Məlumat

11.1: Rekombinant DNT və Gen Klonlaşdırılması - Biologiya

11.1: Rekombinant DNT və Gen Klonlaşdırılması - Biologiya


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Rekombinant DNT süni şəkildə yaradılmış DNT-dir. İki və ya daha çox mənbədən olan DNT tək rekombinant molekula daxil edilir.

Rekombinant DNT-nin (rDNA) edilməsi - Baxış

  • Hər iki mənbədən DNT-ni eyni məhdudlaşdırıcı endonükleazla müalicə edin (bu halda BamHI).
  • BamHI hər iki molekulda eyni yeri kəsir

5' GGATCC 3'
3' CCTAGG 5'

  • Kəsmənin uclarında tək zəncirli DNT-nin həddindən artıq bir hissəsi var.
  • Bunlara "yapışqan uclar" deyilir, çünki onlar tamamlayıcı yapışqan ucu olan istənilən DNT molekulu ilə əsas cütləşə bilirlər.
  • Bu vəziyyətdə, hər iki DNT preparatının tamamlayıcı yapışqan ucları var və beləliklə, qarışdırıldıqda bir-biri ilə cütləşə bilər.
  • A DNT ligaza ikisini kovalent olaraq bir molekula birləşdirir rekombinant DNT.

Faydalı olması üçün analiz, ardıcıllıq və s. üçün material təmin etmək üçün rekombinant molekul dəfələrlə təkrarlanmalıdır. Eyni rekombinant molekulun çoxlu eyni nüsxələrinin istehsalına deyilir. klonlaşdırma. Klonlama polimeraza zəncirvari reaksiya (PCR) adlanan proseslə in vitro edilə bilər. Ancaq burada klonlaşdırmanın necə edildiyini araşdıracağıq in vivo.

Klonlama in vivo olaraq edilə bilər

  • kimi birhüceyrəli mikroblar E. coli
  • birhüceyrəli eukariotlar kimi Maya
  • toxuma mədəniyyətində yetişdirilən məməli hüceyrələrində.

Hər bir halda rekombinant DNT hüceyrə tərəfindən replikasiya oluna və ifadə oluna bilən formada alınmalıdır. Bu, DNT-ni a-ya daxil etməklə əldə edilir vektor. Bir sıra viruslar (həm bakteriya, həm də məməlilər hüceyrələri) vektor kimi xidmət edə bilər. Ancaq burada istifadə edərək klonlaşdırma nümunəsini nəzərdən keçirək E. coli ev sahibi kimi və a plazmid vektor kimi.

Plazmidlər

Plazmidlər kiçikdir (bir neçə min əsas cüt), adətən yalnız bir və ya bir neçə gen daşıyır, dairəvi və tək replikasiyanın mənşəyi. Plazmidlər bakterial xromosomu təkrarlayan eyni mexanizmlə təkrarlanır. Bəzi plazmidlər xromosomla təxminən eyni sürətlə kopyalanır, buna görə də bir hüceyrədə plazmidin yalnız bir nüsxəsi ola bilər. Digər plazmidlər yüksək sürətlə kopyalanır və bir hüceyrədə 50 və ya daha çox ola bilər.

Çox sayda nüsxəyə malik plazmidlərdəki genlər adətən yüksək səviyyədə ifadə edilir. Təbiətdə bu genlər çox vaxt bakteriyanı bir və ya daha çoxdan qoruyan zülalları (məsələn, fermentləri) kodlayır. antibiotiklər. Plazmidlər bakteriya hüceyrəsinə nisbətən asanlıqla daxil olur. Bu, təbiətdə baş verir və xəstəxanalarda və başqa yerlərdə antibiotik müqavimətinin sürətlə yayılmasına səbəb ola bilər. Plazmidlər laboratoriyada hüceyrəni daxil olan genlərlə dəyişdirərək qəsdən bakteriyalara daxil edilə bilər.

Yuxarıdakı şəkildə, dolaşıq təxminən 4300 geni kodlayan 4,6 milyondan çox baza cütünü ehtiva edən tək DNT molekulunun bir hissəsidir. Kiçik dairələr plazmidlərdir.

Plazmidlərin nümunələri

PAMP

  • 4539 əsas cüt
  • tək replikasiya mənşəli
  • gen (ampr)antibiotiklərə qarşı müqaviməti təmin edir ampisilin (penisillinin qohumu)
  • a subay ardıcıllığın meydana gəlməsi

5' GGATCC 3'
3' CCTAGG 5'ki, yuxarıda gördüyümüz kimi, məhdudlaşdırıcı ferment tərəfindən kəsilir BamHI

  • a subay ardıcıllığın meydana gəlməsi

5' AAGCTT 3'
3' TTCGAA 5' məhdudlaşdırıcı ferment tərəfindən kəsilir HindIII

pAMP-nin a qarışıq BamHI və HindIII istehsal edir:

  • fraqmenti 3755 həm də daşıyan baza cütləri ampr gen və replikasiya mənşəyi
  • fraqmenti 784 baza cütləri
  • hər iki fraqmentin ucları yapışqandır

PKAN

  • 4207 əsas cüt
  • tək replikasiya mənşəli
  • gen (kanr) antibiotikə qarşı müqavimət göstərmək kanamisin.
  • tərəfindən kəsilmiş bir sayt BamHI
  • tərəfindən kəsilmiş bir sayt HindIII

pKAN-ın a qarışıq BamHI və HindIII istehsal edir:

  • fraqmenti 2332 baza cütləri
  • fraqmenti 1875 ilə baza cütləri kanr gen (lakin replikasiya mənşəyi yoxdur)
  • hər iki fraqmentin ucları yapışqandır

Bu fraqmentlər həzm qarışıqlarını agaroz geldə elektroforezə məruz qoymaqla görüntülənə bilər. Mənfi yüklü fosfat qruplarına görə DNT birbaşa cərəyan tətbiq edildikdə müsbət elektroda (anod) doğru miqrasiya edir. Parça nə qədər kiçik olsa, geldə bir o qədər uzaqlaşır.

Liqasiya İmkanları

Əgər siz iki məhdudlaşdırıcı fermenti çıxarsanız və DNT liqazının işini görməsi üçün şərait yaratsanız, bu plazmidlərin parçaları yenidən birləşə bilər (yapışqan uclarının tamamlayıcılığı sayəsində).

pKAN və pAMP fraqmentlərinin qarışdırılması yenidən birləşmiş molekulların bir neçə (ən azı 10) imkanını təmin edir. Bunlardan bəziləri funksional plazmidlər əmələ gətirməyəcək (iki və ya replikasiya mənşəli olmayan molekullar fəaliyyət göstərə bilməz).

Şəkil 11.1.4 Rekombinant Plazmid

Maraqlı ehtimallardan biri də qoşulmaqdır

  • 3755-bp pAMP fraqmenti (ile ampr və replikasiya mənşəli) ilə
  • 1875-bp pKAN fraqmenti (ile kanr)

ilə möhürlənmişdir DNT ligaza, bu molekullar müqavimət göstərə bilən fəaliyyət göstərən plazmidlərdir hər ikisi ampisilin və kanamisin. Onlar molekullardır rekombinant DNT.

Molekulun plazmid kimi işləməsini təmin edən replikasiya mənşəyi pAMP tərəfindən təmin edildiyi üçün pAMP adlanır. vektor.

Çevrilir E. coli

Müalicəsi E. coli birləşmiş molekulların qarışığı ilə həm ampisilin, həm də kanamisinin iştirakı ilə inkişaf edə bilən bəzi koloniyalar əmələ gələcək.

  • Bir dayandırılması E. coli əlaqəli DNT molekullarının qarışığı ilə müalicə olunur.
  • Süspansiyon həm ampisilin, həm də kanamisin olan agarın səthinə yayılır.
  • Ertəsi gün, hər iki antibiotikə davamlı olan bir neçə hüceyrə milyardlarla transformasiya edilmiş hüceyrədən ibarət görünən koloniyalara çevriləcəkdir.
  • Hər bir koloniya a təmsil edir klon transformasiya olunmuş hüceyrələrdən ibarətdir.

Bununla belə, E. coli eyni vaxtda birdən çox plazmid tərəfindən transformasiya oluna bilər, ona görə də biz transformasiya olunmuş hüceyrələrin rekombinant plazmid aldığını nümayiş etdirməliyik.

İkiqat davamlı koloniyalardan (klonlardan) DNT-nin elektroforezi hekayəni izah edir.

  • Müqavimətini a-dan əldə edən hüceyrələrdən plazmid DNT rekombinant plazmid yalnız göstərin 3755-bp və 1875-bp lentləri (Klon 1, zolaq 3).
  • Klon 2 (Zolaq 4) eyni vaxtda əlaqəli pAMP və pKAN tərəfindən dəyişdirildi. (Onun rekombinant molekulu da qəbul edib-etmədiyini deyə bilmərik.)
  • Klon 3 (5-ci zolaq) rekombinant molekul, eləcə də bütöv bir pKAN tərəfindən dəyişdirildi.

Digər genlərin klonlanması

Yuxarıda təsvir edilən rekombinant vektorun özü digər genlərin klonlanması üçün faydalı vasitə ola bilər. Fərz edək ki, onun daxilində kanamisinə müqavimət geni (kanr) ardıcıllığın tək baş verməsi var

5' GAATTC 3'
3' CTTAAG 5'

Bu məhdudlaşdırıcı ferment tərəfindən kəsilir EcoRI, yapışqan uçlar istehsal edir.

Əgər hər hansı digər DNT nümunəsini, məsələn, insan hüceyrələrindən EcoRI ilə müalicə etsək, eyni yapışqan ucları olan fraqmentlər əmələ gələcək. EcoRI ilə işlənmiş plazmid və DNT liqaza ilə qarışdırılaraq, az sayda insan molekulu plazmidə birləşdiriləcək və sonra transformasiya üçün istifadə edilə bilər. E. coli.

Amma o klonları necə aşkar etmək olar E. coli insan DNT-sinin bir parçasını daşıyan bir plazmid tərəfindən çevrilən?

Əsas odur ki, EcoRI saytıdır daxilində the kanr gendir, buna görə də insan DNT-sinin bir parçası oraya daxil edildikdə, genin funksiyası məhv olur.

Hamısı E. coli vektor tərəfindən çevrilmiş hüceyrələr, insan DNT-sini daşıyıb-daşımamasından asılı olmayaraq, ampisillinin iştirakı ilə böyüyə bilir. Amma E. coli insan DNT-sini daşıyan plazmid tərəfindən çevrilən hüceyrələr kanamisinin varlığında inkişaf edə bilməyəcəklər. Belə ki,

  • Müalicə olunan bir süspansiyon yaymaq E. coli yalnız tərkibində ampisilin olan agarda
  • bir gecədə böyüyür
  • steril diş çubuğu ilə hər bir koloniyadan az miqdarda kanamisin olan agarda müəyyən edilmiş bir yerə köçürün.
  • (eynini başqa bir ampisilin lövhəsi ilə edin)
  • Gecədə inkubasiya edin

Ampisillin üzərində böyüməyə davam edən, lakin kanamisin üzərində inkişaf edə bilməyən bütün klonlar (burada, klonlar 2, 5, və 8) insan DNT-sinin bir parçası ilə çevrilmişdir.

İnsan terapiyasında istifadə edilən bəzi rekombinant DNT məhsulları

Bu kimi prosedurlardan istifadə edərək, bir çox insan geni klonlaşdırılıb E. coli və ya mayada. Bu, ilk dəfə olaraq, qeyri-məhdud miqdarda insan zülalını in vitro istehsal etməyə imkan verdi. Mədəni hüceyrələr (E. coli, maya, məməli hüceyrələri) insan geni ilə transformasiya edilmiş insan terapiyası üçün 100-dən çox məhsul istehsal etmək üçün istifadə olunur. Bəzi nümunələr:

  • insulin diabet xəstələri üçün
  • amil VIII hemofiliyadan əziyyət çəkən kişilər üçün A
  • amil IX hemofiliya B üçün
  • insan böyümə hormonu (HGH)
  • eritropoetin (EPO) anemiyanın müalicəsi üçün
  • bir neçə növ interferonlar
  • bir neçə interleykinlər
  • qranulosit-makrofaq koloniyalarını stimullaşdıran amil (GM-CSF) sümük iliyi transplantasiyasından sonra sümük iliyinin stimullaşdırılması üçün
  • qranulosit koloniyalarını stimullaşdıran amil (G-CSF) neytrofil istehsalını stimullaşdırmaq üçün (məsələn, kimyaterapiyadan sonra) və sümük iliyindən qana hematopoetik kök hüceyrələrin səfərbər edilməsi üçün.
  • toxuma plazminogen aktivatoru (TPA) qan laxtalarını həll etmək üçün
  • adenozin deaminaza (ADA) bəzi formalarının müalicəsi üçün ağır birləşmiş immun çatışmazlığı (SCID)
  • paratiroid hormonu
  • çoxlu monoklonal antikorlar
  • hepatit B səth antigeni (HBsAg) hepatit B virusuna qarşı peyvənd etmək
  • C1 inhibitoru (C1INH) irsi anjioödemin müalicəsində istifadə olunur

Rekombinant DNT

Rekombinantní DNA technologie (někdy obráceně texnologiya rekombinantní DNA) postup inženýrství je v genovém, PRI kterém se z buněk izolují jednoduché GENY bir ty se pak zavádějí zpět etmək buněk stejného nebo odlišného druhu organismu .. Rekombinantní DNA texnologiya není Jeden konkrétní postup - jde o společné označení biotexnologických postupů, které takto. Rekombinant DNT, elm, tibb, kənd təsərrüfatı və sənaye üçün dəyərli olan yeni genetik birləşmələr yaratmaq üçün ev sahibi orqanizmə daxil edilən iki müxtəlif növdən DNT molekulları. Bütün genetikanın diqqət mərkəzində gen olduğu üçün laboratoriya genetiklərinin əsas məqsədi genləri təcrid etmək, xarakterizə etmək və manipulyasiya etməkdir. Rekombinant molekulları (Rc-DNT) DNT-ni zəbt edən orqanizmlərdir. Vytvářejí se inzercí cizorodé DNT do vektoru, kterým může být bakterialní plazmid nebo fag

Rekombinant DNT Tərifi, Addımlar, Nümunələr və İxtira

Rekombinant DNT, və ya rDNA, edir DNT ki, birləşərək əmələ gəlir DNT genetik rekombinasiya adlanan proses vasitəsilə müxtəlif mənbələrdən. Çox vaxt qaynaqlar müxtəlif orqanizmlərdən olur. Ümumiyyətlə, DNT müxtəlif orqanizmlərdən eyni kimyəvi ümumi quruluşa malikdir Rekombinant DNT hibrid yaratmaq üçün iki və ya daha çox DNT molekulunun birləşdirilməsi üsuludur. Texnologiya iki növ ferment, məhdudlaşdırıcı endonükleazlar və ligaza sayəsində mümkün olur. Məhdudiyyətli endonükleaza müəyyən DNT ardıcıllığını tanıyır və həmin ardıcıllığın daxilində və ya ona yaxın kəsiklər edir Rekombinant DNT Texnologiyası Genetik olaraq dəyişdirilmiş vektor daxil edildikdə və orqanizmin genomuna inteqrasiya edildikdə, əsasən orqanizmin (ev sahibinin) fenotipini dəyişdirmək üçün istifadə edilən üsul. orqanizm. Beləliklə, əsasən, bu proses maraq doğuran genimizi ehtiva edən xarici DNT strukturunun genomuna daxil edilməsini nəzərdə tutur. texnikalar. Laboratoriyada bakteriyalar rekombinant DNT ilə çevrilə bilər. Genetik rekombinasiya, rekombinant DNT və ya rDNA üzərində keçid kimi tanınan bir prosesdə meioz zamanı baş verir, süni şəkildə qurulmuş iki DNT zəncirinin birləşməsini təsvir etmək üçün istifadə olunan termindir. Genetik elm adamları bunu fərqli insanlar üçün unikal DNT zəncirləri yaratmaq üçün edə bilərlər.

