Məlumat

Tamponlar*# - Biologiya


Buferlər

PH-dakı dəyişikliklər bir çox biomolekulların funksiyasına dramatik təsir göstərə bildiyindən, birhüceyrəli və çoxhüceyrəli orqanizmlər pH dəyişməsindən qorunmaq üçün müxtəlif vasitələr hazırlamışlar. Bu mexanizmlərdən biri kimyəvi xassələrinə görə təsnif edilə bilən kiçik molekulların istifadəsidir tamponlar. Buferlər adətən məhluldakı protonları tərsinə bağlaya və ayıra bilən kiçik molekullardır. Əgər mühitdəki pH tampon molekulunda protonasiya edilə bilən funksional qrupun pKa-dan aşağı olarsa, həmin qrup protonlaşmağa meylli olacaq və buna görə də protonu məhluldan “çıxaracaq”. Alternativ olaraq, bir mühitdə pH tampon molekulunda eyni protonasiya edilə bilən funksional qrupun pKa-dan yüksək olarsa, bu qrup yerli pH-ı aşağı salaraq deprotonasiyaya çevrilməyə və ya qalmağa meylli olacaq.

sağ qalmaq üçün lazım olan dar diapazonda diqqətlə saxlanılan bədənin. Qanın pH səviyyəsini sabit saxlamaq bir insanın rifahı üçün vacibdir. İnsan qanının pH səviyyəsini saxlayan tampon tərkibinə karbon turşusu (H2CO3), bikarbonat ionu (HCO3-) və karbon qazı (CO2) daxildir. Bikarbonat ionları sərbəst hidrogen ionları ilə birləşdikdə və karbon turşusuna çevrildikdə, hidrogen ionları çıxarılaraq pH dəyişikliklərini tənzimləyir. Eynilə, artıq karbon turşusu karbon dioksid qazına çevrilə və ağciyərlər vasitəsilə çıxarıla bilər. Bu, qanda çoxlu sərbəst hidrogen ionlarının yığılmasının qarşısını alır və onun pH səviyyəsini təhlükəli şəkildə aşağı salır. Eyni şəkildə, sistemə çox OH- daxil edilərsə, karbon turşusu onunla reaksiya verərək bikarbonat meydana gətirərək pH-ı aşağı salır. Bu tampon sistemi olmasaydı, bədənin pH səviyyəsi sağ qalmağı təhlükə altına alacaq qədər dəyişəcəkdi.

Şəkil 1. Bu diaqram bədənin qan pH səviyyələrinin tamponlanmasını göstərir. Mavi oxlar daha çox CO2 əmələ gəldikdə pH-ın yüksəldilməsi prosesini göstərir.

Tamponların digər nümunələri artıq mədə turşusu ilə mübarizə üçün istifadə olunan antasidlərdir. Reçetesiz satılan bu dərmanların bir çoxu qan tamponları ilə eyni şəkildə işləyir, adətən hidrogeni udmaq və pH-ı normallaşdırmaq qabiliyyətinə malik ən azı bir ion ilə yeməkdən sonra “ürək yanmasından” əziyyət çəkənlərə rahatlıq gətirir. Suyun bir çox faydalı xüsusiyyətlərinə əlavə olaraq, pH-ı tarazlaşdırmaq qabiliyyətinə töhfə verən unikal xüsusiyyətləri Yerdəki həyatın davam etməsi üçün vacibdir.


TAE tamponu

TAE tamponu Tris bazası, sirkə turşusu və EDTA qarışığı olan bufer məhluludur.

Molekulyar biologiyada, adətən DNT və RNT kimi nuklein turşularının ayrılması üçün agaroz elektroforezində istifadə olunur. [1] O, adətən pH 8.3 olan Tris-asetat tamponundan və ikivalentli kationları sekvestr edən EDTA-dan ibarətdir. TAE TBE-dən daha aşağı bufer tutumuna malikdir və asanlıqla tükənə bilər, lakin xətti, ikiqat zəncirli DNT TAE-də daha sürətli işləyir.

Əvvəllər Brody & Kern gel sistemlərində daha səmərəli və ucuz keçirici mühit üçün TBE və TAE tamponlarını əvəz etməklə elektroforetik tamponları sadələşdirmişdir. [2]

TAE (Tris-asetat-EDTA) buferi həm işləyən tampon kimi, həm də agaroz gellərində istifadə olunur. [3] Geniş diapazonlu mutasiya analizi üçün denaturasiya edən gradient gel elektroforez üsullarında istifadəsi də təsvir edilmişdir. [4] TAE natrium xloridli və natriumsuz məhlulda DNT-nin hərəkətliliyini öyrənmək üçün müxtəlif konsentrasiyalarda istifadə edilmişdir. [5] Bununla belə, DNT nümunəsində natrium xloridin (və bir çox digər duzların) yüksək konsentrasiyası onun hərəkətliliyini ləngidir. Bu, yaranan DNT bantlama modelinin səhv şərhinə səbəb ola bilər.

