Məlumat

Protein tərcüməsi zamanı 3' 18s rRNT (Kozak konsensus ardıcıllığı) ilə eukaryotik ribosomların A sahəsi arasında məsafə nə qədərdir?

Protein tərcüməsi zamanı 3' 18s rRNT (Kozak konsensus ardıcıllığı) ilə eukaryotik ribosomların A sahəsi arasında məsafə nə qədərdir?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Quoradan repost edilib

Kozak ardıcıllığının tərcümənin başlanmasında vacib olduğu göstərilir və A-saytı antikodon tanınma yeridir. Məsafə məlum deyilsə, bunun nə olduğunu necə öyrənə bilərəm? Bütün mRNA-rRNA-tRNA kompleksinin kristal quruluşu müəyyən edilibmi? Əgər belədirsə, molekullararası məsafələri təyin etmək üçün hansı modelləşdirmə proqramı daha yaxşı olardı?


Kozak konsensus ardıcıllığı (KCS) başlanğıc kodonun yaxınlığında və ya üst-üstə düşür. Bununla A-saytı arasındakı məsafə dedikdə nəyi nəzərdə tutduğunuzdan əmin deyiləm. Başlanğıc kodonu tərcümənin başlanması zamanı P yerində lokallaşdırılır. Başlanğıcda başlanğıc kodonu/KCS və A-saytı arasındakı məsafə P- və A- yerləri arasındakı məsafə ilə eynidir (təxmin edirəm ~20Å). A-sayt tərcümə zamanı hərəkət etməyə davam edir və buna görə də məsafə artmağa davam edir. Kristal tədqiqatı mövcuddur; Bura baxın.

Başlanğıc-kodon, P-sahəsi (çıxış) və A-saytının (giriş) nisbi mövqeləri üçün yuxarıda göstərilən tədqiqatdan bu rəqəmə baxın.


Protein tərcüməsi zamanı 3' 18s rRNT (Kozak konsensus ardıcıllığı) ilə eukaryotik ribosomların A sahəsi arasında məsafə nə qədərdir? - Biologiya

Nəzərə alın ki, Internet Explorer 8.x versiyası 1 yanvar 2016-cı il tarixindən etibarən dəstəklənmir. Əlavə məlumat üçün bu dəstək səhifəsinə müraciət edin.

Tam mətni PDF formatında yükləyin


Mücərrəd

Prokaryotlarda translyasiya başlanğıcı zamanı 16S rRNT-nin 3′ ucu başlanğıc kodonundan yuxarı axındakı bölgəyə bağlanır. Bu Shine-Dalgarno (SD) bölgəsi ilə ribosomların tərcümənin başlanğıc nöqtələrinə bağlanması arasındakı əlaqə yaxşı öyrənilmişdir, lakin SD, başlanğıc kodonu və aralarındakı boşluq arasında vahid riyazi əlaqə yoxdur. İnformasiya nəzəriyyəsindən istifadə edərək, məlumat bitlərində SD-yə və başlanğıc bölgəsinə (IR) qorunma təyin etməklə və aralığa da bitlərdə qeyri-müəyyənlik təyin etməklə bu üç komponentə eyni şəkildə baxan bir model qurduq. Modeli qurmaq üçün əvvəlcə oradakı məlumat məzmununu artırmaqla SD bölgəsini uyğunlaşdırdıq. Bu prosesin asanlığı nəzərdən keçirilmiş və yenidən işlənmiş 4122 dəsti daxilində SD nümunəsinin mövcudluğunu təsdiqlədi. Escherichia coli gen başlayır. Bu böyük məlumat dəsti, SD və başlanğıc bölgəsi arasındakı məsafənin həm SD saytının qorunmasına, həm də onun nümunəsinə təsir etdiyini ardıcıl loqolarla qrafik olaraq göstərməyə imkan verdi. Ribosom bağlanmasını modelləşdirmək və ribosom bağlama sahəsi modelinə uyğun gəlməyən gen başlanğıclarını müəyyən etmək üçün uyğunlaşdırılmış SD, məsafə və başlanğıc bölgəsindən istifadə etdik. Cəmi 569 eksperimental olaraq sübut edilmiş başlanğıc, yenidən işlənmiş başlanğıcların tam dəstindən daha çox qorunur (daha yüksək məlumat məzmununa malikdir), bu, ehtimal ki, ribosomların səmərəsiz bağlanma sahələrinə malik olan gen məhsullarının aşkarlanmasına qarşı eksperimental qərəzi əks etdirir. Modellər uyğun olmayan zəif yerləri silməklə dövri olaraq dəqiqləşdirildi. Bu prosedurdan sonra orijinal və ya yenidən işlənmiş gen başlanğıc annotasiyasından əldə edilən modellər oxşar idi. Buna görə də, bu məlumat nəzəriyyəsinə əsaslanan texnika bioloji cəhətdən həssas ribosom bağlama sahəsi modellərini asanlıqla qurmaq üçün bir üsul təqdim edir. Bu cür modellər hər hansı bir ardıcıl bakterial genomun gen-başlanğıc proqnozlarını dəqiqləşdirmək üçün faydalı olmalıdır.


Digər həllər

Ən yaxşı Molekulyar Viewer hansıdır?

Kristofer VanLanqın zülal tərcüməsi zamanı 3' 18s rRNT (Kozak konsensus ardıcıllığı) ilə eukaryotik ribosomların A sahəsi arasında məsafə nə qədərdir?

Cavab:

Bu, həqiqətən dad məsələsidir, baxmayaraq ki, şəxsən mən VMD-nin böyük pərəstişkarıyam. Bu üzməzsə.

Genetika sualları! Hemoqlobin, mRNT, Ribosomlar!?

7. [2pt] Hemoqlobinin strukturunu təyin edən geni nəzərdən keçirək. Aşağıdakı hadisələri onların baş verəcəyi ehtimal olunan ardıcıllıqla düzün. Cavab ABCDEFGHIJ olarsa, ABCDEFGHIJ daxil edin. A) Anemiya müşahidə olunur. B) Şəklin forması.

Cavab:

Elm Biologiyası kömək edirmi?

1 Eukaryotik hüceyrədə tərcümə zamanı _____. Bir cavab seçin. a. ribosomların nüvəyə daxil olması b. tRNT amin turşusu molekullarını nüvəyə aparır və burada onlar böyüyən polipeptid zəncirinə əlavə olunur c. polipeptidlər ribosomlarda sintez olunur.