Rekombinant DNT - WikiSkript

Genetika və rekombinant DNT və ya rDNT texnologiyasındakı müasir irəliləyişlər elm adamlarına artıq xəstəlik törətmək potensialı olmayan vaksinlər yaratmağa imkan verib. rDNA peyvəndi texnologiyasına əsaslanan üç müxtəlif növ müasir preparat heyvan və insan peyvəndləri üçün rekombinant DNT və DNT-ni istifadə edir. DNT-molekil və rekombinant DNT-ni məhv etmək üçün istifadə olunur. Et rekombinant DNT-molekyl er altså sammensatt av DNT fra minst to forskjellige Rekombinant DNT Texnologiyası Britannica Ensiklopediyası tərəfindən müxtəlif orqanizmlərin DNT molekullarının bir araya gəlməsi və dəyərli yeni genetik birləşmələr yaratmaq üçün onu ev sahibi orqanizmə daxil etməsi kimi müəyyən edilmişdir. elmə, tibbə, kənd təsərrüfatına və sənayeyə DNT liqazası kovalent olaraq ikisini rekombinant DNT molekuluna bağlayır. Şəkil 11.1.1 rDNT-nin yaradılması. Faydalı olması üçün analiz, ardıcıllıq və s. üçün material təmin etmək üçün rekombinant molekul dəfələrlə təkrarlanmalıdır. Eyni rekombinant molekulun çoxlu eyni nüsxələrinin istehsalına klonlaşdırma deyilir.

Rekombinant DNT Texnologiyası bəşəriyyətin həyat tərzinin yaxşılaşdırılmasında mühüm rol oynayır. Səhiyyə elmində onun rolu çox böyükdür, bizə keyfiyyətli qida dərmanları, hormonlar və s. .aklectures.com/donate.phpVeb saytının video keçidi: http://www.aklectures.com/lecture/plasmids-and-recombinant-dna-technologyFacebook linki:. Rekombinant DNT Rekombinant DNT, bir DNT parçasının götürülməsi və onu başqa bir DNT zəncirinin birləşməsi üçün ümumi addır. Beləliklə, adı rekombinant! Rekombinant DNT-yə bəzən kimera da deyilir

Rekombinant DNT-ni təyin edin. rekombinant DNT sinonimləri, rekombinant DNT tələffüzü, rekombinant DNT tərcüməsi, rekombinant DNT-nin ingilis dili lüğəti tərifi. n. İxtisar. rDNA Bir növdən genlərin başqa bir ev sahibi orqanizmin hüceyrələrinə köçürülməsi və ya birləşdirilməsi yolu ilə hazırlanmış Genetik olaraq hazırlanmış DNT. Rekombinant DNT tərifi belədir - adətən birdən çox orqanizm növünün DNT-sini özündə birləşdirən genetik mühəndis DNT

Genetik mühəndislik və ya rekombinant DNT (rDNT) ilə sinonim olan biotexnologiya praktiki tətbiqlər üçün DNT üzərində elmi tədqiqatdan istifadə edən sənaye prosesidir. rDNT bir formasıdır. . Det är den process som gör att arvsmassan mellan mammans och pappans kromosomer kan blandas så att avkomman får unika kromosomer DNT cloning and recombinant DNT. AP.BIO: IST‑1 (AB), IST‑1.P (LO), IST‑1.P.1 (EK) Google Classroom Facebook Twitter. E-poçt. Biotexnologiya. Genetik mühəndisliyə giriş. Polimeraza zəncirvari reaksiya (PCR) Gel elektroforezi. DNT klonlaşdırılması və rekombinant DNT. Bu, hazırda seçilmiş elementdir

Rekombinant DNT Texnologiyası Nədir? - Fikir C

  • Příklad věty s rekombinantní dna, překlad paměť EMEA0.3 Jedna injekční lahvička prášku obsahuje # milyon IU interferonum alfa-#b produkovaného v E. coli rekombinantní DENA
  • 95°-də
  • Rekombinant DNT vzniká klonováním 1) DNT fragment je vložen do vektoru 2) Vektor s fraqmentləri (rekombinant DNT) və transformatorlar 3) V hostiteli se rekombinantní DNA namnožíí 4) Pokud se 5) DNT rekombinantları. množení vzniká klo

Rekombinant DNT - ümumi baxış ScienceDirect Mövzu

  • Slovo rekombinace má vice významů: . Rekombinace (genetika) - označení pro různé změny v DNA spočívající v jejím rozštípnutí və připojení k jinému řetězci, jíž vznikáí nové vlastbinotick Me - rekombinasiya. keçid-over Mitotická rekombinace - vzácnější Rekombinantní DNA technologie V(D)J rekombinace - náhodná kombinace částí genů pro.
  • Rekombinant DNT üzrə Asilomar Konfransı 1975-ci ilin fevralında Asilomar Dövlət Çimərliyindəki konfrans mərkəzində keçirilən potensial biotəhlükələri və biotexnologiyanın tənzimlənməsini müzakirə etmək üçün Paul Berq tərəfindən təşkil edilmiş təsirli konfrans idi. Təxminən 140 peşəkardan ibarət qrup (əsasən bioloqlar, həm də hüquqşünaslar və həkimlər daxil olmaqla) konfransda könüllü olaraq iştirak etdi.
  • DNT-nin klonlaşdırılması zamanı plazmid adlanan bakteriya DNT-si halqasına yeni bir gen daxil edilir. Animasiyada göstərildiyi kimi, plazmid əvvəlcə məhdudlaşdırıcı fermentlə kəsilir ki, başqa bir orqanizmdən təcrid olunmuş maraq geni dövrəyə daxil edilsin.
  • Rekombinant DNT texnologiyası elm, tibb, kənd təsərrüfatı və sənaye üçün dəyərli olan yeni genetik birləşmələr yaratmaq üçün ev sahibi orqanizmə daxil edilən iki müxtəlif növdən olan DNT molekullarının birləşdirilməsinə aiddir.
  • Rekombinant DNT texnologiyası müxtəlif sahələrdə istifadə edilə bilər. Tələb olunduğu yerdən asılı olaraq, tibb, elm, kənd təsərrüfatı və sənaye ola biləcək tələb olunan sahədə istifadə edilə bilən yeni bir genetik birləşmə yaratmaq üçün iki maraq doğuran DNT birləşdirilir və ev sahibi orqanizmə daxil edilir.
  • Rekombinant DNT Texnologiyası. Rekombinant DNT texnologiyası genetik cəhətdən dəyişdirilmiş vektor vasitəsilə orqanizmin (ev sahibinin) fenotipini dəyişdirir. Bu klonlama vektoru orqanizmin genomuna daxil edilir və inteqrasiya olunur. Beləliklə, əsasən, proses maraq doğuran genimizi ehtiva edən genomda yad bir DNT parçasının daxil edilməsini əhatə edir.
  • Rekombinant DNT (rDNA) texnologiyası insan istifadəsi üçün məhsullar yaratmaq üçün iki fərqli mənbədən olan DNT molekullarının birləşdirilməsi və ev sahibi orqanizmə daxil edilməsi prosesinə aiddir. Bu proses istənilən məhsulu yaratmaq üçün müəyyən bir ardıcıllıqla davam etməli olan bir çox addımları əhatə edir

Rekombinant DNT elmdə çox təsirli bir vasitədir. Onun müxtəlif tətbiqləri var. O, çarpaz növ genetikasında, yəni DNT-nin bir növdən digərinə köçürülməsində, taxıl kimi qida məhsullarının daha keyfiyyətli yaradılmasında, DNT fraqmentinin çoxsaylı nüsxələrinin yaradılmasında, canlılarda arzu olunan əlamətlərin daxil edilməsində və s. istifadə edilə bilər. Rekombinant DNT süni şəkildə yaradılmış DNT-dir. İki və ya daha çox mənbədən olan DNT tək rekombinant molekula daxil edilir. Rekombinant DNT-nin (rDNA) yaradılması: Baxış. Hər iki mənbədən DNT-ni eyni məhdudlaşdırıcı endonükleazla müalicə edin (bu halda BamHI). BamHI hər iki molekulda eyni saytı kəsir 5' GGATCC 3' 3' CCTAGG 5 Rekombinant DNT texnologiyası tərs genetika adlanan bir genetik növü mümkün etdi. Ənənəvi olaraq, genetik tədqiqat mutant fenotiplə başlayır və Mendel keçid analizi ilə tədqiqatçı fenotipi müəyyən bir genə aid edə bilir. Əks genetika tam əks istiqamətdə hərəkət edir

Rekombinant DNT Texnologiyası Çox Seçimli Suallar:-1. Bu məhdudlaşdırıcı fermentlərdən hansı küt ucları əmələ gətirir? A. SaII B. EcoRV C. XhoI D. HindIII. Cavab: B. 2. 17-ci xromosomun RP13 geni zülalı _____ kodlayır. A. qlükozanın daşınmasında iştirak edir B. saç və dırnaqların tərkib hissəsi olan 1. DNT liqaza: DNT liqazı E.coli və Bacteriophage-dən ticari olaraq təcrid olunur və rekombinant DNT texnologiyasında istifadə olunur. DNT liqaz fermenti klonlama vektoru ilə DNT fraqmentlərini birləşdirir. 2. Əks transkriptaza: RT mRNA şablonundan tamamlayıcı zəncir (cDNA) sintez etmək üçün istifadə olunur. RNT-dən asılı DNT polimerləri kimi də tanınır Rekombinant DNT son bir neçə ildə əhəmiyyət qazanır və rekombinant DNT yalnız 21-ci əsrdə daha çox əhəmiyyət kəsb edəcək, çünki genetik xəstəliklər daha çox yayılır və kənd təsərrüfatı sahəsi azalır.. Aşağıda Rekombinant DNT-nin təsir göstərəcəyi bəzi sahələr verilmişdir. Daha yaxşı Bitkilər (quraqlığa və istiliyə davamlılıq) Rekombinant. Rekombinant DNT texnologiyası geni dəyişdirilmiş orqanizmlərə (GMO) gətirib çıxarır. Rekombinant DNT 3 əsas molekulyar alət tələb edir: DNT-nin xüsusi yerlərdə kəsilməsi - əksər hallarda məhdudlaşdırıcı endonükleazlar (məhdudiyyət fermentləri) adlanan fermentlər tərəfindən həyata keçirilir. tədqiqat. Rekombinant DNT adətən maraq doğuran gendən ibarətdir, burada vektora daxil edilmiş donor orqanizmin insulini, virus və ya plazmid kimi başqa bir orqanizmdən öz-özünə təkrarlanan DNT, bakterial DNT-nin kiçik dairəvi parçası.

Rekombinant DNT texnologiyası geni dəyişdirilmiş orqanizmlərə (GMO) gətirib çıxarır. Rekombinant DNT üçün 3 əsas molekulyar alət tələb olunur: DNT-nin xüsusi yerlərdə kəsilməsi - ən çox məhdudlaşdırıcı endonükleazlar (məhdudiyyət fermentləri) adlanan fermentlər tərəfindən həyata keçirilir. Məhdudlaşdırıcı fermentlər tez-tez dupleks DNT-də xüsusi 4, 6 və ya 8-bp palindromik ardıcıllıqda pilləli kəsiklər edir, tək zəncirli üzərində tamamlayıcı əsaslar arasında hidrogen bağı vasitəsilə bir-birinə bağlana bilən xarakterik yapışqan uclar buraxır. Rekombinant insulin yaxşı işlədi və bu, alimlərə ümid verdi ki, DNT texnologiyası tibbi və kommersiya əhəmiyyəti olan maddələrin istehsalı üçün uğurla istifadə edilə bilər. Müvafiq orqanlar tərəfindən şəkərli diabetin müalicəsi üçün rekombinant insulindən istifadə üçün icazə 1982-ci ildə Aleksandr Ovsov tərəfindən rumın dilinə tərcümə edilmiş İnsan insulininin sintezində rekombinant DNT texnologiyası verilmişdir. İnsan insulininin sintezinin təbiəti və məqsədi. Banting və Best 1921-ci ildə insulin hormonunu kəşf etdikdən sonra Rekombinant DNT Texnologiyası Yer üzündəki bütün orqanizmlər ortaq bir əcdaddan təkamül keçirmişdir, buna görə də bütün orqanizmlər DNT-dən irsiyyət molekulu kimi istifadə edirlər.. Kimyəvi səviyyədə DNT, istər mikroskopik bakteriyadan, istərsə də mavi balinadan götürülsə də, eynidir. Nəticədə, müxtəlif orqanizmlərin DNT-si kəsilə və bir-birinə yapışdırıla bilər, [

Əsas Fərq - Genetika Mühəndisliyi və Rekombinant DNT Texnologiyası Orqanizmlərin genetik materialları gen mühəndisliyi üsulları və ya rekombinant DNT texnologiyasından istifadə etməklə dəyişdirilə bilər. Rekombinant DNT texnologiyası maraq doğuran DNT və vektor DNT-ni daşıyan rekombinant DNT molekulu yaratmaq üçün istifadə edilən prosesdir, gen mühəndisliyi isə prosesləri təsvir etmək üçün istifadə olunan geniş termindir. Rekombinant DNT molekulu tərəfindən istehsal olunur. a) iki DNT fraqmentinin birləşməsi. b) iki və ya daha çox DNT fraqmentinin birləşməsi. c) həm a, həm də b. d) müxtəlif orqanizmlərdən yaranan iki və ya daha çox DNT fraqmentinin birləşməsi. 2. İki fərqli mənbədən DNT seqmentlərinin birləşməsindən əmələ gələn gen adlanır Rekombinant DNT və biotexnologiya diaqnostik testlərin yeni dövrünü açdı və bir çox genetik xəstəliklərin aşkarlanmasını mümkün etdi.. DNT analizinin əsas vasitəsi DNT probu adlanan DNT parçasıdır. DNT zond DNT-nin nisbətən kiçik, tək zəncirli fraqmentidir və a-da DNT-nin tamamlayıcı hissəsini tanıyır və ona bağlanır. Rekombinant DNT. Rekombinant DNT (rDNA) texnologiyası iki mənbədən DNT fraqmentlərinin birləşməsini nəzərdə tutur. İki fərqli mənbədən və ya növdən olan DNT molekulları ev sahibi orqanizmə daxil edilir. Nəticədə ortaya çıxan yeni genetik birləşmə elm, tibb, kənd təsərrüfatı və sənaye üçün dəyərlidir. Yaranan DNT rekombinant DNT adlanır

Rekombinant dezoksiribonuklein turşusu orqanizmin yerli DNT-sinə süni şəkildə daxil edilmiş DNT seqmentidir..Biologiya elmlərində rekombinant DNT üçün müxtəlif istifadələr var. Botanikada digər bitki və heyvanların genləri daha sərt bitkilər yaratmaq üçün tez-tez mövcud bitkilərin DNT-sinə daxil edilir. Bu, DNT-ni zəncir boyunca xüsusi ardıcıllıqla kəsən bir məhdudlaşdırıcı ferment tərəfindən genomik DNT-dən kəsilir. Bu parçalar daha sonra analiz edilir və zülal yaratmaq üçün lazım olan DNT çıxarılır və təmizlənir. Çünki insulinin tərkibində disulfid bağları ilə bağlanmış iki polipeptid zənciri var.

