Məlumat

20.9: İşıq - Biologiya

20.9: İşıq - Biologiya


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Eşitmə stimullarında olduğu kimi, işıq dalğalarda yayılır. Elektromaqnit spektrinə nəzər saldıqda, insanlar üçün görünən işığın görünən qırmızı işığın tezliyindən aşağı və görünən bənövşəyi işığın tezliyindən yuxarı olduğu üçün işıq kimi görə bilmədiyimiz radiasiya da daxil olmaqla, bütün spektrin kiçik bir parçası olduğunu göstərir.

İşıq qavrayışını müzakirə edərkən müəyyən dəyişənlər vacibdir. Dalğa uzunluğu (tezliyə tərs olaraq dəyişir) çalar şəklində özünü göstərir. Görünən spektrin qırmızı ucundakı işıq daha uzun dalğa uzunluqlarına malikdir (və daha aşağı tezliklidir), bənövşəyi ucundakı işıq isə daha qısa dalğa uzunluqlarına malikdir (və daha yüksək tezlikdir). İşığın dalğa uzunluğu nanometrlərlə ifadə edilir (qısaldılmış nm); bir nanometr metrin milyardda biridir. İnsanlar təxminən 380 nm ilə 740 nm arasında dəyişən işığı qəbul edirlər. Bəzi digər heyvanlar isə insan diapazonundan kənarda dalğa uzunluqlarını aşkar edə bilirlər. Məsələn, arılar çiçəklərdə nektar bələdçilərinin yerini tapmaq üçün yaxın ultrabənövşəyi işığı görür və bəzi qeyri-quş sürünənlər infraqırmızı işığı hiss edirlər (ov verən istilik).

Dalğa amplitudası işıq intensivliyi və ya parlaqlıq kimi qəbul edilir. İşığın intensivliyinin standart vahidi kandela, bu təxminən bir ümumi şamın işıq intensivliyidir.

İşıq dalğaları vakuumda saniyədə 299,792 km sürətlə hərəkət edir (və hava və su kimi müxtəlif mühitlərdə bir qədər yavaş) və bu dalğalar uzun (qırmızı), orta (yaşıl) və qısa (mavi) dalğalar şəklində gözə çatır. “Ağ işıq” deyilən şey insan gözü tərəfindən ağ kimi qəbul edilən işıqdır. Bu təsir insan gözündəki rəng reseptorlarını eyni dərəcədə stimullaşdıran işıq tərəfindən istehsal olunur. Bir obyektin görünən rəngi obyektin əks etdirdiyi rəngdir (və ya rənglər). Beləliklə, qırmızı obyekt qarışıq (ağ) işıqda qırmızı dalğa uzunluqlarını əks etdirir və işığın bütün digər dalğa uzunluqlarını udur.


20.9: İşıq - Biologiya

MDPI tərəfindən nəşr olunan bütün məqalələr açıq giriş lisenziyası altında dərhal bütün dünyada mövcuddur. MDPI tərəfindən dərc edilmiş məqalənin, o cümlədən rəqəmlər və cədvəllər də daxil olmaqla, hamısının və ya bir hissəsinin təkrar istifadəsi üçün xüsusi icazə tələb olunmur. Açıq giriş Creative Common CC BY lisenziyası altında dərc olunan məqalələr üçün məqalənin hər hansı bir hissəsi orijinal məqaləyə aydın şəkildə istinad etmək şərti ilə icazəsiz təkrar istifadə edilə bilər.

Feature Papers sahədə yüksək təsir üçün əhəmiyyətli potensiala malik ən qabaqcıl tədqiqatları təmsil edir. Bədii məqalələr elmi redaktorlar tərəfindən fərdi dəvət və ya tövsiyə əsasında təqdim olunur və dərc edilməzdən əvvəl ekspert rəyindən keçir.

Bədii məqalə ya orijinal tədqiqat məqaləsi, tez-tez bir neçə texnika və ya yanaşmanı özündə cəmləşdirən əsaslı yeni tədqiqat işi, ya da elmi sahədə ən maraqlı nailiyyətləri sistematik şəkildə nəzərdən keçirən sahədəki ən son irəliləyişlərə dair qısa və dəqiq yenilikləri olan hərtərəfli icmal sənədi ola bilər. ədəbiyyat. Bu tip kağız tədqiqatın gələcək istiqamətləri və ya mümkün tətbiqlər haqqında dünyagörüşünü təqdim edir.

Redaktorun Seçimi məqalələri dünyanın hər yerindən MDPI jurnallarının elmi redaktorlarının tövsiyələrinə əsaslanır. Redaktorlar jurnalda bu yaxınlarda dərc edilmiş az sayda məqaləni seçirlər ki, onlar müəlliflər üçün xüsusilə maraqlı və ya bu sahədə vacib olacaq. Məqsəd jurnalın müxtəlif tədqiqat sahələrində dərc edilmiş ən maraqlı işlərdən bəzilərinin şəklini təqdim etməkdir.


20.9: İşıq - Biologiya

MDPI tərəfindən nəşr olunan bütün məqalələr açıq giriş lisenziyası altında dərhal bütün dünyada mövcuddur. MDPI tərəfindən dərc edilmiş məqalənin, o cümlədən rəqəmlər və cədvəllər də daxil olmaqla, hamısının və ya bir hissəsinin təkrar istifadəsi üçün xüsusi icazə tələb olunmur. Açıq giriş Creative Common CC BY lisenziyası altında dərc olunan məqalələr üçün məqalənin hər hansı bir hissəsi orijinal məqaləyə aydın şəkildə istinad etmək şərti ilə icazəsiz təkrar istifadə edilə bilər.

Feature Papers sahədə yüksək təsir üçün əhəmiyyətli potensiala malik ən qabaqcıl tədqiqatları təmsil edir. Bədii məqalələr elmi redaktorlar tərəfindən fərdi dəvət və ya tövsiyə əsasında təqdim olunur və dərc edilməzdən əvvəl ekspert rəyindən keçir.

Bədii məqalə ya orijinal tədqiqat məqaləsi, tez-tez bir neçə texnika və ya yanaşmanı özündə cəmləşdirən əsaslı yeni tədqiqat işi, ya da elmi sahədə ən maraqlı nailiyyətləri sistematik şəkildə nəzərdən keçirən sahədəki ən son irəliləyişlərə dair qısa və dəqiq yenilikləri olan hərtərəfli icmal sənədi ola bilər. ədəbiyyat. Bu tip kağız tədqiqatın gələcək istiqamətləri və ya mümkün tətbiqlər haqqında dünyagörüşünü təqdim edir.

Redaktorun Seçimi məqalələri dünyanın hər yerindən MDPI jurnallarının elmi redaktorlarının tövsiyələrinə əsaslanır. Redaktorlar jurnalda bu yaxınlarda dərc edilmiş az sayda məqaləni seçirlər ki, onlar müəlliflər üçün xüsusilə maraqlı və ya bu sahədə vacib olacaq. Məqsəd jurnalın müxtəlif tədqiqat sahələrində dərc edilmiş ən maraqlı işlərdən bəzilərinin şəklini təqdim etməkdir.


Α-Sinukleinin çox yönlü strukturları

α-sinuklein (α-sin) presinaptik terminallarda bol şəkildə paylanmış, daxili nizamsız bir proteindir. α-sin-in Lewy cisimlərinə (LB) yığılması Parkinson xəstəliyinin (PD) molekulyar əlamətidir. α-Syn müxtəlif şərtlərə uyğunlaşan və çox yönlü funksiyaları yerinə yetirən ifrat konformasiya müxtəlifliyinə malikdir. Bununla belə, α-sin transformasiyasının molekulyar mexanizmi və müxtəlif struktur növləri ilə onların neyron fəaliyyətində və PD-də funksional və patogen rolları arasındakı əlaqə naməlum olaraq qalır. Bu mini icmalda biz fizioloji və patoloji şəraitdə membrana bağlı vəziyyətdə, sitozolda və amiloid vəziyyətində α-sin strukturlarının son kəşflərini ümumiləşdiririk. α-syn-nin müxtəlif struktur növləri haqqında mövcud biliklərdən biz onun normal neyronlarda və xəstəlik şəraitində funksiyası və toksikliyi haqqında ipucu tapmaq niyyətindəyik ki, bu da PD patogenezinə işıq sala bilər.

Açar sözlər: Parkinson xəstəliyi amiloid atom quruluşu zülal aqreqasiya vezikül ticarəti α-sinuklein.