TAE buferi adətən laboratoriya istifadəsi üçün 50x ehtiyat məhlulu kimi hazırlanır. 242 q Tris əsasını suda həll etməklə, 57,1 ml buzlu sirkə turşusu və 100 ml 500 mM EDTA (pH 8,0) məhlulu əlavə etməklə və son həcmi 1 litrə çatdırmaqla 50× ehtiyat məhlulu hazırlana bilər. Bu ehtiyat məhlulu 1x işçi məhlulu hazırlamaq üçün su ilə 49:1 nisbətində seyreltilə bilər. Bu 1× məhlulda 40 mM Tris, 20 mM sirkə turşusu və 1 mM EDTA olacaq.

Yox. ad 1 mol üçün Əsas həll 50× 1 × məhlul 1X
1 Tris bazası 121,1 q/l 2 M 242,2 q/l 40 mM 4,844 q/l
2 sirkə turşusu 57,1 ml/l 1 M 57,1 ml/l 20 mM 1,21 ml/L
3 EDTA disodium duzu dihidrat 372,24 q/l 50 mM 18,612 q/l 1 mM 0,372 q/l

2 M = 2000 mM, yəni 1 × üçün 2000 mM /50 = 40 mM.
1M = 1000 mM, yəni 1 × üçün 1000 mM /50 = 20 mM.
1× üçün 50 mM /50 = 1 mM.

Əvvəla, bu maddələr 500 ml-də həll edilməli, sonra 1000 ml-ə çatdırılmalıdır.
Qeyd: EDTA-nın həlli daha çox vaxt aparacaq, ona görə də EDTA-nı həll edərkən maqnit qarışdırıcıdan istifadə edin (3 və ya 4 dəfə az miqdarda EDTA).


Bufer

In kimya , bufer bir sistemdir, adətən sulu (su ) həll , bu onun malik müqavimət göstərir pH ona turşu və ya əsas əlavə edildikdə dəyişir.

Normalda məhlula turşunun əlavə edilməsi onun pH-ını aşağı salır, əsasın əlavə edilməsi isə pH-ı yüksəldir. Əgər məhlul tampondursa, onun pH-ı əlavə edilən turşu və ya baza miqdarından gözləniləndən daha az dərəcədə dəyişəcək. Sözdə "tamponlanmış aspirin" əslində tampon deyil, çünki müqavimət göstərmir turşular və əsaslar . Bu, sadəcə olaraq, əsas birləşmə ilə birləşdirilmiş aspirindir, məsələn maqnezium karbonat və ya alüminium hidroksid , hansı ki, mədə turşusunu neytrallaşdırır.

Demək olar ki, hamısı kimyəvi reaksiyalar sulu məhlulda baş verən - demək olar ki, bütün kimyəvi reaksiyalar - konsentrasiyalara həssasdır hidrogen ionları və hidroksid ionları, yəni məhlulun pH-a qədər. Bunun səbəbi hidrogen və hidroksid ionlarının suyun özünün ionları olmasıdır. Xüsusilə, həyat üçün vacib olan bir çox biokimyəvi proseslər müxtəlif bədən mayelərinin turşularına olduqca həssasdır. Müxtəlif təbii tampon sistemləri orqanizmin pH dəyərlərini sağlamlıq üçün lazım olan hədlər daxilində saxlayır. Məsələn, bir neçə tampon sistemi insanın pH-ını saxlayır qan sağlam insanda 7.33 ilə 7.43 arasında. 7.0-dən aşağı və ya 7.8-dən yuxarı bir qan pH ölümcül ola bilər.


PBS bir çox istifadəyə malikdir, çünki izotonikdir və əksər hüceyrələr üçün toksik deyil. Bu istifadələrə maddənin seyreltilməsi və hüceyrə qabının yuyulması daxildir. EDTA ilə PBS, həmçinin birləşmiş və yığılmış hüceyrələri ayırmaq üçün istifadə olunur. Bununla belə, sink kimi iki valentli metallar əlavə edilə bilməz, çünki bu, yağıntıya səbəb olacaqdır. Bu tip tətbiqlər üçün Good's buferləri tövsiyə olunur. PBS-nin SARS-CoV-2 kimi RNT viruslarının daşınması və saxlanması ilə bağlı viral daşıma mühitinə məqbul bir alternativ olduğu göstərilmişdir [1]

PBS məhlullarını hazırlamaq üçün bir çox müxtəlif üsullar mövcuddur (bunlardan biri standart PBS-dən fərqli tərkibə malik Dulbecco-nun fosfat tamponlu şoranıdır (DPBS) [2] ). Bəzi resepturalarda kalium və maqnezium yoxdur, digərlərində isə kalsium və/və ya maqnezium var (tamponun canlı və ya sabit toxumada istifadə edilib-edilməməsindən asılı olaraq: sonuncu KCl və ya MgCl tələb etmir.2 ).