Cavab:

1. C 2. B 3. B 4. C 5. E 6. A 7. D 8. E 9. A 10. B .. amma bilmək lazımdır ki, hansı 3' sonu və hansıdır.

Molekulyar biologiyanın mərkəzi doqması bildirir ki, informasiya bir istiqamətdə axır?

A. nüvələrdən RNT-yə, sitoplazmaya. B. ribosomlardan zülallara DNT-yə. C. genlərdən nüvələrə ribosomlara. D. DNT-dən RNT-yə zülallara. 2. Aşağıdakı DNT zəncirinə tamamlayıcı olacaq RNT zəncirinin nukleotid ardıcıllığını seçin: GTAGTCA. A. UATUAGA.

Cavab:

1 D 2 Bunların heç biri, lakin C qoyun. Geridə olsa düzgün olardı. 3 D 4 D 5 A 6 B 7 B 8 9 A .

Biokimya sualları - transkripsiya, tərcümə və digərləri.

Hey, mən bu səhər imtahan verdim və imtahandan keçirəm və ümid edirdim ki, kimsə bunlara cavab verməkdə mənə kömək edəcək? Bunlar sadəcə doğru və ya yalan olan ifadələrdir. (Hətta yalnız BİR ilə kömək çox yüksək qiymətləndirilir, keçməkdə çətinlik çəkirəm.

Cavab:

n1 Düzgün görünür n2 Bəli n3 Bəli n4 Bəli. n8 Sink sink-barmaq motivində Cys və His tərəfindən əlaqələndirilir.

Prokaryotik ribosomlar eukaryotik sitozolda mövcud olanlardan fərqlənir. aşağıdakılardan hansı düzgündür?

A) Transkripsiya eukariotlarda transkripsiya ilə eyni vaxtda baş verə bilər, lakin prokariotlarda deyil. B) Prokaryotlar eukariotlardan daha çox müxtəlif molekullardan qida mənbəyi kimi istifadə edə bilirlər. C) Bəzi selektiv antibiotiklər zülal sintezini maneə törədə bilər.

Cavab:

C mənə yaxşı gəlir. Get C. Təəssüf ki, mənim Biotexnologiya üzrə magistrlərim var, ona görə də izahat verməməliyəm.

Zəhmət olmasa, sabaha görə ev tapşırığına kömək edin. Hər hansı bir cavab kömək edəcək?

1. Zülalın əmələ gəlməsini istiqamətləndirən DNT-nin böyük bölgəsi A)promoter B)nukleotid C)monomer D)gen adlanır 2.Aşağıdakılardan hansı bir spesifik amin turşusu növü A)mRNT B)tRNA C ilə əlaqə saxlayır. )rRNT D)DNT 3. Yeni mRNT prosesi ilə hazırlanır.

Cavab:

1. D. gen 2. B. tRNT 3. B. transkripsiya 4. B. azot tərkibli əsaslar 5. C. fermentlər 6. C. replikasiya.

Biologiya: Genetika (Gendən Zülala qədər)?

Biz gendən zülala keçməyə yenicə başladıq və mən davam etməzdən əvvəl eukaryotik hüceyrədə transkripsiya və tərcüməni başa düşmək istəyirəm. Xahiş edirəm səhv edirəmsə məni düzəldin. Nüvədə RNT bir RNT polimeraz tərəfindən yaradılan bir DNT-dən transkripsiya edilir.

Cavab:

tRNA-lar ayrı transkriptlərdir. Aminoasil-tRNA sintetazaları seçən sitoplazmik fermentlərdir.

Eukaryotik mRNT-də 3' poli-A ardıcıllığının funksiyası nədir?

a. sitozolik fermentlərdən qorunma b. intron birləşmə siqnalı c. ribosomların ilkin bağlanma yeri d. tərcümənin dayandırılması

Cavab:

Mən 100% əmin deyiləm, amma başa düşdüyüm kimi, düzgün cavab "A"-Qoruma olacaq.


Çərşənbə, 26 may 2010-cu il

Molekulyar biologiya - Poli(A)+ RNT-nin məqsədi?

RNT-seq analizini öyrənirəm. Mən həmişə bu faza "poli(A)+ RNT" ilə qarşılaşıram. Axtardıqdan sonra bunu əldə etdim: "Əksər mesajçı RNT-lərdə poli(A) quyruğu var, struktur RNT-lərdə isə yoxdur. Poly(A) seçimi ona görə də messencer RNT üçün zənginləşdirir. Bu texnika cDNT kitabxanalarının qurulması üçün vacib olduğunu sübut etdi."

Bu o deməkdir ki, cDNT-ni qurarkən biz həmişə A quyruğu olanlardan istifadə edirik? Sonra tRNA kimi digər RNT-lər süzülür və cDNA almaq üçün istifadə edilmir? Mən mikroRNA-ların daxil olduğu UCSC-də bəzi RNT qeydlərini tapıram.

Poli(A)+ RNT kitabxanası dedikdə, normaldan nə fərqi var? Yoxsa normal RNT kitabxanası poli(A)+ RNT kitabxanasıdır? təşəkkürlər.

Orbit - Yer və Ay Pluton və Haron kimi bir-birinin ətrafında fırlanırsa nə olacaq?

Hər iki cavab çox yaxşıdır. Bu əyləncəli, lakin mənasız ssenaridə bütün nə-ifslərə baxmaq istəsək, nəzərə alınmalı olan bir neçə detal var.

Artıq qeyd olundu ki, ölçü nisbəti 81-dən 1-ə deyil, 8-ə 1-dir, buna görə də yeni başlayanlar üçün Ay kimi Haron səmada daha böyük olardı. Kütləsinin təxminən 10 qatı olan və bir qədər kiçik sıxılma nəticəsində bir az daha sıxlıq göstərən Ay, eyni məsafəni fərz etsək, yenə də eni 2,1 dəfə böyük olacaq, bu da onu gecə səmasında 4 dəfə daha parlaq edəcək. Tam ay olduqca təsir edici olardı. Bəlkə də (yalnızca) böyük bir dərslik olsaydı oxumaq üçün kifayət qədər parlaqdır. (bəzi insanlar indi Ay işığı ilə oxuya bildiklərini iddia edirlər, əksər insanlar oxuya bilmir, lakin 4 dəfə daha parlaq, tam ay kifayət qədər parlaq ola bilər.

