Məlumat

Genotip -/- vs delta/delta

Genotip -/- vs delta/delta


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

https://doi.org/10.1016/j.neuron.2018.07.033-də Pan et al. funksional TMC1 geni olmayan siçan ştammını təsvir etmək üçün TMC1^delta/delta təyinatından istifadə edin. Bu kontekstdə delta/delta yuxarı işarəsi ilə -/- yuxarı işarəsi arasında fərq varsa necə?


Delta a aiddir mutant allel, bu halda sistein nöqtəsi mutantıdır. -/- homozigotlara aiddir sıfır allel, bu halda nokaut.


Arasındakı əlaqənin araşdırılması TMPRSS6 döş xərçəngində gen ifadəsi, genetik variantlar və klinik tapıntılar

Döş xərçəngi bütün dünyada qadınlar arasında ən çox yayılmış xərçəng növlərindən biridir. The TMPRSS6 (Transmembrane Serine Protease 6) geni, hepcidin tənzimləyicisi kimi dəmir hemostazında mühüm rol oynayan və döş xərçənginə həssaslıqda rol oynaya bilən matriptaza-2-ni kodlayır. Bu işdə ifadə səviyyələrini araşdırdıq TMPRSS6 döş xərçəngi xəstələrinin sağlam toxumalarında və şiş toxumalarında gen və bu səviyyələrlə patoloji tapıntılar arasındakı əlaqə. Arasındakı əlaqə TMPRSS6 polimorfizmlər (rs733655, rs5756506, rs2413450, rs855791, rs2235324, rs4820268) və xəstələrin hematoloji parametrləri. Gen ifadəsi tədqiqatı 47 döş xərçəngi xəstəsini, gen polimorfizmi araşdırması isə 181 döş xərçəngi xəstəsi və 100 sağlam nəzarətdən ibarət idi. Gen ifadə analizi qRT-PCR ilə aparılmışdır. Genotiplənməsi TMPRSS6 polimorfizmlər RT-PCR ilə həyata keçirilmişdir. TMPRSS6 şiş toxumalarında gen ifadə səviyyələrinin nəzarət toxumalarındakı ifadə səviyyələrindən 1,88 dəfə yüksək olduğu aşkar edilmişdir. arasındakı əlaqəni araşdırdıq TMPRSS6 gen ifadə səviyyələri və patoloji məlumatlar, xəstənin estrogen reseptoru (ER) və HER2 tapıntıları arasında statistik əhəmiyyətli əlaqə tapıldı və TMPRSS6 gen ifadəsi (müvafiq olaraq p = 0,02, p = 0,002). Aralarında əlaqə olduqda TMPRSS6 gen polimorfizmləri ilə bağlı genotiplərin paylanması və hematoloji tapıntılar araşdırılmış, orta korpuskulyar hemoglobin konsentrasiyası (MCHC) parametri ilə yalnız rs733655-in polimorfizmi arasında əhəmiyyətli əlaqə müəyyən edilmişdir. Tədqiqatlarımıza görə, artım TMPRSS6 xərçəngli toxumalarda gen ifadəsi matriptaz-2-nin xərçəng prosesində təsirli ola biləcəyini göstərir. Beləliklə TMPRSS6 gen polimorfizmləri xəstələrin qan parametrlərinə təsir edərək xəstəlik prosesinə təsir göstərə bilər.


Fon

Hepatit delta virusu (HDV) mənfi zəncirli genomlu kiçik qüsurlu RNT virusudur. Virion birləşməsini və ifrazını tamamlamaq üçün zərf zülallarını (HBsAgs) təmin etmək üçün köməkçi virus olan hepatit B virusunu (HBV) tələb edir [1-3]. HDV genomu təqribən 1700 nukleotid uzunluğundadır və dairəvi formadadır, yüksək dərəcədə molekuldaxili tamamlayıcı əsas cütləşməsi səbəbindən budaqlanmamış çubuqvari bir quruluş meydana gətirir [4,5]. HDV-nin genom ardıcıllığı viroidə bənzər ardıcıllığa və zülal kodlaşdırma ardıcıllığına bölünür [1,6]. HDV-nin viroid ardıcıllığı ilə DIPA (delta qarşılıqlı zülal) zülalını kodlayan hüceyrə mRNT arasında RNT rekombinasiyası nəticəsində yarandığı fərz edilmişdir [6,7]. Dünyanın hər yerindən HDV ardıcıllığının təhlili Afrikadan olanların ən yüksək müxtəlifliyə malik olduğunu ortaya qoydu, bu da ilk HDV-nin Afrikada yarana biləcəyini göstərir [8,9]. Afrikadan yeni HDV sekanslarının əlavə təcridindən sonra HDV-nin təsnifatı I-III genotiplər daxil olmaqla birindən 1-dən 8-ə qədər olan kladalara dəyişdirildi [8].

Son üç onillikdə intensiv molekulyar biologiya tədqiqatları HDV ilə kodlanmış zülalların replikasiyada funksiyalarını və rollarını böyük ölçüdə ortaya qoydu. HDV replikasiyası zamanı kodlaşdırma ardıcıllığı iki delta antigeninə (HDAg), kiçik və böyük formada (SDAg və LDAg) çevrilir, eyni oxu çərçivəsindən bunlar müvafiq olaraq 195 və 214 amin turşusudur [10,11] . LDAg istehsalı hüceyrə ADAR [12,13] tərəfindən həyata keçirilən RNT redaktəsi kimi tanınan bir proses vasitəsilə həyata keçirilir, bu, SDAg-nin kəhrəba dayanma kodonunu (UAG) triptofan kodonuna (UGG) çevirir və nəticədə əlavə 19 və ya 20 amin LDAg-ın C-terminalındakı turşular [14]. SDAg HDV replikasiyası üçün vacibdir, LDAg isə SDAg funksiyasını antaqonlaşdırır və virion yığılması və yetişməsi zamanı HBsAg ilə qarşılıqlı əlaqədə olmaq tələb olunur [15,16]. LDAg-ın C-terminusunda siqnal kimi çıxış edən CaaX-qutusu ( müxtəlif HDV genotiplərində 211 CRPQ 214 , 211 CTPQ 214 və 211 CTQQ 214, Şəkil ​ Şəkil 1A) 1A ) var. izoprenilləşmə. LDAg-nin izoprenilasiya siqnalının mutasiyası virion yığılmasının və ifrazının pozulmasına gətirib çıxarır [17-19].

HDV-nin LDAg amin turşusu ardıcıllığının və LDAg-ın 13-aminturşu peptidini kodlayan sintetik oliqonukleotidlərin xüsusiyyətləri. (A) Üç genotipdən LDAg-ın tam uzunluğunun amin turşusu (bir hərf simvollarında) uyğunlaşması. Genotip I Amerika ştamındandır (qoşulma nömrəsi <"tip":"entrez-nukleotid","attrs":<"text":"M28267","term_id":"602445","term_text":"M28267">> M28267), Tayvan-3 ştamından genotip II (qoşulma nömrəsi <"tip":"entrez-nukleotid","attrs":<"text":"U19598","term_id":"1480437","term_text":" U19598">> U19598) və Peru ştamından III genotip (qoşulma nömrəsi <"tip":"entrez-nukleotid","attrs":<"text":"L22063","term_id":"410182","term_text ":"L22063">> L22063). Güman edilən klatrin bağlama domenləri düzbucaqlı qutularla göstərilir və LDAg-nin son 19 və ya 20 amin turşusu qalın üz hərfləri ilə vurğulanır. Post-translational modifikasiya üçün konsensus amin turşuları aşağıdakı kimi göstərilmişdir: 72-ci amin turşusunda Ac (asetilləşmə), 2, 123 və 177 mövqelərində Pi (fosforlaşma) və 211-ci mövqedə Py (izoprenilləşmə). Amin turşusu mövqeləri rəqəmlərlə göstərilir. (B) İki tamamlayıcı oliqonukleotid LDAg-nin müvafiq qısa amin turşusu ardıcıllığının (oliqonükletidlərin üstündəki bir hərf simvollarında göstərildiyi kimi) ifadəsi üçün nəzərdə tutulmuşdur. Oliqonukleotidlərin 5' və 3' ucu məhdudlaşdırma yerlərini daxil etmək üçün nəzərdə tutulmuşdur. EkoRI və Salmən, müvafiq olaraq. Məhdudiyyət saytı dərhal yanındadır Salmən EkoTez klon seçiminə imkan vermək üçün xüsusi olaraq hazırlanmış RV.

İzoprenilasiya siqnal ardıcıllığına əlavə olaraq LDAg-ın C-terminusunda nüvə ixrac edən siqnal (NES) də müəyyən edilmişdir [20]. SDAg və LDAg-nin ümumi 195 amin turşusu ardıcıllığı daxilində iki ehtimal olunan lösin-fermuar motivi, bir RNT bağlama motivi və iki nüvə lokalizasiyası siqnalı müəyyən edilmişdir [21-24]. Həm SDAg, həm də LDAg fərqli dərəcədə modifikasiyaya malik fosfoprotienlərdir [25]. Onlar ya PKC [26], CKII [18,26], PKR [27] və ya ERK1/2 [28] tərəfindən fosforlaşdırıldıqdan sonra HDV replikasiyasına təsir edir və ya SC-35 ləkələrinə yönəldilir [18,26-28] . Həm HDAg-nin lizin-72-də asetilasiyası, həm də arginin-13-də SDAg-ın metilasiyası da HDV replikasiyasına təsir göstərdiyi nümayiş etdirilmişdir [29-31]. Bütün məlum HDV genotipləri arasında HDAg-nin bu post-translational sahələrinin mühafizəsi onu göstərir ki, HDAg-nin translasiyadan sonrakı modifikasiyalarına cavabdeh olan hüceyrə fermentləri HDV replikasiyasında iştirak etməsələr də, ən azı qismən iştirak edirlər.

HDV-nin HBV ilə birgə infeksiyası və super-infeksiyası adətən tək HBV infeksiyasından daha ağır qaraciyər xəstəliyinə səbəb olur [32]. Müxtəlif HDV genotipləri müxtəlif coğrafi paylamalar göstərir və müxtəlif xəstəlik nümunələri ilə əlaqələndirilir [7,33]. HDV genotip I bütün dünyada yayılmışdır və fulminant hepatitdən tutmuş asemptomatik xroniki qaraciyər xəstəliyinə qədər geniş spektrli xəstəliklərlə əlaqələndirilmişdir. Genotip II əsasən Asiyada, o cümlədən Yaponiya, Tayvan və Sibirdə rast gəlinir və görünür, genotip I ilə müqayisədə daha az ağır xəstəliyə səbəb olur. III genotip əsasən Cənubi Amerikanın şimal hissəsində rast gəlinir və fulminant hepatitin ağır formasını yaradır [ 33]. HDV patogenezinin mexanizmi HDV, HBV və/yaxud host faktorları arasında mürəkkəb qarşılıqlı təsirlərdən irəli gəlir və tam başa düşülmür.

Son iki tədqiqat göstərdi ki, HDV patogenezində SDAg deyil, LDAg əhəmiyyətli rol oynaya bilər [34,35]. Bir araşdırma LDAg-nin Smad-3-ə birbaşa bağlanmasını nümayiş etdirdi, bu da plazminogen aktivator inhibitoru-1 ifadəsini aktivləşdirmək üçün TGF-β siqnalını modullaşdırır və bu, qaraciyər sirrozuna gətirib çıxaran c-Jun-induksiya etdiyi siqnal kaskadlarını göstərir [35]. Digər tədqiqat LDAg-nin sitoplazmik formasının klatrin ağır zəncirinə (CHC) bağlandığını nümayiş etdirdi və daha sonra bu LDAg-CHC qarşılıqlı təsirinin HDV montajı üçün tələb olunduğunu irəli sürdü. Bundan əlavə, LDAg-CHC qarşılıqlı əlaqəsi klatrin vasitəçiliyi ilə əlaqəli endositoz və ekzositoza müdaxilə edir ki, bu da nəhayət hepatositlərin zədələnməsinə səbəb ola bilər [34]. Bununla belə, genotip I LDAg-də müəyyən edilmiş klatrin qutusu (199 LFPAD 203) genotip II və III-də eyni vəziyyətdə saxlanılmır (Şəkil ​ (Şəkil 1A). 1A). Bu tədqiqat LDAg-lərin üç əsas genotipində klatrin bağlayan aktivliyin qorunub saxlanmadığını yoxlamaq məqsədi ilə həyata keçirilmişdir.


Təsnifat

HDV Virusların Taksonomiyası üzrə Beynəlxalq Komitə (ICTV) tərəfindən onurğalıların yeni virus növü kimi tanınıb. Deltaviridae ailə, Deltavirus cins [17]. HDV struktur və replikasiya rejiminə görə fitopatogenlərə, viroidlərə və virusoidlərə olduqca oxşar olsa da, ayrı bir cinsə aid etmək üçün kifayət qədər fərqlidir. HDV adətən HBV-nin peyk virusu kimi təsnif edilir, çünki o, HBV olmadığı halda HDV-nin yoluxma qabiliyyətinə malik olmadığı bioloji prinsipinə əsaslanır [14, 18].