DNT Interactive: Manipulyasiya, rekombinant DNT-nin yaradılmasını, onun mübahisəsini və tədqiqatçıların biotexnologiya sənayesini işə salmaq üçün necə əməkdaşlıq etdiyini araşdırın Əlavə məlumatı Rekombinant DNT (rDNA) ilə İşin İcmalında əldə etmək olar. rDNA işinizi qeydiyyata almaq və ya işinizin əhatə dairəsi dəyişdikdə qeydiyyatınızı yeniləmək üçün Rekombinant DNT və ya Sintetik Nuklein Turşu Molekullarının Qeydiyyatını tamamlayın. Metod ətrafdakı DNT-dən istədiyiniz seqmentin kəsilməsini və milyonlarla dəfə kopyalamasını nəzərdə tutur. Mikrob hüceyrələrinin hazırlana biləcəyi rekombinant DNT texnologiyasının uğuru. Sonra rekombinant ifadə vektoru E-yə çevrilir.coli. Sonra rekombinant E. coli hGH istehsal etməyə başlayır. Rekombinant E. coli hGH əldə etmək üçün fermentasiya texnologiyası ilə mədəniyyət və kütləvi istehsaldan təcrid olunur. Rekombinant insan böyümə hormonunun istifadəsi (hGH

Rekombinant DNT Texnologiyası - Alətlər, Proses və Tətbiq

  1. Rekombinant Sual üzrə Çox Seçimli Suallar və Cavablar 1: DNT ilə örtülmüş mikromərmilər vasitəsilə hüceyrələrə DNT daxil edən avadanlıq lazer DNT zond gen silahı aşılayan iynə kimi tanınır Cavab : 3 Sual 2 : Yeni genetik məlumat əldə etmiş heyvan xarici DNT-nin alınmasından, kimera kimi bir transgen heyvan bir vektor və bir ferment hesab olunur.
  2. Rekombinant DNT müxtəlif DNT dəstinə bir zəncir və ya daha çox DNT daxil etməklə süni şəkildə yaradılmış bir DNT növüdür. Mövcud bir canlıya digər orqanizmlərdən DNT-nin süni bitləri və ya bitləri əlavə edərək tamamilə yeni orqanizmlər yaratmaq üçün genetik modifikasiyada istifadə olunur.
  3. Rekombinant DNT müxtəlif mənbələrdən genetik materialı bir araya gətirərək laboratoriyalarda formalaşır. Molekulyar biologiyada arzu olunan genlər bakterial plazmidlərlə rekombinasiya olunur və bakteriyalarda ifadə edilir. Bu proses molekulyar klonlaşdırma kimi tanınır. Bu texnologiyadan istifadə etməklə geniş miqyasda faydalı sənaye məhsulları istehsal olunur
  4. Rekombinant DNT texnologiyası ilk dəfə 1960-1970-ci illərdə ortaya çıxsa da, rekombinasiyanın əsas prinsipi illər əvvəl kəşf edilmişdi. Həqiqətən, 1928-ci ildə Frederik Qriffit, an.

Rekombinant DNT texnologiyası və genetik modifikasiya nadir hallarda medianın diqqət mərkəzindən kənarda qalır, istər geni dəyişdirilmiş məhsullar, geni dəyişdirilmiş ağcaqanadlar, insanlarda genomun redaktə edilməsindən istifadə və ya DNT məhkəmə-tibbi texnologiyasının cinayət dünyasında oynadığı rol. Rekombinant texnologiya artıq istehsalda müntəzəm istifadə olunur. Rekombinant DNT, elm adamlarının adi bir bakteriyanın genetik materialına insan genini daxil etməyi mümkün edən texnologiyadır.. Bu rekombinant mikroorqanizm artıq insan geni tərəfindən kodlaşdırılmış zülal istehsal edə bilər. Alimlər laboratoriyada insan insulin genini qururlar. Rekombinant DNT texnologiyasında istifadə olunan ümumi vektor: cavab seçimləri. plazmid. E. coli. bitki hüceyrəsi. CHO hüceyrələri. Teqlər: Sual 17 . SORĞU. 60 saniyə. S. Gen mühəndisliyi üçün ilk addım: cavab seçimləri. maraq genini təcrid edin. DNT ipini kəsin. DNT fraqmentlərini yenidən birləşdirin. Zülallar istehsal edin. Teqlər: Sual 18 1982-ci ildə Qida və Dərman İdarəsi Genentech-in xüsusi dəyişdirilmiş bakteriyalarından hazırlanmış Humulin, Eli Lily-nin rekombinant insulinini təsdiqlədi. Bu, rekombinant DNT texnologiyası ilə istehsal edilən ilk dərman və istehlakçılara təqdim edilən ilk genetik mühəndislik məhsulları arasında idi.

Rekombinant DNT tərifi. Rekombinant DNT laboratoriyada qurulmuş DNT formasıdır. Seçilmiş DNT hissələrini bir orqanizmdən digərinə köçürməklə əmələ gəlir. Fotoşəkildə göstərilən flakonda genetik olaraq klonlanmış ilk terapevtik zülallardan biri olan insan insulini var. Dərman diabetin müalicəsində istifadə olunur. Heyvan modellərindən istifadə edərək gen funksiyasını sınamağın qeyri-mümkün olduğu hallarda, genlər əvvəlcə bakteriya və ya hüceyrə mədəniyyətlərində ifadə oluna bilər. Eynilə, gen mutasiyalarının fenotipləri və dərmanların və digər agentlərin effektivliyi ola bilər. isim. genetik tamamlayıcısı rekombinasiya nəticəsində yaranan hüceyrə və ya orqanizm. rekombinant DNT yaratmaq üçün müxtəlif mənbələrdən DNT seqmentləri birləşdirildikdə yaranan genetik material

. İstənilən DNT seqmentini daşıyan hüceyrələrin klonu təcrid edildikdən sonra bu DNT-dən qeyri-məhdud miqdarda hazırlana bilər. Bundan əlavə, DNT. Rekombinant DNT (rDNT) molekulları bir çox mənbədən olan genetik materialı bir araya gətirmək üçün laboratoriya üsullarından (molekulyar klonlaşdırma) istifadə edilməsi nəticəsində yaranan və bioloji orqanizmlərdə əks halda tapılmayan ardıcıllıqlar yaradan DNT ardıcıllığıdır Rekombinant zülallar genlərin yeni birləşməsidir. DNT əmələ gətirir. Rekombinant DNT texnologiyası kütləvi miqdarda vəhşi tipli və dəyişdirilmiş insan və məməli zülallarının istehsalına imkan verir. Rekombinant zülallar klonlanmış DNT ardıcıllığından hazırlanır və adətən funksiyası məlum olan fermenti və ya zülalı kodlayır. Bu üsul yumurtada yetişdirilən vaksin virusunu tələb etmir və istehsal prosesində toyuq yumurtasından istifadə etmir. Hal-hazırda rekombinant qrip peyvəndi və hüceyrə mədəniyyətinə əsaslanan qrip peyvəndi ABŞ-da istifadə üçün lisenziyalı yeganə yumurtasız qrip peyvəndidir.

Rekombinant DNT texnologiyası ilə istehsal edilən insan insulini bu texnologiyadan əldə edilən ilk kommersiya səhiyyə məhsuludur. Bu məhsul üzərində iş irimiqyaslı rekombinant DNT işi və ya rekombinant DNT məhsullarının kommersiya inkişafı üçün federal qaydalar mövcud olmamışdan əvvəl başlamışdır. Addımlar Rekombinant DNT tərifi, bir və ya bir neçə seqmentin və ya genin təbii və ya laboratoriya manipulyasiyası ilə fərqli molekuldan və ya eyni molekulun başqa bir hissəsindən daxil edildiyi, nəticədə yeni genetik birləşmə ilə nəticələnən DNT. Daha çox bax Rekombinant molekullar yaratmaq üçün DNT-ni in vitro birləşdirin Rekombinant DNT texnologiyası mikrobioloji seçim və skrininq prosedurlarının gücündən istifadə edərək, tədqiqatçılara orqanizmdəki genetik materialın milyonda 1 hissəsini təşkil edən geni təcrid etməyə imkan verir. maraqlandıran orqanizm kiçik parçalara bölünür və sonra ayrı-ayrı hüceyrələrə yerləşdirilir. Rekombinant DNT texnologiyaları haqqında bilikləriniz bir çox müxtəlif orqanizmlər üçün bütün genomların DNT ardıcıllığını ehtiva edən geniş məlumat bazası olan GenBank ®-ın əhəmiyyətini başa düşməyinizlə və bunun nə üçün faydalı olduğunu başa düşmənizlə yekunlaşacaq.

ilkin (bioloji olaraq) mövcud olmayan bir ardıcıllığın (DNT-nin tam və ya qismən zənciri) kimyəvi, fermentativ və ya bioloji vasitələrlə zəncirə daxil edilməsi nəticəsində yaranan rekombinant DNT dəyişdirilmiş DNT. Farlex Partner Medical Dictionary © Farlex 201 Keçən əsrdə rekombinant DNT texnologiyası sadəcə olaraq hədəf genlərin ifadələrini idarə etməklə canlı orqanizmlərdə arzu olunan xüsusiyyətlərin təkmilləşdirilə biləcəyi bir təsəvvür idi. Bununla belə, son dövrdə bu sahə insan həyatında irəliləyiş gətirməkdə unikal təsirlər nümayiş etdirdi. Bu texnologiya sayəsində sağlamlıq problemləri və pəhriz məqsədləri üçün vacib zülallar tələb olunur. O vaxtdan bəri dəfələrlə yenidən işlənmiş və yenilənmişdir, lakin hələ də rekombinant dezoksiribonuklein turşusu (rDNT) təcrübələrini təhlükəyə görə təsnif etmək və müvafiq saxlama səviyyələrini tövsiyə etmək üçün standartdır.

Bio 102 Təcrübə Problemləri Rekombinant DNT və Biotexnoloq Rekombinant DNT genetik materialın insan orqanizminə birbaşa yeridilməsini nəzərdə tutan vaksinlərdə istifadə olunur. Bu genetik material plazmid və ya xarici DNT halqası şəklindədir.. . Rekombinant NA-nın gücləndirilməsi Böyük miqdarda rekombinant NA molekulunu bərpa etmək üçün onu gücləndirmək lazımdır. Bu, rekombinant NA-nı bakterial host ştammına çevirməklə həyata keçirilir. (Hüceyrələrə CaCl 2 àNA əlavə edilir à Hüceyrələr 42 C-də istilik şokuna məruz qalır àNA bir qədər naməlum mexanizmlə hüceyrəyə daxil olur. Rekombinant DNT bir orqanizmin DNT-sinin digərinin DNT-si ilə birləşməsini əhatə edən müasir texnologiyadır. Bu Çox vaxt insan DNT-sinin başqa bir orqanizmin DNT-sinə daxil edilməsini nəzərdə tutur.Gen mühəndisliyi ilə yaradılmış bu orqanizmlər yetişdirildikdə, insan zülalı əmələ gətirirlər Rekombinant DNT (rDNT) molekulları bir araya gətirmək üçün genetik rekombinasiyanın laboratoriya üsulları (məsələn, molekulyar klonlaşdırma) ilə yaradılmış DNT molekullarıdır. bir çox mənbədən əldə edilən genetik material, başqa cür genomda tapılmayan ardıcıllıqlar yaradır.Rekombinant DNT mümkündür, çünki bütün orqanizmlərin DNT molekulları eyni kimyəvi quruluşa malikdir.