Günəş tutulmaları daha tez-tez baş verəcək və təxminən iki dəfə daha uzun sürəcək və siz Ayın günəş işığını bir qədər kəsməsi səbəbindən Yerin bir az daha soyuq olacağını düşünə bilərsiniz, lakin Ay inanın, ya olmasın, yer üzündə blokladığından daha çox istilik yayır. üzümüzə baxan yanan ay pik gündüz təxminən 400 dərəcə F-dir və temperaturu olan bir səthin bir qədər istilik yaydığını görmək çətin deyil. Çox deyil, bəziləri. Bununla bağlı bir sual, 4 dəfədən bir qədər çox enerji (günəş tutulması itkiləri nəzərə alınmaqla), günəşdən gələn istiliyin təxminən 1/2,500-ü, tam ay zamanı gecə dərəcənin 1/10-u qədər işləyə bilər. Çox deyil, əlbəttə, lakin kifayət qədər həssas alətləri olan hər kəs üçün ölçülə bilər. Ayın parlaqlığı və ölçüsü açıq-aydın temperaturun 1/10-dan (C deyil, F) daha nəzərə çarpacaqdır.

Bu kütlədə bir peyk Yerin fırlanmasını əhəmiyyətli dərəcədə yavaşlatacaq, artıq qeyd edildi, lakin bu barədə bir az düşünməliyik. Ay yarananda Yerə çox yaxın idi, Yer radiusundan təxminən 3-5 dəfə uzaq idi. Mənbə. Bu, Təpə Sferasının xaricindədir və Ayın əmələ gəlməsi Yerin çox sürətlə fırlanmasına səbəb oldu, buna görə də təsirlər (sürətlə fırlanan yer, çox güclü Ay gelgitləri) hələ də orada qalacaq, lakin Aydakı gelgitlər 10 dəfə daha böyük olacaq, ona görə də biz axtarırıq. zəlzələ səviyyəsində, ayın kütləsi 10 dəfə böyük olanda, 3-5 yer radiusu uzaqda olduqda gelgitlər. Ay, formalaşma zamanı o qədər də bucaq impulsuna sahib olmadığı üçün, tez bir zamanda Yer ətrafında fırlanma ilə bağlı bir fırlanma vəziyyətinə düşəcəkdi. Yerdəki gelgit effekti, 10 dəfə daha böyük olarsa (təxminən) 10 dəfə Yerdəki gelgit qabarıqlığı, Ayı Yerdən təxminən 10 dəfə daha sürətli itələyəcək, lakin eyni zamanda, gelgit sürtünməsi yavaşlayır. Yer kürəsi də 10 dəfə böyük olardı (mən güman edirəm ki, bu, təxminən 10 dəfə sürətlidir).

Beləliklə, əsasən, Ay və Yer indi olduqları sistemi izləyəcəklər, lakin kütləsi 10 qat daha böyük olan Ay ilə təxminən 10 qat daha sürətli hərəkət edəcəklər. Təxmini (burada) Ayın Yer kürəsini gelgit kilidinə girmək üçün kifayət qədər yavaşlatması təxminən 50 milyard il çəkəcək, buna görə də 10-a bölün, bu gün gelgit kilidinə çox yaxın olacağıq. Yer çox yavaş fırlanacaqdı. Ay da (ehtimal ki) Yerdən bir qədər uzaqda olacaq və yəqin ki, günəşin təhrikləri səbəbindən daha yırğalanacaq orbitə sahib olacaq və bəlkə də tamamilə qaçacaq. Bu, mən cəhd etməməyi üstün tutduğum mürəkkəb bir riyaziyyat parçasıdır (Ayın indiki kütləsində Günəş ya Ay qaçmadan, ya da Yer fırtınalı şəkildə kilidlənmədən çox əvvəl Qırmızı Nəhəngə gedəcək, lakin Ay 10 qat daha böyükdür. yəqin ki, artıq belə deyil və ya Ay getdi, ya da Ay daha uzaqdadır, daha uzadılmış orbitə malikdir və Yer fırtınalı vəziyyətdədir və ya ona yaxındır.Ay qaçarsa, yerin orbitinə yaxın bir obyektimiz olacaq. sonradan bizimlə toqquşacaq və ya yerin yanından keçib orbitimizi hərəkət etdirə biləcək nəhəng ölçü - ya təsiri, həm də sadəcə ayın olmamasının təsiri çox böyük olardı.

Burada Ay/yerdən qaçış və gelgit kilidi ilə bağlı müzakirə

Tam gelgit kilidlənməsini fərz etsək, 29,5 gün (sinodik, sidreal deyil) və bir az daha uzaqda bir aya baxsaq, yerin 1 fırlanması üçün 30 ilə bəlkə də 40 günə baxa bilərik, bu, 20 gün günəş işığı, 20 gün gecədir. Bu, hava sistemləri və fəsilləri tamamilə məhv edərdi. Gündüzdən gecəyə Yaydan Qışa nisbətən daha böyük təsir göstərəcək və bəzi bölgələr yağış səbəbindən yaxşı ola bilsə də, yay günləri qızmar olacaq. Təkamül yəqin ki, buna uyğunlaşa bilər, amma mənə əyləncəli gəlmir. Daha uzaq məsafələr Ayı gecə səmasında 4 deyil, cəmi 3 dəfə parlaq edə bilər. Siz hələ də qütblərdə 6 ay günəş və 6 ay gecə alacaqsınız, lakin dünyanın əksər hissəsi üçün bu, bu qədər uzun günlər və gecələr olan köklü bir dəyişiklik olardı.

Digər mümkün effektlər, Obliquity (ay yoxdur, bəlkə də daha böyük, daha böyük buz dövrü sürücüsü), buraya baxın. Həmçinin, əgər Yer hələ də Aya malik olsaydı, lakin Ay daha uzun orbitdə olsaydı, Ay appogey və perogeyə daxil olub-çıxarkən bizdə hələ də gelgitlər olardı. şəkilə baxın

Nəticə etibarilə, biz bu barədə çox düşünməsək də, fərqli ölçülü ay əslində çox dəyişəcək. Daha kiçik bir ay Yerdən daha yavaş uzaqlaşar və yer tutaraq 2-ci peyki ola bilərdi, əgər ay daha kiçik olsaydı, bizdə daha aqressiv buz dövrləri və daha böyük əyrilik dəyişikliyinə görə iqlim dəyişiklikləri ola bilərdi və, Nəhəng təsirin hələ də oxşar şəkildə baş verdiyini fərz etsək, lakin daha az miqdarda dağıntı (bu məntiqli deyil, amma iddia etməyə imkan verir), onda daha kiçik bir ay Yerin fırlanmasını bu qədər yavaşlatmazdı və Yer kifayət qədər fırlanırdı. bir az daha sürətli, 24 əvəzinə 10 və ya 15 saat gün. Təsiri olduqca əhəmiyyətli olardı.


