Məlumat

İmmunoqlobulin Fab fraqmentlərinin sintezi: Fab haqqında haradan öyrənə bilərəm?

İmmunoqlobulin Fab fraqmentlərinin sintezi: Fab haqqında haradan öyrənə bilərəm?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Fab sintezində iştirak edən kimyəvi reaksiyanı bilmək istəyirdim. Mən onu hər yerdə axtardım. Uğur yoxdur. Bilirəm ki, burada tapacağam.

Hələlik bildiyim tək şey:

Fab molekuldaxili disulfid bağı ilə bağlanmış VH, CH1 və VL, CL bölgələrindən ibarət olan IgG və IgM-dən yaranan monovalent fraqmentdir.

Fab-ın molekulyar əsası daha mənalı olacaq.


Fab fraqmentlərinin yaradılması üçün hüceyrələr və ya heyvanlar tərəfindən böyük miqdarda hazırlana bilən (ehtimal ki, genetik cəhətdən dəyişdirilmiş) antikorlar istifadə olunur. Bütövlükdə antikorlar sintez edilmir.

Fab fraqmenti, menteşə bölgəsindəki disulfid bağları üzərində antikoru parçalayan papain fermentindən istifadə edərək antikorlardan əldə edilir. Bunun nəticəsində iki Fab fraqmenti (onlarda antigen bağlayan yerlər var) və bir Fc fraqmenti (antikorun sabit bölgəsini ehtiva edir). Şəkilə baxın (buradan):

Mövzunu daha da dərinləşdirmək istəyirsinizsə, aşağıdakı istinadlardan birini oxuyun.

  1. Papain həzmi ilə insan immunoqlobulin G-dən Fab və Fc fraqmentlərinin hazırlanması və ayrılması
  2. Papain istifadə edərək IgG-nin parçalanması

FAbs genetik olaraq hazırlanmışdır və üzvi şəkildə sintez olunmur. Bu PNAS məqaləsi çoxlu miqdarda müxtəlif FA-lar yaratmaq üçün faj (virus) kitabxanasının qurulmasını gözəl təsvir edir və tələb olunan epitop (antigen) yaxınlığı ilə FAb üçün ekrandır: http://www.pnas.org/content/95/11 /6157.qısa


Fab Abzyme Kəsmə Xidməti

Yaradıcı biolaboratoriyalar xüsusi proteazların istifadəsi ilə antikor Fab fraqmentlərini əldə etmək üçün texniki platforma yaratmışdır ki, bu da sizin eksperimental tədqiqat ehtiyaclarınızı xeyli ödəyə bilər. Gen ifadəsi və ya peptid sintezindən tutmuş antikorların etiketlənməsinə və avi-tag biotinilləşdirilmiş antikor xidmətinə qədər fərdi model orqanizm antikor istehsalında uzun illər geniş təcrübəmiz var.

Fermentlərin təsnifatı və üstünlükləri

Fab-Cutter A və Fab-B genlərinin hər ikisi Streptococcus pyogenes-dən əmələ gəlir.S. pyogenes), ilə ifadə edilir E. coli, və çox mərhələli təmizləmə yolu ilə əldə edilir. İnsan, siçan, qoyun, keçi və digər növlərin müxtəlif alt tipləri üçün ferment immunoqlobulin IgG-nin sürətli tək nöqtəli həzmini həyata keçirə bilər.

  • Fab-Cutter A
  • Fermentin parçalanma yeri immunoqlobulin IgG-nin menteşə bölgəsinin üstündə yerləşir
  • Fab fraqmentləri və dimerik Fc fraqmentləri əldə edin
  • Tək ferment kəsmə sahəsi, sürətli kəsmə
  • Fab-Cutter B
  • Fermentin parçalanma yeri immunoqlobulin IgG-nin menteşə bölgəsinin altında yerləşir
  • F(ab')2 fraqmentləri və dimerik Fc fraqmentləri əldə edin
  • Siçan IgG2a və IgG3 üçün də tətbiq oluna bilər
  • Tək ferment kəsmə sahəsi, sürətli kəsmə

Xidmətimizin iş axını

Creative Biolabs-ın alimləri gözlənilən nəticələrə nail olmaq üçün ən az vaxt sərf etməyə imkan verən hərtərəfli layihə planını ehtiyaclarınıza uyğunlaşdırmağa həsr olunublar.

  • Fərdiləşdirməniz üçün müxtəlif antikorlar təqdim edirik, sadəcə antikor resursları üçün bizimlə əlaqə saxlayın
  • Tətbiq ssenarilərinizə uyğun olaraq sizə həzm həlləri təqdim edirik
  • Biz peşəkar həzm təcrübəsi xidməti təqdim edirik

Creative Biolabs-ın xüsusiyyətləri

Creative Biolabs Fab abzyme kəsmə xidmətində geniş təcrübəyə malikdir. Elmi komandamız zəngin təcrübə ilə uzun illər bu sahədə təhsil almağa sadiqdir. Əldə etdiyimiz həzm məhsulları daha yüksək keyfiyyətə malikdir və az miqdarda antikor olan pilot sınaqlar üçün istifadə edilə bilər.


Qrafik Abstrakt

Açıqlama: Müəlliflər aşağıdakı rəqabətli maliyyə maraqlarını bəyan edirlər: E.N., A.C.G., A.P. və A.C.P. spesifik dərman çatdırılması üçün folat hədəfli liposomlarda boyun domen peptidindən istifadə etmək üçün patent üçün müraciət etdi. M.R. MC Toxicology Consulting şirkətinin əməkdaşıdır. M.P. və M.S. EXBIO Praha şirkətinin əməkdaşlarıdır.

Maliyyələşdirmə: Bu iş Avropa İttifaqının Yeddinci Çərçivə Proqramı (FP7/2007-2013 qrant müqaviləsi NMP4-LA-2009-228827 NANOFOL) və Horizon 2020 Araşdırma və İnnovasiya Proqramı (qrant müqaviləsi № 683356 - FOLSMART) tərəfindən maliyyələşdirilib. Portuqaliya Elm və Texnologiya Fondu UID/BIO/04469/2013 bölməsinin və COMPETE 2020 (POCI-01-0145-FEDER-006684) və BioTecNorte əməliyyatının (NORTE-01-01400-000) strateji maliyyələşdirilməsi çərçivəsində Norte2020 çərçivəsində Avropa Regional İnkişaf Fondu tərəfindən maliyyələşdirilir.


Bütün IgG ilə müqayisədə, Fab fraqmentləri hüceyrələrə və toxumalara nüfuz edə və antigenləri daha asan bağlaya bilər. aşağı sterik maneə. Üstəlik, Fc bölgəsinin olmaması Fab fraqmentlərinin qarşısını alır Fc reseptorlarına qeyri-spesifik bağlanma.