Plazma Hüceyrəli Neoplazmalarla Bağlı Amiloidozun Müalicəsi

Plazma Hüceyrəli Neoplazmalarla Bağlı Amiloidoz üçün Müalicə Seçimləri

Müalicə amiloidozun və əsas plazma hüceyrə diskraziyasının sistem zədələnməsinin dərəcəsinin qiymətləndirilməsindən asılıdır.[1] N-terminal pro-beyin natriuretik peptidinin yüksələn və yüksəldilmiş səviyyəsi ürək amiloidozu zamanı gözlənilən ürək çatışmazlığını proqnozlaşdıra bilər və bu xəstələr üçün erkən müalicə nəzərdə tutulmalıdır.[2]

Plazma hüceyrəli neoplazmalarla əlaqəli amiloidozun müalicə variantlarına aşağıdakılar daxildir:

Kimyaterapiya

Bütün plazma hüceyrə diskraziyaları üçün olduğu kimi, çoxsaylı miyelomada aktiv olan bütün eyni rejimlər üçün cavablar bildirilmişdir.[3-9] Daratumumab, digər aktiv agentlərlə və ya onsuz da, adətən, digər agentlərlə birlikdə amiloidoz üçün cavablar göstərmişdir. miyeloma üçün istifadə olunur.[10-16]

Kök hüceyrə xilasetmə

İmmunoqlobulin yüngül zəncirli amiloidozlu 100 xəstənin randomizə edilmiş perspektiv tədqiqatı melfalan və yüksək dozalı deksametazonu yüksək dozalı melfalan və otolog kök hüceyrə xilasetməsi ilə müqayisə etdi.[17] 3 illik median təqibdən sonra orta ümumi sağ qalma (OS) transplantasiya olunmayan qola üstünlük verdi (22,2 aya qarşı 56,9 ay) P = .04).[17][Dəlil səviyyəsi: 1iiA] Bu və digər seriyalarda transplantasiya ilə bağlı 24% ölüm, orqan disfunksiyası olan yaşlı xəstələrdə yüksək dozalı kimyaterapiya ilə bağlı çətinlikləri əks etdirir.[17-22] 2007-ci ilə qədər. və 2012-ci ildə Beynəlxalq Qan və İlik Transplantasiyası Tədqiqat Proqramı otoloji kök hüceyrə transplantasiyası (ASCT) keçirmiş 800 amiloidoz xəstəsini müəyyən etdi, 5 illik OS nisbəti 77% və transplantasiya ilə bağlı ölüm nisbəti 5% idi ki, bu da transplantasiya üçün xəstələrin daha yaxşı seçilməsini təklif edir. .[23][Dəlil səviyyəsi: 3iiiA] Eynilə, 20 il ərzində ASCT keçirmiş 672 ardıcıl amiloidoz xəstəsinin retrospektiv baxışında müalicə ilə bağlı ölüm göstəricisi 2010-2016-cı illər arasında 8,06% ilə müqayisədə 2,4%-ə enmişdir. və 2009 və 1996 və 2002-ci illər arasında 14,5%.[24][Dəlil səviyyəsi: 3iiiD] Otoloji transplantasiyanın faydasını təsdiqləyən randomizə edilmiş sınaq gözlənilmir.[2,25]

Anekdot seriyası tam intensivlikli və azaldılmış intensivlikli allogenik SCT-ni təsvir edir.[26]

Cari Klinik sınaqlar

İndi xəstələri qeyd edən NCI tərəfindən dəstəklənən xərçəng klinik sınaqlarını tapmaq üçün qabaqcıl klinik sınaq axtarışımızdan istifadə edin. Axtarış sınağın yeri, müalicə növü, dərmanın adı və digər meyarlara görə daraldıla bilər. Klinik sınaqlar haqqında ümumi məlumat da mövcuddur.

İstinadlar
  1. Gertz MA, Dispenzieri A: Sistemli Amiloidozun Tanınması, Proqnozu və Terapiyası: Sistematik İcmal. JAMA 324 (1): 79-89, 2020. [PUBMED Abstract]
  2. Merlini G, Wechalekar AD, Palladini G: Sistemli yüngül zəncirli amiloidoz: həkimlərin müalicəsi üçün yeniləmə. Blood 121 (26): 5124-30, 2013. [PUBMED Abstract]
  3. Kumar SK, Hayman SR, Buadi FK, et al.: Lenalidomid, siklofosfamid və deksametazon (CRd) yüngül zəncirli amiloidoz üçün: 2-ci faza sınaqdan uzunmüddətli nəticələr. Blood 119 (21): 4860-7, 2012. [PUBMED Abstract]
  4. Venner CP, Lane T, Foard D, et al.: AL amiloidozunda siklofosfamid, bortezomib və deksametazon terapiyası yüksək klonal reaksiya dərəcələri və uzun müddətli irəliləməsiz sağ qalma ilə əlaqələndirilir. Blood 119 (19): 4387-90, 2012. [PUBMED Abstract]
  5. Wechalekar AD, Schonland SO, Kastrit E, et al.: Ürək mərhələsi III AL amiloidozu olan 346 xəstədə müalicə nəticələrinin Avropa birgə tədqiqatı. Blood 121 (17): 3420-7, 2013. [PUBMED Abstract]
  6. Sanchorawala V, Shelton AC, Lo S, et al.: AL amiloidozunun müalicəsində pomalidomid və deksametazon: 1 və 2-ci faza sınaqlarının nəticələri. Blood 128 (8): 1059-62, 2016. [PUBMED Abstract]
  7. Palladini G, Milani P, Foli A, et al.: Əvvəllər qeyri-transplant müalicələrə həssas olan AL amiloidozunda ikinci sıra müalicə ilə təqdimat və nəticə. Blood 131 (5): 525-532, 2018. [PUBMED Abstract]
  8. Manwani R, Cohen O, Sharpley F, et al.: Bortezomib ilə müalicə olunan sistemik AL amiloidozlu 915 xəstənin perspektivli müşahidə tədqiqatı. Qan 134 (25): 2271-2280, 2019. [PUBMED Abstract]
  9. Kastrit E, Leleu X, Arnulf B və başqaları: Bortezomib, Melphalan və Yüngül Zəncirli Amiloidoz üçün Deksametazon. J Clin Oncol 38 (28): 3252-3260, 2020. [PUBMED Abstract]
  10. Palladini G, Kastrit E, Maurer MS, et al.: Daratumumab plus CyBorD yeni diaqnoz qoyulmuş AL amiloidozu olan xəstələr üçün: ANDROMEDA-nın təhlükəsizliklə bağlı nəticələri. Qan 136 (1): 71-80, 2020. [PUBMED Abstract]
  11. Sanchorawala V, Sarosiek S, Schulman A, et al.: Residiv AL amiloidozunda daratumumabın təhlükəsizliyi, dözümlülüyü və cavab dərəcələri: 2-ci faza tədqiqatının nəticələri. Blood 135 (18): 1541-1547, 2020. [PUBMED Abstract]
  12. Nooka AK, Kaufman JL, Hofmeister CC, et al.: Çox miyelomada Daratumumab. Xərçəng 125 (14): 2364-2382, 2019. [PUBMED Abstract]
  13. Dispenzieri A: AL xəstələri dara olmadan getməyə cəsarət etmirlər. Blood 135 (18): 1509-1510, 2020. [PUBMED Abstract]
  14. Roussel M, Merlini G, Chevret S, və başqaları: Əvvəllər sistemli yüngül zəncirli amiloidozu olan xəstələrdə daratumumabın perspektivli 2-ci faza sınağı. Blood 135 (18): 1531-1540, 2020. [PUBMED Abstract]
  15. Kimmich CR, Terzer T, Benner A, et al.: Sistemli AL amiloidozu üçün Daratumumab: proqnostik amillər və nefrotik diapazonlu albuminuriya ilə mənfi nəticə. Qan 135 (18): 1517-1530, 2020. [PUBMED Abstract]
  16. Royal V, Leung N, Troyanov S, və başqaları: Yüngül zəncirli nefropatiyada böyrək nəticələrinin klinikopatoloji proqnozlaşdırıcıları: çox mərkəzli retrospektiv tədqiqat. Blood 135 (21): 1833-1846, 2020. [PUBMED Abstract]
  17. Jaccard A, Moreau P, Leblond V, et al.: AL amiloidozu üçün yüksək dozalı melfalan və melfalan plus deksametazon. N Engl J Med 357 (11): 1083-93, 2007. [PUBMED Abstract]
  18. Dispenzieri A, Kyle RA, Lacy MQ, et al.: Periferik qan kök hüceyrə transplantasiyası keçirən ilkin sistemik amiloidozlu xəstələrdə üstün sağ qalma: bir vəziyyətə nəzarət araşdırması. Blood 103 (10): 3960-3, 2004. [PUBMED Abstract]
  19. Skinner M, Sanchorawala V, Seldin DC, et al.: AL amiloidozlu xəstələrdə yüksək dozada melfalan və otolog kök hüceyrə transplantasiyası: 8 illik bir araşdırma. Ann Intern Med 140 (2): 85-93, 2004. [PUBMED Abstract]
  20. Leung N, Leung TR, Cha SS, və s.: Kök hüceyrə mobilizasiyası zamanı həddindən artıq maye yığılması: AL amiloidozlu xəstələrdə kök hüceyrə transplantasiyasından sonra birinci ilin sağ qalmasının yeni proqnostik faktoru. Blood 106 (10): 3353-7, 2005. [PUBMED Abstract]
  21. Madan S, Kumar SK, Dispenzieri A, et al.: Ürək tutulumu ilə yüngül zəncirli amiloidoz üçün yüksək dozalı melfalan və periferik qan kök hüceyrə transplantasiyası. Blood 119 (5): 1117-22, 2012. [PUBMED Abstract]
  22. Cibeira MT, Sanchorawala V, Seldin DC, et al.: Yüksək dozada melfalan və otolog kök hüceyrə transplantasiyasından sonra AL amiloidozunun nəticəsi: 421 xəstə seriyasında uzunmüddətli nəticələr. Blood 118 (16): 4346-52, 2011. [PUBMED Abstract]
  23. D'Souza A, Dispenzieri A, Wirk B, et al.: Yüngül Zəncirli Amiloidoz üçün Otoloq Hematopoietik Hüceyrə Nəqlindən Sonra Təkmilləşdirilmiş Nəticələr: Beynəlxalq Qan və İlik Transplantasiyası Tədqiqatları Mərkəzi. J Clin Oncol 33 (32): 3741-9, 2015. [PUBMED Abstract]
  24. Sidiqi MH, Aljama MA, Buadi FK, et al.: Yüngül Zəncirli Amiloidoz üçün Kök Hüceyrə Transplantasiyası: Zamanla Erkən Ölümün Azaldılması. J Clin Oncol 36 (13): 1323-1329, 2018. [PUBMED Abstract]
  25. Mehta J, Gerta MA, Dispenzieri A: Amiloidoz üçün yüksək dozalı terapiya: başlanğıcın sonu? Blood 103 (10): 3612-3, 2004.
  26. Schönland SO, Lokhorst H, Buzyn A, et al.: Amiloid yüngül zəncirli amiloidozlu xəstələrdə allogenik və singenik hematopoetik hüceyrə transplantasiyası: Avropa Qan və İlik Transplantasiyası Qrupunun hesabatı. Blood 107 (6): 2578-84, 2006. [PUBMED Abstract]