Müzakirə

Eukariotlarda müxtəlif hüceyrə və viral mRNT-lərin tərcüməsinin başlanğıcı tək mexanizmlə deyil, çoxlu mexanizmlərlə baş verir (1-3, 5, 6). Model mRNA-lardan istifadə edilən təcrübələr bu mexanizmlərə təsir edən amilləri araşdırmaq imkanı verir. Hazırkı tədqiqatlarda biz AUG kodonu qapaq strukturunun aşağı axınında ≈50 nt məsafədə yerləşdirildikdə tərcümənin ən səmərəli şəkildə başladığını aşkar etdik (Şəkil 2). B). Bundan əlavə, tərcümənin daxili ribosomal işə qəbul yerindən məsafə ilə azaldığını aşkar etdik (Şəkil 3). A) və belə bir işə qəbul yerinin yuxarı və ya aşağı axınında yerləşən AUG kodonlarında tərcüməni səmərəli şəkildə başlada biləcəyini (Şəkil 4).

Həm təbii, həm də model mRNA-lardan istifadə edən müxtəlif tədqiqatlar ribosomal işə qəbul yeri ilə AUG kodonları arasındakı məsafənin dəyişdirilməsinin tərcüməyə təsirini aşkar etmişdir (4, 9, 11, 12). Məsələn, maya vəziyyətində MOD5 mRNA (9), iki AUG kodonunun nisbi istifadəsi bu kodonlar və qapaq strukturu arasındakı məsafə dəyişdirildikdə dramatik şəkildə dəyişdirilə bilər. İlk AUG kodonu mRNT-nin 5′ ucundan 10 nt aralı olduqda, bu AUG kodonunun məsafəsi 65 nt-a qədər artırıldıqda, ≈5-10% istifadə edildi, yalnız istifadə edildi. Müqayisə edilə bilən nəticələr iki AUG kodonu olan model mRNA-lardan istifadə edərək ikinci nümunədə əldə edilmişdir (31). Bu tədqiqatda ilk AUG kodonunun nisbi istifadəsi mRNT-nin 5′ ucundan onun məsafəsi tədricən 3-dən 32 nt-ə qədər artırıldıqda tədricən ≈40%-dən demək olar ki, 100%-ə yüksəldi. Bu nəticələr Şəkil 2-dəki nəticələrimizə uyğundur.

Məsafənin tərcüməyə təsiri şalgam sarı mozaika virus RNT-si üzərində aparılan bir araşdırmada da görüldü (10). Bu RNT-də tərcümənin ≈65%-i yaxın məsafədə yerləşən iki AUG kodonunun birincisində başlamışdır. Bununla belə, ikinci AUG kodonu axın istiqamətində daha uzaq məsafədə yerləşdirildikdə, onun istifadəsi kəskin şəkildə azaldı, uAUG kodonununki isə artdı, beləliklə demək olar ki, bütün tərcümələr bu kodonda başladı. İkinci AUG kodonunun mövqeyinin uAUG kodonunun istifadəsinə təsir etmək qabiliyyəti, iki kodonun tərcümə mexanizmi üçün yarışdığını və bu rəqabətə onların qapaq strukturundan məsafələri təsir etdiyini göstərir.

Model mRNA-lardan istifadə edilən təcrübələr göstərdi ki, tərcümə üstünlük olaraq ribosomal işə götürülmə sahəsinə ən yaxın yerləşən AUG kodonunda, ya qapaq strukturunda, ya da poli(A) quyruğunda başlanır (11). BIGCAT təyin edilmiş mRNT qapaqlı olduqda, lakin poliadenilləşmədikdə, tərcümə iki AUG kodonunun birincisində başladı (bax. Şəkil 2-ə istinad 11). Bu mRNT həm qapalı, həm də poliadenilləşdikdə, tərcümə hər iki AUG-də, lakin əsasən uAUG kodonunda başladı. Bununla belə, bu mRNT poliadenilləşdikdə, lakin qapaq quruluşu olmadıqda, tərcümə əsasən aşağı axın AUG kodonunda başladı.

IRES və AUG kodonları arasındakı məsafənin tərcüməsinə təsirlər də müşahidə edilmişdir. Məsələn, ensefalomiyokardit virusu mRNT-də tərcümə normal olaraq bu RNT-də IRES-in aşağı axınında yerləşən ikinci AUG kodonu olan AUG-11-də başlayır (12). Bununla belə, müxtəlif AUG kodonlarının nisbi istifadəsi onların IRES-dən məsafəsini dəyişdirməklə dəyişdirilə bilər. Məsələn, IRES və AUG-11 arasındakı məsafənin qısaldılması səmərəliliyin azalmasına baxmayaraq, AUG-12-nin demək olar ki, müstəsna istifadəsi ilə nəticələndi. Məsafənin uzadılması AUG-10-dan istifadəni artırdı və AUG-11-dən istifadəni azaltdı.

Bu nümunələrin hamısı ribosomal işə qəbul yerlərinin aşağı axınında yerləşən AUG kodonlarını əhatə edir. Ribozomal işə qəbul sahəsinin yuxarı axınına səbəb olan təbii tərcümə nümunəsi HİV-2 RNT tərəfindən təmin edilir. Bu RNT-də göstərildi ki, Gag zülalının tərcüməsi tamamilə kodlaşdırma ardıcıllığı daxilində olan IRES-dən 50 nt yuxarıda yerləşən AUG kodonunda başlayır (13).