Fc fraqmenti maraq doğurduqda, papain, nəticədə, seçim fermentidir. Papain ilk növbədə Fab fraqmentlərini yaratmaq üçün istifadə olunur, lakin xüsusi fiziki-kimyəvi şəraitdə istifadə edildikdə F(ab&rsquo) 2 fraqmentlərini yaratmaq üçün də istifadə edilə bilər.


Fab Antikor İstehsal Xidməti

Antigen bağlayan fraqmentlər (Fab), tam ölçülü bir antikorun (məsələn, IgG) fermentativ və ya kimyəvi həzmindən əldə edilir. Bu fraqmentlər ağır zəncirin dəyişən bölgəsini (VH), yüngül zəncirin dəyişən bölgəsini (VL), ağır zəncir 1-in sabit bölgəsini (CH) ehtiva edən antikor molekulunun antigen bağlayan domenləridir.1) və yüngül zəncirinin sabit bölgəsi (CL) [1]. Fab fraqmentləri iki yolla əldə edilə bilər: rekombinant sintez və ya ana antikorun fermentativ parçalanması yolu ilə [2].

Rekombinant antikorların qurulması və ifadəsi sahəsində illik tədqiqat təcrübəsi ilə Biologics International Corp (BIC) Fab, scFab, Fab', F(ab') daxil olmaqla antikor fraqmenti istehsalı xidmətləri təklif edir.2, scFv, diabody, triabody, minibody və scFv-Fc istehsalı. Antikor fraqmentləri ilə bağlı əlavə məlumat üçün əlaqə saxlamaqdan çəkinməyin. Biz sizə kömək etməkdən hər zaman şad olarıq.

Təxminən 50 KDa ölçüsündə olan Fab fraqmentləri ağır və yüngül zəncirlərin hər birinin bir sabit və bir dəyişən domenini ehtiva edən antikor molekulunun antigen bağlayan domenləridir. Tərkibində disulfid körpü tiolları olan fraqmentlər Fab fraqmentləri, tiol funksional qrupu olmayanlar isə Fab fraqmentləri adlanır [2]. Kiçik ölçüləri sayəsində Fab/Fab' toxumalara daha effektiv şəkildə nüfuz edə və qandan daha sürətlə təmizlənə bilər. Onların Fc fraqmentləri olmadığı üçün Fab/Fab' anti-Fc vasitəçiliyi ilə antikor aşkarlamasına mane olmayacaq.

Fab Fragments Construction

Fab fraqmentlərini istehsal etmək üçün iki fərqli üsuldan istifadə edilə bilər. Əsas üsul bütün antikorun fermentativ/kimyəvi parçalanmasıdır, burada bütün antikor F(ab') əmələ gətirmək üçün ferment (papain, pepsin və fisin kimi) tərəfindən parçalanır.2 fraqmentlər, sonra Fab fraqmentləri əldə etmək üçün həmin fraqmentlərin azaldılması [2]. Alternativ üsul F(ab') rekombinant sintezidir.2 antikor fraqmentləri, ardınca Fab vahidləri əldə etmək üçün bu fraqmentlərin kimyəvi reduksiyası.

Fab Antikor Kitabxanası

Hal-hazırda, rekombinant antikor fraqmentlərinin əksəriyyəti faj nümayişi antikor kitabxanaları tərəfindən yaradılır [3]. Fab anticisimlər kitabxanası bir neçə mühüm cəhətdən sərfəlidir: birincisi, istehsalı çox zəhmət tələb edən və çox vaxt aparan monoklonal antikorlarla müqayisədə, Fab antikor kitabxanası hibridom texnologiyası vasitəsilə əldə edilməsi çətin olan yeni antikorları sürətlə və səmərəli şəkildə seçə bilir. İkincisi, scFv antikorları kimi, daha yüksək yaxınlıqlara malik Fab antikorlarını yaratmaq daha asan ola bilər. Üçüncüsü, Fab fraqmentlərinin üstünlükləri uzunmüddətli saxlama [4] altında yüksək stabildir və yenidən mühəndisliyə ehtiyac olmadan ümumi aşkarlama antiserumları ilə uyğun gəlir. Bəzi qeyri-adi antigenlərə qarşı antikora ehtiyacınız varsa, əlaqə saxlayın, zəngin müxtəlifliyə və geniş miqyaslı antikor kitabxanamız sizə ideal antikor tapmaqda kömək edəcək.

Daha Fab Formatları

A F(ab')2 Fc menteşə bölgəsinin kiçik bir hissəsini saxlayan fraqmentdə antigenə yaxınlığı artıra bilən iki antigen bağlayan bölgə var. F(ab') azaldılması2 fraqmentlər digər molekullarla birləşmə üçün faydalı olan sərbəst sulfhidril qrupuna malik olan iki monovalent Fab fraqmentini əmələ gətirir.

Fab fraqmentlərini yaratmaq üçün enzimatik/kimyəvi parçalanma üsullarından istifadə rahat və səmərəli olsa da, başlanğıc material kimi çoxlu miqdarda monoklonal antikor tələb edir. Tək zəncirli Fab fraqmenti (scFab) təkmilləşdirilmiş funksiyaya və Fab fraqmentlərinin istehsalına səbəb ola bilər. Bəzi tədqiqatlara görə [3], scFab fraqmentləri Fab ilə müqayisədə üstün antigen bağlama qabiliyyəti nümayiş etdirir və həll olunan Fab istehsalının bəzi mənfi cəhətlərini kompensasiya edir. E. coli.

Bəzi antikor formatları varmı? Fikirlərinizlə bizimlə əlaqə saxlayın, sizin üçün nə edə biləcəyimizi görək.


İmmunoqlobulinin əsas strukturu və sinifləri

Bu yazıda immunoqlobulinin əsas quruluşu və sinifləri haqqında danışacağıq.

Antikorlar, bir antigen (İmmunogen) tərəfindən stimullaşdırılmasına cavab olaraq hüceyrələr tərəfindən istehsal olunan və xüsusi olaraq bu antigenlə reaksiya verə bilən spesifik qlikoproteinlərdir (İmmunoqlobulin). Hər bir immunoqlobulin (qısacası Ig kimi yazılır) dörd polipeptid zəncirindən (iki ağır zəncir və iki yüngül zəncir) ibarət eyni əsas quruluşa malikdir.

Bu zəncirlər kovalent olmayan qüvvələr və kovalent disulfid körpülər tərəfindən bir yerdə tutulur. Hər bir zəncirin dəyişən hissəsi və amin turşularının daimi hissəsi var (şək. 10.3). Müxtəlif fermentlərdən istifadə edərək immunoqlobulin molekulunu parçalamaqla molekulun müxtəlif hissələrinin funksiyalarını öyrənmək mümkün olmuşdur.

