və donma temperaturları -70, -80 və -99°C arasında dəyişə bilər [7].

2.3. Kiçik Spermatozoaların Kriyokonservasiyası

Yuxarıda təsvir edilən ənənəvi sperma kriokonservasiyası üsulları epididimal və testis spermatozoidləri kimi kiçik sayda hüceyrələrin dondurulması üçün ideal deyil. Bu fəsildə əvvəllər qeyd olunduğu kimi, cərrahi yolla əldə edilmiş spermatozoidlərin effektiv dondurulması cərrahi müdaxilələrin sayını azaldır və qadınların oosit alınmasının koordinasiyası ilə bağlı logistik problemin qarşısını alır, həmçinin oositlərin götürüldüyü gün sperma tapılmaması riskini aradan qaldırır [15] . Beləliklə, yeni dondurulmuş konservasiya yanaşmaları məhdud sayda hərəkətli spermanı çox kiçik həcmdə dondurmaq üçün nəzərdə tutulmuşdur (Cədvəl 1). Həm bioloji, həm də qeyri-bioloji daşıyıcılar az sayda spermatozoidlərin kriokonservasiyası üçün sınaqdan keçirilmişdir, baxmayaraq ki, bu günə qədər hər hansı bir daşıyıcının digərlərindən üstün olduğunu nümayiş etdirmək üçün heç bir perspektivli randomizə edilmiş sınaqlar aparılmamışdır [15]. Bundan əlavə, bu günə qədər IVF proqramlarının əksəriyyətində bu texnologiyalardan məhdud istifadə var. Bu, kiçik sperma nömrələrini idarə etmək üçün nəzərdə tutulmuş və daha da tədqiq edilməli olan yeni dondurulmuş konservasiya texnologiyasını göstərir [15]. İstifadə olunan üsuldan asılı olmayaraq, yaxşı nəticələr əldə etmək üçün kriokonservasiyadan əvvəl və sonra bütün addımları düzgün yerinə yetirmək vacibdir: daha uyğun krioprotektorların seçilməsi və ərimə proseduru xüsusilə vacibdir.

2.4. Krioprotektorlar

Krioprotektorlar spermatozoidləri buz kristallaşması nəticəsində donma zədələnməsindən qorumaq üçün istifadə edilən aşağı molekulyar çəkili və yüksək keçirici kimyəvi maddələrdir. Dörd əsas tanınmış krioprotektor var: qliserin, etilen qlikol, dimetil sulfoksid və 1,2-propandiol. Krioprotektorlar maddənin donma nöqtəsini azaltmaqla, nümunənin maye fazasında olan duzların və həll olunan maddələrin miqdarını azaltmaqla və spermatozoidlərdə buz əmələ gəlməsini azaltmaqla fəaliyyət göstərir [16]. Adətən krioprotektorlar bərabər həcmdə spermaya damcı şəklində əlavə edilir, otaq temperaturunda yumşaq qarışdırılır və hüceyrələr və mühit arasında düzgün tarazlıq yaratmaq üçün 37°C-də 10-15 dəqiqə yerləşdirilir [7]. Mühitin hüceyrələrlə qarşılıqlı əlaqədə olması lazımdır. Həqiqətən, krioprotektor maddələrin effektivliyi həm də kriyoprotektorlar və hüceyrələr arasında qarşılıqlı təsir müddətindən asılıdır [7]. Qliserin, insan sperması üçün ən çox istifadə olunan nüfuz edən krioprotektordur: membran quruluşu, lipid ikiqatının keçiriciliyi və sabitliyi, səth zülallarının birləşməsi və hüceyrə metabolizması. Onun istifadəsi membran və akrozom strukturunda əlverişsiz nəticə verir, baxmayaraq ki, keyfiyyətsiz spermanın dondurulmasına imkan verir [7]. Shermanın [14] tədqiqatları göstərdi ki, qliserol istifadəsi bir neçə dəyişikliyə səbəb ola bilər: dalğavari membranın olması, akrosomal daxili membranda dəyişiklik, nüvənin qeyri-homogenliyi və mitoxondrial zirvələrdə qeyri-mütəşəkkillik. Bu müşahidələrdən sonra 4°C-də istifadə edildikdə insan spermasına zərərli təsir göstərən dimetil sulfoksid (DMSO) və spermanın kriokonservasiyasında azca istifadə edilən 1,2-propandiol kimi digər qoruyucu maddələr təklif edilmişdir [7].

2.5. Ərimə Proseduru

Ərimə proseduru eyni dərəcədə vacib bir addımdır: mümkün qədər kəskin istilik dəyişikliklərindən qaçmağa çalışaraq hüceyrənin normal bioloji fəaliyyətini bərpa etməsinə icazə verilməlidir. Ümumiyyətlə, kriokonservasiya protokolları 37°C-lik ərimə temperaturundan istifadə edir, hətta daha yüksək ərimə temperaturları daha sürətli qızdırmağa imkan versə də, hüceyrə zədələnməsi ilə bağlı risklər səbəbindən istifadə edilmir.

Hal-hazırda, bir neçə ərimə üsulları istifadə olunur, bunlar arasında (i) otaq temperaturunda 10 dəqiqə ərimə və sonrakı termostatın 37 ° C-də daha 10 dəqiqə keçməsi, (ii) termostatda və 37 dərəcə su banyosunda ərimə. °C 10 dəqiqə, (iii) otaq temperaturunda 15 dəqiqə ərimə.

Sperma əridildikdən sonra mədəni mühitdə yuyularaq və sentrifuqa edilərək kriokonservasiya mühitindən ayrılır [7].

3. Sperma bütövlüyünə kriokonservasiyanın zərərli təsiri

Digər hüceyrə növləri ilə müqayisədə spermatozoidlər membranın yüksək axıcılığı və aşağı su tərkibi (təxminən 50%) səbəbindən kriokonservasiyanın zədələnməsinə daha az həssas görünür. Buna baxmayaraq, kriokonservasiya sperma strukturunda və funksiyasında zərərli dəyişikliklərə səbəb ola bilər [17]. İnsan spermatozoidlərinin dondurulması-əriməsi zamanı hüceyrədaxili və hüceyrədənkənar buz kristallarının əmələ gəlməsi ilə termal şok, hüceyrə susuzlaşdırması və osmotik şok kimi bir sıra zədələyici proseslərin baş verə biləcəyi geniş şəkildə bildirilmişdir [18].

Kriyokonservasiya zamanı hüceyrə zədələnməsinin əsas səbəbi hüceyrədaxili və ya hüceyrədənkənar buz kristallarının əmələ gəlməsidir. Dondurma prosesi zamanı spermatozoidlərin krio zədələnmə dərəcəsinin müəyyən edilməsində soyutma sürəti mühüm rol oynayır [9].

Sürətli soyutma sürəti ciddi hüceyrədaxili buz əmələ gəlməsinə səbəb olur, çünki suyun membrandan keçməsi pozulur, beləliklə, həddindən artıq soyumağa səbəb olur.

Yaranan buz kristalları membranları pozur və orqanoid funksiyasına təsir göstərir. Bu vəziyyət hüceyrələrin sağ qalmasının pozulmasına səbəb olur. Digər tərəfdən, çox yavaş bir soyutma sürəti suyun daxili mühitdən xarici mühitə axmasını təyin edir, həll olunan maddələrin konsentrasiyasını və osmotik təzyiqi artırır. Bu vəziyyət suyun hərəkəti, dehidrasiya və yüksək məhlul konsentrasiyası səbəbindən toksiklik zədələnməsi ilə bağlı hüceyrə həcmində dəyişikliklərə gətirib çıxarır [9]. Kriyoxəsarət donma prosesi ilə məhdudlaşmır, həm də buzun əriməsi və ya yenidən kristallaşması zamanı ərimə prosesində də baş verə bilər [9]. Dondurulmuş nümunələrdə həm hüceyrədaxili, həm də hüceyrədənkənar buzun yenidən kristallaşması fenomeni temperaturun artması ilə artan yenidən kristallaşma sürəti ilə daha kiçik buz kristalları şəklində baş verir [13].

Soyuqdəymə zədəsinin əsasən fosfolipidlərdən və xolesteroldan [21] ibarət olan plazma membranlarının [19, 20] quruluşunu və bütövlüyünü dəyişdirə biləcəyi geniş şəkildə bildirilmişdir.