Rekombinant DNT - Tərif və Nümunələr Biologiya Lüğəti

Rekombinant-DNT heeft tal van toepassingen in de wetenschap and de geneeskunde. İnsulin istehsalında rekombinant DNT-ni ötürmə qabiliyyətinə malikdir. Voorafgaand aan de komst van deze technologie, insuline grotendeels afkomstig van dieren. İnsulin E. coli və əsas rekombinant DNT-yə ümumi baxış üçün qapı orqanizmlərinin geproduceerd sözlərinin effektivliyini təmin edir. klonlaşdırmanın ümumi təsviri. Şəkil 14-1, səh. 425 Şəkil 14-6, səh. 430 vektor məqsədi ilə rekombinant molekulların yayılmasının formalaşması: fərdi DNT ardıcıllığını gücləndirin. rekombinant DNT-nin yaradılmasında addımlar. DNT-ni təcrid edin. Şəkil 14-2. maraqlandıran bəzi orqanizmlərdən ultrasentrifuqadan istifadə etməklə. kəsilmiş DNT. DNT fraqmentləri Rekombinant DNT texnologiyasının Həyatda 10 Əsas Tətbiqini yaradır 12 Noyabr 2020 7 Oktyabr 2012-ci il, Ranga.nr Bu, arzu olunan genin maraq doğuran orqanizmdən təcrid edilməsi və onun seçdiyi orqanizmə ötürülməsi prosesidir. böyük miqdarda arzu olunan məhsul

Video: Rekombinant DNT nədir? - Tibbi Yenidir

1975-ci ildə Kaliforniyadakı Asilomar Konfrans Mərkəzində keçirilən Rekombinant DNT Molekulları üzrə Beynəlxalq Konfrans uzun bir kölgə saldı. DNT tədqiqatı ilə bağlı təlimatların hazırlanması üçün alimlərin görüşü o vaxt əsası qoyan biotexnologiyanın təhlükəsiz və etik istifadəsinə dair forumlar üçün şablon olaraq qalır Rekombinant DNT (rDNT) maraq doğuran DNT ardıcıllıqlarını kəsib yapışdırmaq üçün fermentlərdən istifadə edən texnologiyadır. Yenidən birləşdirilmiş DNT ardıcıllıqları DNT-ni kopyalana və ya ifadə edilə bilən uyğun bir ana hüceyrəyə daşıyan vektorlar adlanan nəqliyyat vasitələrinə yerləşdirilə bilər.

Peyvənd İnkişafı Elmi üçün Rekombinant DNT Texnologiyası

  • DNT sübutlarına əsaslanan sınaqlar və geni dəyişdirilmiş qarğıdalı və digər orqanizmlərin istifadəsi ilə bağlı mübahisələr
  • Xəstəlik genlərinin və onların təsirlənməmiş bir şəxsdə funksiyasının öyrənilməsi rekombinant DNT və klonlaşdırma üsullarının inkişafı ilə mümkün olmuşdur. Gen klonlama termini bir sıra əhatə edir..
  • Rekombinant DNT vaksinlər vasitəsilə genetik materialın birbaşa bədənə yeridilməsi mənbəyidir. Genetik material plazmid və ya vektor şəklində qablaşdırılır və xarici antigendən götürülür və peyvəndlərlə hədəflənir. Rekombinant olduqda DNT əzələlər vasitəsilə bədənə enjekte edilir, hüceyrələr həmin yad geni götürür və istehsal etməyə başlayır.
  • Rekombinant DNT texnologiyası İnsanlar laboratoriya daxilində DNT ilə manipulyasiya etmək və mikroorqanizmləri təkmilləşdirmək üçün DNT texnologiyasındakı nailiyyətlərdən istifadə edə bilərlər. Rekombinant DNT texnologiyası zamanı DNT fraqmenti ola bilər..
  • Rekombinant DNT: Genlər və Genomlar - Qısa Kurs, 3-cü Nəşr, 3-cü Nəşr. Rekombinant DNT: Genlər və Genomlar - Qısa Kurs, 3-cü Nəşr. 3-cü nəşr. James D. Watson (Müəllif), Richard M. Meyers (Müəllif), Amy A. Caudy (Müəllif), Jan A. Witkowski (Müəllif) və daha 1 nəfər. 5 ulduzdan 4,1 22 reytinq. ISBN-13: 978-0716728665. ISBN-10: 0716728664
  • Rekombinant DNT texnologiyası müəyyən bir orqanizmin DNT-ni istifadə edəcək və sonra həmin DNT-ni bakterial DNT-yə birləşdirəcək, sonra isə həmin DNT bölünüb çoxalacaq. Bakterial DNT plazmid adlanır. Plazmidlər bir bakteriya daxilində əlavə DNT molekullarının bu kiçik dairəvi bölgələridir

Rekombinant DNT kitab. Oxucular üçün dünyanın ən böyük icmasından 3 rəy oxuyun. r.-də rekombitant DNT texnikası və tədqiqatlardakı irəliləyişlərə ümumi baxış. Müxtəlif c-DNT fraqmentlərinin toplusu c-DNT kitabxanasıdır. Gen kitabxanaları xüsusi texnikalar vasitəsilə saxlanılır. Rekombinant DNT Texnologiyasının Tətbiqləri: Rekombinant DNT texnikası aşağıdakı kimi istifadə edilə bilər: 1. Hüceyrə diferensiasiyası və qocalmasının bioloji prosesində molekulyar hadisələri aydınlaşdırmaq üçün istifadə edilə bilər. 2

Rekombinant DNT - Mağaza medisinske leksiko

Övladlığa götürülənlər və bioloji qohumlarını axtaran ailə üzvləri 30 aprel 2018-ci il tarixinədək DNAQuest.org saytında pulsuz MyHeritage DNT dəsti üçün müraciət edə bilərlər. İştirakçılar seçiləcək və onların pulsuz DNT dəstləri 2018-ci ilin may ayının sonuna kimi onlara göndəriləcək. Nəticələr 2018-ci ilin iyul ayından etibarən rekombinant DNT prosedurları indi insanda irsi xəstəliklərin, neoplaziya ilə əlaqəli somatik mutasiyaların əsasını təşkil edən molekulyar qüsurların müəyyən edilməsi probleminə tətbiq edilmişdir. Tətbiqlərlə yanaşı, rekombinant DNT texnologiyasının çatışmazlıqları da vardır ki, bunlar da aşağıdakılardır: 1. Antibiotiklərə davamlı genlər transformasiya olunmuş hüceyrələri müəyyən etmək üçün marker gen kimi istifadə olunur. Bu, insan patogenlərinin antibiotiklərə davamlılığına səbəb oldu. 2. Böcəklərə davamlı bitkilər həşəratlar üçün zərərli olan müəyyən kimyəvi maddələr istehsal edir

1972: İlk Rekombinant DNT. Restriksiya fermentlərindən istifadə edərək rekombinant DNT molekullarının ilk istehsalı 1970-ci illərin əvvəllərində baş verdi. Rekombinant DNT texnologiyası müxtəlif növlərdən olan DNT-nin birləşməsini və sonra hibrid DNT-nin ev sahibi hüceyrəyə, tez-tez Kniha byla v knihovně bakteriyasına daxil edilməsini nəzərdə tutur. Rekombinant DNT

Rekombinant DNT Texnologiyası - ümumi baxış ScienceDirect

Rekombinant DNT və gen klonlamasını təqdim edir. Bu konsepsiya üçün bütün məzmunu daha yaxşı təşkil etmək üçün köçürdük.Lütfən, əlfəcinlərinizi müvafiq olaraq yeniləyin Rekombinant DNT (rDNA) molekulları bir çox mənbədən olan genetik materialı bir araya gətirmək, başqa cür genomda tapılmayan ardıcıllıqlar yaratmaq üçün genetik rekombinasiyanın laboratoriya üsulları (məsələn, molekulyar klonlaşdırma) ilə yaradılmış DNT molekullarıdır.

11.1: Rekombinant DNT və Gen Klonlaşdırılması - Biologiya LibreText

Rekombinant DNT texnologiyası vasitəsilə istədiyimiz genləri yerləşdirin və sonra bir bitkini dəyişdirin və yeni xüsusiyyətə malik bir bitki əldə edin. O zaman bu T-DNT həm istədiyimiz geni, həm də seçilə bilən marker geni ehtiva etməlidir. Kataloqumuzu tədqiq edin Pulsuz qoşulun və fərdiləşdirilmiş tövsiyələr, yeniləmələr və təkliflər əldə edin Rekombinant DNT iki və ya daha çox növün DNT-sini birləşdirərək istehsal edilən süni DNT növüdür. Rekombinant DNT-nin yaradılması prosesi molekulyar klonlama kimi tanınır. Molekulyar klonlaşdırmanın əsas proseduru DNT-nin təcrid edilməsi, DNT-nin kəsilməsi, DNT-nin birləşdirilməsi və rekombinant DNT-nin gücləndirilməsini əhatə edir. Cohen və Boyer plazmid vasitəsilə E.coli bakteriyasına yaratdıqları rekombinant DNT molekulunu daxil etdilər və bununla da transformasiya kimi tanınan yad DNT ardıcıllığının udulmasına və ifadə olunmasına səbəb oldular. coli. Vahid tərifi Taq DNT Polimerazının bir vahidi 74°C-də 30 dəqiqə ərzində 10 nmol dezoksiribonukleotidin DNT-yə daxil edilməsi üçün tələb olunan fermentin miqdarıdır. Üstün PCR performansı üçün biz DreamTaq DNA Polimerase Všechny məlumat və ya məhsul Kniha Rekombinant DNT Controversy, porovnání cen z internetových obchodů, hodnocení and recenze Recombinant DNT Controversy tövsiyə edirik.


Rekombinant insan fosfolipid hidroperoksid glutatyon peroksidazın ifadəsi və xarakteristikası

Fosfolipid hidroperoksid glutatyon peroksidaza (PHGPx və ya GPx4 EC1.11.1.12) fosfolipid və xolesterol hidroperoksidlərini birbaşa azalda bilən selenoperoksidazadır. Yetkin sitoplazmatik GPx4 molekulyar çəkisi 19,5 kDa olan monomer zülaldır. Bu tədqiqatda insan GPx4 (hGPx4) geni insan hepatoma hüceyrə xəttinin tamamlayıcı DNT kitabxanasından gücləndirilmişdir. Eukaryotik ifadə plazmidi pSelExpress1-lider-GPx4 quruldu və HEK293T eukaryotik hüceyrələrinə transfeksiya edildi. hGPx4-ün ifadəsi Western blotlama ilə aşkar edildi və hədəf zülal immobilizasiya edilmiş metal yaxınlıq xromatoqrafiyası ilə təmizləndi. Təmizlənmiş zülalın aktivliyi və kinetikasının nəticələri göstərir ki, əldə edilən zülal “pinq-ponq” mexanizmini izləyir və bu, yerli sitozolik qlutatyon peroksidaza (GPx1 EC1.11.1.9) ilə oxşardır. Bu, hGPx4-ün HEK293T hüceyrələrindən ifadə və təmizlənə biləcəyi ilk dəfədir və bu iş onun in vitro və in vivo funksional öyrənilməsi üçün hGPx4-ün mühüm resursunu təmin edəcək.

Açar sözlər: eukaryotik ifadə glutatyon peroksidaza fəaliyyəti fosfolipid hidroperoksid glutatyon peroksidaz selenosistein selenoprotein ifadəsi.


Hissə 1: Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizinin Əsas Prinsipləri.

1 Gen Klonlaması və DNT Analizi Niyə Vacibdir?

1.1 Genetikanın erkən inkişafı.

1.2 Gen klonlamasının yaranması və polimeraza zəncirvari reaksiya.

1.5 Nə üçün gen klonlaması və PCR bu qədər vacibdir?

1.6 Bu kitab vasitəsilə yolunuzu necə tapmaq olar.

Gen Klonlaması üçün 2 Vektor: Plazmidlər və Bakteriofaqlar.

3 Canlı Hüceyrələrdən DNT-nin Təmizlənməsi.

3.1 Ümumi hüceyrə DNT-nin hazırlanması.

3.2 Plazmid DNT-nin hazırlanması.

3.3 Bakteriofaq DNT-nin hazırlanması.

4 Təmizlənmiş DNT-nin manipulyasiyası.

4.1 DNT manipulyasiya fermentlərinin diapazonu.

4.2 DNT – məhdudlaşdırıcı endonükleazları kəsmək üçün fermentlər.

4.3 DNT molekullarını birləşdirən ligasiya.

5 DNT-nin Canlı Hüceyrələrə daxil edilməsi.

5.1 Transformasiya – DNT-nin bakteriya hüceyrələri tərəfindən mənimsənilməsi.

5.2 Rekombinantların identifikasiyası.

5.3 Bakteriya hüceyrələrinə faj DNT-nin yeridilməsi.

5.4 Rekombinant faqların identifikasiyası.

5.5 DNT-nin bakterial olmayan hüceyrələrə daxil edilməsi.

6 Klonlama Vektoru E. coli.

6.1 Vektorların klonlanması E. coli plazmidlər.

6.2 M13 bakteriofaq əsasında vektorların klonlanması.

6.3 l bakteriofaq əsasında vektorların klonlanması.

6.4 λ və digər yüksək tutumlu vektorlar genomik kitabxanaların qurulmasına imkan verir.

6.5 Digər bakteriyalar üçün vektorlar.

Eukariotlar üçün 7 Klonlama Vektoru.

7.1 Maya və digər göbələklər üçün vektorlar.

7.2 Ali bitkilər üçün vektorların klonlanması.

7.3 Heyvanlar üçün vektorların klonlaşdırılması.

8 Xüsusi bir genin klonunu necə əldə etmək olar.

8.1 Seçim problemi.

8.3 Gen kitabxanasından klonun identifikasiyası.

8.4 Klonların identifikasiyası üsulları.

9 Polimeraza Zəncirvari Reaksiya.

9.1 Konturda polimeraza zəncirvari reaksiya.

9.3 PCR-dən sonra: PCR məhsullarının öyrənilməsi.

9.4 Real vaxtda PZR başlanğıc materialın miqdarını kəmiyyətcə hesablamağa imkan verir.

Hissə 2: Tədqiqatda Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizinin Tətbiqləri.

10 Genlərin və Genomların Sıralanması.

10.1 DNT ardıcıllığının metodologiyası.

10.2 Bir genomu necə ardıcıllaşdırmaq olar.

11 Gen ifadəsinin və funksiyasının öyrənilməsi.

11.1 Bir genin RNT transkriptinin öyrənilməsi.

11.2 Gen ifadəsinin tənzimlənməsinin öyrənilməsi.

11.3 Klonlanmış genin tərcümə məhsulunun müəyyən edilməsi və öyrənilməsi.

12.2 Transkriptom və proteomun tədqiqi.

3-cü hissə:  Biotexnologiyada Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizinin Tətbiqləri.

13 Klonlaşdırılmış genlərdən zülal istehsalı.

13.1 Xarici genlərin ifadəsi üçün xüsusi vektorlar E. coli.

13.2 Rekombinant zülalların istehsalı ilə bağlı ümumi problemlər E. coli.

13.3 Eukaryotik hüceyrələr tərəfindən rekombinant zülalın istehsalı.

14 Tibbdə Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizi.

14.1 Rekombinant əczaçılıq vasitələrinin istehsalı.

14.2 İnsan xəstəliklərinə cavabdeh olan genlərin müəyyən edilməsi.