Papain fermenti molekulu iki Fab fraqmentinə (Fab = fraqment antigenlə bağlanır) və bir Fc fraqmentinə (Fc = kristallaşa bilən fraqmentə), Pepsin fermenti isə molekulu bir F(ab) parçalayır.2 – fraqmenti və bir neçə kiçik və adətən qeyri-aktiv peptidlər.

Fərqli fiziki-kimyəvi xüsusiyyətlər və fərqli lokalizasiyalarla birlikdə bioloji fəaliyyətlərdəki fərqlər antikorların müxtəlif siniflərə və alt siniflərə bölünməsinə səbəb olmuşdur.

Ig-nin əsas strukturu aşağıda göstərilmişdir (Şəkil 10.3):

1. İmmuno&şiqlobulinlərin əsas strukturu:

A. Ağır və yüngül zəncirlər:

Bütün Ig-lərin əsas vahidi olaraq dörd zəncirli quruluş var. Polipeptid zəncirinin bir cütü digər cütündən təxminən iki dəfə çox amin turşusu ehtiva edir. Onlar müvafiq olaraq ağır (H) zəncirlər (50-70 KDa.) və yüngül (L) zəncirlər (25 KDa.) adlanır.

B. Disulfid bağları:

1) Zəncirlərarası: Ağır zəncir və yüngül zəncir və iki ağır zəncir zəncirlərarası disulfid bağları ilə birlikdə tutulur.

2) Zəncirdaxili: Polipeptid zəncirlərinin hər birində zəncirdaxili disulfid bağları da mövcuddur.

C. Dəyişən (V) və Sabit (C) bölgələri:

Həm H zənciri, həm də L zənciri amin turşusu ardıcıllığının dəyişkənliyinə görə iki bölgəyə bölünə bilər.

1) Yüngül Zəncir: Dəyişən bölgə, VL (110 amin turşusu) və sabit bölgə, CL (110 amin turşusu)

2) Ağır Zəncir: Dəyişən bölgə, VH (110 amin turşusu) və sabit bölgə, CH (330-440 amin turşusu).

Antikor (Ig) ağır və yüngül zəncirlərin V bölgəsi, başqa sözlə Fab- fraqmentinin bir hissəsi vasitəsilə antigenlə birləşir. Fc – fraqmenti bioloji fəaliyyətlərə cavabdehdir.

Antikor molekulunun qollarının ‘Y’ meydana gətirdiyi bölgəyə menteşə bölgəsi deyilir, çünki bu nöqtədə molekulda bir qədər elastiklik var.

Ig molekulu hər birində zəncirdaxili disulfid bağı olan qlobulyar bölgələrə bükülür. Bu bölgələrə domenlər deyilir.

1) Yüngül zəncir domenləri – VL və CL

F. Oliqosakaridlər:

Karbohidratlar C-yə bağlanırH2 əksər immunoqlobulinlərdə domen.

Dəyişən bölgənin strukturu:

A. Hiperdəyişən bölgələr (HVR) və ya Tamamlayıcılığı təyin edən bölgələr (CDR):

Ig’s-in dəyişən bölgələrinin amin turşusu ardıcıllığının müqayisəsi göstərir ki, dəyişkənliyin əksəriyyəti hiperdəyişən bölgə və ya tamamlayıcılığı təyin edən bölgələr adlanan üç bölgədə (HVRI1, HVRI2, HVRI3) yerləşir.

B. Çərçivə iş bölgələri (FR):

Dəyişən bölgələrdə CDR’s arasındakı bölgələr çərçivə iş bölgələri adlanır (FR1, FR2, FR3, FR4).

2. İmmunoqlobulin sinifləri və alt sinifləri:

Igs insanlarda beş müxtəlif sinifə bölünə bilər, yəni IgA, IgD, IgE, IgG və IgM (Cədvəl 10.2). Bu IgA, IgD, IgE və IgG arasında H əsas quruluşlu monomerlər kimi meydana çıxır.2L2 yəni iki ağır və iki yüngül polipeptid zənciri. Serum IgA dimerik (H2L2)2 və oliqomerik (H2L2)n formaları.

IgA əsasən sekresiya komponentinə və polipeptid zəncirinə, J-zəncirinə (J=birləşmə) bağlı olan dimmer kimi baş verir. Serumda IgM monomerlərin disulfid körpüləri və J-zəncirləri ilə bir-birinə bağlandığı pentamer (H2L2)S şəklində baş verir. Ig-lərin təsnifatı ilk növbədə H-zəncirinin və L-zəncirinin təbiətinə əsaslanır (Cədvəl 10.2).

Ig sinifləri ağır zəncirlərin sabit bölgələrində amin turşusu ardıcıllığında kiçik fərqlərə əsaslanaraq alt və aşağı siniflərə bölünə bilər. IgG dörd alt sinifdən ibarətdir, yəni IgGl (y-1 H-zəncir, serumda 60-70%), IgG2 (y-2 H-zəncir, zərdabda 14-20%), IgG3 (y-3 H-zəncir). , serumda 4-8%) və IgG4 (y- 4 H-zənciri, serumda 2-6%). Bunlar arasında IgG4 bəzi hallarda allergik reaksiyanı sürətləndirmək üçün mast hüceyrələrinə bağlana bilər.

IgA iki alt sinifdən, yəni IgAl (α-1 H-zəncir) və IgA2 (α-2 H-zəncir) ibarətdir. IgE, allergik reaksiyaların sürətləndirilməsində iştirak edir, baxmayaraq ki, onların serumdakı konsentrasiyası normal olaraq çox aşağıdır (ümumi İg-nin 0,001%). Allergik xəstəliklərdən əziyyət çəkən xəstələrin zərdabında yüksək IgE səviyyəsi aşkar edilir. Bazofil leykositlər və mast hüceyrələri kimi bəzi hüceyrələr IgE-nin Fc fraqmenti üçün reseptorlara malikdirlər.


İmmunoqlobulin Fab fraqmentlərinin sintezi: Fab haqqında haradan öyrənə bilərəm? - Biologiya

Antikorun Fc hissəsini dəyişdirməklə yanaşı, immunoqlobulinin dəyişən bölgəsi Fab, F(ab) kimi müxtəlif fraqmentlərə yenidən formatlaşdırıla bilər.2, scFv, VHH və minicisimlər, və ya bispesifik antikor yaratmaq üçün ikinci spesifikliklə birləşdirilə bilər. Daha kiçik antikor formatları şiş/toxuma nüfuzunu yaxşılaşdırmaq və məməli olmayan sistemlərdə nisbi ifadə asanlığı üçün istifadə edilə bilər.