Müzakirə

Laboratoriyamızın son tədqiqatları 10,26,27 və digərləri 28,29, dəyişdirilmiş SGTA ifadəsini şiş hüceyrələrinin yayılması və / və ya xərçəng proqnozu ilə əlaqələndirdi. SGTA-nın hüceyrə dövrü və apoptozda 5,45,46 və onların düzgün qatlanmasını, bölmələrə bölünməsini və/və ya alverini təmin etmək üçün çoxsaylı protein müştərilərinin molekulyar birgə idarə olunmasında iştirak etdiyini nəzərə alsaq, bu təəccüblü deyil. Bu proseslərin hər biri, əgər qüsurlu olarsa, şişin əmələ gəlməsinə kömək etmək potensialına malikdir. Bir neçə xəstəlik hallarının patofizyologiyasındakı rolundan başqa 10,18,26,27,28,29,30,31, SGTA-nın normal fizioloji rolu haqqında çox az şey məlumdur.

In vitro, SGTA böyrək (NBE) 34 , uşaqlıq boynu xərçəngi (HeLa) 5 və prostat xərçəngi (C4-2B) 26 hüceyrələrində yıxılma pozulmuş mitoz səbəbiylə proliferasiyanı və canlılığı azaldır 5,34 , qüsurlu sitokinez 34 və xromosomların uyğunlaşdırılmasının uğursuz tamamlanması ilə əlaqədar olaraq. Buna və buna görə Sgta hər yerdə ifadə edilir və SGTA ilə geniş spektrli zülal qarşılıqlı əlaqəsi sənədləşdirilir 1, biz fərz etdik ki, Sgta həyat üçün həyati əhəmiyyət kəsb edəcəyini və siçanlarda ablasyonunun ölümcül olduğunu sübut edəcək. Əksinə, biz burada bunun həyat qabiliyyətli olduğunu nümayiş etdirdik Sgta −/− heyvanlar damazlıqdan əldə edilmişdir Sgta-qüsurlu siçanlar, konservləşdirilmiş SGTA orfoloqlarının nokautunda/aşağıda olduğu kimi 32,33-də C. elegans, D. melanogasterS. cerevisiae 14,15,33. Saylarının azalması tendensiyası müşahidə edirik Sgta −/− gözlənilən Mendel irsiyyəti ilə müqayisədə nəsil oxşar TPR tərkibli zülal, FKBP52 üçün mutantlarınkinə uyğundur (Fkbp4) 47,48. SGTA-nın quyruğa bağlanmış (TA) zülal daxil edilməsində iştirak etdiyinə dair əhəmiyyətli sübutlar nəzərə alınmaqla 16,22,49 və TA biogenezi erkən inkişaf üçün vacibdir və bu prosesi pozan genetik ablasyon embrion ölümcülliklə əlaqələndirilir 50,51, mümkündür ki, anormal TA protein emalı mutant heyvanların məhsuldarlığının azalmasına kömək edə bilər. Prenatal ölümün səbəbi qeyri-müəyyən olaraq qalır, lakin FKBP52 −/− vəziyyətində, genetik fon FKBP52 təsirinin nüfuz etməsinə kömək etdi. Yəni, C57BL/6J 47 və 129SvEv 48 fonlarında FKBP52 −/− siçanlarının müstəqil nəsli heterozigot cütləşmələrdən olan embrionların müvafiq olaraq 50% və 30%-də ölümcül nəticə verdi. Üstəlik, FKBP52-129SvEv mutantlarının C57BL/6 ştammına geri çevrilməsi ölümcülliyi demək olar ki, 100% 52 gücləndirdi, bu da mutant modelin əsas genetikasının təqdim olunan fenotipə təsir etdiyinə dair xəbərdarlığı vurğulayır. Daha aydın bir fenotip olsun Sgta −/− siçanların fərqli fon ştammında səciyyələndirilsəydi, müşahidə olunardı, hələ müəyyən edilməməlidir. FKBP52 −/− dən fərqli olaraq, oxşar zülalın silinməsi, FKBP51 (Fkbp5), erkən sağ qalmaya heç bir təsir göstərmədi və siçanlarda heç bir açıq-aydın dəyişdirilmiş fenotip aşkar etmədi 53 FKBP51 nokaut (C57BL/6J fon) FKPB52 silinməsi (129SvEv fon) ilə birlikdə erkən embrion həyatında tam ölümə səbəb oldu 54 . Bu, kooperativ idarəetmə sistemində artıqlığın mövcud olduğunu vurğulayır. Bu anlayışa uyğun olaraq, FKBP52 −/− kişilərdə normal testislər inkişaf etmiş, lakin penil hipospadias 53 nümayiş etdirilmişdir. Penisdə deyil, FKBP52 −/− testisdə FKBP51 mRNA və protein ifadəsinin artması testis disgenezinin aktiv şəkildə qarşısını ala bilər. Homoziqot kontekstində Sgta ablasyon, ola bilsin ki, strukturca oxşar TPR tərkibli zülal(lar) müdaxilə etsin və onun olmadığı halda SGTA rolunu yerinə yetirsin. Artıb Dnajc7 (TPR2) Yumurtalıqdakı mRNT bu məqsədə xidmət edə bilər, lakin 7 TPR tərkibli zülalın mRNT ifadəsi prostat, testis və süd vəzində dəyişməz qalmışdır. Zülal ifadəsində və/və ya TPR tərkibli zülal(lar)ın lokalizasiyasındakı dəyişikliklərin normal fiziologiyada SGTA itkisini kompensasiya edib-etməməsi əlavə araşdırmaya dəyər və bunun səbəbini yalnız yüngül Sgta-Cari tədqiqatda null fenotip müşahidə edilmişdir. Stressorun tətbiqi ilə daha açıq bir fenotip yarana bilər Sgta-null mutantlar, çünki ko-şaperonlar stressdən təsirlənmiş müştəri zülallarının optimal qatlanması/yenidən qatlanması və ticarəti üçün vacibdir 55 . SGTA ortoloqu üçün maya null, Çavuş-2, iki fərqli hüceyrə stressoru, yabanı tipli maya ilə müqayisədə maya canlılığını 15, böyümə və koloniya formalaşmasını 20 azaldıb. Bu, SGTA-nın müəyyən hüceyrə şəraitində vacib olduğunu daha da dəstəkləyir və ehtimal ki, bu şərtlər yarandıqda disfunksiyaların qarşısını almaq üçün onun itkisi kompensasiya edilir.

In Sgta-boş siçanlar, bədən çəkisi və uzunluğunda mütənasib azalmadan ibarət olan bədən ölçüsünün azalması müşahidə edilən ən açıq fenotipik dəyişiklik idi və homozigot mutantlarla məhdudlaşdı. Qeyri-adekvat qidalanma böyümə geriliyinə səbəb ola bilər Sgta −/− böyümə, xüsusən də çəki fərqləri tibb bacısından asılılığın azaldığı bir mərhələ ilə üst-üstə düşdü. Yem səmərəliliyi dəyişmədiyi üçün belə görünmür Sgta −/− siçanlar, istehlak edilən qidadan qida maddələrini udmaq və istifadə etmək qabiliyyətinə baxmayaraq, naməlum olaraq qalır. İstər Sgta ablasyon hormonal artım vasitəçilərinin siqnalında dəyişikliklərə səbəb oldu, xüsusən də miyostatin 23 və GHR 12 SGTA müştəri zülalları olduğu üçün araşdırmaya ehtiyac var. Qüsurlu inkişaf və skelet əzələsinin kütləsinin dəyişməsi proqnozlaşdırıla bilər Sgta çatışmazlığı əzələ kütləsinin mənfi tənzimləyicisi olan miyostatinin yetişməsinə və siqnalına təsir etdi 56, lakin nə əzələ patologiyası, nə də kütləsi təsirlənmədi. GHR vasitəsilə hərəkət edən GH, somatik böyümə, hüceyrə diferensiasiyası 57 və IGF-1 36-nın parakrin istehsalı üçün vacibdir. Anormal GHR siqnalı və GH müqaviməti, IGF-1 istehsalının dayandırılmasına və böyümənin ləngiməsinə səbəb olur. Həm GH, həm də GHR normal olaraq erkən embriogenezdə ifadə olunmasına baxmayaraq, dəyişdirilmiş GH siqnalına görə böyümə dəyişiklikləri yalnız siçanlarda 36,58 postnatal d14-21-dən müşahidə olunur. GHR-null siçanlarda 3 həftədə cırtdanlaşma, artan GH və dövriyyədə IGF-1 səviyyəsinin aşağı düşməsi ilə əlaqələndirilir 36,58 . Eynilə, siçanlarda funksional IGF-1R-nin azalması (IGF-1Rneo) 4-9 həftəlik yaşda böyümənin geriləməsinə gətirib çıxarır ki, bu da 59 saxlanılan ölçüdə yaylaya uyğun gəlir. GHR/IGF-1R çatışmazlığının analoqu 58,59 , Sgta-null mutantlar fiziki olaraq WT-dən daha kiçik olaraq ortaya çıxdı

6 həftə, bu zaman qadınlar WT heyvanlarının çəkisinin 93% və kişilər 87% idi. GH/GHR kimi, SGTA embrionda prenatal olaraq aşkar edilir, lakin erkən inkişaf zamanı onun funksionallığı məlum deyil. Prekursorun və yetkin GHR-nin ubiquitin-asılı endositoz motivi ilə qarşılıqlı əlaqəsini nəzərə alaraq, SGTA-nın sələfi GHR-nin yerləşdiyi endoplazmatik retikulumdan yetkin GHR funksiyalarının olduğu hüceyrə membranına daşınarkən ubiquitin mexanizmləri ilə GHR qarşılıqlı təsirinin qarşısını almaq üçün spekulyasiya edilmişdir. . Anormal GHR/IGF-1R alveri və potensial olaraq ubiquitin vasitəçiliyi ilə GHR deqradasiyası səbəb ola bilər. Sgta ablasyon. Bunun müşahidə olunan böyümə geriləməsinə kömək edə biləcəyini fərz edirik Sgta −/− siçanlar, SGTA itkisinin başqa bir kooperativ tərəfindən kompensasiya edilməməsi şərti ilə. IGF-1 serum və toxuma mRNA səviyyələrini aşağı saldı Sgta −/− heyvanlar qüsurlu GHR siqnalını əks etdirə bilər, halbuki yumurtalıqda yüksək serum GH və yüksəlmiş GHR Sgta −/− çatışmayan GH/IGF-1 siqnalının kompensasiyasını göstərə bilər, lakin sonuncu zülal səviyyəsində təsdiq tələb edir.

Siçanları steril hala gətirən homozigot FKBP52 silinməsindən fərqli olaraq 53, Sgta çatışmazlıq bu işdə yalnız yüngül subfertiliyaya səbəb olmuşdur. Androgen / AR tərəfindən idarə olunan inkişafdan asılı olan cinsiyyət orqanlarında disgenez qüsurlu FKBP52 −/− kişi reproduksiyası 53 , progesteron reseptorundan asılı uşaqlıq implantasiyasının uğursuzluğu isə FKBP52 −/− qadınlarda 48 sterilliyə səbəb olmuşdur. Androgen siqnalı üçün artan surroqat ölçülər (AGD, penis və preputial bez ölçüsü) uşaqlıqda, həm prepubertal, həm də yetkinlik dövründə, tam və ya qismən Sgta çatışmazlıq AR siqnalının dəyişməsini və/və ya hiperandrogenizasiyanı göstərir. Bununla belə, bir sıra digər androgendən asılı orqanlar təsirlənməmişdir Sgta mRNT ifadəsi kimi kişilərdə və qadınlarda ablasyon Ar və AR-a cavab verən genlər. Asılı olmayaraq, bir təsiri Sgta cinsi steroid istehsalının ablasyonunu istisna etmək olmaz.AR tənzimlənməsinə əlavə olaraq, SGTA həmçinin progesteron və qlükokortikoid reseptorları üçün tənzimləyici spesifiklik nümayiş etdirir 1,60 beləliklə, SGTA ablasyonunun progesteron və qlükokortikoid siqnalı ilə idarə olunan bioloji proseslərə təsiri də gələcək araşdırmaları təmin edir. sitoplazmada eyni vaxtda artım olmadan nüvə AR immunoreaktivliyinin azalması Sgta +/− prostata işarə edir Sgta, digər TPR tərkibli zülallar kimi TPR2/Dnajc7 və CHIP/Stub1, AR sabitləşməsində və/və ya deqradasiyasında rol oynayan 61 . Bu, GHR 12 üçün belə görünür, burada onun sabitləşməsi qismən bir mühitdə kompensasiya edilmir. Sgta çatışmazlığı.

Xülasə, bu araşdırma SGTA-nın çoxşaxəli roluna maraqlı ilk baxışı təmin etdi. in vivo. SGTA-nın tam, lakin qismən ablasiyası subfertilite verdi və nəslin canlılığını və böyüməsini məhdudlaşdırdı. Molekulyar ko-şaperonların kompleks qarşılıqlı əlaqəsi və onların fizioloji rollarında, xüsusən də hormon reseptorlarının yetişməsi və siqnalizasiyasında artıqlığın əhəmiyyəti cari tapıntılarla vurğulanır. Bu Sgta-null modeli hormondan asılı və β-amiloid xəstəlikləri də daxil olmaqla, SGTA-nın rolunun olduğu bir neçə kliniki pozğunluqların əlavə tədqiqi üçün münasibdir.


3 NƏTİCƏ

3.1 Skelet əzələsi TRα1 yavaş-yavaş bükülən əzələlərdə lif tipli tərkibi müəyyən edir, lakin məşq qabiliyyəti və enerji homeostazı üçün əhəmiyyətli dərəcədə əvəzolunmazdır.