Yüksək konsentrasiyalarda xolesterin və çoxlu doymamış yağ turşuları aşağı temperaturda membrana daha çox axıcılıq versə də [22], kriokonservasiya zamanı soyutma prosesi membran lipidlərinin faza keçidinə səbəb olur və membran zülalının funksiyasını pozur. Xüsusilə, spermatozoidlərin plazma membranının xarici təbəqəsi əsasən plazma membranının ayrılmaz zülalına (qlikoproteinlər) və ya lipidlərə (qlikolipidlər) bağlanan oliqosakkarid zəncirlərini ehtiva edən karbohidratla zəngin zona olan qlikokaliksdən ibarətdir [23]. Ümumiyyətlə, kriokonservasiya qlikokaliksin karbohidrat tərkibini dəyişdirərək zərərli təsir göstərə bilər, beləliklə, ionların daşınması və metabolizmindən məsul olan membran zülallarının funksiyasını pozur və gübrələmə qabiliyyətinə təsir göstərir [24]: qlikokaliks bəzi fizioloji funksiyalarda iştirak edir, məsələn: qadın genital traktının immun qorunması [25], akrosomal reaksiya [26] və erkən gamet qarşılıqlı.

Plazma və mitoxondrial membranlar kriokonservasiyaya eyni həssaslığa malikdir [27]. Mitoxondriyalar plazma membranı ilə doqquz lifli sütun arasında orta hissə boyunca yerləşdirilərək spermanın hərəkətliliyi üçün lazım olan enerjini təmin edən bir örtük meydana gətirir [27]. Ən böyük enerji sitoplazmada qlikoliz [28] və ya mitoxondriyada oksidləşdirici fosforlaşma (oksfos) yolu ilə sintez edilən ATP molekulları tərəfindən təmin edilir [10].

Daxili mitoxondrial membranda oxphos tərəfindən yaradılan ATP hərəkətliliyi təmin etmək üçün mikrotubullara köçürülür [29]. Buna görə də, mitoxondrial fəaliyyətin pozulması hərəkətliliyin azalmasını izah edə bilər [27].

Mitoxondrial membranın axıcılığının dəyişməsi də mitoxondrial membran potensialının dəyişməsinə və ROS-un sərbəst buraxılmasına səbəb ola bilər [9]. ROS-un konsentrasiyasının artması nəticəsində yaranan peroksidləşmə zədəsi sperma plazma membranının zədələnməsi və aksonemal strukturun pozulması ilə əlaqələndirilir [30]. Bundan əlavə, dondurulmuş konservasiya spermatozoidlərin antioksidant fəaliyyətini azaldır və onları ROS zədələnməsinə daha həssas edir [31]. ROS-un yüksək konsentrasiyası və antioksidant fermentlərin azalması hüceyrə apoptozuna səbəb olur [32]. Bu kontekstdə apoptoz şəlaləsi BCL2 ailəsi zülallarının aktivləşməsi ilə həyata keçirilir: Bax və BAK zülalları vasitəsilə xarici mitoxondrial membranın keçiriciliyi və sitoxromun sərbəst buraxılması var [33]. Öz növbəsində kaspaza 9 apoptosom əmələ gətirmək üçün APAF-1 ilə birlikdə aktivləşir [34]. Mitoxondriyadan apoptoza səbəb olan amillərin sərbəst buraxılması DNT-nin parçalanmasına səbəb olur [35]. rolunu araşdıran bir sıra tədqiqatlar in vitro sperma DNT-ni oksidləşdirici zərərdən qorumaq üçün antioksidant əlavə. Məsələn, kriokonservasiya zamanı toxum mayesinə əlavə olunduqda genistein [36], resveratrol [37] və askorbin turşusu [37] əksinə, DNT zədəsini azaldır, vitamin E [38], askorbat və katalaza [39] hərəkətliliyi yaxşılaşdırır və ROS səviyyələrini azaldır, baxmayaraq ki, onlar spermatozoidlərin canlılığını yaxşılaşdırmır və DNT zədəsini azaltmır. Hər halda, bu tədqiqatların sayı və onların daxil olduğu xəstələrin sayı hələ də DNT-ni dondurma nəticəsində yaranan zərərdən qorumaqda antioksidant əlavələrin effektivliyinə dair hər hansı nəticə çıxarmaq üçün çox məhduddur.

3.1. Kriyokonservasiya və DNT-nin zədələnməsi

Spermatozoaların mayalanma qabiliyyətinə, hərəkətliliyinə, morfologiyasına və canlılığına kriokonservasiyanın təsiri yaxşı sənədləşdirilmiş olsa da, dondurma-ərimə prosedurlarından sonra sperma DNT bütövlüyünün mümkün dəyişməsi məsələsi hələ də açıqdır. Ədəbiyyatda nə kriokonservasiyanın DNT zədələnməsinə səbəb olub-olmaması, nə də zərərin miqdarı ilə bağlı heç bir razılaşma yoxdur. Bəzi tədqiqatlarda müəlliflər kriokonservasiya/əriləmədən sonra sperma DNT bütövlüyündə əhəmiyyətli dəyişiklikləri bildirmişlər [6, 40], digər tədqiqatlar isə fərqli rəy bildirmişlər [41, 42]. Bir araşdırma ilə digəri arasındakı bu mübahisə, ilk növbədə, tapıntıların xeyli sayda nümunəyə istinad etməməsi və həmçinin (1) müxtəlif dondurma prosedurlarının, (2) müxtəlif testlərin istifadəsi ilə izah edilə bilər. DNT bütövlüyünü və (3) kriokonservasiyadan əvvəl müxtəlif sperma hazırlama üsullarını (yəni, üzmə və ya sıxlıq qradiyenti sentrifuqasiyası) qiymətləndirin. Məsələn, Donnelly və həmkarları [6] 50 kişidə həm sperma, həm də hazırlanmış sperma nümunələrinin (sıxlıq qradiyenti və ya birbaşa üzgüçülmə) kriokonservasiyadan əvvəl və kriokonservasiyadan sonrakı DNT bütövlüyünü araşdırdılar. Onlar bildirdilər ki, seminal plazmada spermanın dondurulması ərimədən sonrakı DNT bütövlüyünü yaxşılaşdırır: toxum mayesində hazır olmayan sperma dondurulmuş zədələnməyə dondurulmuş hazırlanmış sperma ilə müqayisədə daha davamlı görünür. Bu, seminal plazmada bol antioksidantların olması ilə əlaqədar ola bilər. Fərqli dondurma prosedurları ilə əlaqəli dəyişkənliyə gəldikdə, Petym və həmkarlarının [43] tədqiqatında müəlliflər iki fərqli proseduru müqayisə edərək sperma xromatini üzərində cryodazage qiymətləndirdilər: maye azot buxarı və kompüterləşdirilmiş proqram dondurucu. Onlar akridin narıncı istifadə edərək 50 sperma nümunəsini təhlil etdilər və maye azotla dondurulduqdan sonra DNT zədəsinin əhəmiyyətli dərəcədə daha yüksək olduğu qənaətinə gəldilər.

Hal-hazırda ədəbiyyatda mövcud olan istinadların ətraflı təhlili nəticəsində məlum oldu ki, sualla bağlı əsasən üç fərqli düşüncə xətti var: “Dondurma-əritmə proseduru sperma DNT zədələnməsinə səbəb olurmu?”.