15 Kənd Təsərrüfatında Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizi.

15.1 Bitki gen mühəndisliyinə gen əlavəsi yanaşması.

15.3 Geni dəyişdirilmiş bitkilərlə bağlı problemlər.

16 Məhkəmə Elmləri və Arxeologiyada Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizi.


Saccharomyces cerevisiae RNT polimeraza III transkripsiya faktoru TFIIIB-nin B" komponentini kodlayan genin TFC5-in klonlaşdırılması, ifadəsi və funksiyası.

Saccharomyces cerevisiae RNT polimeraza III transkripsiya faktoru (TF)IIIB-nin B" komponentini kodlayan unikal və əsas gen olan TFC5 klonlaşdırılıb. O, 594 amin turşusu zülalını (67,688 Da) kodlaşdırır. Escherichia coli tərəfindən istehsal olunan B" TFIIIC-yə yönəldilmiş, həmçinin TATA qutusundan asılı, DNT bağlanması və transkripsiya üçün tam funksional olan tamamilə rekombinant TFIIIB-nin yenidən qurulması üçün istifadə olunur. Tamamilə rekombinant TFIIIB-nin B", 67-kDa Brf və TATA qutusunu bağlayan zülaldan və təbii B ilə yenidən qurulmuş TFIIIB-dən ibarət DNaz I izləri fərqlənmir. 39 N-terminal və 107 C-terminal amin turşusu olmayan B"-nin kəsilmiş forması da transkripsiya üçün funksionaldır.


Gen Klonlaması və DNT Analizi 8-ci nəşr

Əgər hər hansı səbəbdən eTextbook'unuz sizi qane etmirsə, 14 gün ərzində kitabı ləğv edə bilərsiniz və pulunuz tam olaraq geri qaytarılacaq. Aldatma yoxdur! - hər eTextbook üçün bunu yalnız bir dəfə edə bilərsiniz.

Bu kitabla məşhur əşyalar

Chegg Study

Siyahı qiyməti: 56,00 dollar idi Əmanət*: 3,58 dollar

Səbətə əlavə et Səbətə əlavə et Yükləmə tamamlandı

Standart Göndərmə Seçimləri

Qaytarma Siyasəti

Daha çox məlumat:

Bu gün Gen Klonlaması və DNT Analizi 8-ci nəşri (978-1119640677) icarəyə götürün və ya T. A. Braunun digər dərslikləri üçün saytımızda axtarış edin. Hər dərslik 21 günlük "Hansı Səbəb" zəmanəti ilə gəlir. Wiley-Blackwell tərəfindən nəşr edilmişdir.

Dünyada bu mühüm və maraqlı tədqiqat sahəsinə standart giriş mətni kimi tanınan Gen Klonlaması və DNT Analizi: Giriş, 8-ci Nəşr əvvəlki nəşrlərin yaratdığı mükəmməllik ənənəsini qoruyub saxlayır. Hərtərəfli və nüfuzlu kitab, genin klonlaşdırılmasının başa düşülməsi üçün vacib olan bütün mövzuları əlçatan bir şəkildə araşdırır. Asanlıqla izlənilən və istifadəçi dostu tərtibat bütün həcmdə tam rəngdə təqdim olunur və bu, onu mənimsəməyi asanlaşdırır. içərisində olan aydın və əlçatan material.  Gen Klonlaması və DNT Analizi: Giriş, 8-ci Nəşr CRISPR/Cas kimi gen redaktə strategiyalarının yenilənmiş və genişləndirilmiş əhatə dairəsini, DNT ardıcıllığı və genom tədqiqatlarına dair yenidən yazılmış fəsilləri, həmçinin yeni materialı ehtiva edir real vaxtda PCR və insan xəstəlik mutasiyalarının yazılması.  Ətraflı məzmunu canlandırmaq üçün 250-dən çox tam rəngli illüstrasiyalar daxil edilmişdir. Kitab həmçinin aşağıdakı mövzuları əhatə edir: Tədqiqatçılar və sənaye mütəxəssisləri tərəfindən genom ardıcıllıqlarını toplamaq üçün istifadə olunan strategiyalar Next genomların və transkriptomların tədqiqində nəsil ardıcıllığı üsulları və onların tətbiqlərinin təsviri Gen redaktə strategiyalarının istifadəsi və tətbiqi daxildir Neandertallar və Homo Sapiens arasında qarışıqlıq  Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizi: Giriş, 8-ci Nəşr genetika və genomika, molekulyar biologiya, biokimya, immunologiya və tətbiqi biologiya kimi siniflərdə oxuyan tələbələr üçün əvəzolunmaz giriş mətnidir. gen klonlaşdırılması və ya DNT analizinin əsasları haqqında anlayışını təkmilləşdirmək istəyən hər bir mütəxəssis.ÂÂ

Səkkizinci nəşrə ön söz xv

I Hissə Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizinin Əsas Prinsipləri 1

1 Gen Klonlaması və DNT Analizi Nə üçün Vacibdir 3

Gen klonlaması üçün 2 vektor: plazmidlər və bakteriofaqlar 15

3 Canlı Hüceyrələrdən DNT-nin Təmizlənməsi 29

4 Təmizlənmiş DNT ilə manipulyasiya 53

5 DNT-nin Canlı Hüceyrələrə daxil edilməsi 83

E. coli 101 üçün 6 Klonlama Vektoru

Eukariotlar üçün 7 Klonlama Vektoru 121

8 Xüsusi bir genin klonunu necə əldə etmək olar 145

9 Polimeraza Zəncirvari Reaksiya 169

II Hissə Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizinin Tədqiqatda Tətbiqləri 187

10 Genlərin və Genomların Sıralanması 189

11 Gen ifadəsinin və funksiyasının öyrənilməsi 217

13 Transkriptomların və Proteomların öyrənilməsi 259

III Hissə Biotexnologiyada Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizinin Tətbiqləri 275

14 Klonlaşdırılmış genlərdən zülal istehsalı 277

15 Tibbdə Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizi 301

16 Kənd Təsərrüfatında Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizi 327

17 Məhkəmə Elmləri və Arxeologiyada Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizi 355

Səkkizinci nəşrə ön söz xv

I Hissə Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizinin Əsas Prinsipləri 1

1 Gen Klonlaması və DNT Analizi Nə üçün Vacibdir 3

1.1 Genetikanın erkən inkişafı 4

1.2 Gen klonlamasının yaranması və polimeraza zəncirvari reaksiya 4

1.3 Gen klonlaması nədir? 5

1.5 Nə üçün gen klonlaşdırılması və PCR bu qədər vacibdir 8

1.5.1 Klonlaşdırma yolu ilə genin təmiz nümunəsinin əldə edilməsi 8

1.5.2 PCR gen 10-u təmizləmək üçün də istifadə edilə bilər

1.6 Bu kitab vasitəsilə yolunuzu necə tapmaq olar 11

Gen klonlaması üçün 2 vektor: plazmidlər və bakteriofaqlar 15

2.1.1 Ölçü və surət nömrəsi 17

2.1.2 Konjuqasiya və uyğunluq 18

2.1.3 Plazmid təsnifatı 19

2.1.4 Bakteriyalardan başqa orqanizmlərdəki plazmidlər 19

2.2.1 Faq infeksiyası dövrü 20

2.2.3 Viruslar digər orqanizmlər üçün klonlama vektorları kimi 26

3 Canlı Hüceyrələrdən DNT-nin Təmizlənməsi 29

3.1 Ümumi hüceyrə DNT-nin hazırlanması 30

3.1.1 Bakteriya kulturasının yetişdirilməsi və yığılması 30

3.1.2 Hüceyrə ekstraktının hazırlanması 31

3.1.3 Hüceyrə ekstraktından DNT-nin təmizlənməsi 33

3.1.4 DNT nümunələrinin konsentrasiyası 37

3.1.5 DNT konsentrasiyasının ölçülməsi 38

3.1.6 Ümumi hüceyrə DNT-sinin hazırlanması üçün digər üsullar 39

3.2 Plazmid DNT-nin hazırlanması 40

3.2.1 41 ölçü əsasında ayırma

3.2.2 Konformasiya əsasında ayırma 42

3.2.3 Plazmidin gücləndirilməsi 44

3.3 Bakteriofaq DNT-nin hazırlanması 46

3.3.1 Yüksək λ titri əldə etmək üçün kulturaların böyüməsi 47

3.3.2 Lizojen olmayan λ faqların hazırlanması 47

3.3.3 Yoluxmuş kulturadan faqların toplanması 49

3.3.4 DNT-nin λ faq hissəciklərindən təmizlənməsi 49

3.3.5 M13 DNT-nin təmizlənməsi bir neçə problemə səbəb olur 49

4 Təmizlənmiş DNT ilə manipulyasiya 53

4.1 DNT manipulyasiya edən fermentlərin diapazonu 55

4.1.4 DNT-ni dəyişdirən fermentlər 58

4.2 DNT-ni kəsmək üçün fermentlər - məhdudlaşdırıcı endonükleazlar 59

4.2.1 Restriksiya endonükleazlarının kəşfi və funksiyası 60

4.2.2 Tip II məhdudlaşdırıcı endonükleazlar xüsusi nukleotid ardıcıllığında DNT-ni kəsir 61

4.2.3 Küt uclar və yapışqan uclar 62

4.2.4 DNT molekulunda tanınma ardıcıllığının tezliyi 63

4.2.5 Laboratoriyada məhdudlaşdırma həzminin yerinə yetirilməsi 64

4.2.6 Restriksiya endonükleazının parçalanmasının nəticəsinin təhlili 66

4.2.7 DNT molekullarının ölçülərinin qiymətləndirilməsi 68

4.2.8 DNT molekulunda müxtəlif məhdudlaşdırma yerlərinin yerlərinin xəritələşdirilməsi 69

4.2.9 Böyük molekulların ayrılması üçün xüsusi gel elektroforez üsulları 70

4.3 Bağlama - DNT molekullarının birləşdirilməsi 72

4.3.1 DNT liqazanın təsir üsulu 72

4.3.2 Yapışqan uclar bağlamanın səmərəliliyini artırır 74

4.3.3 Küt uçlu molekula yapışqan ucların qoyulması 74

4.3.4 DNT topoizomeraz 79 ilə küt son bağlama

5 DNT-nin Canlı Hüceyrələrə daxil edilməsi 83

5.1 Transformasiya - DNT-nin bakteriya hüceyrələri tərəfindən mənimsənilməsi 85

5.1.1 Bakteriyaların heç də bütün növləri DNT-nin qəbulunda eyni dərəcədə effektiv deyil 85

5.1.2 Səlahiyyətli E. coli hüceyrələrinin hazırlanması 86

5.1.3 Transformasiya edilmiş hüceyrələr üçün seçim 86

5.2 Rekombinantların identifikasiyası 88

5.2.1 pBR322 ilə rekombinant seçim - antibiotik müqavimət geninin insertasiya inaktivasiyası 89

5.2.2 İnsertasiya inaktivasiyası həmişə antibiotiklərə qarşı müqavimət göstərmir 90

5.3 Bakteriya hüceyrələrinə faj DNT-nin yeridilməsi 92

5.3.2 λ klonlama vektorlarının in vitro qablaşdırılması 93

5.3.3 Faq infeksiyası agar mühitində lövhələr kimi görünür 93

5.3.4 Rekombinant faqların identifikasiyası 95

5.4 Bakterial olmayan hüceyrələrə DNT-nin yeridilməsi 97

5.4.1 Ayrı-ayrı hüceyrələrin transformasiyası 97

5.4.2 Bütöv orqanizmlərin çevrilməsi 99

E. coli 101 üçün 6 Klonlama Vektoru

6.1 E. coli plazmidləri əsasında vektorların klonlanması 102

6.1.1 Plazmid klonlama vektorlarının nomenklaturası 102

6.1.2 pBR322 102-nin faydalı xassələri

6.1.3 pBR322 103-ün şəcərəsi

6.1.4 Daha mürəkkəb E. coli plazmid klonlama vektorları 104

6.2 λ bakteriofaq 108 əsasında vektorların klonlanması

6.2.1 Təbii seçmə müəyyən məhdudiyyət sahələri olmayan dəyişdirilmiş λ təcrid etmək üçün istifadə edilmişdir 108

6.2.2 λ genomunun seqmentləri həyat qabiliyyətini pozmadan silinə bilər 108

6.2.3 Daxiletmə və dəyişdirmə vektorları 110

6.2.4 λ daxiletmə və ya dəyişdirmə vektorları ilə klonlaşdırma təcrübələri 112

6.2.5 Uzun DNT fraqmentləri kosmid 113 istifadə edərək klonlana bilər

6.2.6 λ və digər yüksək tutumlu vektorlar genomik kitabxanaların qurulmasına imkan verir 114

6.3 Tək zəncirli DNT 115-in sintezi üçün vektorların klonlanması

6.3.1 M13 bakteriofaq 115 əsasında vektorlar

6.3.2 Hibrid plazmid-M13 vektorları 117

6.4 Digər bakteriyalar üçün vektorlar 118

Eukariotlar üçün 7 Klonlama Vektoru 121

7.1 Maya və digər göbələklər üçün vektorlar 121

7.1.1 2 μm plazmid 122 üçün seçilə bilən markerlər

7.1.2 2 μm plazmid - maya epizomal plazmidlərinə əsaslanan vektorlar 122

7.1.3 A YEp maya xromosom DNT 124-ə daxil ola bilər

7.1.4 Maya klonlama vektorunun digər növləri 124

7.1.5 Süni xromosomlar mayada uzun DNT parçalarını klonlaşdırmaq üçün istifadə edilə bilər 126

7.1.6 Digər mayalar və göbələklər üçün vektorlar 129

7.2 Ali bitkilər üçün vektorların klonlanması 129

7.2.1 Agrobacterium tumefaciens - təbiətin ən kiçik genetik mühəndisi 130

7.2.2 Bitkilərdə genlərin birbaşa gen transferi ilə klonlaşdırılması 135

7.2.3 Bitki viruslarından klonlama vektorları kimi istifadə etmək cəhdləri 137

7.3 Heyvanlar üçün vektorların klonlanması 138

7.3.1 Həşəratlar üçün vektorların klonlanması 139

7.3.2 Məməlilərdə klonlaşdırma 141

8 Xüsusi bir genin klonunu necə əldə etmək olar 145

8.1 Seçim problemi 146

8.1.1 İstədiyiniz klonu əldə etmək üçün iki əsas strategiya var 146

8.2.1 Markerin xilas edilməsi birbaşa seçimin əhatəsini genişləndirir 149

8.2.2 Markerin xilas edilməsinin əhatə dairəsi və məhdudiyyətləri 150

8.3 Gen kitabxanasından klonun identifikasiyası 150

8.4 Klonların identifikasiyası üsulları 153

8.4.1 Tamamlayıcı nuklein turşusu zəncirləri bir-birinə hibridləşir 154

8.4.2 Koloniya və lövhənin hibridləşməsinin araşdırılması 154

8.4.3 Hibridləşmə zondlamasının praktiki istifadəsinə dair nümunələr 157

8.4.4 Klonlanmış genin tərcümə məhsulunun aşkarlanmasına əsaslanan identifikasiya üsulları 164

9 Polimeraza Zəncirvari Reaksiya 169

9.2 PCR daha ətraflı 172

9.2.1 PCR 172 üçün oliqonukleotid primerlərinin layihələndirilməsi

9.2.2 İstifadə etmək üçün düzgün temperaturların işlənməsi 174

9.3 PCR-dən sonra: PCR məhsullarının öyrənilməsi 176

9.3.1 PCR məhsullarının gel elektroforezi 177

9.3.2 PCR məhsullarının klonlaşdırılması 178

9.4.1 Real vaxtda PCR təcrübəsinin aparılması 180

9.4.2 Real vaxtlı PCR başlanğıc materialın miqdarını kəmiyyətcə hesablamağa imkan verir 182

9.4.3 Ərimə əyrisinin təhlili nöqtə mutasiyalarını müəyyən etməyə imkan verir 184