Skelet əzələsində tiroid hormon reseptor siqnalının bütün bədən enerji mübadiləsində rolunu öyrənmək üçün biz skelet əzələsinə xas TRα yaratdıq.1 funksiyasını itirən siçan modeli (TRα HSACre ) (Şəkil S1A-C). Genotiplər arasında bədən çəkisi, yağ və yağsız kütlə və ya qlükoza tolerantlığında heç bir fərq müşahidə edilməmişdir (Şəkil 1B-D). 6 həftə ərzində ölçülən qaçış zolağında və könüllü təkərdə tam işləmə qabiliyyəti də genotiplər arasında fərqlənmirdi (Şəkil 1E,F).

Başqa bir heyvan kohortu 22 həftə ərzində HFD ilə qidalandı. Pəhriz probleminə cavab olaraq TRα HSACre siçanları üçün WT siçanlarına nisbətən daha yavaş çəki artımı trayektoriyasını müşahidə etdik (Şəkil 1H), bu da qida qəbulundaki fərqlərlə izah edilə bilməz (Şəkil 1I). 18 həftəlik HFD məruz qaldıqdan sonra TRα HSACre siçanları WT siçanları ilə eyni çəkiyə sahib oldular. Çəki ilə uyğunlaşdırılmış HFD ilə qidalanan siçanlarda orta soyuqluğa (4 saat ərzində 14°C) cavab olaraq bədən tərkibində, qlükoza tolerantlığında və ya bədən istiliyində genotip fərqləri aşkar edilməmişdir (Şəkil 1J-L). Qeyd edək ki, TRα HSACre siçanları WT siçanları ilə müqayisədə yavaş bükülən soleus əzələsində (SOL) tip I liflərdə artım və IIA tipli liflərdə azalma nümayiş etdirdi (Şəkil 1N). Lakin bu fərq sürətli bükülən ekstensor digitorum longus (EDL) əzələsində mövcud deyildi (Şəkil 1O). Yavaş seğirmə əzələsindəki lif tipli keçid, hüceyrə və mitoxondrial stressin sistemli markeri olan dövran edən böyümənin fərqləndirmə faktoru 15 (GDF15) artımı (72%) ilə müşayiət olundu (Şəkil 1P).

3.2 TRα1 skelet əzələsində T3 səbəb olduğu enerji xərcləri tələb olunur, lakin bədən istiliyinin T3 səbəb olduğu yüksəliş üçün əvəzedilməzdir.

Skelet əzələsi TRα-nın əhəmiyyətini öyrənmək1 qalxanabənzər vəz hormonunun səbəb olduğu enerji xərclərinə görə, beş fərqli TRα HSACre və WT siçan kohortu gündəlik olaraq 5, 7 və ya 14 gün ərzində s.c. T3 və ya avtomobilin enjeksiyonları. T3 və T4-ün plazma konsentrasiyaları avtomobillə işlənmiş arıq və DIO TRα HSACre və WT zibil nəzarətləri arasında oxşar idi (Şəkil 2A-C, F-H). Gözlənildiyi kimi, T3 müalicəsi T3 (100 nmol/kq) müalicəsindən 7 gün sonra və genotiplər arasında heç bir fərq olmadan T3-ün artması, lakin T4 plazma konsentrasiyalarının azalması ilə nəticələndi (Şəkil 2B,C,G,H). Dolayı kalorimetriya həm arıq, həm də obez WT siçanlarında T3 müalicəsinə cavab olaraq enerji xərclərinin artdığını aşkar etdi (Şəkil 2D, E, I, J, Şəkil S2A, B). T3 müalicəsi arıq TRα HSACre siçanlarında enerji xərclərini əhəmiyyətli dərəcədə artırmadı (Şəkil 2D, E). DIO WT siçanlarında T3-ün metabolik sürətə təsiri arıq WT siçanlarına nisbətən daha aydın olmuşdur ki, bu da T3-ün termogenik təsirinin yağ kütləsi ilə əlaqəli olduğunu göstərir. Bu kontekstdə funksional TRα-nın olmaması ola bilər1 DIO siçanlarında arıq siçana nisbətən əzələdə enerji sərfiyyatına daha az təsir göstərəcək. Müvafiq olaraq, gün ərzində T3 vasitəçiliyi ilə metabolik sürətdə artım WT və TRα HSACre siçanlarında oxşar idi, halbuki qaranlıq fazada T3 vasitəçiliyi ilə enerji xərclərinin artması yalnız WT siçanlarında müşahidə edildi (Şəkil 2I,J). DIO siçanlarında T3 ilə stimullaşdırılmış enerji xərclərinin ardıcıl artması bu pəhriz modelində əvvəllər müşahidə etdiyimizə bənzəyir. 11

WT və TRα HSACre siçanlarında T3-ün mitoxondrial tənəffüs üzərində əzələ spesifik təsirini deşifrə etmək üçün T3 ilə müalicə olunan siçanlardan yavaş seğirmə (SOL) və sürətli bükülmə (EDL) əzələləri çıxarıldı və mitoxondrial tənəffüs qabiliyyəti üçün qiymətləndirildi (Şəkil 2K, L). SOL-da sızma tənəffüsü (2-ci vəziyyət) genotiplər arasında oxşar idi, lakin T3 müalicəsi kontekstində tənəffüs yalnız WT siçanlarında artdı, bütün bədən dolayı kalorimetriya məlumatlarını əks etdirdi (Şəkil 2K). Kompleks I ilə əlaqəli substrat ilə oksidləşdirici fosforlaşma qabiliyyəti, WT siçanlarına nisbətən TRα HSACre siçanlarında stimullaşdırılmamış vəziyyətdə SOL-da pozulmuş tənəffüs aşkar etdi. Kompleks I- və kompleks I + II ilə əlaqəli tənəffüsün qiymətləndirilməsi müəyyən etdi ki, TRα HSACre-də T3 stimullaşdırılması WT siçanlarına bənzər dərəcədə tənəffüsü artırdı. EDL-də mitoxondrial tənəffüsdə heç bir fərq müşahidə edilməmişdir (Şəkil 2L).

Qalxanabənzər vəzi hormonlarının bədən istiliyini artıran mexanizmlər hələ də aydın deyil. Əzələ TRα üçün mümkün rolu yoxlamaq1 bədən istiliyinin T3 vasitəçiliyi ilə yüksəlməsində biz 7 gün ərzində hər gün T3 və ya vasitə ilə müalicə olunan WT və TRα HSACre siçanlarında əsas bədən istiliyini ölçdük. Əvvəlki tədqiqatlarla razılaşaraq, T3 müalicəsi WT siçanlarında həm otaq temperaturunda (22°C), həm də termoneytral şəraitdə (30°C) bədən istiliyini əhəmiyyətli dərəcədə yüksəltdi (Şəkil 2M,N). Xüsusilə, T3 ilə müalicə olunan TRα HSACre siçanları, həm 22°C, həm də 30°C-də bədən istiliyinin artması baxımından T3 ilə müalicə olunan WT siçanlarına oxşar şəkildə cavab verdilər (Şəkil 2M, N). Bundan əlavə, 14 günlük T3 və ya nəqliyyat vasitəsi ilə müalicəyə cavab olaraq DIO TRα HSACre siçanlarında DIO WT siçanlarına nisbətən BAT və iWAT-da BAT çəkisi və ya UCP1 zülal ifadəsində heç bir kompensasiyaedici fərq müşahidə edilməmişdir (Şəkil S2C-G). Birlikdə, bu tapıntılar göstərir ki, 1) skelet əzələsində tiroid hormonu siqnalı T3 səbəb olduğu pireksiyaya kömək etmir və 2) tiroid hormonu ilə enerji xərclərinin artması və T3 səbəb olan pireksiya tamamilə bir-biri ilə əlaqəli proseslər deyil.

3.3 Struktur və metabolik yollar TRα-nın T3 vasitəçiliyi ilə aktivləşməsinə cavab olaraq transkriptomda üstünlük təşkil edir.1 soleus əzələsində

T3 müalicəsinə cavab olaraq bütün bədənin enerji xərclərində əzələ ilə əlaqəli induksiyanın mexaniki əsaslarını araşdırmaq üçün biz həm müalicə olunan, həm də müalicə olunmayan şərtlərdən WT və TRα HSACre SOL-un RNT ardıcıllığını (RNT ardıcıllığını) həyata keçirdik. Bu təhlillər göstərdi ki, 788 transkript WT SOL və TRα HSACre SOL arasında diferensial şəkildə ifadə olunub (Şəkil 3A). Qeyri-stimullaşdırılmamış şəraitdə lif tipli tərkibə və əzələ morfologiyasına bağlı çoxlu genlər WT siçanları ilə müqayisədə TRα HSACre siçanlarında diferensial şəkildə ifadə edilmişdir (Şəkil 3A). Bundan əlavə, sarkolipin və MSS51 kimi əzələ termogenezi ilə əlaqəli genlər genotiplər arasında fərqli idi. T3 müalicəsinə cavab olaraq, ifadə profilinin yaradılması, TRα HSACre siçanlarına nisbətən WT siçanlarında diferensial şəkildə tənzimlənmək üçün “NADP biosintezi” və “şaxələnmiş zəncirvari amin turşularının (BCAA) metabolizması” ontoloji terminləri ilə genlərin zənginləşdirilməsini müəyyən etdi (Şəkil 3B). TRα HSACre siçanları ilə müqayisədə WT siçanlarından SOL-da T3-ə cavab verən ən yaxşı transkriptlərin nisbi ifadəsi transkripsiya tənzimlənməsində aydın fərq aşkar etdi (Şəkil 3C, Şəkil S3A). Qeyd etmək lazımdır ki, TRα mutasiyasına baxmayaraq, sistemli T3 administrasiyasına SOL-da aydın transkripsiya reaksiyası qalmışdır.1 əzələdə. Bu, sonradan əzələ transkriptomuna ikincil təsir göstərən T3-ün sistemli təsirlərini əks etdirə bilər. Əzələ termogenezində (Şəkil 3D) və əzələ lifi tipli morfologiyada (Şəkil 3E) iştirak edən əsas genlərin qiymətləndirilməsi WT siçanları və TRα HSACre siçanları arasında həm stimullaşdırılmamış, həm də T3 səbəb olduğu şəraitdə diferensial ifadə nümayiş etdirdi. Qeyd etmək lazımdır ki, TRα HSACre siçanlarında sarkolipin mRNA-da stimullaşdırılmamış artım EDL, gastrocnemius və quadriseps əzələlərində də aşkar edilmişdir (Şəkil S3B). TRα-nın spesifikliyini müəyyən etmək üçün BAT termogenezi və BAT-da tiroid hormonu siqnalı ilə əlaqəli markerlər araşdırıldı.1-əlaqəli əzələ transkripsiya dəyişiklikləri (Şəkil 3E). T3 BAT termogenezində iştirak edən transkriptlərə açıq şəkildə təsir etsə də, WT siçanlarına nisbətən TRα HSACre siçanları arasında heç bir diferensial ifadə müşahidə edilməmişdir ki, bu da əzələ spesifik mutasiyanın digər termogenik toxumalarda metabolik proqramlara sistemli “sökülməsi”nin olmadığını göstərir (Şəkil 3F) .


CD40 və CD40L-də Genetik Variasiyanın Təhlili: Kəskin Koronar Sindromda mRNT Nisbi İfadəsi və Həll Olunan Zülallarla Əlaqə

1 Instituto de Investigación en Ciencias Biomédicas (IICB), Centro Universitario de Ciencias de la Salud (CUCS), Universidad de Guadalajara (UdeG), Sierra Mojada #950, Colonia Independencia, C.P, Gulajada, 44340, Mexiko

2 Doktora və Ciencias Biomédicas, Centro Universitario de Ciencias de la Salud (CUCS), Universidad de Guadalajara (UdeG), Guadalajara, Jalisco, Mexico

3 Genetica Humana, Centro Universitario de Ciencias de la Salud (CUCS), Universidad de Guadalajara (UdeG), Guadalajara, Jalisco, Mexico

4 Especialidad en Cardiología, Unidad Médica de Alta Especialidad, Centro Médico Nacional de Occidente (CMNO), Departamento de Cardiología, Instituto Mexicano del Seguro Social (IMSS), Guadalajara, Jalisco, Mexico

Mücərrəd

Kəskin koronar sindrom (AKS) CD40 və onun CD40L liqandı kimi kostimulyator molekullar tərəfindən immun hüceyrələrin aktivləşdirilməsinə kömək edən iltihabi amillərin olması ilə tetiklene bilər. ACS-nin etiologiyasında ekoloji və genetik faktorlar iştirak edir. Bu işin məqsədi ilə əlaqəli gen və protein ifadəsini araşdırmaq idi CD40CD40L Qərbi Meksika əhalisindən olan ACS xəstələrində genetik variantlar. Qərbi Meksikadan cəmi 620 nəfər işə götürüldü: 320 ACS xəstəsi və işemik kardiopatiya tarixi olmayan 300 şəxs qiymətləndirildi. Genotip TaqMan SNP genotipləşdirmə analizlərindən istifadə etməklə müəyyən edilmişdir. CD40CD40L mRNA səviyyəsindəki ifadələr TaqMan Gen İfadə Təhlillərindən istifadə etməklə ölçüldü. Həll olunan protein izoformları fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi ilə ölçüldü. arasında əlaqəyə dair dəlil tapmadıq CD40 (rs1883832, rs4810485 və rs11086998) və CD40L (rs3092952 və rs3092920) genetik variantlar və ACS-yə həssaslıq, baxmayaraq ki, rs1883832 və rs4810485 yüksək sCD40 plazma səviyyələri ilə əhəmiyyətli dərəcədə əlaqəli idi. sCD40L-nin plazma səviyyələrinə cins və kəskin koronar sindromun klinik spektri təsir edə bilər. Nəticələrimiz funksional rolunu təklif etmir CD40CD40L ACS-də genetik variantlar. Bununla belə, onlar farmakoloji terapiya altında olduqda belə, ACS xəstələrində iltihab prosesini və trombositlərin aktivləşdirilməsini əks etdirə bilər. CD40-CD40L sisteminin ACS patogenezində mühüm rollarına görə, CD40 və CD40L-nin həll olunan səviyyələrinin ACS-dən sonra təkrarlanan ürək-damar hadisəsinin klinik cəhətdən faydalı markerləri ola biləcəyini müəyyən etmək üçün uzununa tədqiqatlar tələb olunur.