Mücərrəd

mücərrədMonositlərin arteriya divarına sızması aterogenezdə erkən hüceyrə hadisəsidir. Son sübutlar C-reaktiv zülalın (CRP) aterogenez yerlərində arterial intimada yığıldığını göstərir. Bu işdə biz CRP çöküntüsünün erkən aterosklerotik lezyonlarda monositlərin görünməsindən əvvəl olduğunu nümayiş etdiririk. CRP yeni təcrid olunmuş insan qan monositləri üçün kemotaktikdir. Spesifik CRP reseptoru monositlərdə in vitro, eləcə də in vivo nümayiş etdirilir və reseptorun monoklonal anti-reseptor antikorunun istifadəsi ilə blokadası CRP-nin yaratdığı kemotaksisi tamamilə ləğv edir. CRP aterogenez zamanı monositlərin yığılmasında böyük rol oynaya bilər.

İltihab aterosklerotik lezyonların formalaşmasında mühüm patogen xüsusiyyətdir. 1 Hüceyrə və humoral iltihabi reaksiyalar aterosklerotik lövhələrin yaranmasında və inkişafında iştirak edir. 1 2

Erkən aterogenezdə arterial divara sızan iltihablı hüceyrələrin əksəriyyəti monositlərdir. 2 Lezyonda demək olar ki, heç bir neytrofilin olmaması ateroskleroz tədqiqatının müəmmasıdır. Lezyonda hüceyrələr tərəfindən sintez edilən spesifik monosit kemoatraktantı olan monosit kemotaktik zülal-1 və digər kemokinlərin yerli sərbəst buraxılması bu fenomeni qismən izah edə bilər. 3 4 5

C-reaktiv zülal (CRP) insanlarda kəskin fazalı zülalın prototipidir. Kəskin faza cavabında onun plazma konsentrasiyası normal konsentrasiyadan 1000 dəfə artıq ola bilər. 6 Əksinə, pentraxin ailəsinin ikinci üzvü olan serum amiloid P, konstitutiv olaraq insan zərdabında 30-50 μg/ml səviyyəsində olur, sepsis zamanı maksimum 2 dəfə artır, siçanlarda isə kəskin faza reaktividir. . 7

CRP və koronar arteriya xəstəliyi arasında proqnozlaşdırıcı əlaqə geniş şəkildə təsdiq edilmişdir. CRP-nin mülayim yüksəlişi ilə müşahidə edilən assosiasiya ağır qeyri-stabil anginası olan stasionar xəstələrdə, 8 anginalı ambulator xəstələrdə, 9-da və hətta zahirən sağlam görünən ümumi populyasiyalarda mövcuddur. 10 11 İndi CRP-nin ateromada iltihaba kömək edə biləcəyini və həmçinin erkən aterogenezdə fəal iştirak edə biləcəyini göstərən dəlillər toplanır. Zülal Ca 2+-dan asılı olaraq LDL 12 13 ilə in vitro bağlanır və komplement sistemini aktivləşdirir. 14 15 Doğma CRP insan aterosklerotik lezyonlarında yığılır. 16 17 18 Bu yaxınlarda CRP və terminal tamamlayıcı kompleks olan C5b-9-un birgə lokalizasiyası insanın erkən aterosklerotik lezyonlarında nümayiş etdirilmişdir ki, bu da CRP-nin lezyonda mühüm tamamlayıcı aktivləşdirici molekul olduğunu göstərir. 19 Yağlı zolaqlarda CRP və köpük hüceyrələrinin kolokalizasiyası CRP-nin hüceyrələrlə qarşılıqlı təsirini göstərir, 19 lakin bu qarşılıqlı əlaqənin patobioloji mənası hələ aydın deyil.

CRP üçün müxtəlif reseptorlar təsvir edilmişdir. Monositlərdə spesifik CRP bağlanması aşağı yaxınlığı 20 olan FcyRI/CD64, eləcə də yüksək yaxınlıqlı FcyRIIa/CD32 vasitəsilə baş verir. 21 Çox yaxınlarda insan monositləri və neytrofilləri üzərində FcyRIIa/CD32 ilə CRP bağlanmasının allele spesifik olduğu göstərilmişdir. 22 Bununla belə, əlavə məlumatlar CRP-nin bağlanması və siqnalizasiyasında iştirak edən əlavə “unikal” CRP reseptorunun (CRP-R) 23 mövcudluğunu göstərir. Bu mərhələdə müxtəlif reseptorların CRP bağlanmasına töhfəsini aydınlaşdırmaq üçün əlavə tədqiqat tələb olunur. 24

CRP-nin monositlərə/makrofaqlara kemotaktik təsiri haqqında hesabatlar mübahisəlidir. Əvvəlki hesabatlardan biri göstərir ki, CRP insan monosit kemotaksisini və prokoaqulyant fəaliyyətini stimullaşdırır. 25 Bununla belə, başqa bir araşdırma göstərir ki, yerli CRP monositlərə kemotaktik təsir göstərmir. 26 Son hesabatlar CRP tərəfindən neytrofil kemotaksisinin inhibəsini nümayiş etdirir. 23 27 28 CRP-nin leykositlərə təsiri ilə bağlı bəzi hesabatlar CRP peptidləri ilə bağlıdır. Bu CRP peptidlərinin in vivo uyğunluğu ən azı şübhə doğurur, çünki CRP proteolizə çox davamlıdır və nə in vivo, nə də ex vivo bioloji mayelərdə CRP fraqmentləri hələ bildirilməyib.

Bu tədqiqat yalnız insan materialına diqqət yetirir. Aterosklerotik lezyonların formalaşmasında CRP-nin aktiv rolunun artan sübutları işığında, monositlərin yığılmasında CRP-nin mümkün funksional rolunu araşdırdıq.

Metodlar

Koronar Arteriya Nümunələri

Yarılma zamanı alınan ürəklərdən koronar arteriya nümunələri hazırlanmışdır. Onlar formalinlə fiksasiya edilmiş, parafinə qatılmış, kəsilmiş və hematoksilin və eozinlə boyanmışdır. Ödemli jelatinli nahiyələrin erkən aterosklerotik lezyonlarının on nümunəsi, 29 30 31 ilkin aterosklerotik lezyon və 31 yağlı zolaq analiz üçün seçilmişdir. 4-dən 5 μm-ə qədər olan serial eninə kəsiklər kəsildi. Koronar arteriyaların aterosklerozsuz intima, lakin adaptiv və diffuz intim qalınlaşması olan bölmələri də tədqiq edilmişdir.

Antikorlar

İnsan CRP-yə qarşı yönəlmiş siçan monoklonal antikoru (mAb) (klon CRP-8, IgG1, 1:500 seyreltmədə istifadə olunur) Sigma Chemical Co. 19-dan alınmışdır. IgG3, 1:100 seyreltmədə istifadə olunur) DAKO-dan alınmışdır.

Sıçan mAb klonu RC10.2 (IgM κ) leykosit CRP-R-yə qarşı yönəldilmişdir – qranulositik və monositik insan hüceyrə xətləri ilə spesifik liqand bağlanmasını maneə törədir. Bu antikorun yaranması və spesifikliyinə nəzarət ətraflı təsvir edilmişdir. 23 İnsan promonositik hüceyrə xətti U937 CRP-R zülalının mənbəyi kimi xidmət edirdi. Antikor BALB/c siçanlarının immunizasiyası ilə yaradılıb. 23

İlkin antikorlar biotinləşdirilmiş anti-siçan poliklonal antikorlarından (Vector Laboratories, DAKO) istifadə etməklə aşkar edilmişdir.

Fərdi Antikorlarla İmmunohistokimyəvi Boyanma

CRP və CD68 üçün immunohistokimyəvi boyanma təsvir edildiyi kimi aparıldı. 19 mAb CRP-8-in bərk fazalı CRP ilə HiTrap yaxınlıq sütunlarına (Amersham Pharmacia Biotech) liqand birləşməsi və mAb RC10.2-yə uyğun olmayan izotip uyğun gələn anticisimlə əvvəlcədən sorulması (əleyhinədir). Aspergillus niger qlükoza oksidazı, klon DAK-GO8, IgM, DAKO) boyanma spesifikliyinə nəzarət etmək üçün istifadə edilmişdir.

Hüceyrə Mədəniyyəti

Monositlər üçün istifadə edilən mədəniyyət mühiti 3,7 q/L NaHCO2 ilə tamponlanmış DMEM (GIBCO) idi.3 və 5% CO ilə qazlaşdırılır2. Mədəniyyət mühitinin pH-ı 7,25 idi. Hüceyrələr nəmləndirilmiş inkubatorda 37 ° C temperaturda saxlanılır. İnsan qanı monositləri təsvir edildiyi kimi donorlardan təcrid edilmişdir. 32 Chemotaxis analizi hazırlandıqdan dərhal sonra aparıldı. Hüceyrə canlılığı tripan mavisinin qəbulu ilə qiymətləndirildi.