PBS-nin ən ümumi tərkibi (1×)
Duz Konsentrasiya (mmol/L) Konsentrasiya (q/L)
NaCl 137 8.0
KCl 2.7 0.2
Na2HPO4 10 1.42
KH2PO4 1.8 0.24

Bütün duzları həll etmək üçün 800 ml distillə edilmiş su ilə başlayın. Ümumi həcmi 1 litrə qədər distillə edilmiş su əlavə edin. Nəticədə ortaya çıxan 1× PBS son konsentrasiyası 157 mM Na+, 140mM Cl-, 4.45mM K+, 10.1 mM HPO olacaq.4 2− , 1,76 mM H2PO4 - və pH 7.96. Buferi 7,3 mM HPO-a keçirmək üçün 2,84 mM HCl əlavə edin.4 2− və 4,6 mM H2PO4 − 7.4 yekun pH və Cl − 142 mM konsentrasiyası üçün.

Cold Spring Harbour Protokolu [3]
reagent MVt kütlə (g) 10× [M] 10× kütlə (g) 5× [M] 5× kütlə (g) 1× [M] 1×
Na2HPO4 141.95897 14.1960 0.1000 7.0980 0.0500 1.41960 0.0100
KH2PO4 136.08569 2.4496 0.0180 1.2248 0.0090 0.24496 0.0018
NaCl 58.44300 80.0669 1.3700 40.0335 0.6850 8.00669 0.1370
KCl 74.55150 2.0129 0.0270 1.0064 0.0135 0.20129 0.0027
pH = 7.4

7.4. Bufer məhlulları hazırlayarkən, həmişə pH metrdən istifadə edərək birbaşa pH ölçmək yaxşı təcrübədir. Lazım gələrsə, pH hidroklor turşusu və ya natrium hidroksid ilə tənzimlənə bilər.

PBS həmçinin kommersiya məqsədilə hazırlanmış PBS tampon tabletləri və ya kisələrindən istifadə etməklə hazırlana bilər. [4]

Hüceyrə kultivasiyasında istifadə olunarsa, məhlul alikotlara bölünə və avtoklavlama və ya filtrasiya yolu ilə sterilizasiya oluna bilər. İstifadəsindən asılı olaraq sterilizasiyaya ehtiyac olmaya bilər. PBS otaq temperaturunda və ya soyuducuda saxlanıla bilər. Bununla belə, konsentratlaşdırılmış məhlullar soyuduqda çökə bilər və istifadə etməzdən əvvəl çöküntü tamamilə həll olunana qədər otaq temperaturunda saxlanılmalıdır.


İstifadəyə hazır tamponlar və reagentlər

Kataloqumuza əlavə olaraq, Boston BioProducts təcrübəli alim komandamız və məhsul inkişafı üzrə mütəxəssislərimiz vasitəsilə xüsusi xidmətlər təklif edir.

Nümunə sorğusu

Növbəti tədqiqat layihəniz başlamazdan əvvəl kataloqumuzdan pulsuz məhsulu sınayın.

Sadəcə qüsursuz müştəri xidməti üçün sizə təşəkkür etmək istədim. Biz böyük həcmdə müxtəlif buferlər sifariş edirik və hər dəfə bu buferlər vaxtında çatır. Buferlərin keyfiyyəti də eyni dərəcədə vacibdir və bu baxımdan biz də məyus olmamışıq. Bütün buferlər ardıcıl olaraq xüsusiyyətlərimizə cavab verir. Çox sağ ol!

Eugene Nebelitsky
Novartis Biotibbi Tədqiqatlar İnstitutu

Münasib qiymətə yüksək keyfiyyətli məhsullar.

Pei Tong
Brigham və qadın xəstəxanası

Etibarlı tamponlar, çox sürətli dönüş və çox yaxşı müştəri xidməti.

Boston BioProducts komandası əla qiymətə əla məhsullar və müstəsna müştəri xidməti təqdim edir. Bir başlanğıc laboratoriyası olaraq vaxt və büdcə vacibdir. Boston BioProducts bizə hər ikisini saxlamağa kömək etdi.