Ribozomal tarama yuxarıda müzakirə edilən və hazırkı tədqiqatlardakı nəticələri izah edə bilərmi? AUG kodonu ribosomal işə qəbul sahəsinə çox yaxın məsafədə yerləşdirildikdə müşahidə edilən səmərəsiz tərcümə (Şəkil 2) B) (12) ribosomal subunitləri mRNA-ya yükləmək üçün ribosomal işə qəbul yerindən minimum məsafə tələb olunarsa, skanlama anlayışı ilə uyğun ola bilər (ref. 25-də müzakirə olunur). Bununla belə, skan mexanizmi ribosomal toplanma yerindən daha uzaqda yerləşən AUG kodonlarında tərcümənin artan məsafə ilə niyə getdikcə daha az effektiv olduğunu asanlıqla izah etmir (Şəkil 2). B və 3 B) (4, 9, 10, 12) əgər, məsələn, 5′ lider uzunluğu artdıqca ribosomal skanlamanın azalan sürətinə müraciət edilmədikdə və ya skan edən ribosomal alt bölmələr mRNT-dən çox yüksək sürətlə sərbəst buraxılarsa, beləliklə daha az skan alt vahidi çatır. 5′ lider uzunluğu artdıqca başlanğıc kodonu. Bu cür mexanizmlər mümkün görünsə də, tərcümənin ribosomal işə qəbul yerinin yuxarı hissəsində yerləşən AUG kodonlarında başlaya biləcəyini göstərən tədqiqatlar (Şəkil 4) (13) ribosomların skan edilməsi ilə asanlıqla izah edilmir. Ribosomal işə qəbul yerlərinin yuxarı hissəsində yerləşən AUG kodonlarında müşahidə etdiyimiz tərcümənin başlanmasını hesablamaq üçün geniş “geri” skan (>60 nt) tələb olunacaq. Bu yaxınlarda aparılan bir araşdırma geriyə doğru hərəkətin yalnız maksimum 15 nt (10) ola biləcəyini təklif etdi. Buna baxmayaraq, skanlama hipotezi ümumiyyətlə bu tip hərəkəti izah etmir (26).

Biz təklif edirik ki, bu müxtəlif müşahidələr və bizim öz məlumatımız ribosom kompleksinin mRNT-yə bağlanmasını və ya daxili yerlərdə ribosomal subunitlərin klasterləşməsini nəzərdə tutan mexanizmlərlə daha asan izah olunur (Şəkil 1). Məsələn, AUG kodonu qapaq strukturundan müəyyən bir məsafədə yerləşdikdə və ya ribosomal alt bölmə mRNA-ya bağlanarsa və AUG kodonunun tanınması birbaşa olaraq baş verərsə, IRES-in baş verəcəyi proqnozlaşdırılırsa, tərcümənin ən səmərəli şəkildə başladığını göstərən nəticələr təşəbbüskar Met-tRNA-nın bağlanması. Suboptimal məsafələrdə tərcümə sterik təsirlərə görə səmərəsiz olacaq, yəni mRNT zəncirinin başlanğıc kodonuna inisiator Met-tRNA-nın optimal bağlanmasına imkan vermək üçün tərcümə mexanizminin istiqamətini dəyişdirməsinə imkan vermək üçün çox qısa olacaq. 5′ lideri kifayət qədər uzun olduqda (Şəkil 2-də ≈50-nt). B), tərcümə daha səmərəli olardı, çünki sterik təsirlər minimaldır və təşəbbüskar Met-tRNA-nın başlanğıc kodonuna bağlanma ehtimalı artır. Getdikcə daha uzun olan 5′ liderləri ilə tərcümə daha az effektiv olur, çünki başlanğıc kodonun yerləşdirilməsi ehtimalı azalır.

Xüsusi mRNT elementlərində ribosomal komplekslərin bağlanmasını və sərbəst buraxılmasını nəzərdə tutan ribosomal klasterləşmə anlayışı əvvəlki tədqiqatlarımızın nəticələri ilə dəstəkləndi (17). Bu mexanizm AUG-dən yuxarı və ya aşağı axın artan məsafələrdə yerləşən AUG kodonlarında tərcümənin niyə tədricən azaldığını izah edə bilər. Gtx elementləri (şək. 3 və 4). Bununla belə, indiki təcrübələr üçün ribosomal alt bölmələrin birləşdiyi zaman bəzi tərcümənin başlama hadisələrinin baş verdiyini tamamilə istisna edə bilmərik. Gtx elementləri.

Ribozomal bağlama və ya klasterləşmə ribosomal manevr də daxil olmaqla çoxsaylı digər müşahidələri izah edə bilər (17). Üstəlik, bu mexanizmlər yaxşı kontekstdə olsa belə, tərcümənin niyə həmişə ilk AUG kodonunda başlamadığını izah edə bilər. Bu mexanizmlərin işləməsi fərdi mRNT ikincil strukturlarının niyə tərcüməyə mane olduğunu və ya olmadığını izah edə bilər. İkinci dərəcəli RNT strukturu mRNT-nin çevikliyini dəyişdirməklə və ya mRNT elementlərini, o cümlədən ribosomal işə qəbul yerləri, eləcə də başlanğıc kodonu maskalamaqla bağlı və ya qruplaşdırılmış ribosomal komplekslərin vasitəçiliyi ilə tərcüməyə təsir göstərə bilər (Şəkil 5). Fərqli mRNT-lərin 5′-li liderlərinin müxtəlif konformasiyalara malik olması və müxtəlif amillərlə qarşılıqlı əlaqədə olma ehtimalı olduğundan, tərcümənin başlanması üçün ribosomal cəlbetmə yerindən optimal məsafənin hər bir mRNT üçün fərqli olacağı ehtimal edilir.

Ribosomal bağlama və ya klasterləşmə ilə vasitəçilik edilən tərcümənin səmərəliliyinə təsir edən amillərin sxematik təsviri. (A) 40S alt bölməsi birbaşa mRNT-də daxili sahəyə bağlanmış şəkildə göstərilir (qırmızı qutu ilə göstərilir). Bağlama həm də vasitəçi amillər və ya qapaq strukturu vasitəsilə baş verə bilər (bax. Şəkil 1). A). Qıvrımlı oxlar sterik effektlər (xırdalanmış ox 1), AUG kodonunun mRNA ikincil strukturu ilə maskalanması (AUG-ni əhatə edir) (tirik ox 2) və AUG kodonunun RNT bağlayıcı zülal tərəfindən maskalanması (kimi ilə göstərilir) səbəbindən səmərəsiz başlanğıcı təmsil edir. cızıqlanmış mavi obyekt) (xırdalanmış ox 3). Ox 4 teterinq zamanı başlanğıc kodonu kimi tanınan AUG-ni göstərir, çünki o, Met-tRNA təşəbbüskarı üçün əlçatandır. (B) Dinamik klasterləşmədən keçən kompleksdən tərcümənin səmərəliliyinə təsir edən amillər, ribosom kompleksinin daha az məhdudlaşdırılması istisna olmaqla, bağlı kompleksə təsir edən amillərlə oxşar olacaq.