Bir neçə müəllifə görə cavab “HƏ” (Cədvəl 2(a)). Spano və onun qrupu [44] 19 nümunədə SCSA tərəfindən qiymətləndirilmiş sperma DNT bütövlüyü daxil olmaqla, dondurma-ərimədən sonra ümumi spermanın keyfiyyətinin pisləşdiyini bildirdi. Bu tapıntılar De Paula və həmkarlarının [40] 77 xəstə üzərində apardıqları tədqiqatda təsdiqləndi, burada müəlliflər dondurma-ərimə prosedurundan əvvəl və sonra TUNEL analizi ilə sperma DNT parçalanma dərəcəsini qiymətləndirdilər: müəlliflər vurğuladılar ki, dondurma-ərimə proseduru mənfi təsir göstərir. DNT bütövlüyü. Bundan əlavə, ədəbiyyatda dərc olunan məlumatlardan aydın olur ki, kriokonservasiyanın sperma DNT-sinin zədələnməsinə səbəb olduğunu iddia edən müəlliflər arasında bəzən əslində bu zərəri yaradan mexanizmlə bağlı heç bir razılaşma yoxdur. Məsələn, ROS-un insan spermatozoidlərinin zədələnməsinin, o cümlədən DNT-nin parçalanmasının patofiziologiyasında mühüm rol oynadığı barədə geniş məlumat verilməsinə baxmayaraq, Zribi və onun qrupu [45] DNT fraqmentasiyası ilə DNT oksidləşməsi arasında heç bir əlaqə olmadığını bildirdilər. . Onlar təklif etdilər ki, kriokonservasiya oksidləşdirici stressdən başqa, DNT təmir edən fermentlərdəki qüsurlar və ya sperma hüceyrələrində artıq mövcud olan qüsurların gücləndirilməsi kimi digər yollarla sperma DNT-nin parçalanmasına səbəb olur. Bu fərziyyə Tomson və həmkarları tərəfindən təkzib olunur [46]: DNT oksidləşməsini qiymətləndirmək üçün eyni texnikadan istifadə edilməsinə baxmayaraq, 8 oksoguaninin aşkar edilməsi üçün flüoresan analiz, onlar insan sperma DNT parçalanmasının kriopozlama zamanı oksidləşdirici stressin artması ilə əlaqəli olduğunu bildirdilər. , kaspaza və apoptozun aktivləşdirilməsindən daha çox.

sualı haqqında "Dondurma-əritmə proseduru sperma DNT zədələnməsinə səbəb olurmu?“bəzi müəlliflər başqa düşüncə xəttini izləyir və cavab verirlər”BƏLİ, lakin bəzi şərtlərlə” (Cədvəl 2(b)). Onlar sonsuz kişilərə nisbətən ÜST meyarlarından istifadə etməklə təsnif edilən münbit kişilərin spermatozoidlərində donma zədələnməsinə daha az həssaslıq hipotezini dəstəkləyirlər. Donnelly və həmkarlarının [6] tədqiqatında 17 münbit və 40 sonsuz kişidən sperma nümunələri alınmış və sperma bütövlüyü Kometa analizindən istifadə edərək kriokonservasiyadan əvvəl və sonra qiymətləndirilmişdir. Müəlliflər göstərdilər ki, münbit kişilərdən alınan sperma, sonsuz kişilərdən alınan nümunə ilə müqayisədə donma zədələnməsinə daha davamlıdır, üstəlik, münbit insanda kriokonservasiyadan sonra DNT bütövlüyündə əhəmiyyətli bir azalma müşahidə edilməmişdir. Bu nəticələr sonsuz kişilərin spermatozoidlərinin qeyri-müntəzəm xromatin təşkilinə daha çox rast gəldiyini və münbit kişilərin spermatozoidləri ilə müqayisədə termal denatürasiyaya əhəmiyyətli dərəcədə azalmış müqavimət göstərdiyini müşahidə edir [47, 48]. Əslində, protaminasiyanın azalması nəticəsində keyfiyyətsiz spermatozoidlər çox vaxt funksional yetişməmişlik yaradan qismən dekondensasiya olunmuş xromatini ehtiva edir [6]. Xromatin kondensasiyası spermatozoidlər üçün əsasdır, çünki spermatogenez sitoplazmanın atılması ilə nəticələnir və spermatozoid DNT təmirini həyata keçirə bilmir. Bu fərziyyəyə əsasən, Kalthur və həmkarları [49], sperma morfologiyasını və sperma DNT zədəsini kriokonservasiyadan əvvəl və sonra qiymətləndirərək, dondurma prosesi zamanı morfoloji anormal spermanın DNT zədələnməsinə həssaslığının normal morfologiyalı sperma ilə müqayisədə əhəmiyyətli dərəcədə yüksək olduğunu bildirdilər. Onlar fərz edirdilər ki, baş anomaliyaları olan sperma membranın fiziki xüsusiyyətlərini dəyişdirə bilər və bununla da soyuq stresə qarşı dözümlülük dəyişə bilər. Bununla belə, morfoloji cəhətdən anormal spermanın kriokonservasiya zamanı xromatin bütövlüyünü saxlaya bilib-bilmədiyini qiymətləndirmək üçün heç bir araşdırma aparılmamışdır.

Yuxarıdakı suala verilən bu iki cavabın əksinə olaraq üçüncü bir fikir xətti var: bəzi müəlliflər deyirlər: “XEYR, dondurma-əritmə proseduru sperma DNT bütövlüyünü pozmur” (Cədvəl 2(c)). Məsələn, Duru və onun qrupu [41] TUNEL analizi və anneksin V istifadə edən 21 xəstədə kriokonservasiyanın DNT fraqmentasiyası və membran bütövlüyünə təsirini qiymətləndirdi. Onların nəticələri göstərdi ki, kriokonservasiya plazma membranının simmetriyasını dəyişdi və fosfatidilserin translokasiyası ilə əlaqələndirildi. DNT bütövlüyü qorunurdu. Bundan əlavə, İsaçenko və həmkarları [42], yavaş dondurma və vitrifikasiyanın krioprotektorun olmaması halında sperma DNT bütövlüyünə təsirlərini müqayisə edərək, DNT-nin bütövlüyünün kriopraservasiyadan təsirlənmədiyini müəyyən etdilər. Kriyokonservasiyanın sperma DNT-sinə təsirinin olmaması Paasch və həmkarlarının [50] məlumatları ilə də təsdiq edilmişdir. Onlar nümayiş etdirdilər ki, kriokonservasiya əhəmiyyətli dərəcədə mitoxondrial membran potensialının pozulması, eləcə də kaspaza 3, 8 və 9-un aktivləşməsi ilə bağlıdır, lakin 84 nümunədə TUNEL analizi ilə qiymətləndirildiyi kimi DNT parçalanmasında əhəmiyyətli dəyişikliklər müşahidə olunmayıb.

məsələsi ilə bağlı fikirlər olsa belə.dondurulmuş konservasiya və DNT-nin zədələnməsi” hələ də çox mübahisəlidir, kriokonservasiyanın sperma xromatinə təsirinin qiymətləndirilməsi son dərəcə vacibdir. Eynilə, sperma DNT bütövlüyü ART-nin müvəffəqiyyəti üçün mühüm amildir [51-53].

4. Kriyokonservasiya və Reproduktiv Nəticə

Kriyokonservasiyanın membranlara, akrosomal quruluşa və akrozin aktivliyinə zərərli təsirləri ilə sperma hərəkətliliyinin pozulması və mayalanma sürətinin azaldılması geniş şəkildə məlumdur [54]. İnsan spermatozoidlərinin dondurulması-əriməsi proseduru həmçinin xromatin strukturuna zərər verə bilər [55], oosit içərisinə yeridildikdən sonra sperma nüvəsinin dekondensasiyası potensial riskinə səbəb olur və beləliklə, gübrələmə sürətini azaldır [56]. Bununla belə, kriokonservasiyanın spermanın mayalanma qabiliyyətinə kumulyativ təsiri dəqiq müəyyən edilməmişdir. Spermanın mayalanma gücünün kriokonservasiya nəticəsində azaldığını nəzərə alsaq, asanlıqla başa düşülə bilər ki, intrauterin mayalanma və ənənəvi in vitro dondurulmuş əridilmiş spermatozoidlərlə mayalanma (IVF) təzə sperma ilə mayalanma ilə müqayisədə hamiləlik nisbətinin aşağı olması ilə nəticələnir [1]: bu səbəbdən intrauterin mayalanmadan və ya ənənəvi IVF-dən əvvəl sperma nümunələrinin dondurulması tövsiyə edilmir.

İntrasitoplazmik sperma inyeksiyası (ICSI) üçün mülahizələr fərqlidir, çünki bu prosedur uğurlu mayalanma üçün yalnız az sayda hərəkətli spermatozoid tələb edir. Buna görə də, hazırkı sual, dondurulmuş sperma hüceyrələrindən çox təzə istifadənin ICSI-də reproduktiv nəticəyə eyni təsir göstərib-keçməməsidir. Bu günə qədər ədəbiyyatda təzə və dondurulmuş əridilmiş insan boşalmış, xaya və ya epididimal spermatozoidləri müqayisə edən ICSI reproduktiv nəticələrinə dair yalnız bir neçə irimiqyaslı tədqiqatlar bildirilmişdir və nəticələr həm də mənşəyindən asılı olaraq müəlliflər arasında fərqlənir. işləyən sperma.