Gino Romano
Silikon Terapevtiklər

Səmərəli, nəzakətli müştəri xidmətinizi, əvvəlki hesablarımda nümayiş etdirdiyiniz təfərrüat və hesabatlılığınızı, mehriban və peşəkar heyətinizi və bütövlükdə biznesinizi aparmağınızı səmimi qəlbdən qiymətləndirirəm. Mən sizin xidmətinizi digər şirkətlərə və kontaktlara tövsiyə etmişəm və bundan sonra da tövsiyə edəcəyəm. Əminəm ki, Kogendəki komandamız sizin işinizdən daha çox razı olmayacaq və biz bu əlaqəni davam etdirməyi səbirsizliklə gözləyirik.


Western Blot Buferləri

western blot emalı və aşkarlanmasının hər bir addımı üçün xüsusi hazırlanmış buferlərimiz haqqında məlumat əldə edin. Biz qərb ləkələrinizdən mümkün olan ən yaxşı məlumatı əldə etməyə kömək etmək üçün geniş çeşiddə bloklama buferləri, yuma buferləri, yuyucu vasitələr və western blot soyma buferlərini təklif edirik.

Hədəf zülallarınızın aşkarlanmasını optimallaşdırmaq üçün müxtəlif western blot bloklayan buferlərimizi araşdırın

Serum və biotinsiz tək təmizlənmiş protein

  • Geniş spektrli antikor və antikor birləşmələri ilə yaxşı işləyir.
  • Streptavidin sistemləri ilə uyğun gəlir
  • 15 dəqiqədən az müddətdə bloklanır
  • Orta yüksək bol zülallar və ya güclü antikor yaxınlığı üçün ən yaxşısıdır
  • Cari bloklama buferi ilə yüksək fon
  • Qərb ləkələrinin soyulması və yoxlanması
  • Fon flüoresansını azaltmağa kömək etmək üçün həddindən artıq qeyri-spesifik bağlanma yerlərini bloklayır,
  • Həm nitroselüloz, həm də aşağı flüoresan PVDF ilə işləyir
  • Yuyucusuz
  • 15-30 dəqiqə ərzində bloklanır
  • Floresan qərb ləkəsi
  • Quru flüoresan ləkələrin təsviri və saxlanması

Aydınlaşdırılmış və stabilləşdirilmiş süd zülalları

  • Western blotting tətbiqlərində evdə hazırlanmış süd bloklayıcı tamponlar üçün yüksək performanslı əvəz
  • Otaq temperaturunda uzun raf ömrü
  • Yağsız Südlə yüksək fon göründüyü zaman istifadə edin
  • Floresan və kemilüminesans tətbiqləri

Serum və biotinsiz tək təmizlənmiş qlikoprotein

  • Zülal əsaslı formulasiya heç bir immunoqlobulin, albumin və ya endogen biotin ehtiva etmir, bu da onu ənənəvi bloklayıcı agentlərin uğursuz olduğu bir çox vəziyyətlərdə uyğun edir.
  • Streptavidin sistemi ilə istifadə üçün biotinsiz
  • 10 dəqiqədən az müddətdə bloklanır
  • Cari bloklama buferi ilə yüksək fon
  • Məməli nümunələri əhatə edən aşkarlama üsullarında faydalıdır.
  • Xüsusilə flüoresan görüntüləmə ilə bağlı tətbiqlərdə effektivdir
  • Məməli nümunələri
  • Floresan qərb ləkəsi

Təmizlənmiş iribuynuzlu serum albumini

  • Yüksək keyfiyyətli iribuynuzlu zərdab albuminin 10% məhlulları
  • Tək təmizlənmiş zülal, serum və ya süd məhlullarına nisbətən analiz komponentləri ilə daha az çarpaz reaksiya şansı təmin edir.
  • Fosfo-zülalları hədəf alarkən istifadə edin
  • Yenidən istifadə edilmiş antikorları blokerdə saxlayarkən istifadə etmək daha yaxşıdır
  • Tək zülal bloklayıcı bufer, serum və ya süd məhlullarına nisbətən analiz komponentləri ilə çarpaz reaksiyanın daha az şansını təmin edir.
  • Yağsız süd blokerləri ilə yüksək fon göründüyü zaman istifadə edin
  • İstifadəyə hazır 5% yağsız süd tozu məhlulu
  • Rahatlıq - istifadəyə hazırdır
  • Evdə hazırlanmış blokerlərə nisbətən daha ardıcıl məhsul

Qeyri-protein bloklayıcı birləşmə

  • Zülal əsaslı bloklama tamponları ilə əlaqəli çarpaz reaktivliyi minimuma endirir və ya aradan qaldırır.
  • Nümunə və antikor birləşmələri çarpaz reaksiyadan və ya istənilən zond funksiyasının söndürülməsindən qaçınmaq üçün analiz sistemində bütün mümkün ekzogen heyvan zülallarının aradan qaldırılmasını tələb edir.
  • Zülal əsaslı blokerlər yüksək fon yaratdıqda istifadə edin

Az bolluq və ya zəif immunreaktivlik antikorları üçün membran müalicəsi

  • Nitroselüloz membranlar üçün ilkin müalicə
  • Zondlama üçün lazım olan ilkin antikor miqdarını azaldır
  • Birincil antikor adətən maraq doğuran zülalın aşkarlanması üçün istifadə ediləndən 3-100 dəfə az əsas antikor olduqda istifadə edin.