C-reaktiv zülal

İnsan CRP-si Sigma-dan alınıb (0,02 mol/L Tris və 0,25 mol/L natrium xloriddə məhlul, pH 8,0). CRP insan plazmasından zülalın fosforilkolinə Ca 2+-dan asılı yaxınlığından istifadə etməklə təmizlənmişdir. Zülalın saflığı SDS-PAGE ilə müəyyən edildiyi kimi ≥98% təşkil edir. Hazırlıq tək bir protein zolağı nümayiş etdirdi Mr ≈21 000. Fiziki vəziyyət 20 mmol/L Tris, 100 mmol/L NaCl və 2 mmol/L-də xətti 10%-40% (ağırlıq/həc) saxaroza sıxlığı qradiyentin 5 mL-də 100 μg sentrifuqa edilərək yoxlanıldı. Ca 2+ bufer (50 000 rpm, şaquli rotor VTi 65, 4°C, 60 dəqiqə, Beckman ultrasentrifuqa modeli L60). Zülal ≈5.5S simmetrik zirvədə çökdü və daha yüksək səviyyədə zülal aşkar edilmədi. Mr fraksiyalar (>19S). Beləliklə, CRP avtomatik birləşmədi. Hazırlıq zamanı lipopolisakkaridlərin çirklənməsinin qarşısını almaq üçün tədbirlər görülmüşdür. Sonuncu tərəfindən istisna edilmişdir Limulus endotoksin analizi (Kinetic-QCL, BioWhittaker). Təhlilin həssaslığı 0,015 ilə 400 IU/ml arasındadır.

Kemotaksis Təhlili

Monosit kemotaksisi 48 quyulu mikrokemotaksis kamerasında (Neuroprobe) təhlil edilmişdir. DMEM-də 5×10 5 /mL sıxlıqda 33 Hüceyrə istifadə edilmişdir. Yuxarı və aşağı quyular polivinilpirolidonsuz polikarbonat membranla (25×80 mm, məsamə ölçüsü 5 μm, Costar) ayrılmışdır. İnkubasiya müddəti 3 saat idi. Süzgəcin alt üzündə mövcud olan köçmüş hüceyrələr ləkələnmiş və xüsusi sayma şəbəkəsindən istifadə etməklə işıq mikroskopu altında sayılmışdır. Hüceyrələr hər quyu üçün 5 təsadüfi yüksək güclü sahədə sayıldı. Hər bir nümunə 4 quyuda sınaqdan keçirilmişdir. DMEM mənfi nəzarət formil-Met-Leu-Phe (FMLP) kimi 100 nmol/L konsentrasiyada istifadə edilmiş və ≈2 olan kemotaktik indeksi (nəzarətdə köçmüş hüceyrələrin sayına görə nümunədə köçmüş hüceyrələrin sayı) induksiya etmişdir. , müsbət nəzarət kimi istifadə edilmişdir. Kemotaktiki kemokinetik reaksiyalardan fərqləndirmək üçün dama taxtası təhlili aparıldı. Statistik təhlil sonrakı Tələbə tərəfindən aparılmışdır t testlər. Bir dəyəri P<0.05 statistik əhəmiyyətli hesab edilmişdir. CRP-nin kemotaktik fəaliyyətini bloklamaq üçün monositlər 4 μg/mL konsentrasiyada anti-CRP-R mAb ilə əvvəlcədən inkubasiya edilmişdir.

RC10.2 ilə immunofluoresan boyama

Monositlər DMEM/10% AB serumunda şüşə slaydlara səpildi və 4% formaldehiddə fiksasiya olundu. Hüceyrələr 30 dəqiqə ərzində anti-CRP-R mAb (2 μg/mL) ilə inkubasiya edildi. İkinci dərəcəli TRITC etiketli antikor (eşşək anti-siçan IgM TRITC, Dianova) başqa 30 dəqiqə ərzində 1:50 seyreltmə ilə əlavə edildi. Hüceyrələr Mowiol (Calbiochem) içərisində quraşdırılmış və immunofluoresan mikroskopla görüntülənmişdir. Nəzarətlərə anti-CRP-R mAb-nin uyğun olmayan izotip uyğun siçan mAb ilə dəyişdirilməsi və RC10.2 ilə boyanmadan əvvəl 4°C-də 3 saat ərzində hüceyrələrin CRP (640 μg/mL) ilə preinkubasiyası daxildir.

CRP və CD68 üçün ikiqat boyama

Slaydlar CRP-yə qarşı ilk antikorla inkubasiya edildi, diaminobenzidin tetrakloridinə batırılma yolu ilə vizuallaşdırıldı, 19 və Tris tamponlu salin ilə yuyuldu. 5% normal at serumu ilə yenilənmiş bloklamadan sonra slaydlar anti-CD68 ilə inkubasiya edildi. 19 Slaydlar daha sonra biotinlə birləşdirilmiş anti-siçan antikoru, ardınca avidin-biotin peroksidaza reagenti ilə inkubasiya edildi. Bu dəfə reaksiya məhsulları slaydları 3-amino-9-etilkarbazola batırmaqla vizuallaşdırıldı. Nəhayət, slaydlar hematoksilinlə əks olundu və quraşdırıldı.

Nəticələr

Morfoloji tapıntılar

Koronar arteriya nümunələri ödemli jelatinli 29 30 və erkən aterosklerotik 31 lezyon meyarlarına cavab verdi. Bu lezyonların hamısı intimanın altındakı fibro-əzələ təbəqəsindən və lümenlə həmsərhəd olan fibroelastik təbəqədən ibarət diffuz adaptiv intimal qalınlaşmalar daxilində idi. Şişkin jelatinli lezyonlar intimanın dağınıq və şəffaf tərəfi ilə xarakterizə olunurdu. Erkən lezyonlar makrofaqların ya intima daxilində təcrid olunmuş yuvarlaq və ya milşəkilli hüceyrələrin qrupları şəklində görünməsi və ya luminal səthin yanında ≥1 təbəqə meydana gətirməsi ilə xarakterizə olunurdu. Bəzən bu hüceyrələr intimanın əksər hissəsində aşkar görünürdü. Endotelin erkən postmortem dissosiasiyası səbəbindən endotel örtüyünə dair heç bir dəlil yox idi. 34

Monosit infiltrasiyasından əvvəl ödemli jelatinli lezyonlarda CRP çöküntüləri

Aterosklerotik lezyonların inkişafı əlamətləri olmayan adaptiv və diffuz intimal qalınlaşmalarda heç bir CRP boyanması görünmədi (Şəkil 1A). Fibroelastik təbəqənin xarici yarısının və adaptiv və diffuz intimal qalınlaşmaların intimumunun fibromuskulyar təbəqəsinin şəffaf göründüyü yerlərdə CRP-nin diffuz çökməsi müşahidə edilə bilər (Şəkil 1C). Bununla belə, normal və dispers adaptiv və diffuz intimal qalınlaşmalarda makrofaqlar yox idi və ya intima daxilində seyrək paylanmışdır (Şəkil 1B və 1D). Erkən aterosklerotik lezyonlarda CRP çöküntülərinin ümumi nümunəsi daha əvvəl təsvir edilmişdir. 19 Şəkil 1-də lüminal səthin yanında bir qat makrofaq köpük hüceyrələrinin (Şəkil 1F) və fibroelastik təbəqənin xarici yarısında və fibromuskulyar CRP-nin diffuz çöküntüsü olan ilkin aterosklerotik lezyonun ardıcıl kəsiyi nümunəsi təsvir edilmişdir. mediaya bitişik intimanın təbəqəsi (Şəkil 1E). Bəzi makrofaqlar da CRP üçün müsbət boyanmışdır (Şəkil 1E).

CRP-nin çökməsi və monosit infiltrasiyası arasında müvəqqəti və məkan əlaqəsi haqqında daha dəqiq məlumat əldə etmək üçün biz ikiqat boyama immunoperoksidaza metodundan istifadə etdik. Şəkil 2 başqa bir ilkin aterosklerotik lezyonun tək toxumasına tətbiq edilən CRP (qəhvəyi) və CD68 (qırmızı) üçün ikiqat immunboyanmanı göstərir. Monositlər CRP çökmə yerlərində arterial divara sızır.

mAb CRP-8 bərk fazalı CRP ilə əvvəlcədən sorulduğunda, immunohistokimyəvi boyanma mənfi oldu (Şəkil 1C, daxil edin).

CRP insan qanı monositləri üçün kemotaktikdir

5 ilə 160 μg/mL arasında dəyişən CRP konsentrasiyalarında DMEM mikrokemotaksis kamerasında kemotaksis üçün sınaq mühiti kimi istifadə edilmişdir. DMEM mənfi nəzarət kimi xidmət etdi və FMLP (100 nmol/L) müsbət nəzarət kimi istifadə edildi. Şəkil 3A artan CRP konsentrasiyası ilə monosit miqrasiyasında əhəmiyyətli artımı göstərir. Maksimum kemotaktik reaksiya 40 μg/ml CRP konsentrasiyasında müşahidə edilmişdir. Bu konsentrasiyada orta kemotaktik indeks 2,4 idi. Daha yüksək CRP konsentrasiyası kemotaktik aktivliyin azalması ilə nəticələndi, beləliklə xarakterik kemotaktik cavabı təmsil etdi. Dama taxtasının təhlili kemokinetik reaksiyadan daha çox həqiqi kemotaktik reaksiya göstərdi (Şəkil 3B), çünki monositlərin miqrasiyası filtrin yuxarı və aşağı üzü arasında CRP qradientinin mövcudluğundan asılı idi.