4.1. Testis spermatozoidləri

Friedler və həmkarları [57] eyni xəstələrdən təzə və ya dondurulmuş xaya spermatozoidləri ilə ICSI siklləri arasında tədqiq edilmiş bütün parametrlərdə (mayalanma dərəcəsi, parçalanma dərəcəsi, embrion keyfiyyəti, implantasiya dərəcəsi, klinik hamiləlik dərəcəsi və davam edən hamiləlik dərəcəsi) statistik əhəmiyyətli fərqlər olmadığını bildirdilər. , müvafiq olaraq təzə (25 dövr) və ərimiş (14 dövr) testis spermatozoidləri ilə həyata keçirilən bütün ICSI dövrlərinin müqayisəsi. Bu fərziyyə bəzi müəlliflərin araşdırması ilə təsdiqlənir: Ben Rhouma və həmkarları [58] təzə (32 dövr) və ərimiş (28 dövr) testis sperma ilə cəmi 60 ICSI dövrü həyata keçirmişlər Habermann və həmkarları [59] cəmi 46 əməliyyat həyata keçirmişlər. Təzə (12 dövr) və ərimiş (34 dövr) testis spermatozoidləri ilə ICSI dövrləri Huang və həmkarları [60] təzə (14 dövr) və ərimiş (8 dövr) testis spermatozoidləri ilə cəmi 22 ICSI dövrü həyata keçirdilər. Bütün müəlliflər eyni nəticələri bildirdilər: dondurulmuş ərimiş xaya spermatozoidləri ilə ICSI-nin reproduktiv nəticəsi təzə xaya spermatozoidləri ilə əldə edilən ICSI-nin reproduktiv nəticəsi ilə müqayisə edilə bilər. Əksinə, De Croo və həmkarları [61] bildirdilər ki, mayalanma, implantasiya və embrion transferinə görə canlı doğum nisbətləri, dondurulmuş ərimiş (35 dövr) ilə ICSI-dən sonra təzə (65 dövr) testis spermatozoidləri ilə müqayisədə əhəmiyyətli dərəcədə aşağıdır.

4.2. Epididimal Spermatozoa

Digər tərəfdən, bəzi qruplar intrasitoplazmik sperma inyeksiyasının (ICSI) nəticələrini təzə və dondurulmuş ərimiş epididimal spermatozoidlərlə müqayisə etdilər. Məsələn, Tournaye və həmkarları [62] bildirdilər ki, ICSI sikllərində klinik hamiləlik nisbəti təzə (157 sikl) və dondurulmuş ərimiş (118 dövr) epididimal spermatozoidlər arasında müqayisə edilə bilər. Sukcharoen və həmkarları [63] təzə (40 dövr) və ərimiş (13 dövr) epididimal spermatozoidlərlə cəmi 53 ICSI dövrü həyata keçirmiş və eyni nəticəyə gəlmişlər, həmçinin Cayan və həmkarları [64] eyni fikri dəstəkləmişlər. Müxalifətdə Şibahara və həmkarları [65] təzə və ya dondurulmuş epididimal spermatozoidlərlə ICSI dövrləri arasında tədqiq edilən bütün reproduktiv parametrlərdə, təzə (5 dövr) və ərimiş (13 dövr) spermatozoa ilə həyata keçirilən ICSI sikllərini müqayisə edərək, əhəmiyyətli fərq olduğunu bildirdilər.

4.3. Eyakulyasiya edilmiş Spermatozoa

Kriyokonservasiya və ICSI reproduktiv nəticələrinə dair tədqiqatların əksəriyyəti testis və ya epididim mənşəli spermatozoidlərdən istifadə etməklə aparılmışdır. Yalnız iki əsas qrup ICSI-dən sonra təzə və dondurulmuş ərimiş insan boşalmış spermatozoidləri müqayisə edərək gübrələmə və hamiləlik nisbətləri haqqında məlumat verdi. Birincisi, Kucznynski və həmkarları [66] hamısı oliqoastenoteratozoospermik xəstələrdən olan təzə spermatozoidlərdən istifadə edilən 118 ICSI dövrünün və dondurulmuş əridilmiş spermatozoidlərdən istifadə edilən 122 ICSI dövrünün reproduktiv nəticələrini müqayisə etdilər. Müəlliflər iki xəstə qrupu arasında gübrələmə nisbətində statistik əhəmiyyətli fərqlər barədə məlumat vermədilər. Üstəlik, bu məlumatlar göstərir ki, insan sperma nümunələri dondurulmuş halda ICSI xəstələrində davam edən hamiləliklərin dəyərləri əhəmiyyətli dərəcədə yüksək olur. Ragni və onun qrupuna görə [67], bu, düzgün yerinə yetirilən kriokonservasiyanın normal spermatozoidlərdən daha çox qüsurlu spermatozoidlərə selektiv şəkildə təsir etdiyini göstərir [44]. Bu müşahidə göstərir ki, ICSI-dən əvvəl kriokonservasiya qocalmış və ya çatışmazlığı olan spermatozoidləri aradan qaldırmaq üçün faydalı ola bilər, beləliklə, reproduktiv nəticəni yaxşılaşdırır [62]. Borxes və onun qrupu [68] həmçinin spermanın dondurulmasının ICSI nəticələrinə təsirini araşdırdılar. Müəllif dondurulmuş və təzə boşalmış spermatozoidlərlə həyata keçirilən 61 və 79 ICSI dövrlərini müqayisə etdi və xüsusilə, azalmış və normal hərəkətli sperma nümunələrindən istifadə edərək əldə edilən reproduktiv nəticəni araşdırdı. Nəticələr göstərdi ki, (1) normal hərəkətli spermadan istifadə etməklə təzə və ya dondurulmuş əridilmiş spermatozoidlərdən istifadə etməklə əldə edilən reproduktiv nəticə eynidir (2) hərəkətliliyi azalmış spermada təzə sperma ilə mayalanma nisbəti dondurulmuş sperma ilə müqayisədə daha yüksəkdir, lakin yox idi. implantasiya və hamiləlikdə fərqlər aşkar edilmişdir. Bu tapıntı dondurma-əritmə prosedurunun sperma keyfiyyətində dəyişiklikləri olan xəstələrdə normal sperması olan xəstələrə nisbətən daha çox zərər verdiyi fərziyyəsini dəstəkləyir. Bununla belə, oosit dölləndikdən sonra sperma anomaliyaları olan və ya olmayan xəstələrdə implantasiya və hamiləlik nisbətləri oxşardır.

5. Nəticə

Bu gün donor və partnyor spermatozoidləri köməkçi reproduksiya müalicələrindən əvvəl saxlamaq, bədxassəli xəstəliklərin terapiyası, vasektomiya və ya cərrahi sonsuzluq müalicələrindən əvvəl spermatozoidləri saxlamaq və ağır kişi amili sonsuzluğunda az sayda spermatozoidin bərpasını təmin etmək üçün spermanın dondurulması geniş şəkildə istifadə olunur. Buna görə də, spermanın kriokonservasiyası məhsuldarlığın idarə edilməsinin vacib komponentidir və onun uğurlu tətbiqinin çox hissəsi ART-nin reproduktiv nəticələrinə təsir göstərir.

Hüceyrələrə kriokonservasiyanın təsiri yaxşı sənədləşdirilmiş olsa da, bu günə qədər ədəbiyyatda kriokonservasiyanın sperma xromatinin bütövlüyünə təsir edib-etməməsi və ya dondurma-ərimə proseduru üçün unikal və funksional protokolun istifadəsi ilə bağlı heç bir razılaşma yoxdur. Bu onu göstərir ki, bu günə qədər unikal dondurma protokollarından istifadə etməklə emal oluna bilən çoxlu sayda sperma nümunələri ilə çoxmərkəzli tədqiqat aparmaq faydalı olardı. Bundan əlavə, kriokonservasiyanın sperma DNT bütövlüyünə real təsirini və dondurulmuş spermatozoidlərin istifadəsinin reproduktiv nəticəyə təsirini tam başa düşmək üçün əlavə araşdırmalara ehtiyac olsa da, kişi cinsi hüceyrələrinin maksimum qorunmasını təmin etmək üçün texniki tədbirlər tətbiq edilməlidir: Krioprotektorlardan əvvəl və kriokonservasiyadan sonra sperma seçmə texnologiyaları DNT parçalanmasının qarşısının alınmasında ən böyük təsirə malikdir və beləliklə, spermanın kriosurvival nisbətlərini yaxşılaşdırır.