Biz anticisimləri və antikor fraqmentlərini faktiki olaraq istənilən formatda yenidən dizayn edə bilərik, bəziləri aşağıda göstərilmişdir. İstehsal edildikdən sonra antikorlar ELISA, Biacore istifadə edərək yaxınlığın təyini və ya müvafiq bioloji analiz kimi geniş təhlillər dəstindən istifadə etməklə xarakterizə edilə bilər.

F(ab)'2 Fc hissəsi olmadan IgG-nin bivalent bağlanmasını saxlayır, əks halda Fcy reseptorları ilə qarşılıqlı əlaqəsi vasitəsilə effektor funksiyalarının cəlb edilməsində iştirak edə bilər.

Fablar bütöv bir IgG ölçüsünün təxminən üçdə birini təşkil edir və monovalentdir. Bu kiçik fraqment toxumalara nüfuz etməyi və dövriyyədən daha sürətli klirensi yaxşılaşdırıb və eynilə Fcy reseptoru ilə əlaqəli effektor funksiyalarının olmamasından faydalana bilər. Fablar məməli olmayan sistemlərdə asanlıqla ifadə edilə bilər.

scFv, ağır və yüngül zəncirlərin dəyişən domenlərini bütöv bir IgG ölçüsünün təxminən beşdə biri olan tək zəncirli molekula birləşdirməklə hazırlanmışdır. scFv müntəzəm olaraq fag nümayişi üçün istifadə olunur və xüsusi hədəfləmə üçün müxtəlif birləşmə zülalları ilə əlaqələndirilə bilər.

VHH yalnız ağır zəncirin dəyişən domenindən ibarətdir və bütün IgG ölçüsünün onda biri qədərdir. Təbii olaraq alpaka və lama kimi dəvələrdə, həmçinin köpək balıqlarında olan VHH yüksək sabitdir və digər zülallarla birləşməyə uyğundur və yalnız ağır zəncirli antikorlar yaratmaq üçün Fc domenləri ilə əlaqələndirilə bilər.

Bispesifik antikorlar

Bispesifik antikorlar iki antigenin eyni vaxtda bir konstruksiya ilə bağlanmasına imkan verən ayrı-ayrı antigenləri hədəf alan iki bağlayıcı domendən ibarətdir. Bu, effektor hüceyrəni hədəf hüceyrəyə yönləndirərkən xüsusilə faydalı ola bilər. Bispesifik antikorlar və ya antikor fraqmentləri müxtəlif müxtəlif formatlarda hazırlana bilər və tətbiqdən asılı olaraq tələblərinizə uyğunlaşdırıla bilər.

Yuxarıdakı nümunələr Abzenanın imkanlarının nümunəsini təqdim edir və biz anticisimləri və antikor fraqmentlərini faktiki olaraq istənilən formatda yenidən dizayn edə bilərik. İstehsal edildikdən sonra antikorlar geniş bağlama analizlərindən (məsələn, ELISA-dan istifadə etməklə), Biacore Səth Plazmon Rezonansından istifadə edərək yaxınlığın təyin edilməsindən və ya müvafiq bioloji analizdə istifadə etməklə xarakterizə edilə bilər.

Abzena ilə işləyirik

Məqsədlərin yerinə yetirilməsini və ya aşılmasını təmin etmək üçün Abzenanın xidmətləri hər bir layihə üçün uyğunlaşdırılmışdır. Təcrübəli layihə qrupları hər bir araşdırmaya təyin olunur və ən az vaxt ərzində layihələrin irəliləyişinə diqqət yetirir. Müştərilərimiz bizi geniş şəkildə keyfiyyətli nəticələr verən peşəkar və diqqətli tərəfdaşlar kimi qəbul edirlər.

Əlavə məlumat, qiymət təklifi və ya telekonfrans təyin etmək üçün bizimlə əlaqə saxlayın.


Mühəndislərin sitoplazmasında aktiv həll olunan antigen bağlayan fraqmentin (Fab) və GFP birləşdirilmiş Fab-ın ifadəsi Escherichia coli

Sitoplazmik məkanda rekombinant antikor fraqmentlərinin ifadəsi Escherichia coli və belə antikorların strukturunu və fəaliyyətini bərpa etmək üçün refolding prosesi effektiv deyil. Burada miroestrol və deoksimiroestrola (MD-Fab) qarşı fraqment antigen bağlayan (Fab) antikorlar və onların yaşıl flüoresan zülal (GFP) ilə birləşmələri ifadə edilmişdir. Reaktiv MD-Fablar SHuffle® T7-nin sitoplazmasında həll olunan və aktiv formalar kimi uğurla ifadə edildi. E. coli gərginlik. Təkcə MD-Fab konstruksiyasına gəlincə, VH–CH1 V ilə əlaqələndirilə bilərL–CL oksidləşdirici sitoplazmada Fab-a daxil olur E. coli gərginlik və əlavə in vitro refolding tələb olunmadı. GFP ilə birləşmələr vəziyyətində, V-nin C-terminalı olduqdaH–CH1 GFP-nin N-terminusu ilə əlaqələndirildi, MD-Fab bağlama reaktivliyi saxlanıldı, lakin GFP-nin flüoresan aktivliyi müdaxilə etdi. GFP-nin C-terminusu V-nin N-terminusu ilə əlaqələndirildikdəL–CL, MD-Fab-ın bağlanma fəaliyyəti müşahidə edilməmişdir. Qurulmuş MD-Fablar, valideyn monoklonal antikor klonu 12G11 ilə müqayisədə deoksimiroestrola qarşı daha yüksək spesifikliyə malik idi. Yekun olaraq, MD-Fabs SHuffle® T7 istifadə edərək ifadə edilə bilər E. coli hüceyrələr. Bu proses immunoassay üsulları üçün antikor fraqmentləri istehsal etmək üçün iqtisadi, məhsuldar və effektiv üsul hesab edilə bilər.


İmmunoqlobulin sinifləri

Ağır zəncirin sabit bölgələrində unikal amin turşusu ardıcıllığının olması ilə müəyyən edilən IgG, IgA, IgM, IgE və IgD immunoqlobulinlərinin 5 sinfi var. Bu immunoqlobulin siniflərinin əsas struktur xüsusiyyətləri burada qısaca müzakirə olunur. Beş əsas immunoqlobulin sinfinin ümumi quruluşu (antikorlar)
(Şəkil mənbəyi: Kubay İmmunologiya)

İmmunoqlobulin G (IgG)

IgG molekulu iki γ ağır zəncirdən və iki κ və ya iki λ yüngül zəncirdən ibarətdir. İnsanda IgG-nin γ -zəncir ardıcıllığındaki fərqlərlə fərqlənən və onların azalan orta zərdab konsentrasiyalarına görə nömrələnən dörd insan IgG alt sinfi var: IgG1, IgG2, IgG3 və IgG4. İmmunoqlobulin G (IgG) və onun funksiyası haqqında daha çox məlumatı burada tapa bilərsiniz.