II Hissə Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizinin Tədqiqatda Tətbiqləri 187

10 Genlərin və Genomların Sıralanması 189

10.1 Zəncirin son DNT ardıcıllığı 190

10.1.1 Kontur 190-da zəncirin xitam ardıcıllığı

10.1.2 Bütün DNT polimerazaları 192-ni ardıcıllaşdırmaq üçün istifadə edilə bilməz

10.1.3 Taq polimeraza 193 ilə zəncirin sonlanması ardıcıllığı

10.1.4 Zəncirin xitam ardıcıllığının məhdudiyyətləri 195

10.2 Növbəti nəsil ardıcıllığı 196

10.2.1 Illumina ardıcıllığı təcrübəsi üçün kitabxananın hazırlanması 197

10.2.2 Illumina təcrübəsinin ardıcıllıq mərhələsi 199

10.2.3 İon yarımkeçiricilərin ardıcıllığı 201

10.2.4 Üçüncü nəsil ardıcıllığı 201

10.2.5 DNT polimerazı olmayan növbəti nəsil ardıcıllığı 202

10.2.6 Xüsusi gen dəstlərində növbəti nəsil ardıcıllığının istiqamətləndirilməsi 203

10.3 Bir genomun ardıcıllığı 205

10.3.1 Prokaryotik genomların ov tüfəngi ilə ardıcıllığı 206

10.3.2 Eukaryotik genomların ardıcıllığı 209

11 Gen ifadəsinin və funksiyasının öyrənilməsi 217

11.1 Bir genin RNT transkriptinin öyrənilməsi 218

11.1.1 RNT nümunəsində transkriptin mövcudluğunun aşkar edilməsi 219

11.1.2 Gen və RNT 220 arasında hibridləşmə yolu ilə transkript xəritələşdirilməsi

11.1.3 Primer genişləndirilməsi ilə transkript təhlili 222

11.1.4 PCR 223 ilə transkript analizi

11.2 Gen ifadəsinin tənzimlənməsinin öyrənilməsi 224

11.2.1 DNT molekulunda zülal bağlama yerlərinin müəyyən edilməsi 225

11.2.2 Silinmə təhlili ilə nəzarət ardıcıllığının müəyyən edilməsi 230

11.3 Klonlanmış genin tərcümə məhsulunun müəyyən edilməsi və öyrənilməsi 232

11.3.1 HRT və HART klonlanmış genin 233 tərcümə məhsulunu müəyyən edə bilər

11.3.2 Zülalların in vitro mutagenez yolu ilə təhlili 234

12.1 Genlərin genom ardıcıllığında yerləşdirilməsi 244

12.1.1 Genom ardıcıllığını skan etməklə zülal kodlayan genlərin yerləşdirilməsi 244

12.1.2 Gen yeri homoloji axtarış 247 ilə kömək edir

12.1.3 Kodlaşdırılmayan RNT transkriptləri üçün genlərin təyini 249

12.1.4 Genom ardıcıllığında tənzimləyici zülalların bağlanma yerlərinin müəyyən edilməsi 250

12.2 Naməlum genin funksiyasının təyini 251

12.2.1 Kompüter analizi ilə gen funksiyalarının təyin edilməsi 251

12.2.2 Eksperimental analizlə gen funksiyasının təyin edilməsi 252

13 Transkriptomların və Proteomların öyrənilməsi 259

13.1 Transkriptomların öyrənilməsi 259

13.1.1 Transkriptomların mikroarray və ya çip analizi ilə öyrənilməsi 260

13.1.2 Transkriptomların RNT ardıcıllığı ilə öyrənilməsi 261

13.2 Proteomların öyrənilməsi 265

13.2.1 Zülalların profilləşdirilməsi 266

13.2.2 Zülal-zülal qarşılıqlı təsirinin öyrənilməsi 270

III Hissə Biotexnologiyada Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizinin Tətbiqləri 275

14 Klonlaşdırılmış genlərdən zülal istehsalı 277

14.1 E. coli 280-də yad genlərin ifadəsi üçün xüsusi vektorlar

14.1.1 Promotor 281 ifadə vektorunun kritik komponentidir

14.1.2 Kassetlər və gen birləşmələri 285

14.2 E. coli-də rekombinant zülalın istehsalı ilə bağlı ümumi problemlər 287

14.2.1 Xarici genin ardıcıllığından yaranan problemlər 288

14.2.2 E. coli-nin yaratdığı problemlər 289

14.3 Eukaryotik hüceyrələr tərəfindən rekombinant zülalın istehsalı 290

14.3.1 Maya və filamentli göbələklərdən rekombinant zülal 291

14.3.2 Rekombinant zülal istehsalı üçün heyvan hüceyrələrindən istifadə 293

14.3.3 Pharming - canlı heyvanlardan və bitkilərdən alınan rekombinant zülal 295

15 Tibbdə Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizi 301

15.1 Rekombinant əczaçılıq vasitələrinin istehsalı 301

15.1.1 Rekombinant insulin 302

15.1.2 E. coli-də insan böyümə hormonlarının sintezi 304

15.1.3 Rekombinant amil VIII 305

15.1.4 Digər rekombinant insan zülallarının sintezi 308

15.1.5 Rekombinant vaksinlər 308

15.2 İnsan xəstəliklərinə cavabdeh olan genlərin identifikasiyası 314

15.2.1 Genetik xəstəlik üçün geni necə müəyyən etmək olar 315

15.2.2 Xəstəlik mutasiyalarının genetik tipləşdirilməsi 320

15.3.1 İrsi xəstəliklər üçün gen terapiyası 321

15.3.2 Gen terapiyası və xərçəng 323

15.3.3 Gen terapiyasının qaldırdığı etik məsələlər 324

16 Kənd Təsərrüfatında Gen Klonlaşdırılması və DNT Analizi 327

16.1 Bitki gen mühəndisliyinə gen əlavəsi yanaşması 328

16.1.1 Öz insektisidlərini hazırlayan bitkilər 328

16.1.2 Herbisidlərə davamlı bitkilər 334

16.1.3 Gen əlavə etməklə bitkilərin qida keyfiyyətinin yaxşılaşdırılması 337

16.1.4 Digər gen əlavə layihələri 338

16.2.1 Antisens RNT və pomidorda meyvə yetişməsinin mühəndisliyi 340

16.2.2 Bitki gen mühəndisliyində antisens RNT-nin istifadəsinə dair digər nümunələr 342


Geni dəyişdirilmiş heyvanlar

Yeni biotexnologiyalardan istifadə etməklə mikrob xətti və qeyri-germ xətti transgen heyvanlar istehsal edilə bilər. Ektopik DNT transferi (qeyri-germ xətti transgenik) transgen heyvanları əldə etmək üçün DNT konstruksiyalarının və ya transgen kök hüceyrələrinin dölün və ya canlı heyvanların qeyri-reproduktiv toxumalarına birbaşa tətbiqinə aiddir, lakin onların transgen xüsusiyyətləri gametlər vasitəsilə gələcək nəsillərə ötürülmür. [10]. Germ-line transgenesis bu məqalənin diqqət mərkəzində olacaq (Şəkil. 4). Əslində, transgen heyvanların istehsalı biokimyəvi reaksiyalara, hüceyrə biologiyasına, hüceyrə mədəniyyətinə, embrionun köçürülməsinə və alıcı analarda dölün böyüməsinə və inkişafına əsaslanır.

Döllənmiş yumurtanın pronukleusuna rekombinant DNT-nin yeridilməsi (Metod I) və ya rekombinant DNT-ni ehtiva edən transformasiya edilmiş embrion kök hüceyrələrinin blastosistə yeridilməsi (Metod II) vasitəsilə transgen heyvanların istehsalı. Heyvandarlıq növləri üçün istifadə edilən ilk və ən çox yayılmış üsulda yumurta hüceyrəsi mayalandıqdan qısa müddət sonra cərrahi yolla toplanır və rekombinant DNT (məsələn, maraq doğuran plazmid DNT) daha sonra çox incə iynə vasitəsilə mayalanmış yumurtanın pronukleusuna mikroinyeksiya edilir. . Transformasiya edilmiş yumurta hüceyrəsi in vitroda blastosistə çevrilir və embrion müddətli inkişaf üçün surroqat anaya köçürülür. İkinci üsulda, onların genomuna maraq genini ifadə edən qurulmuş embrion kök hüceyrələri (preimplantasiya embrionundan hazırlanır) rekombinant DNT ilə transfeksiya edilir. Stabil transformasiya olunmuş ES hüceyrələri seçilir və sonra resipient blastosistin daxili hüceyrə kütləsinə yeridilir. Qısa bir mədəniyyət dövründən sonra, genomunda rekombinant geni olan embrion müddətli inkişaf üçün surroqat anaya köçürülür. Hər iki üsulda surroqat analar transgen nəsillər əmələ gətirir, lakin blastosistin mənşəyi fərqlidir.

Transgen heyvan, genomuna qəsdən daxil edilmiş yad geni daşıyan heyvandır. Xarici gen rDNA texnologiyasından istifadə edərək in vitro şəraitdə qurulur. Plazmid DNT yalnız maraq doğuran geni deyil, həm də digər DNT ardıcıllığını, o cümlədən promotor seqmenti (genin ekspressiyasını təyin etmək və geni müəyyən bir toxumaya yönəltmək üçün), gücləndirici ardıcıllıqları (gen funksiyasını gücləndirmək üçün) və marker geni (genişləmə üçün) ehtiva edir. DNT-nin heyvanın genomuna daxil olmasını aşkar edin). Daha sonra DNT konstruksiyası müəyyən edilmiş iki üsuldan biri ilə heyvanın rüşeym xətti genomuna daxil edilir: (a) rDNT-nin (həmçinin DNT konstruksiya kimi tanınır) mayalanmış yumurtanın pronukleusuna yeridilməsi (Metod I) və (b). ) rDNT-ni ehtiva edən transformasiya edilmiş embrion kök hüceyrələrinin blastokistə yeridilməsi (Metod II). Əsl embrion kök hüceyrələrinin müəyyən edilmiş donuz hüceyrə xəttinin olmaması səbəbindən, gen mühəndisliyi donuzları yaratmaq üçün yalnız I Metoddan (somatik hüceyrələrdə və SCNT-də genetik modifikasiyalar) istifadə edilmişdir [38]. Bundan əlavə, transpozisiya edilə bilən elementlər (transpozonlar) [39] və retrovirus vektorları [40] transgen heyvanları yaratmaq və manipulyasiya etmək üçün istifadə edilə bilər.

Birinci və ən çox yayılmış üsulda yumurta hüceyrəsi mayalanmadan qısa müddət sonra cərrahi yolla toplanır və rDNT (məsələn, maraq doğuran plazmid DNT) daha sonra çox incə iynə vasitəsilə mayalanmış yumurtanın pronukleusuna mikroinyeksiya edilir [24]. Alternativ olaraq, yumurta hüceyrəsi maraq doğuran plazmid DNT ilə transfeksiya edilmiş spermanın intrasitoplazmik inyeksiyasını alır [41]. Transformasiya edilmiş yumurta hüceyrəsi in vitro şəraitdə blastosistə çevrilir və blastosist daha sonra müddətə inkişaf üçün surroqat dişiyə köçürülür. Nəsillərin bəziləri (transgenik) öz genomuna inteqrasiya olunmuş rDNT-ni ehtiva edir. Yad gen həm mikrob hüceyrələrində, həm də somatik hüceyrələrdə olduğu üçün yeni nəsillərə irsi ötürülə bilər [24]. Qeyd edək ki, klonlaşdırma və gen köçürmə üsullarının birləşdirildiyi halda, donor somatik hüceyrələr elektroporasiya və ya viral vektorlar vasitəsilə genetik olaraq mühəndisləşdirilə bilər, ardınca SCNT vasitəsilə transgenik nəsillər istehsal oluna bilər.

İkinci üsulda, gen heyvanlara embrion kök (ES) hüceyrələri vasitəsilə daxil edilir. Preimplantasiya embrionundan əldə edilən ES hüceyrələri həm özünü yeniləyə, həm də erkən embriona köçürüldükdən sonra genin hədəflənməsinə və rüşeym xəttinə töhfə verməyə imkan verən pluripotensial xüsusiyyətləri saxlaya bilir [19]. Qısaca olaraq, ES hüceyrələri hüceyrə xətlərinin qurulması üçün mədəniyyət üçün erkən embriondan təcrid olunur, ardınca hüceyrə transfeksiyası vasitəsilə onların genomuna rDNT (məsələn, maraq doğuran plazmid DNT) daxil edilir. Stabil transformasiya olunmuş ES hüceyrələri seçilir və sonra blastosistin erkən embriona çevrilməsində iştirak etmək üçün alıcı blastosistin daxili hüceyrə kütləsinə yeridilir. Birinci üsula gəlincə, genomunda rekombinant geni olan embrion müddətli inkişaf üçün surroqat qadına köçürülür. Heterozigot transgen nəsillər cütləşərək homozigot transgen ştamını əmələ gətirirlər.