İstinadlar

  1. J. K. Sherman, "1964-cü ildən bəri dondurulmuş insan spermasının istifadəsinin xülasəsi: insan sperma bankçılığı sənətinin vəziyyəti," Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 24, yox. 5, səh. 397–412, 1973. Baxın: Google Scholar
  2. W. G. Sanger, J. H. Olson və J. K. Sherman, "Xərçəngli kişilər üçün sperma kriyobankinqi meyarları dəyişir" Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 58, yox. 5, səh. 1024–1027, 1992. Baxın: Google Scholar
  3. J. R. Jensen, D. E. Morbek və C. C. Coddington III, "Mübarizliyin qorunması," Mayo Klinikası Prosedurları, cild. 86, yox. 1, səh. 45–49, 2011. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  4. J. T. Anger, B. R. Gilbert və M. Qoldşteyn, "Spermanın kriokonservasiyası: göstərişlər, üsullar və nəticələr", Urologiya jurnalı, cild. 170, yox. 4 I, səh. 1079–1084, 2003. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  5. G. J. Morris, E. Acton və S. Avery, "Spermanın dondurulmasına yeni yanaşma", İnsan çoxalması, cild. 14, yox. 4, səh. 1013–1021, 1999. Baxın: Google Scholar
  6. E. T. Donnelly, N. McClure və S. E. M. Lewis, "İnsan spermasının və hazırlanmış spermanın kriokonservasiyası: hərəkətlilik parametrlərinə və DNT bütövlüyünə təsirlər," Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 76, yox. 5, səh. 892–900, 2001. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  7. R. Fabbri, P. Ciotti, B. Di Tommaso et al., “Tecniche di crioconservazione riproduttiva,” Rivista Italiana di Ostetricia və Ginekologiya, cild. 3, səh. 33–41, 2004. Baxın: Google Scholar
  8. S. J. Behrman və Y. Sawada, “Dondurulmuş və maye-azotlu soyuducuda saxlanılan insan sperması ilə heteroloji və homoloji mayalanma,” Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 17, yox. 4, səh. 457–466, 1966. Baxın: Google Scholar
  9. T. M. Said, A. Qaqlani və A. Aqarval, “Sperma cryoinjuryində apoptozun təsiri”, Reproduktiv BioMedicine Onlayn, cild. 21, yox. 4, səh. 456–462, 2010. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  10. M. Mahadevan və A. O. Trounson, “Soyutma, dondurma və ərimə sürətlərinin və saxlama şəraitinin insan spermatozoalarının qorunmasına təsiri”, Andrologiya, cild. 16, yox. 1, səh. 52–60, 1984. Baxın: Google Scholar
  11. J. V. Thachil və M. A. S. Jewett, "İnsan spermasının saxlanması üsulları", Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 35, yox. 5, səh. 546–548, 1981. Baxın: Google Scholar
  12. W. V. Holt, "Spermanın dondurulmuş saxlanmasının əsas aspektləri", Heyvanların Reproduksiyası Elmi, cild. 62, yox. 1𠄳, səh. 3–22, 2000. Baxın: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  13. P. Mazur, W. F. Rall və N. Rigopoulos, "Donmamış su fraksiyasının və duz konsentrasiyasının yavaş-yavaş donmuş insan eritrositlərinin sağ qalmasına nisbi töhfələri," Biofizika jurnalı, cild. 36, yox. 3, səh. 653–675, 1981. Baxın: Google Scholar
  14. J. Sherman, "İnsan spermasının dondurulması", in Sonsuzluğun Laborator Diaqnozu və Müalicəsi üzrə Təlimatlar, B. Keel və B. W. Webster, Eds., CRC Press, Boca Raton, Fla, ABŞ, 1990. Baxın: Google Scholar
  15. F. Abdelhafez, M. Bedaiwy, S. A. El-Nashar, E. Sabanegh və N. Desai, "Fərdi və ya az sayda insan spermatozoalarının dondurulması üçün üsullar: sistematik bir baxış", İnsan Reproduksiyası Yeniləmə, cild. 15, yox. 2, səh. 153–164, 2009. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  16. D. Royere, C. Barthelemy, S. Hamamah və J. Lansac, “Spermatozoaların dondurulması: 1996-cı il icmalı”, İnsan Reproduksiyası Yeniləmə, cild. 2, yox. 6, s. 553–559, 1996. Baxış: Publisher Site | Google Alim
  17. P. F. Watson, "Kriopservasiya edilmiş sperma ilə məhsuldarlığın azalmasının səbəbləri", Heyvanların Reproduksiyası Elmi, cild. 60-61, səh. 481–492, 2000. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  18. P. Stanic, M. Tandara, Z. Sonicki, V. Simunic, B. Radakovic, and E. Suchanek, "İnsan spermasının dondurulması üçün qoruyucu mühitlərin və dondurma üsullarının müqayisəsi", Avropa Mamalıq Ginekologiya və Reproduktiv Biologiya Jurnalı, cild. 91, yox. 1, səh. 65–70, 2000. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  19. A. Arav, Y. Zeron, S. B. Leslie, E. Behboodi, G. B. Anderson və J. H. Crowe, "Faza keçid temperaturu və iribuynuzlu oositlərin soyuqlama həssaslığı", Kriobiologiya, cild. 33, yox. 6, səh. 589–599, 1996. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  20. Y. Zeron, M. Pearl, A. Borochov və A. Arav, “Kinetik və temporal amillər cücərmə vezikülünün və yetkin iribuynuzlu oositlərin soyuducu zədələnməsinə təsir göstərir,” Kriobiologiya, cild. 38, yox. 1, səh. 35–42, 1999. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  21. M. N. Giraud, C. Motta, D. Boucher və G. Grizard, "Membran axıcılığı insan spermatozoalarının kriokonservasiyasının nəticəsini proqnozlaşdırır" İnsan çoxalması, cild. 15, yox. 10, səh. 2160–2164, 2000. Baxın: Google Scholar
  22. P. J. Quinn, "Bioloji membranların aşağı temperaturda zədələnməsinin lipid fazalı ayrılması modeli," Kriobiologiya, cild. 22, yox. 2, səh. 128–146, 1985. Baxın: Google Scholar
  23. T. Talaei, T. Esmaeelpour, F. Aekiyash və S. Bahmanpour, “İnsan spermatozoalarının plazma membranının qlikokonjuqatlarına kriokonservasiyanın təsiri”, İran Reproduktiv Tibb Jurnalı, cild. 8, yox. 3, səh. 119–124, 2010. Baxın: Google Scholar
  24. S. Benoff, “Karbohidratlar və gübrələmə: ümumi baxış” İnsanın molekulyar çoxalması, cild. 3, yox. 7, səh. 599–637, 1997. Baxın: Google Scholar
  25. N. L. Cross və J. W. Overstreet, "İnsan sperma səthinin qlikokonjuqatları: paylanması və in vitro kapasitasiyası ilə müşayiət olunan dəyişikliklər," Gamete Araşdırma, cild. 16, yox. 1, səh. 23–35, 1987. Baxın: Google Scholar
  26. B. Lassalle və J. Testart, "İnsan sperma səthindən sialik turşunun çıxarılması ilə əlaqəli insan zona pellucida tanınması," Reproduksiya və Məhsuldarlıq Jurnalı, cild. 101, yox. 3, səh. 703–711, 1994. Baxış: Google Scholar
  27. M. O'Connell, N. McClure və S. E. M. Lewis, "Kriyokonservasiyanın sperma morfologiyası, hərəkətliliyi və mitoxondrial funksiyaya təsiri", İnsan çoxalması, cild. 17, yox. 3, səh. 704–709, 2002. Baxın: Google Scholar
  28. W. C. L. Ford və J. M. Rees, "Məməlilərin sperma hərəkətliliyinin bioenergetikası", Sperma hərəkətliliyinə nəzarət: Bioloji və Klinik Aspektlər, C. Gagnon, Ed., s. 175–202, CRC Press, Boca Raton, Fla, USA, 1990. Baxış: Google Scholar
  29. L. Zamboni, “Spermatozoanın ultrastruktur patologiyası sonsuzluğun səbəbi kimi: spermanın keyfiyyətinin qiymətləndirilməsində elektron mikroskopiyanın rolu”, Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 48, yox. 5, səh. 711–734, 1987. Baxın: Google Scholar