İmmunoqlobulin A (IgA)

IgA molekulu iki α ağır zəncirdən və iki κ və ya iki λ yüngül zəncirdən ibarətdir.

IgA ilk növbədə serumda monomer kimi mövcuddur, lakin xarici ifrazatlarda o (sekretor IgA) J-zəncirli polipeptidlə bağlanmış dimer və ya tetramer kimi mövcuddur. Burada immunoqlobulin A və onun funksiyası haqqında daha çox məlumat əldə edin.

İmmunoqlobulin M (IgM)

IgM molekulu iki μ ağır zəncirdən və iki κ və ya iki λ yüngül zəncirdən ibarətdir. IgM "əlavə" ağır zəncir sabit sahəsinə və μ-zəncirində menteşə bölgəsinin olmamasına malikdir.

IgM-in iki forması var monomerik IgM (B hüceyrələrində membrana bağlanır) və pentamerik IgM (plazma hüceyrələri tərəfindən ifraz olunur). Pentamerik IgM-də beş monomer vahidi karboksil terminal ağır zəncir domenlərini (Cμ4/Cμ4) və onların (Cμ3/Cμ3) domenlərini J (birləşmə) zənciri adlanan Fc ilə əlaqəli polipeptidlə birləşdirən disulfid bağları ilə bir yerdə saxlanılır. . Burada immunoqlobulin M (IgM) və onun funksiyaları haqqında daha çox məlumat əldə edin.

İmmunoqlobulin E (IgE)

IgE molekulu iki ε ağır zəncirdən və iki κ və ya iki λ yüngül zəncirdən ibarətdir. IgE-nin "əlavə" ağır zəncir sabit sahəsi və ε-zəncirində menteşə bölgəsinin olmaması var. İmmunoqlobulin E (IgE) dərhal hiperhəssaslıq reaksiyalarında vasitəçilik rolu ilə məşhurdur. IgE haqqında daha çox məlumat daha sonra başqa bir blog yazısında dərc olunacaq.

İmmunoqlobulin D (IgD)

IgD molekulu iki δ ağır zəncirdən və iki κ və ya iki λ yüngül zəncirdən ibarətdir. IgD adətən yetkin B hüceyrələrinin səthində IgM ilə birlikdə ifadə olunur.


İmmunoqlobulin Fab fraqmentlərinin sintezi: Fab haqqında haradan öyrənə bilərəm? - Biologiya

Burada antikor strukturunun və müxtəlif antikor fraqmentlərinin ətraflı təsvirini təqdim edirik. Biz antikorların əsas tətbiqlərini, eləcə də tam ölçülü antikorların fraqmentlərə qarşı istifadəsinin üstünlüklərini və mənfi cəhətlərini müzakirə edirik. Daha sonra antikor fraqmentlərindən istifadə edilən tədqiqatların icmalı və Fc reseptorları adlanan antikor reseptorlarının müzakirəsini təqdim edirik.

Antikorlar xarici antigen molekullara (immunogenlərə) cavab olaraq plazma hüceyrələri (B hüceyrələri) tərəfindən istehsal olunan immunoqlobulin (Ig) qlikoproteinləridir. Antikorların əsas funksiyası bu xarici antigenlərə xüsusi olaraq bağlanaraq onları sıradan çıxarmaq və/və ya immun sistemi tərəfindən məhv edilmək üçün işarələmək və bununla da ev sahibini infeksiyadan qorumaqdır. Antikorların bir neçə sinfi var. Bu xülasənin birinci hissəsi çoxlu tədqiqat, diaqnostik və terapevtik biotibbi tətbiqlərdə intensiv şəkildə istifadə olunan adi tam ölçülü antikorlara, IgG və IgM sinif antikorlarına yönəlmişdir.

Adi bir antikorun əsas vahidi iki eyni ağır zəncirdən və disulfid bağları ilə birlikdə tutulan iki eyni yüngül zəncirdən ibarət dörd polipeptid vahididir. Yüngül zəncirlər daha qısadır, ağır zəncirlərdən daha az molekulyar çəkiyə malikdir. Antikorun ümumi forması Y-nin mərkəzində çevik menteşə (domenlararası) bölgəsi ilə Y-dir. Domenlərarası menteşə bölgəsinin çevikliyi antikorun bivalent bağlanması üçün vacibdir [2], iki bağlama cibinə imkan verir. dəyişkən məsafələrdə antigenik saytlarla qarşılıqlı əlaqədə olmaq. Hər bir polipeptid zənciri antikorlar arasında əhəmiyyətli dərəcədə fərqlənməyən sabit bir bölgəyə və hər bir xüsusi antikora xas olan dəyişən bir bölgəyə malikdir. Yüngül zəncir dəyişkən bölgəsi üçün ümumi qeyd V-dirL yüngül zəncir üçün sabit bölgə C-dirL (Şəkil 1). Qeyd ağır zəncir dəyişəni (VH) və sabit bölgələr (CH) ilə CH1, CH2 və CH3 ağır zəncirin müxtəlif sabit bölgə sahələrini ifadə edir. Karbohidratlar adətən C-yə bağlanırHAğır zəncirlərin 2 domeni. Parçanın kristallaşan (Fc) bölgəsi ağır zəncirlərdən (CH), lakin fraqment antigen bağlayan bölgə (Fab) həm sabit domen, həm də həm ağır, həm də yüngül zəncirlərin (VH və C) dəyişkən domenlərini ehtiva edir.L). Fraqment dəyişən bölgəsiV regionda yalnız iki dəyişən domen var (Şəkil 1). İmmunoqlobulin izotipləri, alt sinifləri və immunoqlobulin domenlərinin sayı haqqında müzakirə üçün siçan antikoruna baxın.

Hər tam antikorun F-də yerləşən iki antigen bağlayan cibləri varV bölgələrdə olur və iki antigenə bağlana bilir (bivalent bağlanma). Bununla belə, əgər iki antigen çox yaxındırsa (≤3 nm) və ya çox uzaqdırsa (≥29nm), antikor yalnız bir antigenə (monovalent bağlanma) bağlana bilər [2]. Kd dəyərlərində 1500 dəfə dəyişikliklə monovalent və bivalent bağlanmalar arasında əhəmiyyətli yaxınlıq dəyişikliyi var [2].