Hazırkı fərziyyələr yalnız skan etmənin müxtəlif məlumatları izah edə bilməyəcəyi anlayışına əsaslanır ki, bu da bizi skanlama modelinin istənilən halda etibarlı olub-olmadığını və əgər belədirsə, onun eksklüziv olub-olmadığını soruşmağa vadar edir. Təxminən 30 illik araşdırma skanlamanın əsasını təşkil edən mexaniki təfərrüatları aydınlaşdıra bilmədi və ya skan edən ribosomları birbaşa vizuallaşdıra bilmədi (27). Prosessiv skan rejimi onun enerji tələbləri ilə bağlı sual yaradır. Hər addımda bir ATP istifadə edən mikrotubullarda kinesin hərəkəti kimi prosessiv molekulyar mühərriklərin digər bioloji nümunələrindən fərqli olaraq (28), strukturlaşdırılmamış RNT-lərdə başlanğıc kodona ribosom hərəkəti üçün heç bir enerji tələbi yoxdur (29). Bu tapıntı ribosomal tarama əməliyyatının enerji mənbəyi olmadan davam edə biləcəyini göstərir. Strukturlaşdırılmış mRNT-lər üçün başlanğıc kodonunda ribosom kompleksinin formalaşması, ehtimal ki, eIF4A-nın helikaz fəaliyyəti üçün tələb olunan ATP (29) tələb edir. Bununla belə, bu helikaz emaledici deyil (30) və skan edən ribosomları idarə etmək ehtimalı azdır.

Biz təklif edirik ki, bəzi mRNA-lar üçün tethering və ya klasterləşmə skan etmək üçün sınaqdan keçirilə bilən alternativlərdir. Onlar qapaq strukturunda və ya daxili mRNT ardıcıllığında ribosomların cəlb edilməsinin məlum mexanizmlərini yerləşdirir və ribosomların skan edilməsi ilə asanlıqla izah olunmayan müxtəlif müşahidələri izah edə bilirlər. Bundan əlavə, bu modellər tərcümənin başlanmasını asanlaşdırmaq və idarə etmək üçün çoxlu mexanizmlərdən istifadə oluna biləcəyi ideyasına uyğundur.


Materiallar və metodlar

Plazmidlər.

Aşağı nüsxə sayı URA3 tam uzunluqlu maya eIF5B ifadə edən pC982 plazmidi ≈3.9-kb subklonlaşdırma yolu ilə qurulmuşdur. Salmən-BampC479 (6)-dan pRS316-a qədər HI fraqmenti. Maya eIF5B G domen mutantları sahəyə yönəldilmiş mutagenez yolu ilə yaradılmış və eyni vektora daxil edilmişdir. Plazmid pC484 GST-maya eIF5B-ni ifadə etmək üçün istifadə olunur396–1002 bakteriyalarda təsvir edilmişdir (4). Bu plazmidin törəmələri maya eIF5B mutantlarını ifadə etmək üçün qurulmuşdur. GST-insan eIF5B-nin WT və G domen mutant formalarını ifadə edən plazmidlər587–1220 təsvir edilmişdir (5). Bu sonuncu plazmidlərdən eIF5B hissələri pET28a-ya subklonlaşdırılaraq heksa-histidin və T7 işarəli (Onun6) insan eIF5B versiyaları587–1220.

Biokimyəvi Texnikalar.

Maya polisom analizləri və in vitro tərcümə təhlilləri təsvir edildiyi kimi aparılmışdır (6). Subunit birləşdirici və ya 80S kompleks montaj analizləri, metionil-puromisin (MP) sintezi testləri və GTP hidroliz təhlilləri təsvir edildiyi kimi aparılmışdır (7). Alt bölmənin birləşmə analizləri üçün 5 pmol 40S alt bölməsi, 5 pmol 60S alt bölməsi, 5 pmol [35 S]Met-tRNA, 0,5 μg eIF1, 0,5 μq eIF1A, 3 μq eIF2, 8 μq eIFA3, eIF50. μg eIF4B, 2 μg eIF4F, 0.3 μg eIF5 və 1.5 μg eIF5B 100 μl son həcmdə inkubasiya edildi. MP sintez analizləri üçün 2 pmol 40S alt bölməsi, 2,5 pmol 60S alt bölməsi, 3 pmol [35 S]Met-tRNA, 1 nmol AUG trinukleotidi, 0,5 mkq eIF1, 0,5 mkq eIF1A, məsələn, IF2, μ5 μg, μIF5. μg eIF5 və 1 μg eIF5B 40 μl son həcmdə inkubasiya edildi. [γ- 32 P]XTP Perkin-Elmer Life Sciences tərəfindən sintez edilmişdir.


Başlanğıc Komplekslərinin Primer Uzatma "Toeprinting" Təhlili

SP-A1 mRNA-nın 318-338 mövqelərinə bağlanan ayaq izi primeri 5′-FAM-CAGGAGGACATGGCATTTCTC-3′ (20 pmol) (GenBank qoşulma nömrəsi. HQ021440, Şəkil 1)B) 3 μg in vitro transkripsiya edilmiş RNT ilə 2 dəqiqə 68°C-də qızdırılmaqla preannealed və 8 dəqiqə ərzində 37°C-də soyudulmuşdur. Tərkibində 50% RRL, 20 μM amin turşusu qarışığı, 500 ng/μl sikloheksimid və 20 U RNAseOUT (Invitrogen) olan tərcümə qarışığı 30 μl yekun həcmə əlavə edildi. Reaksiyalar 30°C-də 20 dəqiqə inkubasiya edilmişdir. Əks transkriptaza reaksiyası bütün ribosom bağlama reaksiyasını, 50 mM Tris·HCl (pH 7.5), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 4 mM DTT, hər bir dNTPs, 500 μM2 ehtiva edən 50 μl ümumi həcmdə həyata keçirildi. U RNAseOUT və 200 U M-MLV RT (Invitrogen). Reaksiyalar 25°C-də 30 dəqiqə inkubasiya edilmişdir. Primer uzatma məhsulları DNA Clean & Concentrator-5 dəsti (Zymo Research, Irvine, CA) istifadə edərək çıxarılıb, tərkibində GeneScan 600 Liz ölçü standartları (Invitrogen) olan Hi-Di formamiddə seyreltilib və müstəqil olaraq kapilyar gel elektroforezi ilə analiz edilib. Penn State Tibb Kollecinin Əsas Obyektləri və Genewiz tərəfindən (South Plainfield, NJ). Alınan elektroferoqramlar (n = 9) PeakScanner proqramı (v.1.0, Applied Biosystems) ilə təhlil edilmişdir.