Maraqlanan zülalları yoxlamadan əvvəl antikorların qeyri-spesifik bağlanmasının qarşısını almaq üçün membranın qalan bağlayıcı səthi bloklanmalıdır. Əks halda, antikorlar və ya digər aşkarlama reagentləri əvvəlcə maraq doğuran zülalları hərəkətsizləşdirməyə xidmət edən membranda qalan hər hansı bir yerə bağlanacaq. Prinsipcə, analizdə hədəf və ya zond komponentləri üçün bağlanma yaxınlığı olmayan istənilən zülal bloklama üçün istifadə edilə bilər.

Süd və ya normal zərdabdan yüksək təmizlənmiş zülallara qədər müxtəlif bloklama tamponları membrandakı boş yerləri bloklamaq üçün istifadə edilə bilər. İdeal bloklama buferi antikor bağlaması üçün epitopu dəyişdirmədən və ya gizlətmədən fonu tamamilə aradan qaldıraraq, qeyri-spesifik qarşılıqlı əlaqənin bütün potensial sahələrinə bağlanacaq. Bloklama tamponları antikorların bağlanmasına və spesifikliyinə təsir göstərə bilər - ona görə də optimallaşdırma lazımdır. Heç bir tək zülal və ya zülal qarışığı bütün Western blot təcrübələri üçün ən yaxşı nəticə vermir və xüsusi antikorların, membran tipinin və substrat sisteminin verilmiş kombinasiyası üçün mümkün olan ən yaxşı nəticələri əldə etmək üçün empirik sınaq tələb olunur.


Universal və bazal tamponlarda məhdudlaşdırıcı fermentlərin nisbi aktivliyi

Bizim məhdudlaşdırıcı fermentlərimiz optimal universal buferlə təchiz edilmişdir (aşağıdakı cədvəldə mavi ilə göstərilən beş universal tampondan biri). Digər universal tamponların hər birində nisbi aktivlik optimal tampona qədər normallaşdırılır, burada optimal tamponda hər bir fermentin aktivliyi 100% kimi ifadə edilir. ( ) daxilindəki dəyərlər ulduz fəaliyyətindən təsirlənmə ehtimalı olan buferləri göstərir. Bu təsirlərin qarşısını almaq üçün mavi və ya çəhrayı ilə vurğulanmış tamponlardan istifadə etmək tövsiyə olunur.

Bir neçə spesifik ferment (AccIII, BalI, BcnI, BglI, Bpu1102I, Cfr10I, Eco52I, NruI, PshBI, SnaBI, SspI, TaqI və VpaK11BI) hər biri xüsusi ferment üçün ixtisaslaşmış bazal tamponla təchiz edilmişdir. Bu bazal tamponların tərkibi fermentdən asılı olaraq dəyişir.