CRP-R monositlər tərəfindən ifadə edilir və CRP-nin kemotaktik aktivliyi Anti-CRP-R mAb tərəfindən ləğv edilir.

Anti-CRP-R mAb ilə təzə təcrid olunmuş monositlərin immunofluoressensiya ilə rənglənməsi hüceyrələrin intensiv hüceyrə membranına yönəlmiş müsbət ləkəsini göstərdi (Şəkil 4). Ekvivalent konsentrasiyalarda uyğun olmayan izotip uyğunlaşdırılmış IgM antikoru heç bir immunofluoresan boyanma aşkar etmədi (Şəkil 4B). Hüceyrələrin CRP (640 μg/mL) ilə 3 saat ərzində 4°C-də inkubasiyası anti-CRP-R ilə immunofluoressensiyanı nəzərəçarpacaq dərəcədə azaldır (Şəkil 4C).

Mikrokemotaksis kamerasında təzə təcrid olunmuş monositlərə CRP (40 μg/mL) təklif edildi. Hüceyrələr kemotaksis analizində istifadə edilməzdən əvvəl monositlərin 4 μg/mL-də anti-CRP-R mAb ilə bağlanmasına icazə verildi. Şəkil 5 CRP vasitəçiliyi ilə kemotaksisin tam blokadasını nümayiş etdirir. Bunun əksinə olaraq, uyğun olmayan izotip uyğunlaşdırılmış IgM antikoru (4 μg/mL) CRP vasitəçiliyi ilə kemotaksisi inhibə etməmişdir. Hüceyrə canlılığına anti-CRP-R mAb və ya CRP-nin özü təsir etməmişdir, belə ki, tripan mavi boyanın xaric edilməsi ilə qiymətləndirilmişdir (məlumatlar göstərilmir).

Erkən Aterosklerotik Lezyonlarda CRP-R-nin Lokalizasiyası

CRP-R-nin tədqiq edilmiş bütün erkən aterosklerotik lezyonlarda lokallaşdırıldığı aşkar edilmişdir. Bununla belə, CRP-R boyanması nə ödemli jelatinli lezyonlarda, nə də aterosklerotik lezyonların inkişafı əlamətləri olmayan adaptiv və diffuz intimal qalınlaşmalarda müşahidə edilməmişdir. Erkən lezyonlarda CRP-R-nin üstünlük təşkil edən təzahürü köpük hüceyrələrinin hüceyrə səthi boyunca müsbət boyanma idi. Bəzən güclü sitoplazmik boyanma da var idi. İlkin aterosklerotik lezyonlarda CRP-R-müsbət hüceyrələr luminal səthin yanında lokallaşdırılmışdır (Şəkil 6A və 6B). Yağlı zolaqlarda onlar intimanın əksər hissəsində, o cümlədən mediaya bitişik intimanın bazal təbəqəsində aydın görünürdü (Şəkil 6C). Ümumiyyətlə, arteriya mediasında CRP-R boyası yox idi. Müvafiq olmayan IgM mAb ilə həyata keçirilən oxşar boyanma proseduru bütün toxuma nümunələri ilə mənfi nəticələr verdi (Şəkil 6D).

Müzakirə

CRP-nin aterogenezdə rol oynaya biləcəyinə dair sübutlar toplanır: (1) Epidemioloji sübutlar yüksək CRP plazma səviyyələri ilə ateroskleroz və onun nəticələri arasında əlaqəni ortaya qoyur. 9 10 11 (2) CRP in vitro LDL-yə bağlanır və beləliklə, yığılmış lipidlər tərəfindən intimada sıxışdırıla bilər. 12 13 (3) CRP klassik yol vasitəsilə komplement sistemini aktivləşdirir. 14 15 İnsan koronar arteriyalarının erkən aterosklerotik lezyonlarında CRP və C5b-9-un kolokalizasiyası göstərir ki, CRP arterial divarda komplementi aktivləşdirməklə xroniki iltihabi prosesi saxlaya bilər. 19 (4) CRP bioloji hissəcikləri opsonlaşdırır və CRP-nin və yağlı zolaqlardakı köpük hüceyrələrinin kolokalizasiyası CRP-nin köpük hüceyrələrinin əmələ gəlməsində iştirak etməsi konsepsiyasını dəstəkləyir. 19

Bu işdə biz insan aterogenezində monositlərin yığılmasında CRP-nin potensial rolunu araşdırdıq. Biz monositlərin, CRP və CRP-R-nin ödemli jelatinli nahiyələrdə və erkən aterosklerotik lezyonlarda paylanmasını təkcə arterial divarda CRP çöküntüsünün monosit infiltrasiyasından əvvəl olduğunu nümayiş etdirməklə deyil, həm də infiltrasiya edən monositlər və köpük hüceyrələrində CRP-R immunoreaktivliyini nümayiş etdirməklə təsvir edirik. Bundan əlavə, biz CRP-nin Boyden mikrokimyotaksis kamerasında insan qanı monositləri üçün kemotaktik olduğunu in vitro nümayiş etdirdik və dama taxtası analizindən istifadə edərək, bu cavabın kimokinetik deyil, kemotaktik olduğunu nümayiş etdirdik. İnsan qanı monositlərinin spesifik CRP-R-ləri ifadə etdiyinə dair anti-CRP-R mAb ilə immunofluoresan boyama vasitəsilə də sübutumuz var. Bundan əlavə, biz CRP vasitəçiliyi ilə monosit kemotaksisinin xüsusi anti-CRP-R mAb tərəfindən ləğv edildiyini nümayiş etdiririk.

Erkən lezyonlarda olan köpük hüceyrələrinin CRP-R, eləcə də CRP 19 üçün müsbət boyanması, CRP-nin lipid hissəciklərini opsonlaşdıraraq köpük hüceyrələrinin formalaşmasında iştirak etdiyi fərziyyəsinə uyğundur. CRP-nin enzimatik olaraq deqradasiya olunmuş LDL (E-LDL) 32 35 36 ilə kolokalizasiyası bu yaxınlarda erkən aterosklerotik lezyonlarda nümayiş etdirilmişdir. 13 E-LDL tərəfindən köpük hüceyrələrinin əmələ gəlməsinin qismən lipoproteinlərin zibil reseptorunun vasitəçiliyi ilə mənimsənilməsi ilə bağlı olduğuna dair sübutlar olsa da, E-LDL-nin hüceyrə qəbulu bağlı CRP-nin qəbulu ilə müşayiət oluna bilər və CRP-nin vasitəçiliyi ilə baş verə bilər. R. Bu fərziyyə anti-CRP-R mAb ilə bəzən müşahidə edilən və reseptorla əlaqəli CRP-nin endosomal yolla makrofaqlar tərəfindən daxililəşdirildiyini və qismən parçalandığını, ardınca təkrar emal edildiyini nümayiş etdirən əvvəlki tapıntılara uyğun gələn sitoplazmik boyanma ilə dəstəklənir. CRP-R. 37 CRP ilə opsonizasiyadan sonra hüceyrə zibilinin monositlər tərəfindən udulması köpük hüceyrələrində CRP-R-müsbət boyanması üçün əlavə izahat verə bilər, belə ki, biz terminal deoksinukleaza ilə qiymətləndirilən erkən aterosklerotik lezyonlarda bir neçə apoptotik nüvə ilə CRP çökməsinin qismən kolokalizasiyasını müşahidə etdik. – vasitəli dUTP nick end-labeling (MT et al, dərc olunmamış məlumatlar, 2000).

CRP monosit mənşəli makrofaq köpük hüceyrələrinin ilk görünüşü ilə xarakterizə olunan ilkin aterosklerotik lezyondan əvvəl arterial divarı insuda edən plazma zülallarının mühüm komponenti ola bilər. Arterial divara monosit infiltrasiya 2 mərhələli prosesdir ki, bu proses ilk növbədə aktivləşdirilmiş endotelə yapışmağı, ikincisi isə kemotaktik qradientə yönəldilmiş miqrasiyanı əhatə edir. 4 Diffuz şəkildə yığılmış CRP endoteli köçürmüş monositləri cəlb edərək arterial divarda kemotaktik qradient yarada bilər.