VİROLOGİYADA PROQRAMLI ÇƏRÇİVƏ DƏYİŞMƏSİNİN NƏTİCƏLƏRİ

Bir çox RNT virusları monosistronik mRNA-ları ilə kodlanmış çoxlu genin ifadəsini posttranskripsiya ilə tənzimləmək üçün PRF-dən istifadə edir. Bir çox bu cür virusların, məsələn, totivirusların, Ty elementlərinin və əksər retrovirusların mRNA-ları iki və ya daha çox üst-üstə düşən ORF-ləri ehtiva edir ki, burada əsas viral nukleokapsid zülalları (məsələn, Gag) 5′ ORF ilə kodlanır, sekanslar isə zülalları fermentativ viruslarla kodlayır. funksiyaları (adətən Pro və Pol) Gag ORF-dən 3′ məsafədə və çərçivədən kənarda yerləşir. Enzimatik zülallar yalnız istifadə olunan xüsusi virus və analiz sistemindən asılı olaraq 1-40% tezliklərdə baş verən PRF hadisələri nəticəsində tərcümə olunur. 54 Bu, enzimatik/replikativ fəaliyyətə malik məhsullara struktur nukleokapsid zülallarının daha böyük nisbətdə istehsalını təmin edir. Virusların yayılmasında struktur və enzimatik zülalların dəqiq nisbətlərinin saxlanmasının vacibliyi mayanın iki endogen virusundan istifadə etməklə nümayiş etdirilmişdir. S. cerevisiae və iki retrovirus. Maya dsRNA L-A 'qatil' virusunda, Gag-pol dimerizasiyası viral hissəciyin meydana gəlməsini nüvələşdirir. 55 Proqramlaşdırılmış çərçivə dəyişdirmə effektivliyindəki kiçik dəyişikliklər virusun sürətlə itirilməsinə səbəb olur və hesab olunur ki, sintez edilən Gag-pol zülalının miqdarının artırılması həddən artıq çox hissəciklərin qeyri-məhsuldar şəkildə başlamasına səbəb ola bilər, çox az istehsal isə effektiv dimerləşmənin qarşısını ala bilər. 56 Eynilə, Ty-də +1 ribosomal çərçivə dəyişikliyinin səmərəliliyinin artırılması və ya azalması1 Mayanın retrotranspoziv elementi TyA-TyB poliproteinin (Gaq-pol ekvivalenti) proteolitik emalına mane olmaqla retrotranspozisiya tezliklərinin azalmasına səbəb olur, beləliklə RNase H, inteqraza və əks transkriptazın yetkin formalarının formalaşmasını bloklayır. 48 Eynilə, HİV və ya Moloney Murine Leukemia Virus kimi retroviruslarda Gag-ın Gag-pol zülallarına nisbətinin dəyişdirilməsi virus-hissəciklərin əmələ gəlməsinə mane olur. 57-61 Bu viruslarda Gag-pol zülalının həddindən artıq ekspressiyası da poliproteinin səmərəsiz işlənməsi və virus istehsalının ləngiməsi ilə nəticələndi.

Koronaviruslar həmçinin sonradan proteolitik şəkildə işlənən C-terminal olaraq uzadılmış füzyon zülallarını sintez etmək üçün -1 PRF-dən istifadə edir. 62 Koronavirusların genomik təşkili struktur zülalların subgenomik mRNT-lərdə kodlaşdırıldığı halda, −1 PRF ilə tənzimlənən genlərin replikaza/transkriptaza funksiyasında iştirak etməsi ilə fərqlənir. SARS ilə əlaqəli koronavirusda (SARS-CoV) −1 PRF effektivliyinin dəyişdirilməsinin nəticələrini araşdıran bir araşdırma göstərdi ki, iştirak edən funksional genlər çox fərqli olsa da, onlar viral PRF effektivliyinin müəyyən bir təsir göstərmək üçün incə şəkildə tənzimləndiyinə dair ümumi fərziyyəni dəstəklədilər. Optimal virus replikasiyası və canlılığı üçün tələb olunan zülalların "qızıl ortası" 63 (Şəkil 2).

Proqramlaşdırılmış ribosomal çərçivə dəyişdirmə (PRF) səmərəliliyi viral hissəciklərin yığılması üçün vacibdir. Üst panel: PRF-nin normal nisbətləri viral struktur (Gag) və fermentativ (Gag-pol) zülallarının düzgün stoxiometrik nisbətləri ilə nəticələnir, effektiv viral hissəciklərin yığılmasına, virus genomunun qablaşdırılmasına və yetişməsinə imkan verir. Orta panel: PRF-nin artan nisbətləri natamam viral hissəciklərin meydana gəlməsinə səbəb olur. Aşağı panel: azalmış PRF nisbətləri boş viral hissəciklərin meydana gəlməsini təşviq edir.