Üstünlüklər və tətbiqlər

Transgen heyvan texnologiyası arzu olunan xüsusiyyəti (məsələn, arıq toxumaların yüksək nisbətdə qazanması və yem səmərəliliyi) və yeni qabiliyyəti (məsələn, qidalanma tətbiqləri ilə zülal sintezi) yaratmaq üçün heyvanın mikrob xəttinə yad genin daxil edilməsinə imkan verir. ) mal-qaranın damazlıq xəttində. Nəticə donuzlar, siçanlar, siçovullar, mal-qara, dovşanlar, qoyunlar, toyuqlar və balıqlar daxil olmaqla transgen heyvanların uğurlu istehsalıdır [10]. Bu, aşağıdakıları artırmaqla heyvandarlıq istehsalının səmərəliliyini artırmaq üçün ənənəvi heyvandarlıq üsullarını tamamlaya bilər: (a) pəhriz qidalarının həzmini, udulmasını və istifadəsini, (b) metabolik və yoluxucu xəstəliklərə qarşı müqaviməti və (c) yaşayış mühitinə uyğunlaşmanı [18] , 42, 43]. Bundan əlavə, transgen donuzlar [məsələn, α-1,3-qalaktosiltransferaza lokusu (GGTA1) gen-hədəflənmiş fibroblastlardan istifadə etməklə nüvə ötürülməsi yolu ilə istehsal edilən nokaut donuzları] biotibbdə ksenotransplantasiya üçün orqanlar təmin edə bilər [44].

Transgen heyvanlar qidalanma baxımından vacib olan yağ turşuları [45] və amin turşuları, müalicəvi zülallar [25, 26, 31], qidalanma baxımından əhəmiyyətli zülallar [46] və qidalanma əleyhinə amilləri [47] aradan qaldırmaq üçün fermentlər istehsal edə bilər. Sonuncu yanaşma təsərrüfatlarda heyvanların sayını, eləcə də azot və fosforun ətraf mühitin çirklənməsini azaltmaq üçün qida maddələrindən istifadənin səmərəliliyini artıra bilər. Transgen heyvanlar istehsal edir: (a) mastit törədən bakteriyalara qarşı bakteriostatik xüsusiyyətlərə malik lizozimlər [48], (b) geniş spektrli antimikrobiyal fəaliyyətə malik insan və mal-qara laktoferrin zülalları [46] və (c) peyvəndlər (məsələn, effektiv malyariya peyvəndləri) süddə [49].

Prinsip sübutu olaraq, insan böyümə hormonunu ifadə edən transgen donuzlar Hammer və başqaları tərəfindən 33 il əvvəl yaradılmışdır. [24]. Bir neçə il sonra, bədən yağının və plazma xolesterinin səviyyəsini azaldaraq, böyümə sürətini və yem səmərəliliyini artırmaq üçün iribuynuzlu böyümə hormonunu və ya böyümə hormonunu ifraz edən faktoru həddindən artıq ifadə edən transgen donuzlar yaradıldı [50, 51]. Bununla belə, bu faydalı xüsusiyyətlər reproduktiv fəaliyyətin azalması, xəstəliklərin başlanğıcı (məsələn, artrit, mədə xorası, dermatit və böyrək xəstəliyi) və vaxtından əvvəl ölüm [50] daxil olmaqla mənfi təsirlərlə kompensasiya edilmişdir. Heyvanlarda transgenezin bu arzuolunmaz təsirləri: (a) embrionların kulturasiyası üçün şərtlərin (məsələn, mühitdə amin turşuları, qlükoza, minerallar və vitaminlər kimi qida maddələrinin tərkibi), (b) tənzimləyicilərin tam başa düşülməməsi səbəbindən baş verir. normal ifadə nümunələri üçün cavabdeh olan elementlər, (c) xarici DNT inteqrasiyası yeri və (d) spesifik gen məhsullarının fizioloji funksiyaları. Transgenik heyvanların iqtisadi və etik istehsalına imkan vermək üçün bu tədqiqat sahələrinə müraciət etmək üçün çoxlu araşdırmalara zəmanət verilir.

Heyvanların transgenezinin perspektivli nəticələrindən biri əsas çoxlu doymamış yağ turşularını sintez edə bilən donuzların istehsalıdır. Məsələn, Saeki et al. [52] donuzların ağ yağ toxumasına bitki geni ∆ 12 yağ turşusu desaturazını təqdim etmişdir. Bu ferment olein turşusunu (C18:1, ω9) C12-də desaturasiya edir və donuzlarda qida baxımından vacib olan çoxlu doymamış yağ turşusu olan linoleik turşusu (C18:2, ω6) əmələ gətirir [4]. Linoleik turşu araxidon turşusunun (C20:4, ω6) sintezi üçün bir xəbərçidir, bu da donuzlarda qidalanma baxımından vacib çoxlu doymamış yağ turşusudur. Bundan əlavə, linoleik turşu insan və donuzların ürək-damar sağlamlığı üçün faydalıdır. a ifadə edən transgen donuzlar da var idi C. elegans linoleik turşunu ω3 poli doymamış yağ turşusuna çevirə bilən yağ turşusu desaturazası üçün gen [53]. Yabanı tipli həmkarları ilə müqayisədə transgen donuzlarda dörd ω3 poli doymamış yağ turşusunun daha çox konsentrasiyası var: α-linolenik turşu (C18:3, ω3), eikosapentaenoik turşu (C20:5, ω3), dokosapentaenoik turşu, C22: ) və dokosaheksaenoik turşu (C22:6, ω3). Bu tapıntılar olduqca əhəmiyyətlidir, çünki transgen donuzlar ω6 və ω3 poli doymamış yağ turşularını sintez edə bildikdə, pəhrizlərdə bitki mənşəli yağların (məsələn, soya yağı, günəbaxan yağı və yerfıstığı yağı) və balıq yağının istifadəsi azaldıla və ya bəlkə də aradan qaldırıla bilər. donuz istehsalı xərclərini azaltmaq.

Müasir biotexnologiyanın digər perspektivli nəticəsi tüpürcək vəzində mikrob fitazını ifadə edən transgen donuzların istehsalıdır. İlk dəfə tüpürcəkdə mikrob fitazını buraxmaq üçün transgen Yorkshire donuzları (Cassie xətti) yaradıldı [54]. Bu donuz xətti yem fitatını həzm etmək qabiliyyətinə malik idi. Məsələn, əlavə fosfor (P) olmadan tipik kommersiya yemləri ilə qidalandıqda, transgen qabanlar və zərlər böyüyür və əlavə P ilə oxşar pəhrizlərlə bəslənən adi, yaşa uyğun olan analoqlara oxşar nisbətdə yemdən istifadə edirlər. Bundan əlavə, transgen kurqanlar Əlavə P olmadan aşağı P pəhrizi süddən kəsmə, böyümə və bitirmə mərhələlərində əlavə P olmadan oxşar pəhrizlərlə qidalanan adi Yorkshire kurqanlarına nisbətən müvafiq olaraq 25-40%, 77-91% və 27-56% daha çox P saxlamışdır. , Zhang et al. [46] genlərin bakteriya və göbələklərdən təcrid edilməsinə əsaslanaraq tüpürcək vəzilərində həm fitaz, həm də karbohidraza (ksilanaz və iki növ β-qlükanaza) ifadə edən transgen donuzlar istehsal etmişdir. Transgen donuz ağızda fitatları və nişasta olmayan polisaxaridləri hidroliz etməyə başlaya bilər və eyni qida ilə qidalanan qeyri-transgen donuzlarla müqayisədə 24% daha az azot və tullantılarda 44% daha az istehsal edə bilər. Bu tədqiqatlar arasında kəmiyyət fərqləri transgenlərin ifadə səviyyələrində və qida maddələrinin (Ca, P və zülal daxil olmaqla) tərkibindəki fərqlərlə bağlı ola bilər [54,55,56]. Potensial olaraq, qida baxımından vacib amin turşularının sintezi üçün bitki və ya mikrob genlərini ifadə edən donuzlar, P və ya kristal amin turşuları ilə pəhriz əlavələrinə ehtiyac olmadan aşağı P və aşağı proteinli pəhrizlərin qidalanmasına icazə verə bilər. Bu amin turşularından biri treonindir [57], donuz balalarının böyüməsinə nisbətən bitki mənşəli yemlərdə aşağıdır [58].

Mənfi cəhətləri

Heyvanların transgenezinin orijinal üsulları (pronuklear inyeksiya və virusların inteqrasiyası) çox aşağı effektivliyə malik olmaqla yanaşı, genlərin susdurulması, gen ifadəsinin zəif tənzimlənməsi və genlərin təsadüfi inteqrasiyası nəticəsində böyük dəyişkənlik ilə nəticələnirdi [19]. Transgen heyvan texnologiyasının digər böyük çatışmazlığı mal-qara növlərində, o cümlədən donuzlarda prenatal və süddən əvvəl ölüm hallarının yüksək olmasıdır. Bu, genlərin ev sahibi genomuna təsadüfi inteqrasiyası nəticəsində ola bilər ki, bu da insertasiyalı mutagenezlə nəticələnir. Məsələn, Zhang et al. [47] bildirmişdir ki, 4008 rekonstruksiya edilmiş embrion 16 alıcı soyuna köçürüldükdən sonra yalnız 33 diri donuz balaları doğulmuşdur, embrion inkişafının müddətli səmərəliliyi < 1% olmuşdur. 33 diri doğulmuş donuz balalarından 25-i transgen üçün müsbət olub, 20 donuz balasında isə transgen ifadə kasetinə toxunulmamış olub. Təəssüf ki, yalnız 9 transgen donuz süddən kəsilməyə qədər sağ qaldı. Həddindən artıq yüksək xərclərlə birlikdə bu problemlər transgen donuzlardan istehsal kənd təsərrüfatında istifadə edilməzdən əvvəl aradan qaldırılmalıdır. Hazırda transgen heyvandarlıq tədqiqatları qida maddələrindən istifadə [52,53,54,55,56], xəstəliklərə qarşı müqavimət [59,60,61,62,63,64] və α olmadan orqanların ksenotransplantasiyası kimi biotibbi tətbiqlərə yönəlmişdir. Hiperkəskin rədd cavabından məsul olan -1,3-qalaktosiltransferaza geni [18, 19, 65, 66].

Transgen heyvanların istehsalı üçün II üsul heyvandarlıq üçün uğurlu deyil, çünki genetik modifikasiyalara tab gətirə bilən və hələ də mikrob xəttinə töhfə verən ES və ya induksiya edilmiş pluripotent kök (iPS) hüceyrələri haqqında məlumat yoxdur [19]. Bu, donuz modellərinin və ya bəlkə də bütün mal-qaranın kritik çatışmazlığıdır. Somatik hüceyrələrin genetik modifikasiyası, ardınca SCNT, genomu redaktə sisteminin inkişaf etməkdə olan embrionlara birbaşa yeridilməsinə qədər, sahəyə xüsusi dəyişiklikləri daşıyan, genetik olaraq hazırlanmış donuzlar yaratmaq üçün yeganə seçim idi [18, 63,64,65,66].


Rekombinant Fasciola gigantica 14-3-3 epsilon zülalı (rFg14-3-3e) keçi periferik qan mononükleer hüceyrələrinin müxtəlif funksiyalarını modullaşdırır.

Fon: Fasciola gigantica 14-3-3 zülalının molekulyar quruluşu xarakterizə edilmişdir. Bununla belə, bu zülalın parazit patogenezində iştirakı qeyri-müəyyən olaraq qalır və onun fitri immun hüceyrələrin funksiyalarına təsiri məlum deyil. Biz rekombinant F. gigantica 14-3-3 epsilon zülalının (rFg14-3-3e) klonlaşdırılması və ifadəsi və onun keçi periferik qan mononükleer hüceyrələrinin (PBMCs) spesifik funksiyalarına təsirinin sınaqdan keçirilməsi haqqında məlumat veririk.

Metodlar: rFg14-3-3e zülalı Pichia pastorisdə ifadə edildi. rFg14-3-3e zülalının anti-F-yə reaktivliyini yoxlamaq üçün Western blot və immunofluoressensiya analizindən (IFA) istifadə edilmişdir. gigantica və anti-rFg14-3-3e antikorları. Təmizlənmiş rFg14-3-3e zülalının sitokin ifrazı, yayılması, miqrasiya, azot oksidi (NO) istehsalı, faqositoz və apoptotik imkanlar daxil olmaqla keçi PBMC-lərinin xüsusi funksiyalarına stimullaşdırıcı təsirlərini araşdırmaq üçün müxtəlif analizlərdən istifadə edilmişdir. rFg14-3-3e-nin potensial zülal interaktorları Intact, String, BioPlex və BioGrid verilənlər bazası sorğusu ilə müəyyən edilmişdir. Müəyyən edilmiş qarşılıqlı əlaqənin hər birinin Ümumi Enerji təhlili aparılmışdır. Gen Ontologiyası (GO) zənginləşdirmə təhlili Funcassociate 3.0 istifadə edərək aparılmışdır.

Nəticələr: Ardıcıllıq təhlili rFg14-3-3e zülalının Fasciola hepatica-dan olan 14-3-3 zülalına 100% eynilik göstərdiyini ortaya qoydu. Western blot analizi göstərdi ki, rFg14-3-3e zülalı eksperimental olaraq F. gigantica ilə yoluxmuş keçilərin seraları tərəfindən tanınır və siçovullara qarşı anti-rFg14-3-3e anticisimlərindən istifadə edərək immunofluoressensiya ilə boyanma rFg14-3-3e zülalının səthə spesifik bağlanmasını nümayiş etdirdi. keçi PBMCs. rFg14-3-3e zülalı keçi PBMC-lərini aşağı səviyyəli IL-4 və interferon qamma (IFN-γ) ilə uyğun gələn interleykin-10 (IL-10) və transformasiya edən böyümə faktoru beta (TGF-β) istehsal etmək üçün stimullaşdırdı. Həmçinin, bu rekombinant protein NO və hüceyrə apoptozunun sərbəst buraxılmasını təşviq etdi və keçi PBMC-lərinin yayılmasını və miqrasiyasını maneə törətdi və monosit faqositozunu basdırdı. Homoloji modelləşdirmə rFg14-3-3e və insan 14-3-3 protein YWHAE arasında 65% eynilik aşkar etdi. Qarşılıqlı təsir göstərən zülalların GO zənginləşdirilməsi təhlili eksperimental tapıntıları dəstəkləyən apoptoz, zülal bağlaması, hərəkət, hippo siqnalı və leykosit və limfosit diferensasiyası ilə bağlı terminləri müəyyən etdi.

Nəticələr: Bizim məlumatlarımız göstərir ki, rFg14-3-3e zülalı in vitro keçi PBMC-lərinin müxtəlif hüceyrə və immunoloji funksiyalarına təsir göstərə bilər və F. gigantica patogenezində vasitəçilikdə iştirak edə bilər. F. gigantica-nın fitri immun hüceyrələri tərəfindən tanınmasında iştirak etdiyinə görə, rFg14-3-3e zülalının diaqnostika və terapevtik müdaxilələrin inkişafı üçün tətbiqləri ola bilər.