1. Giriş

Ürək-damar xəstəlikləri bütün dünyada ölümün əsas səbəbidir [1], xüsusilə də koronar qan axınının kəskin azalması və miokard işemiyası və ya nekrozu ilə xarakterizə olunan kəskin koronar sindrom (AKS). Üç klinik əlamət fərqləndirilir: ST seqment yüksəlişli miokard infarktı (STEMI), qeyri-ST seqmentli miokard infarktı (NSTEMI) və qeyri-stabil stenokardiya (UA), ümumi etiologiyalı, lakin onların fərqli nəticələri ola bilər [2]. Bu səbəbdən, erkən proqnoz və risk təbəqələşməsi ACS-dən sonra təkrarlanan epizodların və ya hətta ölüm riskini azaltmaq üçün ilk fəaliyyət xəttidir [3].

ACS-nin etiologiyasında metabolik, genetik, ətraf mühit və digər amillərlə yanaşı, iltihabı və endotel disfunksiyasını artıra bilən şərtlər, aterosklerozun inkişafında əsas elementlər iştirak edir [4, 5]. Müəyyən edilmişdir ki, irsilik faizi əhəmiyyətli genetik təsiri dəstəkləyən ACS riskində fərdlərarası variasiyanın 40-55%-ni təşkil edir [6].

CD40, konstitutiv olaraq B limfositlərində ifadə olunan və monositlər, makrofaqlar, endotel hüceyrələr (EC) və hamar əzələ hüceyrələri (SMCs) kimi digər hüceyrələrdə ifadə olunan kostimulyator molekuldur [7]. Onun CD40L liqandı əsasən trombositlərin (95%), T-limfositlərin, EK-lərin, SMC-lərin və makrofaqların səthində ifadə olunur [7, 8].

CD40 və CD40L-nin qarşılıqlı təsiri c-Jun, NF- siqnal yolları vasitəsilə iki istiqamətli hüceyrə aktivləşməsində iştirak etdiyinə görə ACS-nin [9] immunopatogenezində iştirak edir.κB və ERK 1/2, yapışma molekullarının artmasına, proinflamatuar sitokinlərin ifrazına və trombositlərin aktivləşməsinə kömək edir [7]. Bununla belə, CD40 və CD40L-nin həll olunan formaları endotel disfunksiyası ilə əlaqələndirilmiş və ya ACS [10, 11] xəstələrdə ürək-damar sisteminin xoşagəlməz hadisələrinin markerləri kimi onları terapevtik agentlərin potensial hədəfləri kimi təklif etmişdir [9].

Bu baxımdan, tək nukleotid polimorfizmləri (SNPs) müəyyən edilmişdir CD40CD40L genom miqyaslı assosiasiya tədqiqatları [7] və namizəd gen tədqiqatları [12-16] vasitəsilə ACS-nin inkişafına həssaslığı artıra bilən genlər. Bu genetik variantlar iltihabi və otoimmün xəstəliklərlə əlaqələndirilmişdir [17, 18]. CD40CD40L mRNT ifadəsi [19-25], eləcə də aterosklerozun başlanğıcı, inkişafı və irəliləməsində təsir göstərən [15, 20] funksiyalarını dəyişdirən həll olunan formaların tənzimlənməsi [26, 27].

İltihab və endotel disfunksiyası aterosklerozun inkişafına təkan verən amillərdir, lakin mövcud risk faktorlarını aterosklerotik proseslə əlaqələndirən əsas hüceyrə və molekulyar qarşılıqlı təsirlər yaxşı xarakterizə edilməmişdir. Bizim məlumatımıza görə qatqısını qiymətləndirən heç bir araşdırma yoxdur CD40CD40L xüsusilə ACS ilə ürək-damar xəstəlikləri ilə əlaqəli qərb Meksikadan olan əhalidə polimorfizmlər.

Müvafiq olaraq, bu tədqiqatın məqsədi tək nukleotid polimorfizmləri arasındakı əlaqəni araşdırmaq idi. CD40 (rs1883832 (c.-1C>T), rs4810485 (c.51+914G>T) və rs11086998 (c.679C>G)) və CD40L (rs3092952 (g.1615A>G) və rs3092920 (18656G>T)) genləri və ACS-yə qarşı həssaslıq. Bu polimorfizmlər arasındakı əlaqəni də araşdırırıq CD40CD40L ACS xəstələrindən və nəzarət qrupuna (CG) daxil olan işemik kardiopatiyası olmayan subyektlərdən alınan plazma nümunələrində ölçülən periferik qan leykositlərində və həll olunan səviyyələrdə ifadə.

2. Materiallar və Metodlar

2.1. Nəzarət Qrupunda ACS Xəstələri və Subyektləri

Tədqiqat kohortu Amerika Kardiologiya Kollecinə [28] uyğun olaraq təsnif edilmiş ACS diaqnozu qoyulmuş 320 xəstədən və KQ kimi ACS risk faktorları olan, lakin anamnezində işemik kardiopatiya (sorğu ilə müəyyən edilmiş) olmayan 300 subyektdən ibarət idi. Tədqiqata Meksikanın qərbindən daxil olan bütün şəxslər Hospital de Especialidades del Centro Medico Nacional de Occidente del Instituto Mexicano del Seguro Social (CMNO-IMSS) tərəfindən işə götürülüb. Tədqiqat müddəti 2016-cı ilin fevralından 2018-ci ilin iyun ayına qədərdir.

2.2. Etik Mülahizələr

Tədqiqat 2013-cü il Helsinki Bəyannaməsinə uyğun olaraq aparılıb. Bütün şəxslər tədqiqatda iştirak etməyə razılıq verdilər və məlumatlandırılmış yazılı razılığı imzaladılar. Etik təsdiq Centro Universitario de Ciencias de La Salud (CUCS), UdeG (CI/065/2014) tərəfindən alınıb.

2.3. Genotipləşdirmə və Keyfiyyətə Nəzarət

Genetik variantlar TaqMan Assays istifadə edərək genotipləmə idi CD40 (rs1883832 (C__11655919_20), rs4810485 (C___1260190_10) və rs11086998 (C___1260325_10)) və üçün CD40L (rs3092952 (C__26154899_10) və rs3092920 (C__27452204_10)) istehsalçının protokoluna uyğun olaraq TaqMan Genotyping Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) istifadə edərək. Keyfiyyətə nəzarət olaraq, genotip təyinatında heç bir dəyişiklik olmadan bütün polimorfizmlər üçün nümunələrin 25%-nin ikiqat kor genotiplənməsi aparılmışdır.

2.4. Real-Time PCR Analizi

Ümumi RNT, Chomczynski və Sacchi metoduna uyğun olaraq ümumi RNT əldə etmək üçün istehsalçının göstərişinə uyğun olaraq TRIzol reagentindən (Invitrogen, Carlsbad, CA, ABŞ) istifadə edərək periferik qan leykositlərindən çıxarıldı [29]. İstehsalçının protokoluna uyğun olaraq cDNA əldə etmək üçün əks transkripsiya reagentlərindən istifadə etməklə bir mikroqram ümumi RNT əks transkripsiya edilmişdir (Promega Corporation, ABŞ). Real vaxt rejimində PCR TaqMan zondlarından istifadə edərək həyata keçirildi: qliseraldehid 3-fosfat dehidrogenaz (GAPDH) (Hs02786624_g1), CD40 (Hs01002915_g1), və CD40L (Hs00163934_m1) Roche LightCycler 96® sistemindən istifadə edərək TaqMan Gen İfadə Təhlili Protokolunda (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) göstərilən şərtlərə uyğun olaraq. Nisbi ifadə istifadə edərək ifadə səviyyəsinə normallaşdırıldı GAPDH daxili nəzarət kimi və 2 -ΔΔCq və 2 -ΔCq metodlarından istifadə etməklə qiymətləndirilmişdir [30]. Nəticələr müvafiq olaraq nəzarət və ifadə vahid nisbi (URE) ilə müqayisədə nisbi qat artımı kimi ifadə edilir. 2 -∆∆Cq metodu Livak və Schmittgen [30] tərəfindən təklif edildiyi kimi hesablanmışdır. Aşağıdakı tənlikdən istifadə edərək:

, burada ∆Cq kalibrator nəzarət qrupunun orta ∆Cq göstəricisinə aiddir. ACS xəstələrinin periferik qan leykositlərində nisbi CD40 mRNT ifadəsini təyin etdik (

). İfadə səviyyələrinin qiymətləndirilməsi üçün kohort xüsusiyyətləri aşağıdakı kimi idi: yaş (

), cins (qadın/kişi nisbəti ACS: 1.7, CG: 1.6) və oxşar risk faktorunun mövcudluğu və eyni sayda xəstə ACS-nin üç klinik obyektinin hər biri (14 UA, 14 NSTEMI və 14 STEMI) üçün daxil edilmişdir. ).

2.5. sCD40, sCD40L və IFN-nin aşkarlanmasıγ

sCD40, sCD40L və IFN- səviyyələriγ istehsalçının protokoluna uyğun olaraq fermentlə əlaqəli immunosorbent analizlərindən (ELISA) (Human CD40 Quantikine ELISA Kit, Human CD40 Ligand Quantikine və Human IFN-gamma Quantikine ELISA Kit, R&D Systems) istifadə edərək plazma nümunələrində müəyyən edilmişdir. sCD40, sCD40L və IFN- üçün analiz həssaslığıγ müvafiq olaraq 5,56 pq/mL, 10,1 pq/mL və 8 pq/mL olmuşdur.

2.6. Statistik təhlil

Statistik təhlil SPSS proqram təminatının 22 versiyasından (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) istifadə edilməklə aparılmışdır. Başqa cür göstərilmədiyi təqdirdə məlumatlar median və interquartile diapazon (IQR) kimi təqdim edilmişdir. Mann-Whitney

qruplar arasında fərqləri müqayisə etmək üçün test və Kruskal-Wallis testindən istifadə edilmişdir. Genotip və allel tezlikləri CD40CD40L ACS xəstələri və nəzarət qrupu arasında genetik variantlar müqayisə edilmişdir. Odds əmsalları (OR) və 95% güvən intervalları (CI) uyğun olduqda, Chi-kvadrat və Fisher'in dəqiq testlərindən istifadə edərək hesablanmışdır. Bonferroni korreksiyası çoxsaylı müqayisələrdə statistik tip 1 səhvini (pc) azaltmaq üçün tətbiq edilmişdir. Hardy-Weinberg tarazlığı genotip paylanmasından hesablanmış və polimorfizmlər arasındakı əlaqə tarazlığı (LD) Levontin istifadə edərək hesablanmışdır.

genetik markerlər arasında. Haplotiplər və onların tezlikləri SHEsis proqram platformasından (http://analysis.bio-x.cn/myAnalysis.php) istifadə edilməklə qiymətləndirilib. Ümumi risk faktorlarının (komorbidlər, cins, dərman qəbulu və s.) sCD40, sCD40L və mRNA ifadə səviyyələri ilə əlaqəsini qiymətləndirmək üçün çoxxətti reqressiya modelindən istifadə edilmişdir. Korrelyasiya təhlili Spearmanın korrelyasiyası ilə müəyyən edilmişdir.

3. Nəticələr

3.1. Klinik Xüsusiyyətlər

320 ACS xəstəsi və 300 nəzarət subyektinin klinik məlumatları Cədvəl 1-də qeyd edilmişdir. ACS xəstələri və CG subyektlərinin orta yaşı müvafiq olaraq 62 (±11 standart sapma (SD)) və 55 (±10 SD) il idi. ACS qrupunda qadınlardan 3,32 daha çox kişi var, CG-də kişi/qadın nisbəti demək olar ki, 1/1 idi. ACS xəstələri CK, CK-MB və troponin I də daxil olmaqla yüksək səviyyəli ürək funksiyası markerlərini təqdim etdilər. ACS-də yüksək qan təzyiqi, siqaret çəkmə və 2-ci tip şəkərli diabet aşkar edilmişdir. Reinfarkt 49 halda (15,3%) aşkar edilmişdir. Dərman qəbuluna antiplatelet (asetilsalisil turşusu, klopidoqrel), statinlər, antikoaqulyantlar (heparin və enoksaparin) və antihipertenziv dərmanlar (kaptopril, enalapril, spironolakton və furosemid) daxildir.

test ACS: kəskin koronar sindrom Apo AI: apolipoprotein AI Apo B: apolipoprotein B CG: nəzarət qrupu CK: kreatinin kinaz CK-MB: kreatinin kinaz əzələ və beyin CRP: C-reaktiv protein HDL-c: yüksək sıxlıqlı lipoproteinlərarası IQR: diapazon LDL-c: aşağı sıxlıqlı lipoprotein NSTEMI: qeyri-ST seqmenti yüksəlmiş miokard infarktı NA: tətbiq edilmir UA: qeyri-stabil angina STEMI: ST seqmentinin yüksəlməsi miokard infarktı (STEMI). Başqa cür göstərilmədiyi təqdirdə məlumatlar median və interkvartil diapazonu (Q25-Q75) kimi ifadə edilmişdir. a Verilənlər

3.2. Genotip və allel analizi

Genotip və allel tezlikləri CD40 (rs1883832, rs4810485 və rs11086998) və CD40L (rs3092952 və rs3092920) polimorfizmləri Cədvəl 2-4-də göstərilmişdir. Genotip paylamaları Hardy-Weinberg tarazlıq gözləntiləri ilə razılaşdırılmışdır (

cinslər arasında allelik model üçün dəyər.