Anti-CRP-R mAb tərəfindən CRP-vasitəçili kemotaksisin in vitro inhibe edilməsi, arterial divara monosit kemotaksisini maneə törətməyə cəhd etmək üçün bu antikorun eksperimental heyvan modelində gələcəkdə istifadəsi üçün əsas yaradır. Digər reseptorların, xüsusən də Fcy reseptorlarının (FcyRI/CD64 və FcyRII/CD32) CRP vasitəçiliyi ilə kemotaksisdə iştirakını həll etmək üçün əlavə tədqiqatlar tələb olunur. Bundan əlavə, aterogenezdə dəyişdirilmiş CRP adlanan rolu araşdırma gözləyir. Bu denatürasiya olunmuş CRP bu yaxınlarda normal damar toxumasında aşkar edilmişdir və yerli CRP-dən fərqli olaraq hüceyrələrə bioloji xüsusiyyətlərə və təsirlərə malikdir. 38 Buna baxmayaraq, insuda olan ərazilərdə yerli CRP-nin erkən yığılması, indiyədək başa düşülməyən aterosklerotik lezyonların formalaşmasında bəzi hadisələri qismən izah edə bilər. Birincisi, digər kemoatraktantlara əlavə olaraq, məsələn, monosit kemotaktik zülal-1, CRP in vivo olaraq qan monositləri üçün kemoatraktant kimi çıxış edə bilər. İkincisi, CRP-nin neytrofil kemotaksisini 23 26 27 və neytrofillərin endotel hüceyrələrinə bağlanmasını maneə törətdiyi məlumdur. Sonuncu, parçalanmanın stimullaşdırılması və neytrofil membranlardan L-selektinin tökülməsi ilə əlaqədardır. 39 Bu, nə üçün lezyonda neytrofillərin demək olar ki, aşkar edilmədiyini yaxşı izah edə bilər, baxmayaraq ki, güclü neytrofil kemoatraktantları, məsələn, C5a lezyon daxilində əmələ gəlməlidir.

Xülasə olaraq, bizim məlumatlarımız göstərir ki, komplementin aktivləşdirilməsinə əlavə olaraq, monosit kemotaksisinin stimullaşdırılması və neytrofil kemotaksisinin inhibəsi arterial divarda CRP-nin çökməsi nəticəsində yaranan mühüm iltihab mexanizmləri ola bilər. CRP-nin aterogenez proseslərində yaxından iştirak etdiyinə dair artan dəlillər işığında, məlumatlarımız insudasiya edilmiş ərazilərin aşkar erkən aterosklerotik lezyonlara keçməsini təşviq etməkdə CRP-nin erkən rolunu təklif edir.

Şəkil 1. İnsan koronar arteriyalarının ardıcıl bölmələrində CRP və monositlər. Lumen yuxarı sağ küncdə yerləşir. İntima və media arasındakı sərhəd oxlarla göstərilir. Bar = 50 μm. Panellər A-dan D-yə qədər (A və B) və (C və D) ödemli jelatinli sahə olmadan 2 uyğunlaşmalı intim qalınlaşmasının ardıcıl bölmələridir. C və D panellərində intimal qalınlaşma A və B panellərinə nisbətən daha qabarıq olur (eyni böyütmə). A, CRP ləkəsi, intima daxilində protein çöküntüsünün olmaması. B, CD68 ləkəsi, luminal səthin yanında tək müsbət hüceyrə nümayiş etdirir (kiçik ox ucu). C, CRP ləkəsi, intimanın insudasiya edilmiş zonasında CRP-nin diffuz çöküntüsünü nümayiş etdirir (insert, bərk fazalı CRP ilə əvvəlcədən sorulan mAb CRP-8). D, CD68 ləkəsi, luminal səthin yanında 2 və ya 3-dən çox olmayan kiçik makrofaq nümayiş etdirir (kiçik ox ucu). Panel E və F adaptiv intimal qalınlaşma daxilində ilkin aterosklerotik lezyonun ardıcıl hissələridir. Fibroelastik təbəqənin xarici yarısında və mediaya bitişik intimanın fibromuskulyar təbəqəsində CRP-nin diffuz çökməsini nümayiş etdirən E, CRP ləkəsi. Qeyd edək ki, bəzi makrofaqlar da müsbət CRP ləkəsi (kiçik ox başları) göstərir. F, CD68 ləkəsi, luminal səthin (kiçik ox başları) yanında bir qat makrofaq köpük hüceyrələrini nümayiş etdirir.

Şəkil 2. Initial atherosclerotic lesion within an adaptive intimal thickening of a human coronary artery stained simultaneously for CRP (brown color, large arrowheads) and the macrophage marker CD68 (red color, small arrowheads). Lumen is in upper right corner. The demarcation between intima and media is indicated by an arrow. Bar=25 μm. As in Figure 1E and 1F , note the single intermittent layer of macrophage foam cells next to the luminal surface and the diffuse deposition of CRP in the outer half of the fibroelastic layer and in the fibromuscular layer of the intima adjacent to the media.

Şəkil 3. CRP and monocyte chemotaxis. A, Bar graphs showing the average chemotactic index in response to increasing CRP concentrations (n=6). Maximum chemotactic response was observed at a CRP concentration of 40 μg/mL. DMEM was used as a negative control FMLP (10 − 7 mmol/L) served as a positive control. Increase in monocyte migration up to the concentration of 40 μg/mL was demonstrated to be significant at a level of P<0.001 (ANOVA). tələbə t tests were performed to compare the various CRP concentrations vs control (*P<0.05). B, Checkerboard analysis. Serial dilutions of CRP were applied above and under the filter, and migration was quantified by counting, for each well, the number of migrated monocytes in 5 random high-power fields. The results demonstrate true chemotactic activity because monocyte migration depends on the presence of a CRP gradient between the upper and lower face of the filter, and migration is not significantly modified by increasing concentrations of CRP on both sides of the filter.

Şəkil 4. A, Immunofluorescent staining of freshly isolated monocytes (CRP-R stain with RC10.2). Note the intense cell membrane–focused positive stain of cells. B, Staining with irrelevant isotype-matched mouse mAb, confirming specificity of the anti–CRP-R mAb. C, Preincubation with CRP (640 μg/mL) for 3 hours at 4°C before staining with RC10.2. A marked reduction of immunofluorescence is revealed.

Şəkil 5. Effect of RC10.2 on monocyte migration. The antibody (4 μg/mL) abolishes CRP-mediated monocyte migration. Average chemotactic indices are for 3 independent experiments (P<0.05).

Şəkil 6. CRP-R in early atherosclerotic lesions of human coronary arteries. Lumen is in upper right corner. Demarcation between intima and media is indicated by arrows. Bar=50 μm (A and B) and 25 μm (C and D). A and B, Initial atherosclerotic lesion within an adaptive intimal thickening, identifying CRP-R–bearing foam cells next to the luminal surface (A, CPR-R stain) as being macrophages (B, CD68 stain). C and D, Fatty streak within an adaptive intimal thickening, confirming specificity of the anti–CRP-R mAb (C, CRP-R stain D, staining with irrelevant isotype-matched mouse mAb directed against Aspergillus niger glucose oxidase).

This study was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 451, project A4). We gratefully acknowledge Dr David Bowyer and Dr Nikolaus Marx for critical reading of the manuscript and the blood transfusion service of Ulm University for providing buffy coats. We thank Armin Imhof for help with statistical analysis. This work contains data from the MD thesis of Carsten Rist.


What If Humans Had Eagle Vision?

If you swapped your eyes for an eagle's, you could see an ant crawling on the ground from the roof of a 10-story building. You could make out the expressions on basketball players' faces from the worst seats in the arena. Objects directly in your line of sight would appear magnified, and everything would be brilliantly colored, rendered in an inconceivable array of shades.

The more scientists learn about eagle vision, the more awesome it sounds. Thanks to developing technologies, some aspects of their eyesight may eventually be achievable for humans. Others, we can only imagine.

Eagles and other birds of prey can see four to five times farther than the average human can, meaning they have 20/5 or 20/4 vision under ideal viewing conditions. Scientists have to cook up special experiments to judge eagles' eyesight &mdash your optometrist's alphabet eye charts are of no use, after all &mdash and one common setup involves training the birds to fly down a long tunnel toward two TV screens. One screen displays a striped pattern, and the birds get a treat when they land on it. Scientists test their acuity by varying the width of the stripes and determining from what distance the eagles begin to veer in the correct direction.

According to William Hodos, a distinguished professor emeritus at the University of Maryland who has studied the visual acuity of birds since the 1970s, two eyeball features confer eagles' sharper vision. First, their retinas are more densely coated with light-detecting cells called cones than human retinas, enhancing their power to resolve fine details just as higher pixel density increases the resolving power of cameras.

Second, they have a much deeper fovea, a cone-rich structure in the backs of the eyes of both humans and eagles that detects light from the center of our visual field. "Our fovea is a little shell or bowl, while in hawk or eagle it's a convex pit. Some investigators think this deep fovea allows their eyes to act like a telephoto lens, giving them extra magnification in the center of their field of view," Hodos told Life's Little Mysteries.

On top of sharp focus and a central magnifier, eagles, like all birds, also have superior color vision. They see colors as more vivid than we do, can discriminate between more shades, and can also see ultraviolet light &mdash an ability that evolved to help them detect the UV-reflecting urine trails of small prey. But there's no way to know what these extra colors, including ultraviolet, look like. "Suppose you wanted to describe the color of a tomato to someone who was born blind. You couldn't do it. We can't even guess what they're subjective sensation of ultraviolet light is," Hodos said. [Red-Green & Blue-Yellow: The Stunning Colors You Can't See]

Life with 20/5 vision

Eagle vision wouldn't change how we perform most daily activities &mdash such as reading computer screens or the newspaper, or finding milk in a crowded refrigerator &mdash but how we perceive the world and use our eyes would certainly be different. It's perhaps easiest to consider our new powers in the context of how eagles use them: for hunting.

On top of the ability to see farther and perceive more colors, we would also have nearly double the field of view. With our eyes angled 30 degrees away from the midline of our faces like an eagle's, we would see almost all the way behind our heads with a 340-degree visual field (compared to normal humans' 180 degree field) this would confer a clear advantage in hunting and self-defense.