Məhdudiyyət fermenti Nisbi fəaliyyətlər (%)
LMHKT + BSABazal***
AatII <20 <20 <20 <20 100 120
AccI 20 100 <20 (<20) 160 80
AccII (260) 100 <20 20 200 160
Akt III (<20) (<20) 20 (80) (<20) 100
AfaI 60 60 40 60 100 100
AflII 20 80* <20 <20 140 120
AluI 100 100 <20 40 200 120
Aor13HI <20 20 <20 80 * 80 100
Aor51HI 80 100 <20 20 120 120
ApaI 100 <20 <20 <20 <20 120
ApaLI 100 20 <20 <20 120 120
AvaI (<20) 100 20 40 100 120
AvaII 80 100 <20 20 100 100
BalI 20 20 <20 <20 40 100
BamHI (<20) <20 40 100 (<20) 80
BanII (120) (120) 100 80 (100) 100
BcnI <20 20 40 60 60 100
BglI <20 <20 20 40 <20 100
BglII <20 20 100 (100) (60) 100
BlnI <20 20 40 100 20 120
BmeT110I <20 <20 20 100 <20 140
BmgT120I <20 <20 100 40 <20 240
Bpu1102I <20 <20 <20 40 60 100
BspT104I 100 60 <20 <20 100 120
BspT107I <20 20 80 100 20 100
Bsp1286I 100 20 <20 <20 60 100
Bsp1407I 20 60 20 20 100 100
BssHII 100 100 60 20 140 100
BstPI (<20) (60) 100 (100) (100) 100
BstXI <20 40 100 <20 <20 120
Bst1107I (<20) 60 100 100 40 100
Cfr10I (<20) (<20) (<20) 40 (20) 100
ClaI 40 100 120 100 60 100
CpoI <20 <20 80 100 <20 100
DraI 100 100 60 100 80 80
EaeI 60 100 <20 <20 120 160
EcoO65I (20) (60) 60 * 40 40 100
EcoO109I 100 60 <20 <20 100 160
EcoRI (20) (100) 100 (120) (80) 120
EcoRV (<20) (40) 100 (120) (40) 100
EcoT14I (<20) (40) 100 120 (60) 100
EcoT22I <20 20 100 (140) (20) 120
Eco52I <20 <20 <20 <20 <20 100
Eco81I <20 100 <20 <20 100 160
FbaI (<20) (<20) (80) 100 (20) 100
Foki (20) (60) <20 <20 (200) 100
HaeII 80 100 <20 80 140 100
HaeIII 60 100 100 60 100 100
Xoşbəxt II 100 60 <20 <20 100 80
HhaI 80 100 100 120 120 100
HincII 20 100 20 40 100 80
HindIII (60) 100 <20 200 (100) 80
Hinfi 80 100 100 160 60 100
Hin1I 40 80* <20 20 60 160
HpaI <20 (40) 20 100 (80) 100
KpnI 100 60 <20 <20 (100) 80
MboI 20 40 60 100 40 100
MboII 100 60 <20 <20 60 100
MflI 100 80 <20 <20 80 100
MluI 60 60 100 (100) 60 100
MspI 80 80 <20 100 100 80
MunI (200) 100* <20 <20 160 100
MvaI (<20) (40) 80 100 (20) 120
NaeI 100 <20 <20 <20 100 120
NcoI (40) (60) 20 60* (60) 160
NdeI <20 40 100 100 80 100
NheI (120) 100 <20 <20 (160) 100
NotI (<20) (<20) 20** <20 (<20) 100
NruI 0 <20 20 20 <20 100
NsbI 40 20 <20 60 100 100
PmaCI 100 80 <20 <20 100 100
PshaAI 20 40 <20 100 60 160
PshBI (20) (40) 20 40 40 100
Psp1406I 20 60 <20 <20 100 100
PstI (<20) (60) 100 80 (20) 80
PvuI (<20) (20) (40) 80* (40) 120
PvuII (80) 100 40 <20 (40) 100
SacI 100 60 <20 <20 80 80
SacII 40 20 <20 <20 100 40
SalI <20 <20 100 (20) <20 120
Sau3AI (60) 80 100 <20 (80) 100
ScaI (<20) (<20) 100 (60) (<20) 100
SfiI (40) 100 <20 <20 100 100
SmaI <20 <20 <20 <20 100 100
SmiI <10 <20 100 40 <10 100
SnaBI (20) (40) <20 <20 (40) 100
SpeI (80) 100 80 100 (80) 100
SphI (20) (40) 100 120 (20) 100
Sse8387I (120) 60* <20 <20 (60) 100
SspI (<20) (60) 40 (100) (80) 100
StuI 60 100 60 80 140 100
Təqİ 40 80 60 60 80 100
Tth111I (20) 80 40 100 (80) 120
Van91I <20 (20) 60 100 (60) 100
VpaK11BI <20 <20 60 (40) <20 100
XbaI <20 80* 20 <20 120 120
XhoI <20 60 100 160 60 100
XspI <20 60 <20 100 160 100

Mavi: məhdudlaşdırıcı fermentlə təchiz edilmiş tampon
Çəhrayı: istifadə üçün tövsiyə olunan alternativ bufer

*+0,01% BSA &rarr 100% AflII, EcoO65I, FokI, Hin1I, MunI, NcoI, PvuI, SplI, Sse8387I, XbaI
**+0,01% BSA + 01% Triton X-100 &rarr 100% Qeyd
*** Bazal tamponların tərkibi fermentə xasdır.