OR: ehtimal nisbəti. Haplotip müvafiq olaraq rs1883832, rs4810485 və rs11086998 ilə təmsil olunur.

Üçün nə genotip, nə də allel paylanması CD40 ACS və nəzarət qrupları müqayisə edildikdə polimorfizmlər statistik olaraq fərqli idi.

Çünki CD40L X xromosomunda yerləşir, biz cinsə görə analiz apardıq (Cədvəl 3). Qeyd etmək lazımdır ki, biz allel tezlikləri üçün fərq tapmadıq CD40L cinslər arasında variantlar (rs3092952 A/G:

). Hər iki polimorfizmin genetik paylanması xəstələr və nəzarət qrupları arasında ya birləşdirilmiş (məlumatlar göstərilmir) və ya cinsiyyətə görə oxşar olmuşdur.

3.3. Haplotip analizi CD40 və CD40L

Biz CD40/CD40L genlərinin və ACS-nin qərb Meksika kohortunda tapılan haplotiplər arasındakı əlaqəni təhlil etdik. Təhlil göstərdi ki, rs1883832, rs4810485 və rs11086998 CD40 əlaqə balanssızlığında idi ( , , ). ACS xəstələrində və nəzarət subyektlərində müvafiq olaraq 67.1% və 65.5% təşkil edən bir əsas haplotip (CCG) tapdıq. Biz həmçinin qoruyucu haplotip tapdıq (CTC, OR: 0.22 ) (Cədvəl 4).

CD40L polimorfizmlər LD-də yox idi ( ), 3092952 və rs3092920-nin ayrıca təhlil edilməsinin lazım olduğunu göstərir.

3.4. CD40 mRNT ifadəsi

ACS xəstələri daha yüksək median ifadəsini nümayiş etdirdi CD40 Periferik qan leykositlərində mRNT nəzarət qrupları ilə müqayisədə (0,82 dəfə çox), lakin bu müqayisə əhəmiyyətli deyildi. Eynilə, ACS qrupunda (UA, NSTEMI və STEMI) klinik diaqnostika ilə təbəqələşmə mRNA ifadə səviyyəsində heç bir fərq göstərmədi. CD40. Sonra, rs1883832, rs4810485 və rs11086998 genotiplərini daşıyaraq, ACS xəstələri və CG-dən alınan məlumatları təhlil etdik. Kiçik allellərin aşağı tezliklərinə görə biz dominant birləşmə modelini qəbul etdik (rs1883832: C/C vs. C/T+TT, r4810485: G/G vs. G/T+TT və rs11086998: C/C vs. .C/G+G/G) səviyyəsində fərq tapmasa da CD40 hər iki qrupdakı genetik variantlar arasında ifadə (məlumatlar göstərilmir).

3.5. CD40L mRNT ifadəsi

2 -ΔΔCq üsulu ilə aparılan təhlillər göstərdi ki CD40L ACS xəstələrində mRNT ifadəsi CG ilə müqayisədə 1,25 dəfə yüksək idi (Şəkil 1(a)) bu fərq 2-ΔCq metodu ilə əhəmiyyətli dərəcədə müəyyən edilmişdir (p=0,035) (Şəkil 1(b)). Klinik qurumlar üzrə biz heç bir fərq tapmadıq (məlumatlar göstərilmir).

). ACS: kəskin koronar sindrom CG: nəzarət qrupu.

X xromosomu üzərindəki yeri və digər araşdırmaların nəticəsini nəzərə alaraq CD40L mRNT ifadəsi cinsdən təsirlənə bilər [20], biz hər hansı bir əlaqə sübutu olmadan hər iki tədqiqat qrupunda hər cins üçün ayrıca təhlil etdik. Cinslərə görə, istər qadın, istərsə də kişi xəstələr nəzarət qrupu ilə müqayisədə daha çox ifadə nümayiş etdirməyə meyllidirlər (Şəkil 2(a)). ACS və cinsin klinik diaqnozu ilə təbəqələşdiyimiz zaman, UA qadın xəstələri ən yüksək ifadəni (5.12 URE) göstərdi, baxmayaraq ki, müqayisələrin heç biri statistik cəhətdən əhəmiyyətli deyildi (kişi xəstələr, qadın xəstələr, ) (Şəkil 2(b)).

tədqiq etdiyimizi qeyd etmək vacibdir CD40L mRNT Hər iki tədqiqat qrupunda genetik variantlara (rs3092952 və rs3092920) görə ifadə, dominant modeldən sonra, lakin biz fərq tapmadıq.

3.6. sCD40 və sCD40L arasında ACS ilə əlaqə

Biz hər iki tədqiqat qrupunda CD40 və CD40L plazma səviyyələrini qiymətləndirdik. Biz aşkar etdik ki, ACS xəstələri nəzarət qrupu ilə müqayisədə (843.3-ə qarşı 492 pg/ml) əhəmiyyətli dərəcədə yüksək sCD40 ( ) səviyyələrini təqdim edirlər. Çoxxətti reqressiya modeli göstərir ki, bu əlaqə klopidoqrel tərəfindən maskalana bilər ( ). ACS diaqnozunun sCD40 (UA: 677.1 pg/mL NSTEMI: 661.7 pg/mL və STEMI: 782.4 pg/ml, ) ilə əlaqəli olmadığı görünür.

CD40 genetik variantları arasında sCD40 səviyyələri arasındakı fərqlər də dominant birləşmə modelini nəzərə alaraq təhlil edilmişdir. Şəkil 3-də göstərildiyi kimi, C/C daşıyıcılarında rs1883832 C/T+T/T (561-ə qarşı 475,7 pg/mL, ) ilə müqayisədə daha yüksək plazma sCD40 səviyyələri var idi. Eynilə, rs4810485-in homozigot daşıyıcıları G/T+T/T daşıyıcılarına nisbətən daha yüksək həll olunan CD40 konsentrasiyasını göstərmişdir (562,5-ə qarşı 489,7 pq/mL, ).

ACS xəstələrində bu CD40 genetik variantları arasında belə bir əlaqə və ya CD40 rs11086998 C/C-yə qarşı C/G+G/G (ACS: 846 pg/mL qarşı 725 pg/mL, CG: 509 pg/ml vs.) assosiasiyasının dominant modelini fərz etməklə hər iki tədqiqat qrupunda CD40 plazma səviyyələri ilə polimorfizm 540 pg/mL, ) (Şəkil 4).

sCD40L plazma səviyyələrinə gəlincə, xəstələr nəzarət qrupları ilə müqayisədə daha yüksək sCD40L səviyyələri nümayiş etdirirlər, lakin bu müqayisə statistik əhəmiyyətə malik olmayıb (1080-ə qarşı 868,9 pq/mL, ). ACS diaqnostikasına və cinsə görə təbəqələşdirilmiş sCD40L-ə əsasən, STEMI olan qadın xəstələrdə UA qadın xəstələri ilə müqayisədə daha yüksək səviyyələr olmuşdur (1489,5-ə qarşı 533,8 pg/ml, ). UA kişi xəstələri UA qadın xəstələrlə müqayisədə daha yüksək sCD40L səviyyələrini təqdim etdilər (1714.3-ə qarşı 533.8 pg/mL, , Şəkil 5). Birləşdirilmiş zaman, sCD40L səviyyələri ACS diaqnozu ilə oxşar idi (, məlumatlar göstərilmir).

Multireqressiya modelində tətbiq edildikdə dərmanlar ACS qrupunda plazma sCD40L-ə əhəmiyyətli təsir göstərməmişdir (

: 0.003, ) yəni sCD40L ACS olan xəstələr arasında fərqlər dərman vasitəsi ilə idarə olunmur.

Biz genetik variantlar arasındakı əlaqəni təhlil etdik CD40L və hər iki tədqiqat qrupunda sCD40L plazma səviyyələri heç bir əlaqə sübutu olmadan.

Nəhayət, sCD40L və IFN- arasında müsbət xətti korrelyasiya müşahidə etdik.γ ACS xəstələrində ( , ) (Şəkil 6).

4. Müzakirə

CD40 və CD40L hüceyrələrin aktivləşdirilməsini və proinflamatuar sitokinlərin istehsalını təşkil edən mühüm funksiyalara malikdir. Bu, ateroskleroz proseslərini sürətləndirə bilən və ürək-damar xəstəliklərinin inkişafında funksional rol oynayan iltihabı təşviq edir [8]. Buna görə də, genetik variantlar ürək-damar xəstəlikləri riskinin artması ilə əlaqəsi üçün maraq doğurmuşdur [14, 15].

SNP üzərində CD40 gen, rs1883832, əsas C allelinin varlığında ACS ilə əlaqələndirilmiş və kiçik T allelinin mövcudluğunda sCD40 səviyyəsinin azalması və ürək-damar xəstəlikləri riski ilə əlaqəli olmuşdur [31, 32]. Qərbi Meksika kohortunda bu, romatoid artrit (RA) üçün genetik risk faktoru kimi müəyyən edilməmişdir [25]. Bu polimorfizm CD40-ın azalmış mRNT ifadəsi ilə əlaqələndirilmişdir [21, 22] rs1883832 yüksək LD-də rs4810485 ilə aşkar edilmişdir, sonuncusu Tayvan əhalisində koronar arteriya lezyonunun əmələ gəlməsi ilə əhəmiyyətli dərəcədə əlaqələndirilir [33]. Bu SNP-lərin müvafiq olaraq 5-ci UTR və intron 1-də lokalizasiyasını nəzərə alsaq, onlar CD40 promotorunda yerləşən və mRNT səviyyələrinə təsir edən rs6074022 ilə demək olar ki, tam LD-də ( ) olduqları üçün mRNT ifadəsindəki dəyişikliklərlə əlaqələndirilmişdir [20] ]. Əks halda, bildiyimiz qədər, rs11086998 ürək-damar xəstəliklərində genetik risk faktoru kimi əlaqələndirilməmişdir, lakin onun proinflamatuar sitokinlərin, TNF səviyyələrinin modulyasiyasında əlaqəli olduğu bilinir.α və IL-6, çünki o, CD40-ın siqnal yollarında iştirak edən hüceyrədaxili domen zülalını kodlayan ekson 9-da yerləşir [34].

Bu polimorfizmlər əvvəllər əsasən Çin və Avropa əhalisi arasında ürək-damar xəstəliklərinin genetik markerləri kimi müəyyən edilmişdir: Li et al. Çin Han populyasiyasında 160 ACS xəstəsi və 92 nəzarəti tədqiq etdi [12] Tian et al. Çin populyasiyasında 248 ACS xəstəsini və 206 nəzarəti təhlil etdi [13] Wang et al. Çin əhalisinin [14] və García-Bermúdez et al. ürək-damar hadisələri olan revmatoid artritli (RA) 290 xəstəni və RA olan, lakin ürək-damar hadisələri olmayan 1285 xəstəni təhlil etdi [17]. Ancaq araşdırmamızda bu birliyi dəstəkləyə bilmərik. Bu, populyasiyalar arasında genetik fərqlərlə izah edilə bilər [35]. CD40-dakı üç variant LD-də tapıldı, bu da ən azı populyasiyamızda birlikdə təhlil edilməli olduqlarını göstərir. Bu kontekstdə biz tapdıq ki, haplotip bloku rs1883832 (C)-rs4810485 (T)-rs11086998 (C) ACS riskinin azalması ilə əlaqələndirilir (OR: 0.22 ) və bu, Meksikanın qərbində ACS üçün qoruyucu amil ola bilər. populyasiya, baxmayaraq ki, LD blokundakı digər yaxın SNP-lərin xəstəliyə həssaslıqla əlaqəli olduğunu istisna etmək olmaz [21].

Xəstəliklərdə X xromosomunda genetik dəyişkənliyin təhlili maraq dairəsidir. Yuxarıda göstərilənlərə uyğun olaraq, in CD40L, biz 5 UTR (rs3092952) və 3 UTR (rs3092920)-də yerləşən iki SNP-ni qiymətləndirdik, onlar müxtəlif haplotip bloklarında yerləşir və təsdiq etdiyimiz kimi zəif LD-yə malikdir [36]. rs3092952 plazma nümunələrində sCD40L səviyyələrini modulyasiya etməklə funksional variant kimi təsvir edilmişdir. Rs3092920 RA xəstələri və miokard infarktı olan xəstələrdə ürək-damar xəstəliklərinin genetik markeri kimi tədqiq edilsə də, bəzi tədqiqatlar belə bir əlaqə tapmamışdır [15, 17], bu bizim nəticələrimizə uyğundur, çünki biz genetik variantlar arasında əlaqə tapmadıq. the CD40L gen və ACS riski.

Buna baxmayaraq, digər amillər ACS riskini artıra və mənfi hadisələrə təsir göstərə bilər [5] bizim nəticələrimiz kəskin koronar hadisələrdə bu polimorfizmlərin əhəmiyyətli rolunu göstərmir. Bununla belə, bu genetik variantların və ACS-nin təsirinin əsasını təşkil edən hüceyrə və molekulyar mexanizmlər potensial olaraq CD40 və CD40L-nin gen və zülal ifadəsindəki dəyişikliklərlə vasitəçilik edilə bilər.