Bir çox RNT virusunun -1 PRF dəqiq dərəcələri üçün tələbi antiviral terapevtiklər üçün bir hədəf təklif etdi. 64 Peptidiltransferaza inhibitorları anizomisin, sparsomisin və preussin hamısı −1 PRF effektivliyinə təsir edir və mayada virusun yayılmasını maneə törədir, 65, 66 və eEF-2 inhibitoru sordarin +1 PRF və Ty-ni dəyişdirir.1 retrotranspozitsiya. 66 Biokimyəvi və hesablama ekranları HIV-1 59, 67, 68 və SARS-CoV-nin −1 PRF siqnallarını bağlaya bilən kiçik birləşmələri müəyyən etmişdir. 69 Sintetik oliqonukleotid əsaslı birləşmələrin də -1 PRF nisbətini dəyişdirdiyi göstərilmişdir. 70-75 The recent development of cell-based dual-fluorescence reporter systems provide inexpensive platforms for high throughput screens directed at viral PRF signals. 76, 77 Genetic methods have been employed to identify numerous cellular gene products that affect both −1 and +1 PRF (reviewed in Ref 78 ). Importantly however, all of the mutants generated by the genetics approaches promote deleterious cellular phenotypes, suggesting that global dysregulation of PRF may interfere with expression of cellular genes (see next section). Indeed, the recent demonstration that defects in rRNA pseudouridylation promote increased rates of −1 PRF support this, and suggest that such defects may contribute to the pathologies associated with the human diseases X-linked Dyskeratosis Congenita and Hoyeraal-Hreidarsson syndrome. 79


Materiallar və metodlar

Specimens

With the exception of laboratory rats and mice, all specimens were caught in the wild using live traps. Geographic localities of the collected specimens, all from Argentina, are as follows: C.talarum (Necochea, Buenos Aires), C.porteousi (Bonifacio, Buenos Aires), C.opimusO.gliroides (Tres Cruces, Jujuy).

Primary cultures

Testes were decapsulated and dispersed in a medium containing 1000 U/ml collagenase, 0.1% (w/v) trypsin inhibitor, 0.1% (w/v) hyalouronidase, 0.4% (w/v) bovine serum albumin, 0.1% (w/v) DNase II, 1 mM glucose, 2.5 ng/ml amphotericin B, 1 U/ml penicillin/streptomycin at 37°C for 30 min. After pelleting, cells were plated in high glucose Dulbecco‘s modified Eagle's medium (DMEM) (Life Technologies), 10% (v/v) fetal calf serum, 100 g/ml penicillin/streptomycin.

RNA preparation

Total RNA was routinely prepared by the acid guanidinium thiocyanate–phenol–chloroform method of Chomczynski and Sacchi (1987) .

Sucrose gradients

Total RNA (120 μg) was run in 10–30% (w/v) sucrose linear gradients prepared in 10 mM Tris–HCl, 1 mM EDTA at 24 000 r.p.m. in a SW55 Beckman rotor for 13 h at 4°C. Gradients were fractionated in ∼45 fractions of 100 μl each.

Oligonucleotides

The following oligonucleotides were used in this paper:

Northern blots

RNA was electrophoresed in 1% (w/v) agarose–formaldehyde gels ( Lehrach və b., 1977 ) and blotted to Hybond N+ membranes (Amersham) in 50 mM NaOH overnight. Oligonucleotides were end-labeled with [γ- 32 P]ATP and T4 polynucleotide kinase. Hybridizations were performed at 56°C in 0.9 M NaCl, 0.09 M Tris–HCl pH 7.5, 6 mM EDTA, 0.5% (v/v) NP-40, 100 μg/ml herring sperm DNA. Washings were performed in 6× SSC, 0.1% (w/v) SDS, at 56°C for 30 min.

Southern blots

DNA was restricted with BamHI–BglII or NcoI–BglII using 4 U of enzyme per microgram of DNA. After a double phenol extraction and ethanol precipitation, digested DNA was electrophoresed in 1% agarose gel and after denaturing with 0.5 N NaOH in 1.5 M NaCl blotted to Hybond N membranes (Amersham) in 10× SSC overnight. Probe labeling, hybridization and washing conditions were identical to those used for Northern blots.

Primer extension

Approximately 1 μg of total RNA was denatured at 95°C for 10 min in 5 μl H2O. If denaturation was performed at 65°C, as most protocols indicate, no cDNA was synthesized, confirming the need to unfold the extremely stable secondary structure of Ctenomys D6. Annealing and cDNA synthesis were performed in 20 μl final volume containing 25 pmol of oligonucleotide primer plus 8 nmol of dNTPs, 5 μCi of [α- 32 P]dCTP, 20 U of human placental ribonuclease inhibitor and 300 U of MMLV reverse transcriptase (Promega) in the buffer provided by the manufacturer. The mix was incubated at room temperature for 10 min to allow RNA–primer annealing and then at 35°C for 60 min. Nucleic acids were ethanol-precipitated in 2.5 M NH4OAc. Pellets were resuspended in 10 μl of formamide-containing loading buffer and run in 8% polyacrylamide sequencing gels.

PCR, RT–PCR, subcloning and sequencing

PCR of rDNA was performed in 50 μl containing 1.5 mM MgCl2, 0.2 mM dNTPs, 1 μM primers, 10% (v/v) dimethylsulfoxide, 100 ng of genomic DNA and 1 unit of Taq DNA polymerase (Life Technologies) in the buffer provided by the manufacturer, with or without the addition of 2 μCi of [α- 32 P]dCTP. A 30-cycle reaction was preceded by incubation at 95°C for 5 min and ended by incubation at 72°C for 10 min. Each cycle consisted of incubations at 95°C for 1 min, 50°C for 30 s and 72°C for 90 s. RT–PCR was performed following the same primer extension (without labeled nucleotides, and adding a final incubation at 95°C for 10 min after the polymerization) plus PCR protocols specified above. Two microliters of each RT reaction were taken as template for the PCR. PCR and RT–PCR products (762 and 656 bp, respectively) were phosphorylated with T4 polynucleotide kinase, blunt-ended with Klenow, eluted from 1.8% (w/v) low melting point agarose gels, and subcloned into the EkoRV site of the plasmid pBS-SK+ (Stratagene). Direct sequencing of the PCR and RT–PCR products or their subclones was performed using the Prism Ready Reaction Dye Deoxy Terminator Cycle Sequencing Kit provided by Perkin Elmer in an Applied Biosynthesis 373 DNA sequencer. Genomic and cDNA clones used for further studies were named pCtgD6 and pCtcD6, respectively.


Videoya baxın: Ev tapsirigi qametogenez (Iyul 2022).


Şərhlər:

  1. Zukree

    Əhəmiyyətli məlumat

  2. Toft

    Bravo, his words just perfect

  3. Kai

    Bəli, həqiqətən, təşəkkür edirəm

  4. Montrell

    Təəssüf ki, indi ifadə edə bilmirəm - çox məşğuldur. Amma qayıdacağam - mütləq yazacam ki, düşündüm.

  5. Zephan

    Və hamısı budur, amma seçimlər haqqında nə demək olar?

  6. Presley

    Maraqlıdır ki, bu, çox qiymətli sikkədir



Mesaj yazmaq