Tamponlar*# - Biologiya

PHEM (500 ml) 2x
18,14 g Borular
6,5 q Hepes
3,8 q EGTA
0,99 q MgSO 4
pH 7.0 w/ KOH

PBS (500 ml-də 5x)
20,45 q NaCl
0,465 q KCl
10,142 q Na 2 HPO 4 *7 H2O
0,545 q KH 2 PO 4
pH 7.2

Quraşdırma mediası
20 mM Tris pH 8.0
0,5'N-propil gallat
90-37 qliserin
4oC temperaturda saxlayın

PM Bufer*
100 ml 1 M BORULAR (100 mM BORULAR pH= 6.9)
2 ml 1 M MgSO 4 , (2 mM MgSO 4 )
2 ml 0,5 M EGTA (1 mM EGTA,)
distillə edilmiş su 900 ml
pH-ı 6.9-a tənzimləyin
distillə edilmiş su 1 litrə qədər
4oC temperaturda saxlayın

Valap*
50 q vazelin, 50 q lanolin və 50 q parafin (hamısı Fisherdən əldə edilə bilər) 1 litrlik Pyrex stəkana qoyun.
Bütün komponentlər əriyənə və yaxşıca qarışdırılana qədər hərdən qarışdıraraq isti plitədə "aşağı" qızdırın.
Bir neçə kiçik vintli qapaqlı bankalara tökün (" tutum 12650 ml)
Otaq temperaturunda saxlayın

20 x Enerji Bərpa Sistemi*
150 mM kreatin fosfat (Boehringer �)
2 ml 100 mM MgATP ehtiyatı (20 mM ATP, 20 mM MgSO 4 )
40ml 0,5 M EGTA (2 mM EGTA)
distillə edilmiş su 10 ml
100 ml hissələrə bölün və -20oC-də saxlayın

İzolyasiya Buferi*
20 ml 5 M NaCl ehtiyatı (0,1 M NaCl)
4 ml 1 M MgSO 4 Ehtiyat (4 mM MgSO 4 )
2 ml 0,5 M EDTA (1 mM EDTA)
10 ml 1 M HEPES ehtiyatı (10 mM HEPES)
distillə edilmiş su 900 ml
pH-ı 7.0-a tənzimləyin
distillə edilmiş su 1 litrə qədər
4oC temperaturda saxlayın

Yüksək Duz Tamponu*
120 ml 5 M NaCl ehtiyatı (0,6 M NaCl)
4 ml 1 M MgSO 4 Stok (4 mM MgSO 4 )
2 ml 0,5 M EDTA (1 mM EDTA)
10 ml 1 M HEPES ehtiyatı (10 mM HEPES)
distillə edilmiş su 900 ml
pH-ı 7.0-a tənzimləyin
distillə edilmiş su 1 litrə qədər
4oC temperaturda saxlayın

10 x Sütun Buferi*
500 ml 1 M BORU ehtiyatı (250 mM BORULAR)
40 ml 0,5 M EGTA ehtiyatı (10 mM EGTA)
40 ml 1 M MgSO 4 Ehtiyat (5 mM MgSO 4 )
distillə edilmiş su 1800 ml
pH-ı 6.7-ə tənzimləyin
distillə edilmiş su 2 litrə qədər
4oC temperaturda saxlayın

Homogenləşdirmə Buferi*
300 ml PM bufer
52,3 mq PMSF (1 mM PMSF)
3 q leupeptin (10 mq/ml leupeptin)
300 mq pepstatin A (1 ug/ml pepstatin A)
3 mq TAME (10 ug/ml TAME)
həll etmək üçün yaxşıca qarışdırın, dərhal istifadə edin

PMG Bufer*
80 ml 1 M BORULAR Ehtiyat (80 mM BORULAR)
2 ml 1 M MgSO 4 Stok, (2 mM MgSO 4 )
2 ml 0,5 M EGTA ehtiyatı (1 mM EGTA,)
600 ml qliserin
distillə edilmiş su 900 ml, yaxşı qarışdırın
pH-ı 6.9-a tənzimləyin
distillə edilmiş su 1 litrə qədər
4oC temperaturda saxlayın

PBS*
8,18 q NaCl (140 mM NaCl)
0,186 q KCl (2,5 mM KCl)
0,218 q KH 2 PO 4 (1,6 mM KH 2 PO 4 )
2,15 q Na 2 HPO 4 (15 mM Na 2 HPO 4 )
distillə edilmiş su 1 litrə qədər
Otaq temperaturunda saxlayın

1M MgSO4 ehtiyat*
24,074 q MgSO 4
distillə edilmiş su 200 ml
otaq temperaturunda saxlayın

1 M HEPES, pH = 7.0 Ehtiyat*
119,15 q HEPES (sərbəst turşu)
distillə edilmiş su 400 ml
pH Ӳ.8 olana qədər qarışdırarkən bir neçə dəfə bərk NaOH əlavə edin.
pH = 7.0-ə çatmaq üçün damcı-damcı konsentratlaşdırılmış NaOH əlavə edin
distillə edilmiş su 500 ml
steril filtr və 4oC-də saxlayın

1 M BORULAR, pH = 6.9 Stok*
151,2 q BORULAR (sərbəst turşu)
distillə edilmiş su 400 ml
pH Ӳ.7 olana qədər qarışdırarkən bir neçə dəfə bərk NaOH əlavə edin.
pH = 6.9-a çatmaq üçün konsentratlaşdırılmış NaOH damcı əlavə edin
distillə edilmiş su 500 ml
steril süzün və 4oC-də saxlayın