  30. R. A. Saleh və A. Agarval, "Oksidativ stress və kişi sonsuzluğu: tədqiqat masasından klinik təcrübəyə", Andrologiya jurnalı, cild. 23, yox. 6, səh. 737–752, 2002. Baxın: Google Scholar
  31. J. L. Lasso, E. E. Noiles, J. G. Alvarez və B. T. Stori, "Kriyokonservasiya zamanı insan sperma hüceyrələrindən superoksid dismutaz itkisinin mexanizmi", Andrologiya jurnalı, cild. 15, yox. 3, səh. 255–265, 1994. Baxın: Google Scholar
  32. X. Wang, R. K. Sharma, S. C. Sikka, A. J. Thomas, T. Falcone və A. Agarwal, "Oksidativ stress, kişi amili sonsuzluğu olan xəstələrdə spermatozoid DNT zədələnməsinə səbəb olan apoptozun artması ilə əlaqələndirilir" Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 80, yox. 3, səh. 531–535, 2003. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  33. D. S. McClintock, M. T. Santore, V. Y. Lee və başqaları, "Bc1-2 ailə üzvləri və funksional elektron daşıma zənciri oksigen çatışmazlığından qaynaqlanan hüceyrə ölümünü tənzimləyir," Molekulyar və Hüceyrə Biologiyası, cild. 22, yox. 1, səh. 94–104, 2002. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  34. D. Arnoult, B. Gaume, M. Karbowski, J. C. Sharpe, F. Cecconi və R. J. Youle, "AIF və EndoG-nin mitoxondrial sərbəst buraxılması Bax/Bak vasitəçiliyi ilə keçiriciliyin aşağı axınında kaspazın aktivləşdirilməsini tələb edir," EMBO jurnalı, cild. 22, yox. 17, səh. 4385–4399, 2003. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  35. G. Martin, N. Cagnon, O. Sabido et al., “Buğa spermatozoidlərinin kriokonservasiya prosesi zamanı apoptozun bəzi xüsusiyyətlərinin baş verməsinin kinetikası”, İnsan çoxalması, cild. 22, yox. 2, səh. 380–388, 2007. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  36. J. C. Martinez-Soto, J. De Dioshourcade, A. Quti'sxe9rrez-Ad'xe1n, J. L. Landeras və J. Gadea, "Ərimə mühitinin genistein əlavəsinin dondurulmuş insan spermatozoalarının xüsusiyyətlərinə təsiri", Asiya Andrologiya Jurnalı, cild. 12, yox. 3, səh. 431–441, 2010. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  37. C. S. Branco, M. E. Garcez, F. F. Pasqualotto, B. Erdtman və M. Salvador, “Resveratrol və askorbin turşusu insan spermasında kriokonservasiya nəticəsində yaranan DNT zədələnməsinin qarşısını alır,” Kriobiologiya, cild. 60, yox. 2, səh. 235–237, 2010. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  38. K. Taylor, P. Roberts, K. Sanders, və P. Burton, “Kriopreservasiya mühitinin antioksidant əlavəsinin insan spermatozoalarının ərimədən sonrakı bütövlüyünə təsiri”, Reproduktiv BioMedicine Onlayn, cild. 18, yox. 2, səh. 184–189, 2009. Baxın: Google Scholar
  39. Z. Li, Q. Lin, R. Liu, W. Xiao və W. Liu, "Kriokonservasiya zamanı askorbat və katalazanın insan spermatozoalarına qoruyucu təsiri", Andrologiya jurnalı, cild. 31, yox. 5, səh. 437–444, 2010. Baxın: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  40. T. S. de Paula, R. P. Bertolla, D. M. İspaniya, M. A. Cunha, N. Şor və A. P.Cedenho, "Oliqozoospermiya olan xəstələrdə sperma apoptotik deoksiribonuklein turşusunun parçalanmasına kriokonservasiyanın təsiri" Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 86, yox. 3, səh. 597–600, 2006. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  41. N. K. Duru, M. S. Morshedi, A. Schuffner və S. Oehninger, "Fraksiyalaşdırılmış insan spermatozoalarının kriokonservasiyası-əriməsi DNT parçalanması ilə deyil, membran fosfatidilserinin xariciləşdirilməsi ilə əlaqələndirilir" Andrologiya jurnalı, cild. 22, yox. 4, səh. 646–651, 2001. Baxın: Google Scholar
  42. E. İsaçenko, V. İsaçenko, İ. İ. Katkov və başqaları, “Standart yavaş dondurmadan sonra insan spermatozoidlərinin DNT bütövlüyü və hərəkətliliyi, krioprotektorsuz vitrifikasiyaya qarşı,” İnsan çoxalması, cild. 19, yox. 4, səh. 932–939, 2004. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  43. S. Petyim və R. Çoavaratana, “AO testi ilə qiymətləndirilən müxtəlif dondurma üsullarına görə sperma xromatində kriodazaj,” Tayland Tibb Assosiasiyasının jurnalı, cild. 89, yox. 3, səh. 306–313, 2006. Baxın: Google Scholar
  44. M. Span'sxf2, E. Cordelli, G. Leter, F. Lombardo, A. Lenzi və L. Gandini, "Flow sitometrik sperma xromatin strukturu təhlili ilə qiymətləndirilən üzgüçülük və kriokonservasiyaya məruz qalan insan spermatozoalarında nüvə xromatinin variasiyaları, ” İnsanın molekulyar çoxalması, cild. 5, yox. 1, səh. 29–37, 1999. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  45. N. Zribi, N. Feki Chakroun, H. El Euch, J. Gargouri, A. Bahloul və L. Ammar Keskes, “Kriopservasiyanın insan sperma deoksiribonuklein turşusunun bütövlüyünə təsiri” Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 93, yox. 1, səh. 159–166, 2010. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  46. L. K. Thomson, S. D. Fleming, R. J. Aitken, G. N. De Iuliis, J. A. Zieschang və A. M. Clark, "Kriyokonservasiya ilə bağlı insan sperma DNT-sinin zədələnməsi apoptozdan çox oksidləşdirici stress vasitəsilə baş verir" İnsan çoxalması, cild. 24, yox. 9, səh. 2061–2070, 2009. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  47. D. P. Evenson, Z. Darzynkiewicz və M. R. Melamed, "Axın sitometriyası ilə insan və siçan sperma xromatinin strukturunun müqayisəsi" Xromosoma, cild. 78, yox. 2, səh. 225–238, 1980. Baxın: Google Scholar
  48. D. P. Evenson və M. R. Melamed, "Axın sitometriyası ilə insan sperma və testis biopsiyalarında normal və anormal hüceyrə növlərinin sürətli təhlili," Histokimya və Sitokimya Jurnalı, cild. 31, yox. 1 A, səh. 248–253, 1983. Baxın: Google Scholar
  49. G. Kalthur, S. K. Adiga, D. Upadhya, S. Rao və P. Kumar, "Teratospermiya olan xəstələrdə sperma DNT bütövlüyünə kriokonservasiyanın təsiri", Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 89, yox. 6, səh. 1723–1727, 2008. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  50. U. Paasch, R. K. Sharma, A. K. Gupta et al., "Kriopozlama və ərimə, boşalmış insan spermatozoidlərinin alt qruplarında apoptotik mexanizmin müxtəlif dərəcədə aktivləşməsi ilə əlaqələndirilir," Çoxalmanın biologiyası, cild. 71, yox. 6, səh. 1828–1837, 2004. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  51. R. J. Aitken və G. N. De Iuliis, "Kişi germ hüceyrələrində DNT zədələnməsinin mənşəyi və nəticələri," Reproduktiv BioMedicine Onlayn, cild. 14, yox. 6, səh. 727–733, 2007. Baxın: Google Scholar
  52. N. Tarozzi, D. Bizzaro, C. Flamigni və A. Borini, “Köməkçi reproduksiyada sperma DNT zədəsinin klinik əhəmiyyəti”, Reproduktiv BioMedicine Onlayn, cild. 14, yox. 6, səh. 746–757, 2007. Baxın: Google Scholar
  53. A. Zini, J. M. Boman, E. Belzile və A. Ciampi, “Sperma DNT zədələnməsi IVF və ICSI-dən sonra hamiləlik itkisi riskinin artması ilə əlaqələndirilir: sistematik baxış və meta-analiz,” İnsan çoxalması, cild. 23, yox. 12, səh. 2663–2668, 2008. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  54. N. L. Kross və S. E. Hanks, "Kriopozivasiyanın insan sperma akrozomlarına təsiri" İnsan çoxalması, cild. 6, yox. 9, səh. 1279–1283, 1991. Baxın: Google Scholar