Xüsusi antikorların strukturu Struktur Antikor Verilənlər Bazasından (SAbDab), ictimaiyyətə açıq olan antikor strukturlarının seçilmiş verilənlər bazasından, həmçinin Zülal Məlumat Bankından (PDB) həftəlik yenilənən struktur modelləşdirmə alətlərindən əldə edilə bilər [3].

Konvensional tam ölçülü antikorlar onilliklər ərzində Western blot analizləri [4], immunohistokimya [5] və fermentlə əlaqəli immunosorbent analizləri (ELISA) [6] vasitəsilə zülalların aşkarlanması üçün tədqiqatlarda istifadə edilmişdir. Tam ölçülü antikorlar, həmçinin hamiləlik testləri və qanda bakteriya və virusların aşkarlanması kimi diaqnostik tətbiqlər üçün, məsələn, HİV-i aşkar edən ELISA kimi işlənib hazırlanmışdır. Bundan əlavə, adi tam ölçülü antikorlar adətən xəstəlik müalicəsində istifadə olunur. Məsələn, Infliximab şiş nekroz faktoru alfa (TNFα) tanıyan bir çox mövcud antikorlardan biridir və o, Crohn xəstəliyi və romatoid artritin müalicəsində istifadə olunur [7, 8]. Trastuzumab və ya Herceptin, epidermal böyümə faktoru 2 reseptoruna bağlanan və metastatik döş xərçənginin müalicəsində istifadə olunan bir antikordur [9]. Alloqreftin rədd edilməsinin qarşısını almaq üçün transplant resipiyentlərinə verilən Muromonab [10] da daxil olmaqla bir neçə antikor əsaslı müalicələr də mövcuddur.

Adi tam ölçülü antikorların hər ikisi terapevtik tətbiqlər üçün istifadə oluna bilsə də, tam antikordan istifadənin üstünlükləri və mənfi cəhətləri var. Ənənəvi antikorların mühüm üstünlüyü, Fc bölgəsinin bədənin immun reaksiyasına girməsi və məhv olmaq üçün bağlı antigenləri hədəfə almasıdır. Bu Fc bölgəsi bəzi klinik tətbiqlərdə də çatışmazlıq ola bilər, çünki onun adətən ortaya çıxardığı immun reaksiya xəstənin sağlamlığına zərər verə bilər. Bundan əlavə, tam ölçülü antikorlar nisbətən böyük ölçülərinə görə müəyyən toxumalara yaxşı nüfuz edə bilmirlər [11]. Bəzi hallarda, diaqnostik proqramlar üçün tam ölçülü antikorlardan istifadə edərkən Fc domeni aşkarlama tətbiqlərini zəiflədə bilən əhəmiyyətli qeyri-spesifik bağlanmaya səbəb ola bilər.

Bir çox tətbiq üçün antikor fraqmentlərinə üstünlük verilir. Antikor fraqmentləri kimyəvi və ya genetik mexanizmlər vasitəsilə istehsal edilə bilər. Kimyəvi parçalanma, menteşə bölgəsindəki disulfid bağlarını qırmaq və pepsin, papain və ficin daxil olmaqla proteazlarla antikorun həzm edilməsi üçün reduksiyaedici maddələrdən istifadə edir. Fraqmentlərin genetik quruluşu hər biri özünəməxsus bağlanma və funksional xüsusiyyətlərə malik çoxlu fraqment tərkibli molekullar yaratmaq imkanı təklif edir.

Tam ölçülü IgG və ya IgM antikorlarının kimyəvi və proteaz həzmi yalnız ağır zəncir CH2 və CH3 domenlərindən ibarət olan antigen bağlayan fraqmentlər (Fab Şəkil 1) və Fc fraqmentləri verir. Antikor fraqmentlərinin yaradılmasının biokimyəvi üsulları diaqnostik və terapevtik tətbiqlər üçün faydalı alətlər istehsal edir, lakin bu, olduqca zəhmətlidir və çoxlu miqdarda antikor başlanğıc materialı tələb edir.

Biyokimyəvi həzm nəticəsində yaranan antigen bağlayan fraqmentlərə Fab, (Fab'2), Fab'' və F daxildir.V, bunların hamısında Fc bölgəsi yoxdur. Monovalent F(ab) fraqmentlərində bir antigen bağlayan yer var, ikivalent (Fab')2 fraqmentləri isə disulfid bağları ilə bağlanmış iki antigen bağlayan bölgəyə malikdir. Tam ölçülü antikor papain fermenti ilə həzm edildikdə iki fərdi F(ab) fraqmenti əmələ gəlir. Menteşe bölgəsinin bir hissəsini saxlayan F(ab')2 fraqmenti IgG və ya IgM antikorlarının pepsin həzm edilməsi ilə istehsal olunur. F(ab')2 fraqmentlərinin reduksiyası digər molekullarla birləşmə üçün faydalı olan sərbəst sulfhidril qrupuna malik olan 2 monovalent Fab' fraqmenti əmələ gətirir. FV fraqmentlər IgG və IgM sinif antikorlarının enzimatik parçalanmasından hazırlanmış ən kiçik fraqmentdir (Şəkil 1). FV fraqmentlərin antigen bağlayan yeri VH və VL bölgələr, lakin Fabın daimi bölgələri yoxdur (CH1 və CL) bölgələr (Şəkil 1, sağ panel). VH və VL F-də birlikdə saxlanılırV qeyri-kovalent qarşılıqlı təsirlə fraqmentlər. Fraqmentlər kommersiyada mövcud olan dəstlər vasitəsilə yaradıla bilər, məsələn, G-Biosciences-dən F(ab')2 Fragmentation Kit [12].