With eagle eyes, we would swivel our heads constantly. To locate prey or any other object of interest in the distance, you'd periodically turn your head to the side to sweep your fovea (telephoto lens) across your field of view. After spotting what you're looking for in this manner, you'd redirect your head toward it and use stereoscopic vision &mdash combining the viewpoints of both eyes to gauge distance &mdash to calibrate the speed of your approach.

Enhanced perception and hunting prowess would likely come with a few drawbacks. "I would say that birds probably have a greater proportion of their brain volume devoted to visual processing than other groups of animals. Now the question of what it comes at the expense of: most birds appear not to have a well-developed sense of smell or taste," Hodos said.

It's more difficult to say how your more sophisticated cognitive processes would fare. "Birds have areas that seem to function like the cortex [the part of our brains responsible for memory, language and complex thought], but it's arguable. But in terms of their ability to solve problems and so on, they match what many mammals can do. Many birds have superb memory," he said. [The 5 Smartest Non-Primates on the Planet]

Maximizing our potential

Eagles' high-flying lifestyle requires better vision than humans need, and the physical properties of our eyeballs limit us to 20/10 or 20/8 vision at best. Natural vision that good is extremely rare, but research by David Williams, director of the Center for Visual Science at the University of Rochester, and his colleagues may soon enable laser eye surgeons to achieve 20/10-or-better vision for a large percentage of patients, placing their visual acuity halfway between that of humans and eagles.

Williams and his colleagues use an instrument called a wavefront sensor to detect distortions in human vision. They shoot light into the eye and observe how it bounces back through hundreds of tiny lenses in the sensor. The aberrations in patterns created by those lenses serve as a map of the eye's mistakes. Customized surgical techniques are being developed to implement the results of patients' wavefront measurements, in order to correct their vision beyond 20/20.

Follow Natalie Wolchover on Twitter @nattyover. Follow Life's Little Mysteries on Twitter @llmysteries, then join us on Facebook.


The Impact of School Start Times on Adolescent Health and Academic Performance

“All life on earth has evolved under a rhythmically dəyişən cycle of light and darkness, and organisms from single-celled bacteria up to man possess an internal representation of time. These 24 hour cycles, termed circadian rhythms, persist in the absence of external cues, and provide a means of anticipating changes in the environment rather than passively responding to them. In mammals, including man, light provides the critical input to the circadian system, synchronising the body clock to prevailing conditions.” ( 248 ) — RUSSELL FOSTER , Ph.D., F.R.S. , C.B.E. , Chair of Circadian Neuroscience, Head of Nuffield Laboratory of Ophthalmology, Oxford University [circadian: circa = about die = day].

“[Y]oung people have special needs during adolescent development that are related directly to their intrinsic sleep cycles.” (6) Adolescence commences at puberty’s onset ( 2 ) i.e., when children attain Tanner stage 2 (sexual maturation rating). (249, Stang & Story, Adolescent Growth and Development, publish. in, Guidelines for Adolescent Nutrition Services (Stang & Story, edits., Univ. Minn. 2005) p. 1.) The normal age range of pubertal onset is between 8 and 13 years in girls and between 9 years 6 months and 13 years, 6 months in boys. (249) ”The timing and tempo of puberty vary widely, even among healthy children.” (250)

While the end of puberty is defined as the point of cessation of bone growth, the end of adolescence is “defined less clearly, by a mixture of physical, psychological, social, and mental measures. One conspicuous property of adolescence is the apparently unsaturable capacity to stay up late and to sleep in.” (250.3) Individuals reach a maximum in their “‘lateness’” at around the age of 20. (250.3) At about 19.5 years in girls and at about 20.9 years in boys, there is an “abrupt change in the timing of sleep[,]” generally accepted as the “first biological marker of the end of adolescence.” (250.3 , see ns. 7, 103, 250.4.)

Circadian Rhythms & Homeostasis

Although sleep/wake patterns have long been known to delay in adolescents, behavioral factors (e.g., jobs, social diversions, scholastic obligations) were assumed to be entirely responsible. ( 21 , 192) In 1913, for example, Stanford Psychology Department Chair Lewis Terman and his co-author, Adele Hocking, noted a shift from “vesperal” to “matinal” sleeping during adolescence, attributing the change to increasing homework. (250.7) In the 1970s, researchers recognized that sleep patterns “change fundamentally at the transition to adolescence.” ( 5 )

In 1993, Carskadon, et al., (1) and Andrade, et al., (1.5) determined that the circadian system undergoes developmental biological changes when puberty arrives. (1, 1.5, 193) Other researchers have made “similar observations, together providing converg[ing] evidence that the circadian phase undergoes a delay in association with puberty[.]” ( Carskadon , Maturation of processes regulating sleep in adolescents, publish. in, Sleep in Children: Developmental Changes in Sleep Patterns ( Marcus , Carroll , & Donnelly, edits., Informa Healthcare, 2nd ed. 2008) p. 100 see also, n. 2.5.) Recent studies demonstrate “adolescent changes in sleep (delayed sleep phase and disrupted sleep) are evident prior to the bodily changes associated with puberty.” (Wolfson & Richards, Young Adolescents: Struggles with Insufficient Sleep, publish. in, Sleep and Development (Oxford Univ. Press, El Sheikh edit. 2011) p. 268, citing n. 250.5 .)

“Growing evidence supports the conjecture that endogenous circadian period and light sensitivity of the circadian system are altered during puberty in humans and animals. Such changes could explain the development of delayed sleep phase during puberty.” ( 103 )

The sleep pressure rate, or homeostatic drive—the biological trigger that causes sleepiness—slows down in adolescence. (26, 103) “Homeostasis relates to the neurobiological need to sleep the longer the period of wakefulness, the more pressure builds for sleep and the more difficult it is to resist[.]” (222) Adolescents develop a resistance to sleep pressure that permits them to stay up later. ( 103 ) At the same time, their circadian phase becomes relatively delayed, which provides them with a drive to stay awake later in the evening and to sleep later in the morning. ( 103 ) The magnitude of the delay is greater on non–school days. (1.5, 20, 21, 65, 147, 193) Additionally, rising time on non–school days gets later as adolescence progresses. (1.5, 21, 183.5)

The preferred sleep onset time for most adolescents is 11 p.m. və ya daha sonra. (2, 7, 8, 9, 54) In adults, by contrast, the ideal sleep onset time may range from 8 p.m. to midnight. (269) Bedtime gets later on school and non–school days with increasing adolescent age. (21, 65, 193) The circadian system and melatonin, a sleep-inducing hormone, direct a sleep cycle in teens which operates from approximately 11 p.m. to 8 a.m., or later. (2, 3, 6, 7, 8, 9, 54) The pubertal stage correlates with the “circadian phase marker” such that more mature children show a “later phase of melatonin secretion offset[]” ( Carskadon , Maturation of processes regulating sleep in adolescents, publish. in, Sleep in Children: Developmental Changes in Sleep Patterns , supra , səh. 100 [the presence of melatonin may be measured in salivary levels], n. omitted see also, n. 21 ), generally leaving students in the upper grades the most sleep-deprived. (67, 107, 145)

While some individuals may be able to fall asleep earlier than 11 p.m. (Smolensky & Lamberg, The Body Clock: Guide to Better Health (Henry Holt & Co., 2000) [melatonin secretion may occur by 10:30 p.m. in older adolescents and by about 9:30 p.m. in younger adolescents] p. 88), others may not secrete melatonin until midnight or later. ( 251 , 252 , see, Terman & McMahan , Chronotherapy: Resetting Your Inner Clock to Boost Mood, Alertness, and Quality Sleep (Penguin Group 2012) p. 199 [adolescent “inner clock … shifts in the direction of signaling sleep at midnight or 1 a.m. and waking up at 9 or 10 a.m.”].) For most adolescents, melatonin continues in peak production until about 7 a.m., then stops at about 8 a.m. ( 24 , 252 ) In adults, levels peak at about 4 a.m. ( 24 ) Therefore, waking a teenager at 7 a.m. is “equivalent” to waking an adult at 4 a.m. ( 20 , 24 , see also, Cardinali, Chronoeducation: How the Biological Clock Influences the Learning Process, publish. in, The Educated Brain: Essays in Neuroeducation (Battro, Fischer, & Léna, edit., Cambridge Univ. Press 2008) pp. 115, 121.)