  55. D. Royere, S. Hamamah, J. C. Nicolle və J. Lansac, "Donma-ərimə nəticəsində yaranan xromatin dəyişiklikləri insan spermasının gübrələmə qabiliyyətinə təsir göstərir," Beynəlxalq Andrologiya Jurnalı, cild. 14, yox. 5, səh. 328–332, 1991. Baxın: Google Scholar
  56. D. Sakkas, F. Urner, P. G. Bianchi et al., "Sperma xromatin anomaliyaları intrasitoplazmik sperma inyeksiyasından sonra dekondensasiyaya təsir edə bilər" İnsan çoxalması, cild. 11, yox. 4, səh. 837–843, 1996. Baxın: Google Scholar
  57. S. Friedler, D. Strassburger, A. Raziel, D. Komarovsky, Y. Soffer və R. Ron-El, “Qeyri-obstruktiv azospermiya olan xəstələrdə təzə və dondurulmuş xaya spermatozoidlərinin intrasitoplazmik inyeksiyası𠅊 müqayisəli tədqiqat,” Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 68, yox. 5, səh. 892–897, 1997. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  58. K. Ben Rhouma, H. Marrakchi, H. Khouja, K. Attalah, E. Ben Miled və M. Sakly, "Təzə və dondurulmuş əridilmiş testikulyar spermatozoaların intrasitoplazmik inyeksiyasının nəticəsi: müqayisəli tədqiqat", Mama və Ginekoloq üçün Reproduktiv Tibb Jurnalı, cild. 48, yox. 5, səh. 349–354, 2003. Baxın: Google Scholar
  59. H. Habermann, R. Seo, J. Cieslak, C. Niederberger, G. S. Prins və L. Ross, "Təzə və ya dondurulmuş əridilmiş testis spermatozoidləri ilə intrasitoplazmik sperma inyeksiyasından sonra in vitro gübrələmə nəticələri", Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 73, yox. 5, səh. 955–960, 2000. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  60. F. J. Huang, S. Y. Chang, M. Y. Tsai və başqaları, “Azoospermiyalı kişilərdən kriyoprezervasiya olunmuş xaya spermatozoidindən istifadə edərək intrasitoplazmik sperma inyeksiyasının klinik nəticələri,” Mama və Ginekoloq üçün Reproduktiv Tibb jurnalı, cild. 45, yox. 4, səh. 310–316, 2000. Baxın: Google Scholar
  61. I. D. Croo, J. Van Der Elst, K. Everaert, P. D. Sutter və M. Dhont, "Təzə və ya dondurulmuş əridilmiş testis sperma ilə ICSI-dən sonra gübrələmə, hamiləlik və embrion implantasiya dərəcələri", İnsan çoxalması, cild. 13, yox. 7, səh. 1893–1897, 1998. Baxın: Google Scholar
  62. H. Tournaye, T. Merdad, S. Silber et al., "Təzə və ya dondurulmuş əridilmiş epididimal sperma ilə intrasitoplazmik sperma inyeksiyasından sonra nəticədə fərq yoxdur," İnsan çoxalması, cild. 14, yox. 1, səh. 90–95, 1999. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  63. N. Sukcharoen, T. Sithipravej, S. Promviengchai, V. Chinpilas və W. Boonkasemsanti, “Təzə və dondurulmuş əridilmiş epididimal spermatozoidlərdən perkutan epididimal yolla əldə edilən intrasitoplazmik sperma inyeksiyasının nəticəsinin müqayisəsi”, Tayland Tibb Assosiasiyasının jurnalı, cild. 84, yox. 1, səh. S331–S337, 2001. Baxın: Google Scholar
  64. S. Cayan, D. Lee, J. Conaghan et al., "ICSI nəticələrinin eyni cütlərdən təzə və dondurulmuş epididimal sperma ilə müqayisəsi," İnsan çoxalması, cild. 16, yox. 3, səh. 495–499, 2001. Baxın: Google Scholar
  65. H. Shibahara, Y. Hamada, A. Hasegawa et al., "Dondurulmuş ərimiş epididimal spermatozoidlərin hərəkətliliyi ilə intrasitoplazmik sperma inyeksiyasının nəticəsi arasında korrelyasiya", Beynəlxalq Andrologiya Jurnalı, cild. 22, yox. 5, s. 324–328, 1999. Baxış: Publisher Site | Google Alim
  66. W. Kuczyski, M. Dhont, C. Grygoruk, D. Grochowski, S. Woczyski və M. Szamatowicz, “The result of the intracytoplasmic injection of fresh and cryopserved ejaculated spermatozoa𠅊 prospektiv randomizə edilmiş tədqiqat,” İnsan çoxalması, cild. 16, yox. 10, səh. 2109–2113, 2001. Baxın: Google Scholar
  67. G. Ragni, A. M. Caccamo, A. Dalla Serra və S. Guercilena, "Xaya şişləri və ya Hodgkin xəstəliyi olan kişilərin spermasının kompüterdə yavaş-yavaş dondurulması spermanı standart buxar dondurulmasından daha yaxşı saxlayır," Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 53, yox. 6, səh. 1072–1075, 1990. Baxın: Google Scholar
  68. E. Borges Jr., L. M. Rossi, C. V. Locambo de Freitas et al., "Təzə və ya dondurulmuş boşalmış spermatozoa ilə intrasitoplazmik inyeksiyadan sonra gübrələmə və hamiləliyin nəticəsi", Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 87, yox. 2, səh. 316–320, 2007. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  69. A. Borini, E. Sereni, M. A. Bonu və C. Flamigni, “TESA tərəfindən əldə edilən bir neçə testis spermatozoidinin dondurulması,” Molekulyar və Hüceyrə Endokrinologiyası, cild. 169, yox. 1-2, səh. 27–32, 2000. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  70. J. Cohen, G. J. Garrisi, T. A. Congedo-Ferrara, K. A. Kieck, T. W. Sehimmel və R. T. Scott, "Tək insan spermatozoalarının kriokonservasiyası", İnsan çoxalması, cild. 12, yox. 5, səh. 994–1001, 1997. Baxın: Google Scholar
  71. R. Walmsley, J. Cohen, T. Ferrara-Congedo, A. Reing, and J. Garrisi, "Evkuasiya edilmiş yumurta zonasında spermanın dondurulması ilə əlaqəli ilk doğumlar və davam edən hamiləliklər," İnsan çoxalması, cild. 13, yox. 4, səh. 61–70, 1998. Baxın: Google Scholar
  72. M. Montag, K. Rink, U. Dieckmann, G. Delacrétaz və H. Van Der Ven, “Hüceyrəsiz zona pellucidada tək insan spermatozoasının lazerlə dondurulması,” Andrologiya, cild. 31, yox. 1, səh. 49–53, 1999. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  73. Y. Y. Hsieh, H. D. Tsai, C. C. Çanq və H. Y. Lo, "İnsan və ya siçan boş zona pellucidae içərisində insan spermalarının dondurulması," Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 73, yox. 4, səh. 694–698, 2000. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  74. J. Liu, X. Z. Zheng, T. A. Baramki, G. Compton, R. A. Yazigi və E. Katz, "Boş zona pellucidada 3 gün ərzində in vitro yetişdirilmiş az sayda təzə insan testis spermatozoidinin və xaya spermatozoidinin kriokonservasiyası," Andrologiya jurnalı, cild. 21, yox. 3, səh. 409–413, 2000. Baxın: Google Scholar
  75. P. E. Levi-Setti, E. Albani, L. Neqri, A. Cesana, P. Novara və S. Bianchi, “Sarı ilə dolu insan zona pellucidaelərində az sayda spermatozoidlərin kriokonservasiyası”, Archivio Italiano di Urologia və Andrologia, cild. 75, yox. 4, səh. 195–198, 2003. Baxın: Google Scholar
  76. A. Cesana, P. Novara, S. Bianchi et al., "Oliqo-astenospermik xəstələrdə spermanın dondurulması" Avropa İnsan Reproduksiyası və Embriologiya Cəmiyyətinin 19-cu İllik Toplantısının Materialları, Madrid, İspaniya, iyul 2003. Baxın: Google Scholar