Genetik mühəndislik üsulları tək zəncirli dəyişən fraqmentlərin (scFv) istehsalına imkan verir, bunlar FV V-dən ibarət olan fraqmentləri yazınH və VL dizayn edilmiş çevik bağlayıcı peptidlə bağlanmış domenlər (Şəkil 1) [13]. V-domenlərinin oriyentasiyasının və bağlayıcı uzunluğunun manipulyasiyası F-nin müxtəlif formalarını yaradırV molekullar [14]. Bağlayıcı ən azı 12 qalıq uzunluğunda olduqda, scFv fraqmentləri ilk növbədə monomerdir (Şəkil 1-də göstərildiyi kimi) [14]. 3-11 qalıq olan bağlayıcılar funksional F-yə qatlana bilməyən scFv molekulları verir.V domen. Bu molekullar ikinci scFv molekulu ilə birləşərək bivalent diacisim yaradır [15]. Bağlayıcının uzunluğu üç qalıqdan azdırsa, scFv molekulları triabodilərə və ya tetrabodilərə birləşir [14]. Məsələn, Tao Y və digərləri qısa bir GGGGS bağlayıcısı olan VH-VL diabody və uzun GTTAASGSSGGSSSGA bağlayıcı ilə scFv yaratdılar [16]. Çoxvalentli scFv-lər daha iki hədəf antigen bağlayan yerə malik olması nəticəsində hədəf antigenlərinə daha çox funksional bağlanma yaxınlığına malikdirlər ki, bu da antikor fraqmentinin kənarlaşma sürətini azaldır [17]. Minicisimlər scFv-C-dirHBivalent dimerlərə birləşən 3 füzyon zülalları [18]. Eyni zamanda iki fərqli epitopu bağlaya bilən bispesifik bis-scFv fraqmentləri istehsal etmək üçün iki fərqli dəyişən domenə malik kiçik scFv fraqmentləri yaradıla bilər [19]. Bispesifik Fab dimerləri yaratmaq üçün genetik üsullardan da istifadə olunur (Fab2) və trispesifik Fab trimerləri (Fab3) [19]. Bu antikor fraqmentləri eyni vaxtda müvafiq olaraq 2 və ya 3 müxtəlif antigeni bağlamağa qadirdir. Tədqiqatçılar zülal strukturu tədqiqatlarında zülal komplekslərini sabitləşdirmək üçün tez-tez scFv fraqmentlərindən istifadə edirlər [20].

Ənənəvi antikorlara əlavə olaraq, dəvə balığı və köpəkbalığı (squalidae) növləri, yalnız yüngül zəncirləri olmayan ağır zəncirli homodimerlərdən ibarət olan özünəməxsus Ağır Zəncirli Antikorların (hcAb) alt dəstini ehtiva edir [21, 22]. Dəvələrdə VHH və köpək balıqlarında VNAR adlanan bu antikorların Fab hissələri təbii olaraq tapılan ən kiçik antigen bağlayan bölgələrdir [23]. Nanobodilər antigenləri bağlaya bilən VHH-dən əldə edilən rekombinant domenlərdir, tez-tez betakoronarivus S zülallarına [24] və ya SARS-CoV-2 sünbüllü protein RBD domeninə [25] qarşı olanlar kimi VHH faq kitabxanalarından klonlanır. Onların bağlanma termodinamikası və strukturları tədqiq edilmişdir ( [26] və orada istinad). Nanobodies çox sabitdir və bakteriyalar kimi ümumi sadə protein ifadə sistemlərindən istifadə etməklə asanlıqla böyük miqdarda istehsal edilə bilər (funksional şərti tam ölçülü antikorları bakterial sistemdə düzgün şəkildə ifadə etmək çətindir), beləliklə tədqiqat və terapevtik məqsədlər üçün perspektivli bir vasitədir. , xüsusilə super rezolyusiyaya malik mikroskopiya, kütləvi spektrometriya və hədəflənmiş protein deqradasiyası sahələrində [27]. Nanobodiyalar həmçinin peptidlərlə birləşərək [28, 29] və ya in vivo [30] vasitəsilə canlı hüceyrələrə çatdırıla və ya birbaşa in vivo olaraq ifadə oluna və in vivo hədəflərini tanıya bilər. RFP və ya GFP-yə qarşı nanobodies, uzaq qırmızı Atto boyaları ilə birləşdirildikdə, GFP və ya RFP üzərində flüoresan siqnalların 118 qat böyüdülməsinə nail oldu və bütün bədən siçan neyron bağlantısı yaratmaq üçün istifadə edildi [31]. Onlar həmçinin struktur tədqiqatlarda zülalların aktiv vəziyyətini sabitləşdirmək üçün istifadə edilmişdir [32]. Müxtəlif qrip ştammlarına qarşı çoxlu birləşdirilmiş nanobodiləri olan ifadə sistemi universal qrip peyvəndi yaratmaq üçün bir vasitə kimi araşdırılır [33]. Rekombinant anti-IgG ikincili nanobodies heyvanlar istifadə edərək istehsal olunan geniş istifadə olunan poliklonal ikincili antikorları əvəz etmək üçün böyük potensiala malikdir [34].

Nanobodies have the unique ability to cross the blood-brain barrier [35, 36] however, nanobodies tend to be processed and cleared very quickly from the body [37]. Nanobodies can be used for methods like immunoprecipitation, for example, RFP-Trap MA from Chromotek [38], or coupled to fluorescent proteins to track intracellular targets in live cells in real-time [39].

About 10% of bovine immunoglobulins contain an unusually long third heavy-chain complementarity-determining region (CDR 3H) with a large number of cysteine residues [40-42]. These cysteines pair to form disulfide bonds which leads to a stalk-and-knob like structure in the antigen binding domain [42]. This exceptionally long CDR3H domain with the long-stalk contributes to the diversity of bovine antibody specificity.

Intrabodies, or intracellular antibodies, refer to antibodies or their fragments (usually of scFv design) expressed directly inside cells or in animals in vivo through an expression vector. For example, Dong JX et al developed several nanobodies against neuronal proteins for intracellular expression as intrabodies [43]. One important consideration/caveat is the reducing intracellular environment which diminishes the affinity of an antibody or antibody fragment whose binding with the antigen is dependent on intradomain disulfide bonds. Another consideration is that intrabodies tend to aggregate. Kabayama H et al designed intrabodies with a net engative charge even at the lowest cytoplasmic pH 6.6 to generate ultra-stable cytoplasmic antibodies [44]. Intrabodies are used as alternatives to pharmacological inhibitors to target specific endocytic participants. For instances, expression of a single-chain variable fragment (scFv) derived from the 3B12A monoclonal antibody against the TDP-43 nuclear export signal in HEK293A cells or after in utero electroporation of its expression vector promoted the proteolysis of TDP-43 aggregates in cultured cells and embryonic mouse brain [45]. Virus-mediated delivery into the nervous system of an scFv antibody against the RNA recognition motif 1 of TDP-43 reduced microgliosis in a mouse model of acute neuroinflammation and mitigated cognitive impairment, motor defects, TDP-43 proteinopathy, and neuroinflammation in transgenic mice expressing TDP-43 mutations linked to amyotrophic lateral sclerosis [46]. The potential of intrabodies as a therapeutical modality remains to emerge.

An antibody fragment can also be linked with a cell-import tag, such as an IPTD tag [47], to facilitate its entry into cells.