Digər tədqiqatlar təhlil edilmişdir CD40/CD40L Periferik qanın mononükleer hüceyrələrinin və qRT-PCR-nin ayrılmasından sonra koronar arteriya xəstəliyində (CHD) mRNT ifadə səviyyələri və nəzarət qrupu ilə müqayisədə CHD qrupunda hər iki genin ifadə səviyyələrinin əhəmiyyətli dərəcədə artdığını aşkar etdi [24].

Aralarında fərq tapmadıq CD40 ACS xəstələrinin və nəzarət subyektlərinin ümumi periferik qan leykositlərində mRNT səviyyələri. Bu, periferik qanda CD40-ın əsas mənbəyinin B hüceyrələri olması ilə əlaqədar ola bilər [21]. Field və s. genotip və tam qanda ölçülən CD40 mRNT ifadəsi arasında əlaqə tapmadı, lakin C/C rs1883832 genotipi B hüceyrələrində daha yüksək CD40 ifadəsi ilə əlaqələndirildi [21]. CD40 mRNA gen ifadəsində bu genetik variantların funksionallığını anlamaq üçün bu alt populyasiyaları təhlil edən əlavə tədqiqatların aparılmasını təklif edirik.

Genetik polimorfizmlər və CD40 ifadəsi arasında əlaqənin olmaması Jacobson et al. [22], çünki onlar təklif edirlər ki, rs1883832 genetik variantı rs4810485 ilə yüksək əlaqə balanssızlığındadır (

), transkripsiyadan daha çox tərcümə səviyyəsində fəaliyyət göstərir, mRNT səviyyələrinə hər hansı genotip təsiri olmadıqda, tərcümənin effektivliyinin tənzimlənməsi yolu ilə xəstəliyin etiologiyasında funksional polimorfizm kimi təsirini göstərir. Eyni xəttdə, rs4810485 SNP, axın sitometriyası ilə qiymətləndirilən lupus eritematozlu xəstələrin CD14 + monositlər və CD19 + B hüceyrələrində CD40 protein ifadəsi ilə əlaqələndirildi [18]. Digər tədqiqatlar rs1883832 və rs4810485 polimorfizmlərinin kiçik allelini daşıyan subyektlərdə sCD40 səviyyəsinin artdığını bildirmişdir [25, 32].

Biz nəzarət qrupu ilə müqayisədə kəskin koronar xəstələrin plazma nümunələrində sCD40 səviyyəsinin yüksəldiyini müşahidə etdik ( ). İltihabi proseslər zamanı sCD40 immunomodulyator kimi təsvir edilən bioloji xüsusiyyətlərə malikdir, çünki o, immun cavabları inhibə edir [37]. Proinflamatuar sistemli reaksiya bu mənada ürək-damar nəticələrinə töhfə verən bu sindromun patofiziologiyasında əsas rol oynayır, sCD40 CD40-ın aktivləşdirilməsinə qarşı antaqonist təsiri ilə CD40-CD40L sisteminin modulyasiya oluna biləcəyi potensial elementdir [38].

ACS-nin kliniki əlamətləri müxtəlif nəticələr verdikdə belə plazma sCD40 səviyyələrində ( ) fərqlənmirdi və sCD40 ACS inkişafının bir neçə mərhələsində iştirak edir [39]. Nəticələrimizi ehtiyatla qəbul etmək lazım olduğunu vurğulayırıq, çünki klopidoqrel ACS-də CD40 plazma səviyyələrinin ümumi dəyişkənliyinin 25% -ni izah edir və qan lipidlərinin artan konsentrasiyaları sCD40 səviyyələrinin əhəmiyyətli proqnozlaşdırıcıları kimi görünür (xətti reqressiya ilə qeyd olunur, ). ACS xəstələrində istifadə edilən farmakoloji terapiya ilə xolesterin sintezinin azalması sCD40 səviyyəsinin artması ilə əlaqələndirilmişdir [40]. Aydınlaşdırmaq lazımdır ki, klopidoqrel bu xəstələrin müalicə sxemində təməl daşı təşkil edən dərmanlardan biridir, ona görə də bu, gələcək tədqiqatlarda nəzərə alınmalı olan müdaxilə edən dəyişəndir. Təəssüf ki, klopidoqrellə müalicə olunmayan xəstələrin sayı kifayət qədər azdır və bu, güclü müqayisələrə mane olur.

Farmakoloji terapiya CD40-ın plazma səviyyələrinə təsir göstərə bilər [41], bu, polimorfizmlər arasında əlaqənin olmamasını izah edəcək bir vəziyyətdir. CD40 ACS xəstələrində plazma nümunələrinin lokalizasiyası və həll olunan səviyyələri. Bunun lehinə bir arqument, rs1883832 və rs4810485 əsas allelinin homozigot daşıyıcılarının sCD40 səviyyəsinin əhəmiyyətli dərəcədə daha yüksək olduğunu aşkar etdiyimiz nəzarət qrupundakı tapıntılardır (Şəkil 3).

ACS olan xəstələrin səviyyəsi artmışdır CD40L mRNT nəzarət elementləri ilə müqayisədə. Əsas odur ki, yüksək səviyyələr CD40L T limfositlərində mRNT ifadəsi kəskin koronar hadisələrlə əlaqədardır [42]. sCD40L plazma səviyyələrində ACS və CG arasında əhəmiyyətli fərqlər tapmasaq da, xəstələrdə sCD40L səviyyəsinin daha yüksək olduğunu və sCD40L ilə IFN- arasında müsbət xətti korrelyasiya olduğunu müşahidə etdik.γ aşkar edilmişdir (Şəkil 6), beləliklə, kəskin koronar hadisə olan xəstələrdə endotel disfunksiyasını və sistemik iltihabı təşviq edən T hüceyrə reaksiyalarının gücləndiyi güman edilə bilər [43, 44].

Əvvəlki hesabat belə nəticəyə gəlib CD40L mRNT ifadəsi cinsdən təsirlənə bilər [20] əlavə olaraq, CD40L mRNA səviyyəsinin azalması və sCD40L konsentrasiyalarının artması ACS-nin immunopatologiyasında CD40L funksiyasını dəstəkləyən daha böyük trombosit aktivliyini əks etdirə bilər [7]. Müvafiq olaraq, biz yalnız ACS xəstələrində daha yüksək plazma sCD40L konsentrasiyası tapdıq. Klinik təəssüratlara görə, UA olan qadınlarda STEMI olanlara nisbətən daha az konsentrasiya olub, kişilərdə əks təsir müşahidə olunub. Maraqlıdır ki, ACS-nin üç klinik spektri çox vaxt eyni simptomologiyaya malikdir [45] və elmi ictimaiyyət diaqnozu tamamlayan biomarkerlər tapmağa çağırılır.

Üstəlik, ürək-damar işemik xəstəlikləri olan xəstələrin 4%-30%-nin “aşağı cavab verənlər” və ya “cavab verməyənlər” [46] kimi etiketlənən antiplatelet terapiyaya zəif cavab verdiyi bildirilmişdir [46], xüsusən də kişi xəstələrdə 2,9 dəfə daha çox olduğu bildirilmişdir. qadınlara nisbətən antiplatelet terapiyaya cavab verməyən [47] və koronar ürək xəstəliyi, ölümcül olmayan əsas koronar hadisə (miokard infarktı, qeyri-sabit angina ilə xəstəxanaya yerləşdirmə və ya reanimasiya edilmiş ürək dayanması) və ya ölümcül işemik nəticəsində ölüm kimi təkrarlayan ürək-damar hadisəsi ilə əlaqələndirilir. vuruş [48].

Trombosit reaktivliyinin davamlılığı hətta antiplatelet agentlərinin istifadəsi ilə ACS-dən sonra təkrarlanan ürək-damar hadisələri riski yüksək olan subyektləri müəyyən edə bilən strategiyalara maraq oyatdı. Bununla əlaqədar olaraq, CD40L-nin plazma konsentrasiyası miyokard zədələnməsinin bir göstəricisi kimi əlaqələndirilmişdir və müstəqil olaraq ACS olan xəstələrdə ölümü və təkrarlanan Mİ-ni proqnozlaşdırır [10]. Beləliklə, ACS-də istifadə edilən antiplatelet terapiyanın cins və risk faktorlarına uyğun tənzimlənməsi mənfi hadisələrin riskini azalda və xəstələrin nəticələrini yaxşılaşdıra bilər.

Buna baxmayaraq, biz nəzərə alırıq ki, nəticələrimiz ehtiyatla şərh edilməli və təbəqələşdirilmiş analiz altında nümunə ölçüsü effektinə görə təkrarlanmalıdır.

Nəhayət, CD40L-in iki genetik variantının birləşməsinin təhlili mRNT ifadəsi və protein konsentrasiyası ilə əlaqəli deyil. CD40 və CD40L ifadəsində bu polimorfizmlərin funksional təsirini anlamaq üçün gen ifadəsini dəyişə bilən dəyişdirilə bilən amilləri nəzərə alaraq əlavə tədqiqatlar tələb olunur.

5. Nəticələr

Fərdi olaraq təhlil edilən, genetik variantları CD40CD40L bu Meksika kohortunda ACS üçün həssaslıq markerləri deyil. Bununla birlikdə, CD40-ın CTC haplotipi ACS riskinin azalması ilə əlaqələndirildi.

ACS xəstələri daha yüksək nümayiş etdirildi CD40L mRNT nisbi ifadəsi nəzarətdən daha.

ACS olan xəstələrdə CD40-ın həll olunan səviyyələri yüksəldi, lakin klopidoqrel terapiyası onlara təsir göstərir.

Nəzarətdə rs1883232 C/C və rs4810485 G/G genotip daşıyıcıları CD40-ın daha yüksək həll olunan səviyyələrini göstərdi.

STEMI olan qadın xəstələrdə UA ilə müqayisədə daha yüksək sCD40L səviyyələri var idi. Əks halda, UA kişi xəstələri UA ilə müqayisədə daha yüksək sCD40L səviyyələrini təqdim etdilər. Dərmanların plazma sCD40L-ə əhəmiyyətli təsiri olmadı.

Bu nəticələr, hətta antiplatelet və antiinflamatuar terapiya altında olduqda belə, ACS xəstələrində iltihab prosesini və trombositlərin aktivləşdirilməsini əks etdirə bilər. CD40-CD40L sisteminin AKS patogenezində immunoloji proseslərdə mühüm roluna görə, CD40 və CD40L-nin həll olunan səviyyələrinin ACS-dən sonra təkrarlanan ürək-damar hadisəsinin klinik cəhətdən faydalı markerləri ola biləcəyini müəyyən etmək üçün uzununa tədqiqatlar tələb olunur.

Məlumatların mövcudluğu

Bu araşdırmanın nəticələrini dəstəkləmək üçün istifadə edilən məlumatlar məqaləyə daxil edilmişdir.

Maraqların toqquşması

Müəlliflər bildirirlər ki, bu məqalənin dərci ilə bağlı maraqlar toqquşması yoxdur.

Təşəkkürlər

Müəlliflər hər bir insanın bu tədqiqatda iştirakını yüksək qiymətləndirirlər. Bu iş qismən Qvadalaxara Universiteti tərəfindən YV-yə verilən PROSNI 2017 və PROSNI 2018 tərəfindən dəstəkləndi.