  77. H. Hassa, F. Gürer, A. Yıldırım, C. Can, V. Şahintürk və B. Tekin, “Boş zona pellucida içərisində az sayda spermanın dondurulması üçün yeni bir qoruyucu həll: Osmangazi-Türk həlli,” Hüceyrə Qoruma Texnologiyası, cild. 4, yox. 3, səh. 199–208, 2006. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  78. M. Gil-Salom, J. Romero, C. Rubio, A. Ruiz, J. Remohí və A. Pellicer, “Kriopservasiya edilmiş xaya spermatozoidləri ilə intrasitoplazmik sperma inyeksiyası” Molekulyar və Hüceyrə Endokrinologiyası, cild. 169, yox. 1-2, səh. 15–19, 2000. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  79. E. Sereni, M. A. Bonu, L. Fava və başqaları, “Testikulyar incə iynə aspirasiyası ilə əldə edilən dondurulmuş spermatozoid: yeni bir texnika,” Reproduktiv BioMedicine Onlayn, cild. 16, yox. 1, səh. 89–95, 2008. Baxın: Google Scholar
  80. C. Quintans, M. Donaldson, I. Asprea et al., "Çox az sayda spermatozoidlərin kriokonservasiyası üçün yeni yanaşmanın işlənib hazırlanması", İnsan çoxalması, cild. 15, səh. 99, 2000. Baxın: Google Scholar
  81. N. Bouamama, P. Briot və J. Testart, "Çox az sayda spermanın kriokonservasiyasının iki üsulunun müqayisəsi" Ginekologiya Obstetrique Fertilite, cild. 31, yox. 2, səh. 132–135, 2003. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  82. M. Qvaxaria və G. Adamson, “Azsaylı insan spermatozoidlərinin uğurlu kriokonservasiyası metodu”, Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 76, səh. S101, 2001. Baxın: Google Scholar
  83. J. O. Sohn, S. H. Jun, L. S. Park və başqaları, "Ultra sürətli dondurma və ya yavaş dondurmadan sonra ICSI pipetində spermanın bərpası və canlılığının müqayisəsi," Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 80, səh. S128, 2003. Baxın: Google Scholar
  84. A. Just, I. Gruber, M. Wr, J. Lahodny, A. Obruca və H. Strohmer, “Ağır oliqospermiya olan xəstələrdən xaya spermasının və boşalmış spermatozoidlərin kriokonservasiyası üçün yeni üsul: pilot tədqiqat”, Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 82, yox. 2, səh. 445–447, 2004. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  85. A. Herrler, S. Eisner, V. Bach, U. Weissenborn və H. M. Beier, "Algin turşusu kapsullarında spermatozoidlərin kriokonservasiyası", Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 85, yox. 1, səh. 208–213, 2006. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  86. F. Nawroth, V. Isachenko, S. Dessole et al., "İnsan spermatozoalarının krioprotektorlar olmadan vitrifikasiyası", Krio-məktublar, cild. 23, yox. 2, səh. 93–102, 2002. Baxın: Google Scholar
  87. T. G. Şuster, L. M. Keller, R. L. Dunn, D. A. Ohl və G. D. Smith, “Kriolooplardan istifadə edərək çox az sayda spermanın ultra sürətli dondurulması,” İnsan çoxalması, cild. 18, yox. 4, səh. 788–795, 2003. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  88. N. Desai, C. Culler və J. Goldfarb, “Cryoloops üzərində epididimal və testikulyar nümunələrdən tək spermanın kriokonservasiyası: ilkin vəziyyət hesabatı,” Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 82, səh. S264, 2004. Baxın: Google Scholar
  89. N. N. Desai, H. Blackmon və J. Goldfarb, "Cryoloops üzərində tək sperma dondurulması: fərdi spermatozoaların dondurulması üçün hamster zonasına alternativ", Reproduktiv BioMedicine Onlayn, cild. 9, yox. 1, səh. 47–53, 2004. Baxın: Google Scholar
  90. D. A. İsaev, S. Y. Zaletov və V. Zaeva, “Tək spermatozoidlərin dondurulması üçün süni mikrokonteynerlər”, Avropa İnsan Reproduksiyası və Embriologiya Cəmiyyətinin 23-cü İllik Yığıncağının materialları, səh. 394, Lyon, Fransa, iyul 2007. Baxın: Google Scholar
  91. N. Desai, D. Qlavan və J. Qoldfarb, “Mikro miqdarda spermanın dondurulması üçün əlverişli texnika” Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 70, səh. S197–S198, 1998, İllik görüş proqramına əlavə. Baxın: Google Scholar
  92. V. İsaçenko, E. İsaçenko, M. Montaq və başqaları, “İnsan spermatozoalarının krioprotektorsuz vitrifikasiyası üçün təmiz texnika”, Reproduktiv BioMedicine Onlayn, cild. 10, yox. 3, səh. 350–354, 2005. Baxın: Google Scholar
  93. I. Koscinski, C. Wittemer, V. Lefebvre-Xalil, F. Marcelli, A. Defossez və J. M. Rigot, "Müvafiq kriokonservasiya proqramı ilə ekstremal oliqozoospermiyanın optimal idarə edilməsi" İnsan çoxalması, cild. 22, yox. 10, səh. 2679–2684, 2007. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  94. S. Hamamah, D. Royere, J. C. Nicolle, M. Paquignon və J. Lansac, "Dondurma-ərimənin spermatozoid nüvəsinə təsiri: donuz və insan növlərində müqayisəli xromatin sitofotometrik tədqiqat", Reproduksiya Qidalanma İnkişafı, cild. 30, yox. 1, səh. 59–64, 1990. Baxın: Google Scholar
  95. M. E. Hammadeh, C. Dehn, M. Hippach et al., "Mübariz və subfertil kişilərdən spermatozoidlərin xromatinə və morfologiyasına zərərli təsir ilə əlaqədar kompüterləşdirilmiş yavaş mərhələli və statik maye azot buxarının dondurulması üsullarının müqayisəsi," Beynəlxalq Andrologiya Jurnalı, cild. 24, yox. 2, səh. 66–72, 2001. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  96. L. Gandini, F. Lombardo, A. Lenzi, M. Spanò və F. Dondero, “Cryopreservation and sperm DNT integrity,” Hüceyrə və Toxuma Bankçılığı, cild. 7, yox. 2, səh. 91–98, 2006. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  97. T. Ngamwuttiwong və S. Kunathikom, “Maye azot buxarı metoduna (I) görə sperma xromatinin krio zədələnməsinin qiymətləndirilməsi”. Tayland Tibb Assosiasiyasının jurnalı, cild. 90, yox. 2, səh. 224–228, 2007. Baxın: Google Scholar
  98. S. Dejarkom və S. Kunathikom, “Kompüterlə idarə olunan sürətin dondurulması metoduna uyğun olaraq sperma xromatinin krio-zədəsinin qiymətləndirilməsi 2-ci hissə,” Tayland Tibb Assosiasiyasının jurnalı, cild. 90, yox. 5, səh. 852–856, 2007. Baxın: Google Scholar
  99. L. Əhməd, S. Cəlali, S. A. Şami, Z. Əkrəm, S. Batool və O. Kalsoom, “Normospermik və dörd kateqoriyalı sonsuz kişilərdə sperma DNT bütövlüyünə kriokonservasiyanın təsiri” Reproduktiv Tibbdə Sistem Biologiyası, cild. 56, yox. 1, səh. 74–83, 2010. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  100. E. Høst, S. Lindenberg, J. A. Kahn və F. Christensen, “İnsan sperma hüceyrələrində DNT zəncirinin qırılması: normal və oliqozoospermik sperma nümunələri olan kişilər arasında müqayisə,” Acta Obstetricia and Gynecologica Scandinavica, cild. 78, yox. 4, səh. 336–339, 1999. Baxın: Google Scholar
  101. E. K. Steele, N. McClure və S. E. M. Lewis, "İki üsulla kriyoprezervasiyanın testis sperma DNT-yə təsirlərinin müqayisəsi," Məhsuldarlıq və Sterillik, cild. 74, yox. 3, səh. 450–453, 2000. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim

Müəllif hüququ

Müəllif hüququ © 2012 Marlea Di Santo et al.Bu, Creative Commons Attribution License əsasında paylanmış açıq giriş məqaləsidir və orijinal əsərə lazımi sitat gətirmək şərti ilə istənilən mühitdə məhdudiyyətsiz istifadəyə, paylanmağa və təkrar istehsala icazə verir.


Videoya baxın: İnsan atığının sizi çok şaşırtacak 6 faydası (BiləR 2022).