0,5 M EDTA ehtiyatı*
16,81 q EDTA (natrium duzu)
distillə edilmiş su 90 ml
pH-ı 7.0-a tənzimləyin
Distillə edilmiş su 100 ml
Otaq temperaturunda saxlayın

0,5 M EGTA ehtiyatı*
19,02 q EGTA (natrium duzu)
distillə edilmiş su 90 ml
pH-ı 7.0-a tənzimləyin
100 ml-ə qədər distillə edilmiş su
Otaq temperaturunda saxlayın

1M ditiotreitol (DTT)*
1,542 q ditiotreitol
distillə edilmiş su 10 ml
500 ml alikvotlara paylayın və -20oC-də saxlayın

1 M KCl ehtiyatı*
74,55 q KCl
distillə edilmiş su 1 litrə qədər
otaq temperaturunda saxlayın

10 M NaOH ehtiyatı*
40 q NaOH
distillə edilmiş su 100 ml
otaq temperaturunda saxlayın

100 mM MgGTP ehtiyatı*
Sizdə olan GTP partiyasının düstur çəkisini yoxlayın, 10 ml 100 mM məhlul üçün tələb olunan miqdarı təyin edin.
müəyyən edilmiş miqdarda 8,5 ml distillə edilmiş su əlavə edin
1 ml 1M MgSO əlavə edin 4 Səhm
pH-ı 7.0-a tənzimləyin,
distillə edilmiş su 10 ml
200 ml alikotlara paylayın, -20oC-də saxlayın

100 mM MgATP ehtiyatı*
Əlinizdə olan ATP partiyasının düstur çəkisini yoxlayın, 10 ml 100 mM məhlul üçün tələb olunan miqdarı təyin edin.
müəyyən edilmiş miqdarda 8,5 ml distillə edilmiş su əlavə edin
1 ml 1M MgSO əlavə edin 4 Səhm
pH-ı 7.0-a tənzimləyin
distillə edilmiş su 10 ml
200 ml alikotlara paylayın, -20oC-də saxlayın

5 M NaCl ehtiyatı*
292,2 q NaCl
distillə edilmiş su 1 litrə qədər
otaq temperaturunda saxlayın

3,6 mM Brefeldin A*
10 mq Brefeldin A (Epicenter Technologies Madison, WI-dan əldə edilə bilər)
mütləq etanol 12 ml-ə qədər
-20oC-də saxlayın

30 x NaF*
378 mq NaF (0,9 M NaF)
distillə edilmiş su 10 ml
-20oC temperaturda saxlayın

30 x AlCl3*
20 mq (1,5 mM AlCl 3 )
distillə edilmiş su 100 ml
Otaq temperaturunda saxlayın

30 mM Mg GTP-g-S*
10 mq GTP-g-S tetralitium duzu (Boehringer Mannheim 覔 467-dən əldə edilə bilər)
18 ml 1 M MgSO 4 Ehtiyat (30 mM MgSO 4 )
572 ml distillə edilmiş su əlavə edin (592 ml-ə qədər)
-20oC temperaturda saxlayın


150 mM Mg AMP-PNP*
25 mq AMP-PNP (Boehringer Mannheim 褞 547-dən əldə edilə bilər)
90 ul 1 M MgSO 4 Ehtiyat (150 mM MgSO 4 )
225 ml distillə edilmiş su əlavə edin (315 ml-ə qədər)
-20oC temperaturda saxlayın


100 mM Natrium ortovanadat*
1,839 q natrium ortovanadat
vida qapaqlı boruda 8 ml-ə qədər distillə edilmiş su
pH-ı 10-a tənzimləyin
məhlul sarıdırsa, şəffaf olana qədər qaynar suya qoyun
pH-ı yenidən yoxlayın, lazım olduqda təkrarlayın
A265 nm, ext. əmsal= 2925M-1sm-1 və lazım olduqda distillə edilmiş su əlavə edilir
-20oC-də saxlayın


3 M KI*
4,98 q KI
10 ml distillə edilmiş su əlavə edin
otaq temperaturunda saxlayın


0,5 M Na2CO3*
531 mq Na 2 CO 3
10 ml distillə edilmiş su əlavə edin
otaq temperaturunda saxlayın

L B Bulyon
1 litr ddH-da 2 O, birləşdirin:
10 qram Bakto-tripton
5 qram Bakto-maya ekstraktı
5 qram NaCl
Qarışana qədər qarışdırın.


Videoya baxın: Biologiya Gomologik va Anologik qanday farqlash (Yanvar 2022).