İstinadlar

  1. A. Gisterå və G. K. Hansson, “Aterosklerozun immunologiyası”, Təbiət Nefrologiya rəyləri, cild. 13, yox. 6, səh. 368–380, 2017, qabaqcadan onlayn nəşr. Baxın: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  2. J. L. Anderson və D. A. Morrow, "Kəskin miokard infarktı" New England Journal of Medicine, cild. 376, yox. 21, səh. 2053–2064, 2017. Baxın: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  3. R. S. Rosenson, H. B. Brewer və D. J. Rader, "Lipoproteinlər kəskin koronar sindromun qəbulunda biomarkerlər və terapevtik hədəflər kimi", Sirkulyasiya Tədqiqatı, cild. 114, yox. 12, səh. 1880–1889, 2014. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  4. M. K. Reriani, A. J. Flammer, A. Jama, L. O. Lerman və A. Lerman, "Kəskin koronar sindromdan sonra həssas xəstələrdə ürək-damar hadisələrinin proqnozlaşdırılması üçün yeni funksional risk faktorları" Tiraj jurnalı, cild. 76, yox. 4, səh. 778–783, 2012. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  5. M. Franchini, “Kəskin koronar sindromun genetikası”, Tərcümə Tibbinin İlnamələri, cild. 4, yox. 10, səh. 192, 2016. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  6. R. Elosua, C. Lluis, və G. Lucas, “Estudio del komponente genético de la cardiopatía isquémica: de los estudios de ligamiento al genotipado integral del genom,” Revista Española de Cardiología Əlavələri, cild. 9, yox. 2, səh. 24–38, 2009. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  7. N. A. Mişel, A. Zirlik və D. Volf, “CD40L və aterotrombozda onun reseptorları – yeniləmə”, Ürək-damar təbabətində sərhədlər, cild. 4, səh. 40, 2017. Baxış: Nəşr Saytı | Google Alim
  8. E. Lutgens, D. Lievens, L. Beckers, M. Donners və M. Daemen, "CD40 və aterosklerozda onun liqandı" Ürək-damar təbabətində tendensiyalar, cild. 17, yox. 4, səh. 118–123, 2007. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  9. C. Antoniades, C. Bakogiannis, D. Tousoulis, A. S. Antonopoulos və C. Stefanadis, "CD40/CD40 liqand sistemi: iltihabın aterotrombozla əlaqələndirilməsi", Amerika Kardiologiya Kollecinin jurnalı, cild. 54, yox. 8, səh. 669–677, 2009. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  10. N. Varo, J. A. de Lemos, P. Libby və başqaları, “Soluble CD40L: akut koronar sindromlardan sonra risk proqnozu,” Dövriyyə, cild. 108, yox. 9, səh. 1049–1052, 2003. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  11. M. T. Rondina, J. M. Lappe, J. F. Karlquist və başqaları, "Koronar angioqrafiyadan keçən stabil xəstələrdə koronar arteriya xəstəliyinin və uzunmüddətli klinik nəticələrin proqnozlaşdırıcısı kimi həll olunan CD40 liqandı," Kardiologiya, cild. 109, yox. 3, səh. 196–201, 2008. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  12. Y. Li, C.-X. Tian, ​​M. Wang və Z.-E. Xia, "CD40 gen polimorfizmlərinin kəskin koronar sindrom, hipertoniya və diabetlə əlaqəsi" Zhonghua Yi Xue Za Zhi, cild. 87, yox. 10, səh. 690–694, 2007. Baxın: Google Scholar
  13. C. Tian, ​​W. Qin, L. Li, W. Zheng və F. Qiu, “CD40 Kozak ardıcıllığında ümumi polimorfizm (-1C/T) kəskin koronar sindromla əlaqələndirilir,” Biotibb və Farmakoterapiya, cild. 64, yox. 3, səh. 191–194, 2010. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  14. C. Wang, J. Yan, P. Yang, R. Du və G. Chen, "CD40 gen polimorfizmi və qeyri-sabit koronar aterosklerotik lövhələr arasındakı əlaqə" Klinik Kardiologiya, cild. 33, yox. 6, səh. E55–E60, 2010. Baxın: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  15. A. Mälarstig, B. Lindahl, L. Wallentin və A. Siegbahn, “Hollaşan CD40L səviyyələri -3459 A>G polimorfizmi ilə tənzimlənir və miyokard infarktı və ST yüksəlməsi olmayan kəskin koronar sindromda antitrombotik müalicənin effektivliyini proqnozlaşdırır,” Arterioskleroz, Tromboz və Damar Biologiyası, cild. 26, yox. 7, səh. 1667–1673, 2006. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  16. K. P. Burdon, C. D. Langefeld, S. R. Beck və başqaları, "CD40 geninin variantları, lakin CD40L geninin variantları Diabet Ürək Tədqiqatında (DHS) koronar arteriya kalsifikasiyası ilə əlaqələndirilir." American Heart Journal, cild. 151, yox. 3, səh. 706–711, 2006. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  17. M. García-Bermúdez, C. González-Juanatey, R. López-Mejías et al., "İspan romatoid artritli xəstələrdə CD40-CD154 gen polimorfizmlərinin xəstəliyə həssaslıq və ürək-damar riski ilə əlaqəsinin öyrənilməsi," PLOS BİR, cild. 7, yox. 11, səh. e49214, 2012. Baxış: Publisher Site | Google Alim
  18. V. M. Vazgiourakis, M. I. Zervou, C. Choulaki və başqaları, "CD40 bölgəsində ümumi bir SNP sistemik lupus eritematosus ilə əlaqələndirilir və dəyişdirilmiş CD40 ifadəsi ilə əlaqələndirilir: patogenez üçün təsirlər," Revmatik Xəstəliklərin Salnamələri, cild. 70, yox. 12, səh. 2184–2190, 2011. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  19. K. S. Qandi, F. C. McKay, M. Koks və başqaları, "Dağınıq skleroz tam qan mRNT transkriptomu və genetik birliklər patogenezdə spesifik T hüceyrə yollarının nizamsızlığını göstərir," İnsan molekulyar genetikası, cild. 19, yox. 11, səh. 2134–2143, 2010. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  20. M. Wagner, M. Sobczyński, M. Bilińska et al., "MS risk alleli rs1883832T CD40-ın mRNA ifadəsinin azalması ilə əlaqələndirilir," Molekulyar Neyrologiya Jurnalı, cild. 56, yox. 3, səh. 540–545, 2015. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  21. J. Field, F. Shahijanian, S. Schibeci et al., "CD40-ın MS risk alleli antigen təqdim edən hüceyrələrdə hüceyrə membranına bağlı ifadənin azalması ilə əlaqələndirilir: gen funksiyası üçün təsirlər," PloS One, cild. 10, yox. 6, səh. e0127080, 2015. Baxış: Publisher Site | Google Alim
  22. E. M. Jacobson, E. Concepcion, T. Oashi və Y. Tomer, "A Graves xəstəliyi ilə əlaqəli Kozak ardıcıllığının tək nukleotid polimorfizmi CD40 gen tərcüməsinin effektivliyini artırır: tərcümə patofizyolojisi üçün bir vəziyyət," Endokrinologiya, cild. 146, yox. 6, səh. 2684–2691, 2005. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  23. Z.-L. Liu, J. Hu, S.-P. Zhao, X.-Z. Xiao və M.-S. Yang, “The CD40 rs1883832 Polimorfizm Sepsis Həssaslığına və sCD40L səviyyələrinə təsir edir,” BioMed Research International, cild. 2018, Məqalə nömrəsi 7497314, 8 səhifə, 2018. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  24. J. Chen, J.-H. Li, S.-J. Zhao, D.-Y. Wang, W.-Z. Zhang və W.-J. Liang, "Koroner ürək xəstəliyində CD40/CD40L və CD134/CD134L kostimulyator molekullarının klinik əhəmiyyəti," Dərman, cild. 96, yox. 32, məqalə e7634, 2017. Baxış: Publisher Site | Google Alim
  25. I. V. Román-Fernández, D. F. Ávila-Castillo, S. Cerpa-Cruz və başqaları, "Meksikanın qərbindəki romatoid artritli xəstələrdə CD40 funksional gen polimorfizmləri və mRNA ifadəsi," Genetika və Molekulyar Tədqiqatlar, cild. 15, yox. 4, 2016. Baxış: Nəşr Saytı | Google Alim
  26. P. Gururajan, P. Gurumurthy, P. Nayar et al., "Kəskin koronar sindromu olan xəstələrdə proqnostik marker kimi həll olunan CD40 liqandının serum konsentrasiyasının artması," Hindistan Klinik Biokimya Jurnalı, cild. 24, yox. 3, səh. 229–233, 2009. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  27. D. Engel, T. Seijkens, M. Poggi et al., "Aterosklerozda CD154-CD40-TRAF qarşılıqlı təsirinin immunobiologiyası", İmmunologiya üzrə seminarlar, cild. 21, yox. 5, səh. 308–312, 2009. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  28. CP Cannon, RG Brindis, BR Chaitman et al., "2013 ACCF/AHA əsas məlumat elementləri və kəskin koronar sindromlar və koronar arteriya xəstəliyi olan xəstələrin klinik idarə edilməsi və nəticələrinin ölçülməsi üçün təriflər: Amerika Kardiologiya Kolleci Fondunun hesabatı/ Amerika Ürək Assosiasiyasının Klinik Məlumat Standartları üzrə İş Qrupu (kəskin koronar sindromlar və koronar arteriya xəstəliyinin klinik məlumat standartlarını hazırlamaq üçün yazı komitəsi) Dövriyyə, cild. 127, yox. 9, səh. 1052–1089, 2013. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  29. P. Chomczynski və N. Sacchi, "Quanidinium tiocyanate-fenol-xloroform turşusu ilə RNT izolyasiyasının tək addımlı üsulu: iyirmi bir ildən sonra", Təbiət protokolları, cild. 1, yox. 2, səh. 581–585, 2006. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  30. K. J. Livak və T. D. Şmittgen, “Real-vaxt kəmiyyət PCR və 2(-delta delta C(T)) metodundan istifadə edərək nisbi gen ifadə məlumatlarının təhlili”, Metodlar San Dieqo Kaliforniya, cild. 25, yox. 4, səh. 402–408, 2001. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  31. M. Wang, Y. Li, W. Li, Z. Xia və Q. Wu, "CD40 gen polimorfizmi rs1883832, Çin hallarına nəzarət tədqiqatında kəskin koronar sindrom riski ilə əlaqələndirilir," DNT və Hüceyrə Biologiyası, cild. 30, yox. 3, səh. 173–178, 2011. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  32. J.-M. Chen, J. Guo, C. D. Wei və başqaları, "CD40 polimorfizmlərinin CD40 serum səviyyələri və sistemik lupus eritematosus riski ilə əlaqəsi," BMC Genetika, cild. 16, yox. 1, 2015. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  33. H.-C. Kuo, M. C. Chao, Y. W. Hsu və başqaları, "Tayvan əhalisində Kawasaki xəstəliyinin həssaslığı və koronar arteriya lezyonları ilə əlaqəli CD40 gen polimorfizmləri," Scientific World Journal, cild. 2012, Məqalə nömrəsi 520865, 5 səhifə, 2012. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  34. A. L. Peters, R. M. Plenge, R. R. Graham et al., "Gücləndirilmiş funksiyalı insan CD40 reseptorunun yeni polimorfizmi" qan, cild. 112, yox. 5, səh. 1863–1871, 2008. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  35. R. Rubi-Castellanos, G. Martínez-Cortés, J. Francisco Muñoz-Valle və başqaları, "İspanqabağı Mesoamerikan demoqrafiyası bütün Meksika ərazisində Mestizosun indiki əcdadını təxmin edir," Amerika Fiziki Antropologiya Jurnalı, cild. 139, yox. 3, səh. 284–294, 2009. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  36. S. Chadha, K. Miller, L. Farwell et al., "TNFRSF5-TNFSF5 (CD40-CD40L) və sistemik lupus eritematozusda assosiasiya analizinin haplotip quruluşu", Avropa İnsan Genetikası Jurnalı, cild. 13, yox. 5, səh. 669–676, 2005. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  37. C. van Kooten və J. Banchereau, “CD40-CD40 liqand,” Leykosit Biologiyası Jurnalı, cild. 67, yox. 1, səh. 2–17, 2000. Baxın: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  38. B. D. Hock, J. L. McKenzie, N. W. Patton və başqaları, "Hematoloji bədxassəli şişləri olan xəstələrdə həll olunan CD40-ın dövran səviyyələri və klinik əhəmiyyəti," Xərçəng, cild. 106, yox. 10, səh. 2148–2157, 2006. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  39. M. Tsuzuki, I. Morishima, T. Yoshida et al., "Qeyri-sabit anginası olan xəstələrdə həll olunan CD40 liqandı ilə həll olunan CD40 arasında tərs korrelyasiya yoxdur," Ürək damarları, cild. 20, yox. 6, səh. 245–250, 2005. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  40. M. Luomala, H. Päivä, R. Laaksonen et al., "Plazmada həll olunan CD40, orta dərəcədə hiperkolesterolemiyası olan xəstələrdə xolesterol metabolizması ilə əlaqədardır," Skandinaviya ürək-damar jurnalı, cild. 40, yox. 5, səh. 280–284, 2006. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  41. T. Sexton, E. Wallace və S. Smyth, "Kəskin koronar sindromlarda statinlərin antitrombotik təsiri: tromboz, iltihab və trombosit-leykosit qarşılıqlı əlaqəsinin kəsişməsində", Cardi Kardiologiya Baxışları, cild. 12, yox. 4, səh. 324–329, 2016. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  42. S. X. Anand, J. F. Viles-Qonzalez, J. J. Badimon, E. Çavuşoğlu və J. D. Marmur, “Aterotrombotik xəstəlikdə membranla əlaqəli CD40L və sCD40L”, Tromboz və hemostaz, cild. 90, yox. 09, səh. 377–384, 2003. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  43. J. F. McDyer, T. J. Goletz, E. Thomas, C. H. June və R. A. Seder, “CD40 liqand/CD40 stimullaşdırılması IFN- istehsalını tənzimləyir.γ insan periferik qanının mononükleer hüceyrələrindən IL-12 və/və ya CD28-dən asılı şəkildə İmmunologiya jurnalı, cild. 160, yox. 4, səh. 1701–1707, 1998. Baxın: Google Scholar
  44. K. Y. Stokes, L. Calahan, C. M. Hamrik, J. M. Russell və D. N. Qreyncer, "CD40/CD40L hiperkolesterolemiya səbəb olduğu mikrovaskulyar iltihaba kömək edir" Amerika Fiziologiya Jurnalı-Ürək və Qan dövranı Fiziologiyası, cild. 296, yox. 3, səh. H689–H697, 2009. Baxın: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  45. Təcili yardım şöbəsində kəskin koronar sindromun sürətli diaqnostikası üçün yüksək həssaslıqlı kardiak troponin: klinik və qiymət-effektivliyin qiymətləndirilməsi, Səhiyyədə Dərmanlar və Texnologiyalar üzrə Kanada Agentliyi, Ottava, 2013, CADTH Optimal İstifadə Hesabatı, No. 2.1A.
  46. T. K. W. Ma, Y.-Y. Lam, V. P. Tan və B. P. Yan, "Klopidogrelə cavab dəyişkənliyi: farmakogenetika və dərman qarşılıqlı təsiri nə qədər vacibdir?" Br. J. Clin. Farmakol., cild. 72, yox. 4, səh. 697–706, 2011. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  47. R. E. J. Roach, S. C. Cannegieter və W. M. Lijfering, "Birinci və təkrarlanan venoz tromboz üçün kişilərdə və qadınlarda diferensial risklər: genlərin və ətraf mühitin rolu," Tromboz və hemostaz jurnalı, cild. 12, yox. 10, səh. 1593–1600, 2014. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim
  48. G. G. Schwartz, C. M. Ballantyne, P. J. Barter və başqaları, "Kəskin koronar sindromdan sonra təkrarlanan işemik hadisələrin riski ilə lipoproteinin (a) birləşməsi: Dal-Nəticələrin randomizə edilmiş klinik sınaqlarının təhlili," JAMA Kardiologiya, cild. 3, yox. 2, səh. 164–168, 2018. Baxış: Nəşriyyat Saytı | Google Alim

Müəllif hüququ

Müəllif hüququ © 2019 D. E. Martínez-Fernández et al. Bu, Creative Commons Attribution License əsasında paylanmış açıq giriş məqaləsidir və orijinal əsərə lazımi sitat gətirmək şərti ilə istənilən mühitdə məhdudiyyətsiz istifadəyə, paylanmağa və təkrar istehsala icazə verir.