“The teenage body is nocturnal[.]” (268) According to Stanford sleep expert Dr. William Dement, adolescents’ “biological rhythms are set in such a way that they really can’t wake up earlier. It’s like telling a person they have to jump eight feet. They just can’t.” ( 184 )

“Many parents and teachers become frustrated that adolescents seem to create their own problem of not getting enough sleep by choosing a late bedtime, despite their complaints of sleepiness in the morning. However, there are multiple factors that contribute to later bedtimes, and it is increasingly clear that adolescents stay awake later largely for biological, not social, reasons. As with adults, the physiological factor that most powerfully regulates the timing of waking and sleeping in adolescents is the circadian rhythm, a hard-wired ‘clock’ in the suprachiasmatic nucleus of the brain.” ( 2 )

Phase delayed sleep/wake patterns prevail among adolescents globally. ( 253 , 254 , 255 , 256 , 257 , 258 , 259 ) “[A] delay in the timing of sleep during the second decade of life has been observed in over 16 countries on 6 continents, in cultures ranging from pre-industrial to modern.” ( 103 ) For some teens, “the biological urge to stay up late continues into their forties.” (Terman & McMahan, Chronotherapy: Resetting Your Inner Clock to Boost Mood, Alertness, and Quality Sleep, supra, səh. 199.) Most children and adolescents, however, sleep increasingly later until the age of approximately 20, when there is an “abrupt shift in sleep schedules” and “mid-point times” become increasingly earlier again. (250.3, 265) Until then, scientists have repeatedly observed that adhering to Poor Richard’s judgment—“ ‘early to bed, early to rise’—may be difficult in the presence of a biologically driven phase preference.” ( 1 , 7 , 32 )

Individuals are inherently “larks” or “owls” who naturally prefer earlier or later daily schedules i.e., morningness or eveningness chronotypes. ( 260 , 261 ) Females tend to be more ‘morning type’ due to a tendency to have a shorter circadian period. ( 266 )

“Chronotype refers to when an individual’s endogenous circadian clock synchronises (entrains) to the 24 h day. When shielded from environmental time cues, i.e. cycles of light and darkness, circadian clocks ‘run free’, with a period of about one day (hence ‘circa-dian’). In nature, they are entrained to the earth’s 24 h light–dark cycle, with individual clocks entraining differently —some very late (‘owls’), others very early (‘larks’), and the majority in between. The chronotype is predominantly defined via behavior, e.g. activity onset in animals which strongly correlates with sleep offset.” (250.3)

“There is a difference of about 65 minutes in the peaks of body temperature rhythm between morning and evening types, and morning types secrete significantly more adrenaline in the morning than do evening types. Furthermore, the timing of mood and activity rhythms differs by several hours between distinct morning and evening types.” (264)

Although phase delay generally shifts adolescents to the owl’s schedule, ( 260 ) individuals retain biological preferences for morning or evening activities. ( 261 ) “For around 40% of teens, this natural tendency toward an eveningness chronotype is so severe that it is practically impossible for them to fall asleep much before midnight even under the most supportive of parental/familial conditions and bedtime routines[.]” (250.1)

There may be variation within chronotypes, placing some at mid-range, others at extremes. ( 262 ) Extreme “owls” may fall asleep when extreme “larks” awaken. ( 263 ) Mid-range types may slightly favor morning or evening activities, but can occasionally manage either. (Smolensky & Lamberg, The Body Clock: Guide to Better Health, supra, pp. 40-41, 55 [referring to mid-range types as “hummingbirds”].)

Morning-type individuals tend to awaken about two hours earlier than evening types and have peaks earlier in time (phase advanced) for variables such as melatonin secretion, body temperature, and self-reported alertness. (267) Morning- and “neither-type individuals” also have shorter latencies to fall asleep in response to a forced nap than do evening types. (267) The underlying physiology that differentiates morning and evening-type individuals is the length of their circadian period or “clock” (tau). (267) Morning-type individuals have shorter values of tau which are actually close to a 24-h period, while evening-type individuals have values that are somewhat longer than 24 h. (267)

“Our daily life is organized by three different clocks: a solar clock, providing light and warmer temperatures during the day a social clock, which we see or hear first thing on a working day and a biological clock, which we sense most vividly when jet lagged, during shift work, or when adjusting to daylight savings time. When shielded from the solar and the social clock (constant conditions), the biological clock ‘runs free.’ In real life, however, circadian clocks are usually synchronized (entrained) to the 24 h of the solar clock. The major environmental signal for entrainment (zeitgeber) is light that, in mammals, can reach the biological clock only through the eyes[.]” (263, citations omitted.)

“Long after the initial discovery of circadian rhythms, it was assumed that human beings had evolved to the point where circadian rhythms were no longer impacted by the light-dark environment. The finding by Lewy et al. that bright white light delivered to the human eye at night could inhibit melatonin production—and even shift the melatonin production rhythm—demonstrated that this earlier belief about lighting was false.” (278) (The totally blind generally have circadian rhythms that are “free-running” — i.e., not entrained to environmental time cues, oscillating on a cycle slightly longer than 24 hours.) (279)

Nearly all adolescents in the U.S. have at least one electronic item such as a television, computer, telephone, or music device in their bedrooms. ( 25 , 105 ) The brightness of a television or computer screen may interfere with melatonin release, because release occurs only under dark conditions. ( 105 ) In turn, regulation of the sleep-wake cycle may be disturbed. ( 105 ) A 2014 survey of 9,089 high school students in three states found that students with either a phone or computer in their bedrooms were less likely to capture eight hours of sleep than students without these items in their bedrooms. (309) Electronic device multitasking also appears to be a good predictor of diminished sleep. ( 105 ) Video gaming may be particularly disruptive to adolescent sleep. ( 108)

As little as five hours exposure to normal levels of indoor lighting, and not just very bright light, can reset the human biological clock, a finding which indicates that many people in industrialized countries may be constantly sleep deprived and in a permanent state of jet lag. ( 280 ) A study of Brazilian adolescents living without electricity showed a delay in sleep, however, those living in nearby electrified homes delayed sleep to a greater degree and slept less. (Carskadon, Maturation of processes regulating sleep in adolescents, publish. in, Sleep in Children: Developmental Changes in Sleep Patterns, supra, səh. 96.)

Although light treatments have served to modify circadian timing in some populations, a 2005 study reported early morning light treatments did not change adolescent sleep/wake cycles or improve daytime performance during weekdays. ( 6 ) “Natural circadian patterns are very resistant to change.” (Wahlstrom, Accommodating the Sleep Patterns of Adolescents Within Current Educational Structures: An Uncharted Path, publish. in, Adolescent Sleep Patterns, Biological, Social, and Psychological Influences, supra, səh. 173.) By contrast, carefully controlling light exposure, including wearing eyeshades to exclude evening light, has been successful in modifying adolescent circadian timing. (5, 8) However, this approach may be less than practical for most teenagers.

Inadequate exposure to short-wavelength (blue) light further delays the adolescent sleep/wake cycle, pushing back the onset of melatonin by about six minutes for each morning light-deprived day. ( 281 ) Mariana Figueiro , Ph.D., Assistant Professor and Program Director at Rensselaer Polytechnic Institute’s Lighting Research Center, explains:

“ ‘As teenagers spend more time indoors, they miss out on essential morning light needed to stimulate the body’s 24-hour biological system, which regulates the sleep/wake cycle[.]’ [¶] The problem is that today’s middle and high schools have rigid schedules requiring teenagers to be in school very early in the morning. These students are likely to miss the morning light because they are often traveling to and arriving at school before the sun is up or as it’s just rising. ’This disrupts the connection between daily biological rhythms, called circadian rhythms, and the earth’s natural 24-hour light/dark cycle[.]’ ” ( 282 )

In addition, Figueiro contends schools are unlikely to provide adequate electric light or daylight to stimulate this biological or circadian system, which regulates body temperature, alertness, appetite, hormones and sleep patterns. (282) Our biological system responds to light much differently than our visual system. (282) It is much more sensitive to blue light. (282) Therefore, having enough light in the classroom to read and study does not guarantee sufficient light to stimulate our biological system. (282)


INDIRECT VIRULENCE FACTORS

As we know, the ability of B. mandrillaris to produce human diseases is a multifactorial process and among other factors, is dependent on their ability to survive outside its mammalian host for various times and under diverse environmental conditions (high osmolarity, varying temperatures, food deprivation, and resistance to chemotherapeutic drugs). It is most likely the cyst stage that allows B. mandrillaris to overcome such conditions. Consequently, the ability of B. mandrillaris to switch its phenotype can be considered as contributory factors toward disease and are indicated as indirect virulence factors.


There are a number of graphical tools we have at our disposal to assess approximate normality based on observations of a variable of interest. There are also some formal tests we can apply. Here we focus on the graphical tools.

18.11.1 Comparing histograms to theoretical normals

One of the simplest approaches to assessing approximate normality for a variable of interest is to plot a histogram of the observed variable, and then to overlay on that histogram the probability density function you would expect for a normal distribution with the same mean and standard deviation.

In the example below I show a histogram of heights from a sample of 100 men, overlain with the PDF of a normal distribution with the mean and standard deviation as estimated from the sample.

The histogram matches fairly well to the theoretical normal, but histograms are rather course visualizations when sample sizes are modst.

18.11.2 Normal probability plot

A second graphical tool for assessing normality is a “normal probability plot”. A normal probability plot is a type of scatter plot for which the x-axis represents theoretical quantiles of a normal distribution, and the y-axis represents the observed quantiles of our observed data. If the observed data perfectly matched the normal distribution with the same mean and standard deviation, then all the points should fall on a straight line. Deviations from normality are represented by runs of points off the line.

The ggplot functions geom_qq() and gome_qq_line() take care of the necessary calculations required to generate a normal probability plot. Here is the normal probability plot for the male height data:

This plot suggests that the male heights are approximately normally distributed, though there are maybe a few more very short men and a few less very tall men in our sample then we would expect under perfect normality.

18.11.3 Comparing the empirical CDF to the theoretical CDF

A third visual approach is to estimate a cumulative distribution function (CDF) for the variable of interest from the data and compare this to the theoertical cumulative distribution function you’d expected for a normal distribution (as provided by pnorm() ). When you estimate a cumulative distribution function from data, this is a called an “empirical CDF”.

The function ggplot::stat_ecdf estimates the empirical CDF for us and plots it, we can combine this with stat_function() to plot the theoertical CDF using pnorm, as shown below for the height data.

Here the match between the empirical CDF and the theoretical CDF is pretty good, again suggesting that the data is approximately normal.


Videoya baxın: : Çox mübahisəli iddialar. Vacib dərslər. (Iyul 2022).


Şərhlər:

  1. Ames

    qalay zarafatı !!

  2. Johanne

    Əla, bu sadəcə əla ideyadır



Mesaj yazmaq