Antibody fragments offer certain advantages over a full-size antibody for some applications. This topic was reviewed by Nelson [48]. One advantage of fragments over full-size antibodies is that antibody fragments are smaller than conventional antibodies and generally lack glycosylation, allowing their production in prokaryotic expression systems, which provide time and cost savings. Additionally, fragments are small enough to infiltrate into some tissues that full-size antibodies are unable to penetrate, which aids in many therapeutic and immunohistochemical procedures [11]. Furthermore, the lack of Fc domain is a substantial advantage for primary antibodies used in immunohistochemistry and other detection applications because they have greatly reduced non-specific binding to the Fc receptor. One scFv that is commonly used in diagnostics is the NC10 antibody against influenza neuraminidase. The MOC-31 antibody against epithelial cell adhesion molecule Ep-CAM is an scFv commonly used in as a cancer therapy. Diabodies, triabodies and tetrabodies have potential uses in applications such as radioimmunotherapy and diagnostic in vivo imaging [49]. However, fragments that lack the Fc domain are degraded in the body much more rapidly than conventional antibodies [50], and are unable to elicit Fc-mediated cytotoxic processes unless they are conjugated to an effector moiety [51], which requires further optimization for antibody fragment-based therapeutics.

Although various antibody fragments offer certain advantages, they are not commonly utilized in experiments. In the more than 60,000 articles manually curated by Labome only a few articles cited applications of antibody Fab fragments. The Roche anti-digoxigenin Fab antibody fragments ( 11093274910) and anti-fluorescein Fab antibody fragments ( 11426338910) are generated in sheep and produced through digestion with papain. Anti-digoxigenin Fab fragments were used for in situ hybridizations since the RNA probes are labeled with digoxigenin [52-54]. They were also used to perform protein folding analysis to study the process of single calmodulin molecule folding through single-molecule force spectroscopy [55]. F(ab) fragments of anti-mouse secondary antibodies are often used to block endogenous mouse Ig during immunostaining, for example, AffiniPure Fab fragment Donkey antimouse IgG from Biozol (JIM-715-007-003) [56].

B Shen et al performed whole mount staining of mouse half bones with Alexa Fluor 647-AffiniPure F(ab')2 fragment donkey anti-chicken IgY at 1:250, Alexa Fluor 488-AffiniPure F(ab')2 fragment donkey anti-rabbit IgG at 1:250, Alexa Fluor 488-AffiniPure F(ab')2 fragment donkey anti-rabbit IgG (at 1:250 (all from Jackson ImmunoResearch) [57]. Invitrogen Alexa Fluor 546-conjugated goat anti-rabbit IgG F(ab')2 fragment was used to perform immunohistochemistry to investigate the role of sFLT-1 in the maintenance of the avascular photoreceptor layer in mouse models [58] and Invitrogen Alexa Fluor 488 (Fab')2 fragment of rabbit anti-goat IgG (H+L) was used in immunohistochemistry to investigate the mechanism of tip link regeneration in auditory hair cells [59].

Fc receptors (FcRs) are molecules expressed primarily on/in innate immune cells, that recognize and bind the Fc domain of antibodies and thereby initiate a cell-based immune response. The diverse functions of FcRs reflect the wide range of protective or modulating roles of antibodies, including mediating the neutralization and clearance of targeted substrates, as well as the programming of adaptive immunity [60]. The biological functions of FcRs are regulated by immunoreceptor tyrosine-based activation motifs (ITAMs) and immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs (ITIMs), that act as the receptor’s interface with activating and inhibitory signaling pathways, respectively. Thus, signaling by ITAMs can elicit cell activation, phagocytosis and endocytosis, whereas signaling by ITIMs has an inhibitory effect on cell activation [61]. FcRs have been described for all classes of immunoglobulins and some of them are discussed below.

This family includes FcγRI, FcγRII, FcγRIII and their isoforms. They are responsible for antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) and antibody-dependent cell-mediated phagocytosis (ACDP) [60].

Another receptor that binds IgG is neonatal Fc receptor (FcRn), which is involved in the transfer of passive humoral immunity from a mother to her fetus. FcRn also protects IgG from degradation in vivo, explaining their long half-life in the serum [62]. This phenomenon has led to the development of better therapeutic antibodies by introducing alterations in the Fc region to promote the Fc-FcRn interaction.

They include the high-affinity FcεRI, which is capable of binding monomeric IgE, and the low-affinity C-type lectin FcεRII, which interacts preferentially with complex IgE. FcεRI mediates the immediate hypersensitivity response of many allergic reactions by stimulating degranulation and the release of a range of inflammatory mediators on mast cells and basophils [63]. FcεRII exists both in a membrane-bound form that delivers a downregulating signal for IgE synthesis [63], as well as soluble fragments that generate an opposing upregulation on IgE synthesis [64]. Its role in transcytosis of IgE-allergen complexes in human airway and the intestinal epithelium is actively being investigated as a potential target for allergic airway inflammation as a result of food allergies [65, 66].

The sole member of the IgA receptor group, FcαRI, is expressed only in cells of the myeloid lineage. It plays a role in both pro- and anti-inflammatory responses depending on the state of the IgA bound. While binding of secretory IgA (SIgA) present at mucosal sites has anti-inflammatory effects including prevention of pathogen invasion, binding of serum IgA leads to inflammatory responses. FcαRI also regulates neutrophil viability depending on the inflammatory microenvironment [67].

TRIM21 can be distinguished from other FcRs as it shows a broad antibody specificity. It can bind IgG, IgM and IgA [68-70]. It is also expressed by cells of most histogenic lineages [71]. TRIM21 participates in antibody-mediated interference of viral replication by targeting cytosolic virus-antibody complexes for proteasomal degradation.

Binding of Fc domains to FcRs can have undesired effects in monoclonal antibody-based analytical methods such as immunohistochemistry (IHC), fluorescence activated cell sorting (FACS) and chromatin immunoprecipitation (ChIP). Non-specific binding to FcRs may introduce background noise that can lead to detection of false positives. Solutions to deal with this problem include the use of (i) isotype controls for gating, (ii) serum to broadly compete for the receptors involved in non‐specific binding, or (iii) purified IgG to block Fc receptors specifically [72]. Innovex Fc Receptor blocker #NB309 can be used to block paraffin or frozen sections during IHC or IC experiments [73] or BD Biosciences #553142 [73, 74], Miltenyi Biotec Fc receptor block [75, 76] for flow cytometry. For example, Chopra S et al blocked FcγR binding with 5 μg/ml TruStain fcX (anti-mouse CD16/32, clone 93) from BioLegend during flow cytometry and cell sorting [77].

Dr. Macarena Fritz Kelly from São José dos Campos, SP, Brazil, contributed the section about Fc receptors in September, 2018.


Videoya baxın: معلومة عالطاير . المقاومة وتحديد الواط المناسب للفيب (BiləR 2022).