Açar sözlər: 14-3-3 epsilon protein izoformu Fasciola gigantica Keçi Homologiyasının modelləşdirilməsi Periferik qanın mononükleer hüceyrələri.

Maraqların toqquşması bəyanatı

Etikanın təsdiqi

Bütün protokollar Jiangsu Əyalətinin Elm və Texnologiya Agentliyi tərəfindən nəzərdən keçirilmiş və təsdiq edilmişdir (Təsdiq nömrəsi: SYXK (SU) 2010–0005).


1 Genlərdən Genomlara 1

1.2 Əsas molekulyar biologiya 4

1.2.4 Nuklein turşularının sintezi 11

1.2.5 Sarma və superburulma 11

1.4 Məlumat axını: gen ifadəsi 15

1.5 Gen quruluşu və təşkili 20

1.6 Modelin təkmilləşdirilməsi 22

2 Gen 25-i necə klonlaşdırmaq olar

2.2 Prosedurların icmalı 26

2.3 Nuklein turşularının çıxarılması və təmizlənməsi 29

2.3.1 Hüceyrələrin və toxumaların parçalanması 29

2.3.2 Qələvi denaturasiya 31

2.3.3 Sütunların təmizlənməsi 31

2.4 Nuklein turşularının aşkarlanması və miqdarının təyini 32

2.5 Gel elektroforezi 33

2.5.1 Analitik gel elektroforezi 33

2.5.2 Hazırlayıcı gel elektroforezi 36

2.6 Məhdudiyyətli endonükleazlar 36

2.6.2 Yapışqan və küt uclar 40

2.7.1 Bağlama şərtlərinin optimallaşdırılması 44

2.7.2 Arzuolunmaz bağlamanın qarşısının alınması: qələvi fosfataz və ikiqat həzm 46

2.7.3 DNT fraqmentlərini birləşdirməyin digər yolları 48

2.8 Məhdudiyyət fraqmentinin uclarının dəyişdirilməsi 49

2.8.1 Bağlayıcılar və adapterlər 50

2.8.2 Homopolimer qalıqları 52

2.9.1 Plazmid replikasiyası 54

2.9.3 Seçilə bilən markerlər 57

2.9.4 Daxiletmə inaktivasiyası 58

2.10 Lambda bakteriofaqına əsaslanan vektorlar 61

2.10.2 In vitro qablaşdırma 65

2.10.3 Daxiletmə vektorları 66

2.10.4 Əvəzedici vektorlar 68

2.12 Nəzarətçilər: YAC və BAC 72

3 Genomik və cDNT Kitabxanaları 75

3.1.3 Genomik kitabxananın qurulması və qiymətləndirilməsi 83

3.2 Kitabxanaların yetişdirilməsi və saxlanması 86

3.4 Gen zondları ilə kitabxanaların yoxlanılması 94

3.4.3 Hibridləşmə təcrübəsinin mərhələləri 99

3.4.4 Skrininq proseduru 100

3.4.5 Zond seçimi və generasiya 101

3.5 Antikorlarla ifadə kitabxanalarının skrininqi 103

3.6 Plazmid klonlarının xarakteristikası 106

3.6.2 PCR və ardıcıllığın təhlili 108

4 Polimeraza Zəncirvari Reaksiya (PZR) 109

4.2.1 PCR reaksiyasının optimallaşdırılması 114

4.2.3 PCR məhsullarının təhlili 117

4.3 PCR məhsullarının klonlaşdırılması 119

4.5 Əks transkripsiya PCR 123

4.6 Kəmiyyət və real vaxt PCR 123

4.6.3 Molekulyar mayaklar 125

4.7 PCR 127-nin tətbiqləri

4.7.1 Zondlar və digər dəyişdirilmiş məhsullar 127

4.7.2 PCR klonlaşdırma strategiyaları 128

4.7.3 Rekombinant klonların və nadir hadisələrin təhlili 129

4.7.4 Diaqnostik tətbiqlər 130

5 Klonlanmış genin ardıcıllaşdırılması 131

5.1.1 DNT ardıcıllığının prinsipləri 131

5.1.2 Avtomatlaşdırılmış ardıcıllıq 136

5.1.3 Ardıcıllığın genişləndirilməsi 137

5.1.4 Ov tüfənginin ardıcıllığı 138

5.2 Məlumat bankı qeydləri və annotasiya 140

5.3.1 Kodlaşdırma regionunun müəyyən edilməsi 146

5.3.2 İfadə siqnalları 147

5.4 Ardıcıl müqayisələr 148

5.4.2 Zülal ardıcıllığının müqayisəsi 151

5.4.3 Ardıcıl düzülmələr: Clustal 157

5.5.1 Struktur proqnozları 160

5.5.2 Zülal motivləri və domenləri 162

5.6 Gen funksiyasının təsdiqlənməsi 165

5.6.1 Allelik dəyişdirmə və gen nokautları 166

6 Gen ifadəsinin təhlili 169

6.1 Transkripsiyanın təhlili 169

6.1.2 Əks transkripsiya-PCR 171

6.1.3 Yerində hibridləşmə 174

6.2 Promotorun öyrənilməsi üsulları 174

6.2.1 Promouterin yerləşdirilməsi 175

6.3 Tənzimləyici elementlər və DNT-ni bağlayan zülallar 179

6.3.1 Maya bir-hibrid analizləri 179

6.3.2 DNaz I izi 181

6.3.3 Gel gecikdirmə analizləri 181

6.3.4 Xromatin immunoprecipitation (ChIP) 183

6.4 Tərcümə təhlili 185

6.4.2 İmmunositokimya və immunohistokimya 187

Doğma və manipulyasiya edilmiş klonlanmış genlərdən 7 məhsul 189

7.1 Klonlanmış genlərin ifadəsinə təsir edən amillər 190

7.1.2 Tərcümə başlanğıcı 192

7.1.4 Zülal məhsulunun təbiəti 194

7.2 Bakteriyalarda klonlanmış genlərin ifadəsi 195

7.2.1 Transkripsiya birləşmələri 195

7.2.2 Sabitlik: şərti ifadə 198

7.2.3 Ölümcül genlərin ifadəsi 201

7.2.4 Tərcümə birləşmələri 201

7.3.1 Maya üçün vektorların klonlanması 204

7.3.2 Maya ifadə sistemləri 206

7.4 Həşərat hüceyrələrində ifadə: bakulovirus sistemləri 208

7.5.1 Məməli hüceyrələri üçün klonlama vektorları 210

7.5.2 Məməli hüceyrələrində ifadə 213

7.6 Teq və siqnalların əlavə edilməsi 215

7.6.2 İfrazetmə siqnalları 217

7.7 In vitro mutagenez 218

7.7.1 Sahəyə yönəldilmiş mutagenez 218

7.7.4 Sintetik genomlar 224

7.7.5 Zülal mühəndisliyi 224

8 Genomik Analiz 229

8.1 Genom ardıcıllığının icmalı 229

8.2 Növbəti nəsil ardıcıllığı (NGS) 231

8.2.1 Pyrosequencing (454) 232

8.2.2 SOLiD ardıcıllığı (Tətbiqi Biosistemlər) 235

8.2.3 Körpü gücləndirmə ardıcıllığı (Solexa/Ilumina) 237

8.2.4 Digər texnologiyalar 239

8.3 De novo ardıcıl montaj 239

8.3.1 Təkrarlanan elementlər və boşluqlar 240

8.4 Təhlil və annotasiya 242

8.4.1 ORF-lərin identifikasiyası 243

8.4.2 Genlərin və onların məhsullarının funksiyasının müəyyən edilməsi 250

8.4.3 Nuklein turşusu ardıcıllığının digər xüsusiyyətləri 251

8.7 Əlaqədar genlər və funksiyalar: genetik və fiziki xəritələr 260

8.7.2 Sifarişli kitabxanalar və xromosom gəzintisi 262

8.8 Transpozon mutagenezi və digər müayinə üsulları 263

8.8.1 Bakteriyalarda transpozisiya 263

8.8.2 Transpozisiya Drosophila 266

8.8.3 Digər orqanizmlərdə transpozisiya 268

8.8.4 İmza işarəli mutagenez 269

8.9 Gen nokautları, gen nokautları və gen susdurulması 271

9 Genetik Variasiyanın Təhlili 275

9.1 Tək nukleotid polimorfizmləri 276

9.1.1 Birbaşa ardıcıllıq 278

9.2 Daha böyük miqyaslı dəyişikliklər 280

9.2.1 Mikroarraylar və indekslər 281

9.3 Variasiyanın öyrənilməsi üçün digər üsullar 282

9.3.1 Genomik Southern blot analizi: məhdudlaşdırıcı fraqment uzunluğu polimorfizmləri (RFLPs) 282

9.3.2 VNTR və mikropeyklər 285

9.3.3 İmpuls-sahəli gel elektroforezi 287

9.4 İnsan genetik dəyişkənliyi: fenotipin genotip 289 ilə əlaqəsi

9.4.2 Genom miqyaslı assosiasiya tədqiqatları (GWAS) 292

9.4.3 Verilənlər bazasının resursları 294

9.4.4 Genetik diaqnostika 294

9.5 Molekulyar filogenez 295

9.5.1 Ağacların qurulması üsulları 298

10 Post-Genomik Analiz 305

10.1 Transkripsiyanın təhlili: transkriptomlar 305

10.1.1 Diferensial müayinə 306

10.1.2 Digər üsullar: transpozonlar və reportyorlar 308

10.2 Massiv əsaslı üsullar 308

10.2.1 İfadə edilmiş ardıcıllıq etiketi (EST) massivləri 309

10.2.2 PCR məhsul massivləri 310

10.2.3 Sintetik oliqonukleotid massivləri 312

10.2.4 Massivlərin hibridləşdirilməsində mühüm amillər 313

10.3 Transkriptom ardıcıllığı 315

10.4 Tərcümə təhlili: proteomika 316

10.4.1 İkiölçülü elektroforez 317

10.4.2 Kütləvi spektrometriya 318

10.5 Post-translational analiz: zülalların qarşılıqlı təsiri 320

10.5.1 İki hibrid skrininq 320

10.5.2 Faq nümayişi kitabxanaları 321

10.7 İnteqrativ tədqiqatlar: sistem biologiyası 324

10.7.1 Metabolomik analiz 324

10.7.2 Yol analizi və sistem biologiyası 325

11 Modifikasiya edən orqanizmlər: Transgenlər 327

11.1 Transgenez və klonlaşdırma 327

11.1.1 Transgenez üçün istifadə olunan ümumi növlər 328

11.1.2 Transgen ifadəsinə nəzarət 330

11.2 Heyvanların transgenezi 333

11.2.2 Birbaşa inyeksiya 333

11.2.3 Retrovirus vektorları 335

11.2.4 Embrion kök hüceyrə texnologiyası 336

11.2.6 Gen yıxma texnologiyası: RNT müdaxiləsi 340

11.2.7 Gen knock-in texnologiyası 341

11.3 Transgen heyvanların tətbiqi 342

11.4 Xəstəliklərin qarşısının alınması və müalicəsi 343

11.4.1 Canlı peyvəndin istehsalı: bakteriya və virusların modifikasiyası 343

11.4.3 Gen terapiyası üçün virus vektorları 347

11.5 Transgen bitkilər və onların tətbiqi 349

11.5.1 Xarici genlərin daxil edilməsi 349

11.5.2 Genlərin çıxarılması 351

11.6 Transgeniklər: kod 353


Rekombinant protein kompleksinin istehsalı üçün yeni bakulovirus ifadə vasitələri

Əksər eukaryotik zülallar xüsusi hüceyrə fəaliyyətini kataliz etmək üçün birgə fəaliyyət göstərən bir çox alt bölmələri olan böyük çoxkomponentli birləşmələr şəklində mövcuddur. Bu molekulyar maşınların bir çoxu öz yerli sahiblərində yalnız az miqdarda mövcuddur ki, bu da mənbə materialından təmizlənməyə mane olur. Onların strukturunu və funksiyasını yüksək qətnamə ilə açmaq çox vaxt heteroloji həddindən artıq istehsaldan asılı olacaq. Struktur tədqiqatlar üçün multiprotein komplekslərinin rekombinant ifadəsi həm əmək, həm də materiallara, xüsusən strukturun uğurlu müəyyən edilməsi üçün fərdi alt bölmələrin dəyişdirilməsi və şaxələndirilməsi zəruri olduqda əhəmiyyətli, bəzən inhibe edici investisiyalara səbəb ola bilər. Laboratoriyamız mürəkkəb istehsal və diversifikasiya prosesini asanlaşdıran texnologiyalar inkişaf etdirməklə bu problemi həll etdi. Burada biz yaratdığımız MultiBac bakulovirus/həşərat hüceyrə ifadə sistemindən istifadə edərək rekombinant multiprotein kompleksinin istehsalı üçün bu inkişafların bir neçəsini nəzərdən keçiririk. Biz həmçinin multigen vektor generasiyası üçün robotik qaydalar işləyib hazırlayaraq, multiprotein kompleksinin ifadəsi üçün gen birləşməsinin paralelləşdirilməsi və avtomatlaşdırılması məsələlərinə toxunduq. Bu töhfədə biz təqdim etdiyimiz bakulovirus ekspressiya sisteminin fəaliyyətinin bir neçə təkmilləşdirilməsinə diqqət yetiririk: transfer plazmidlərinin modifikasiyası, kompozit multigen bakuloviral DNT-nin generasiya üsulları və MultiBac sistemimizdən istifadə edərək təsvir etdiyimiz sadələşdirilmiş və standartlaşdırılmış ifadə prosedurları.


Videoya baxın: Гены, ДНК и хромосомы (Iyul 2022).


Şərhlər:

  1. Ritter

    Xeyr, sizə deyə bilmərəm.

  2. Kagashicage

    Tamamilə fikrinizi bölüşürəm. Mənə elə gəlir ki, yaxşı fikirdir. Mən səninlə razıyam.

  3. Beal

    Between us speaking, I advise to you to try to look in google.com

  4. Ordwin

    Olduqca faydalı mesaj

  5. Tocage

    Gedin yaxşı bir filmə baxın və ara verin, sadəcə olaraq filmləri haradan əldə etmək barədə məqalə yazdım. Sağ menyu bölməsinə baxın Səhifələr və filmləri haradan əldə etmək olar adlı məqalə var. FTP serverlərinə, izləyicilərə keçidlər var.

  6. Gardakus

    Mən sizinlə tamamilə razıyam. Fikir əladır, sizinlə razıyam.



Mesaj yazmaq