Metodlar

İştirakçılar

İştirakçılar yaşları 18-77 arasında olan 105 qafqazlı kişi idi (M = 28.51, SD = 13.82) flayerlər, qəzetlər və onlayn reklamlar vasitəsilə Stony Brook Universitetindən və ətraf icmalardan işə götürülənlər. İştirakçılar uyğunluq üçün telefonla yoxlanılıb. Bütün iştirakçılar əvvəlcədən psixoloji pozğunluqların diaqnozu və ya hər hansı bir əlaqəli dərman istifadə etmədiyini bildirdi. Digər istisna meyarlarının təfərrüatları Əlavə fayl 1-də verilmişdir. Erkən həyat və xroniki stress, 5-HTTLPR genotipi və DNT metilasiyası ölçüləri (aşağıya bax) bu iştirakçıların hamısından əldə edilmişdir. alt çoxluq (N = 71) TSST-də iştirak etdi (M yaş = 29.79, SDyaş = 15.24). Bu iştirakçılardan son depresif simptomlar, gen ifadəsi və TSST-yə kortizol reaksiyası haqqında əlavə məlumatlar əldə edilmişdir. Tədqiqat Stony Brook Universitetinin İnstitusional Nəzarət Şurası tərəfindən təsdiqləndi və iştirakçılar eksperimental sessiyalarda iştirak etməzdən əvvəl yazılı razılıq verdilər. Hər sessiyanın sonunda iştirakçılara şifahi və yazılı şəkildə məlumat verilmiş və hər hansı ictimai nəqliyyat xərcləri üçün 100 ABŞ dolları üstəgəl kompensasiya ödənilmişdir.

Eksperimental seanslar

Gündəlik dəyişkənliyin təsiri altında bioloji tədbirləri standartlaşdırmaq üçün bütün eksperimental seanslar saat 12:00 ilə 14:00 arasında başladı. İştirakçılara gəlməzdən əvvəl ən azı 1 saat yeməkdən, içməkdən (sudan başqa) və idmandan çəkinmələri tövsiyə olunub. Təxminən 4 saat davam edən ümumi prosedura razılıq, sorğu vərəqələrinin doldurulması, TSST, həyat hadisəsi ilə bağlı müsahibə və brifinq daxildir. İştirakçılar həmçinin, biri sessiyanın əvvəlində (TSST-dən 45 dəqiqə əvvəl) və biri də sonunda (TSST-dən 105 dəqiqə sonra) genotipləşdirmə və DNT metilasiya analizləri üçün qan nümunələri təqdim etdilər. Kortizol səviyyələri sessiya ərzində doqquz fərqli vaxt nöqtəsində toplanmış tüpürcək nümunələri ilə qiymətləndirilib.

Erkən həyat stressinin qiymətləndirilməsi

Fiziki, cinsi və emosional zorakılıq və fiziki və emosional laqeydlik alt ölçüləri olan 28 maddədən ibarət uşaqlıq dövründə pis rəftarın ümumi istifadə edilən ölçüsü olan Uşaqlıq Travması Sorğu (CTQ) [47] ilə erkən həyat stressi qiymətləndirilmişdir. Hər bir alt miqyas beş maddədən, üstəlik, pis rəftarın rədd edilməsinə nəzarət edən üç maddədən ibarətdir. Maddələr 5 ballıq Likert şkalasında (1-dən 5-ə qədər) qiymətləndirilir və daha yüksək ballar pis rəftarın daha yüksək səviyyəsini göstərir. 25 ilə 125 arasında dəyişə bilən CTQ ümumi xalını hesablamaq üçün ballar əlavə olunur.

Xroniki stress və son depressiya əlamətlərinin qiymətləndirilməsi

Son 3 aydakı xroniki stress Trier Xroniki Stressin İnventarlaşdırması (TICS) ilə qiymətləndirilmişdir [48,49]. TICS xroniki stresslə əlaqəli davranışların tezliyi ilə bağlı 12 maddədən ibarət olan öz-özünə hesabat ölçüsüdür, məsələn, “Tapşırıqlarımı yerinə yetirə bilməyəcəyimdən narahatam” və “Həddindən artıq işim var.” Hər bir maddə 0 (heç vaxt) ilə 4 (çox tez-tez) arasında qiymətləndirilib və 0-dan 48-ə qədər dəyişə bilən ümumi xroniki stress xalını hesablamaq üçün maddələr əlavə olunur.

TSST yerinə yetirən iştirakçılar həmçinin son depressiv simptomları qiymətləndirmək üçün Beck Depressiya İnventar II BDI-II [50] tamamladılar. BDI-II, kədər, ümidsizlik və özünü günahlandırma kimi son depressiya əlamətlərinin (son 2 həftə) 21 maddədən ibarət öz hesabat ölçüsüdür. Hər bir maddə 0-dan 3-ə qədər miqyasda qiymətləndirilir və ballar 0-dan 63-ə qədər dəyişə bilər. Daha yüksək ballar daha yüksək depressiv simptomları göstərir.

Kortizol səviyyələrinin və stress reaktivliyinin qiymətləndirilməsi

TSST-yə cavab olaraq kortizol səviyyələrinin qiymətləndirilməsi üçün tüpürcəklərdən istifadə etməklə iştirakçıların tüpürcək nümunələri toplandı (Sarstedt, Rommelsdorf, Almaniya). İlk qan götürülməsindən 45 dəqiqə sonra və TSST başlamazdan əvvəl iştirakçılar ilkin tüpürcək nümunələrini təqdim etdilər və sonra TSST otağına aparıldılar. TSST Kirşbaumda təsvir edildiyi kimi yerinə yetirildi və b. [22]. Qısaca olaraq, tapşırıq hazırlıq mərhələsindən (5 dəqiqə) ibarət idi, daha sonra iştirakçının xəyal etdiyi iş üçün niyə ən yaxşı namizəd olacağına dair ictimai çıxış (5 dəqiqə) və geriyə hesablama tapşırığı (5 dəq) idi. . Tapşırıq şifahi və ya şifahi olmayan rəy bildirməyən iki nəfərlik komitənin qarşısında baş verdi. TSST zamanı mövzuya göstəriş verən fəal komitə üzvü həmişə əks cinsdən (qadın) iştirakçı ilə ünsiyyətdə olmayan fəal olmayan komitə üzvü həmişə iştirakçı ilə eyni cinsdən (kişi) olub. TSST-dən sonra iştirakçılar ilkin sınaq otağına qayıtdılar və TSST-dən dərhal sonra ikinci tüpürcək nümunəsi verdilər və TSST təcrübələrini qiymətləndirən 8 maddəlik Visual Analog Scale (VAS) doldurdular, məsələn, stresli, təhdid edici, və ya çətinləşdirir. Əlavə tüpürcək nümunələri TSST-dən 10, 20, 30, 45, 60, 90 və 105 dəqiqə sonra toplanmışdır. Tüpürcək nümunələri kortizol konsentrasiyasının təhlili üçün Boston Brandeis Universitetinə göndərilənə qədər sessiyadan dərhal sonra -20°C-də saxlanıldı. Hər bir nümunə 0,16 ng/ml həssaslıqla (IBL International, Toronto, ON, Kanada) kommersiyada əldə edilən kimilüminesans immunoassay (RE62019) istifadə edərək dublikatlarda yoxlanılıb. Təhlillərarası və analizdaxili dəyişmə əmsalları müvafiq olaraq 7%-dən və 4%-dən az olmuşdur. Kortizolun pik artımı TSST-dən sonra pik kortizol səviyyəsi ilə əvvəlki tədqiqatlarda istifadə edilən baza arasındakı fərq kimi qiymətləndirilmişdir [23,24]. Bütün iştirakçılar üçün TSST-dən sonra ən yüksək reaksiya TSST-dən sonra 10-20 dəqiqə ərzində müşahidə edilmişdir. Kortizol reaktivliyinin ölçüsü kimi əyri altındakı sahədən deyil, pik reaksiyadan istifadə etdik, çünki birincisi potensial olaraq gen ifadəsindəki dəyişikliklərlə, ikincisi isə ümumi hormonal çıxışla daha yaxından əlaqəli ola bilər [51].

Qan nümunələrinin işlənməsi

Vahid hüceyrələr qrupu ilə başlamaq üçün qan alındıqdan dərhal sonra periferik qan mononükleer hüceyrələri (PBMCs) Leucosep® borularından (Greiner Bio-One Inc., Monroe, NC, ABŞ) və Ficoll-Paque istifadə edərək qandan təcrid olundu. (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, ABŞ) istehsalçının protokoluna uyğun olaraq ayırma mühiti. Təcrid olunmuş PBMC qranulları sonrakı DNT və RNT ekstraksiya prosedurları üçün -80°C-də saxlanıldı.

PBMC qranullarından DNT və RNT çıxarılması istehsalçının təlimatlarına uyğun olaraq AllPrep DNT/RNT/Protein Mini dəsti (Qiagen, Valencia, CA, ABŞ) tərəfindən həyata keçirilmişdir. DNT və RNT-nin kəmiyyət və keyfiyyəti NanoDrop ND-1000 (Thermo Scientific, Wilmington, DE, ABŞ) vasitəsilə qiymətləndirilib, DNT nümunələri -20°C-də, RNT nümunələri isə -80°C-də saxlanılıb.

5-HTTLPR və rs25531-in genotiplənməsi

5-HTTLPR genotipi əvvəlki işdə istifadə edilmiş primerlərdən istifadə edərək 67,5°C tavlama temperaturunda 25 ng DNT-nin PCR gücləndirilməsi yolu ilə müəyyən edilmişdir [5]. 24 nümunədən ibarət təsadüfi alt dəst 100% olan test-təkrar test etibarlılığını qurmaq üçün ilkin nəticələrə kor olan bir texnik tərəfindən iki dəfə işlənmişdir. Genotipləşdirmə nəticəsində fərdlər S/S, S/L və ya L/L kimi genotipləniblər.

A/G SNP (rs25531) genotiplənməsi üçün 6 μl 5-HTTLPR PCR məhsulu 5 Vahidlə həzm olundu. HpaII məhdudlaşdırıcı ferment (New England Biolabs, Ipswich, MA, ABŞ) 3 saat 37°C-də. Nəticədə fərdlər S/S, S/L kimi genotipləndiA, S/LG, LA/LA, LA/LG, və LG/LG. L-nin ifadəsini nəzərə alaraqG allelin S allelinə [52], trialelliyə (S, LA, LG) təsnifat sxemi qruplaşdırılmış S/LG və LG/LG 'S/S' və L kimi şəxslərA/LG şəxslər 'L/S' kimi. Genotip paylanması həm bialel, həm də triallelik təsnifat sxemlərinə görə Hardy-Weinberg tarazlığında idi (P > .05).

DNT metilasyon analizləri

DNT metilasyonunun təhlili üçün hər bir iştirakçıdan 500 ng DNT istehsalçının göstərişlərinə uyğun olaraq Epitect Bisulfite dəsti (Qiagen, CA) istifadə edilərək bisulfitlə işlənmiş və metilasiya analizlərində istifadə olunana qədər -20°C-də saxlanılmışdır. Bundan əlavə, bütün metilasiya analizlərində 500 ng metillənməmiş (0%) və tam metilləşdirilmiş (100%) insan DNT nümunələri (Zymo Research, Irvine, CA, ABŞ) bisulfitə çevrilmə kimi istifadə edilmək üçün iştirakçıların nümunələri ilə birlikdə bisulfitlə müalicə edilmişdir. nəzarət edir.

Qlobal DNT metilasiyası

Uzun interspersed Nüvə Element-1-in metilasiyası (Xətt-1) həm ELS ilə assosiasiyaların tədqiqi üçün ([39]-a oxşar) və həm də gen-spesifik metilasyonun ([31]-ə bənzər) araşdırılması zamanı qlobal metilasiyaya nəzarət üçün qlobal metilasiya ölçüsü kimi istifadə edilmişdir. Xətt-1 metilasiya istehsalçının protokoluna uyğun olaraq və dəstlə birlikdə təqdim edilən kommersiya primerləri ilə Stony Brook Universitetinin Genomika Əsas Təsislərində PyroMark Q96 MD sistemində PyroMark Q96 CpG LINE-1 dəstindən (Qiagen, CA) istifadə etməklə dublikatlarda ölçüldü. Prosedurun təfərrüatları Əlavə fayl 1-də verilmişdir.

SLC6A4 CpG ada DNT metilasiyası

CpG adasının yuxarı axınının metilasiyası SLC6A4 Sequenom Epityper MassArray sistemi (San Dieqo, CA, ABŞ) ilə ölçüldü. İki primer dəsti Philibert-ə bənzər iki amplikonda CpG adasındakı 79 CpG sahələrini gücləndirmək üçün nəzərdə tutulmuşdur. və b. [40] Epityper proqram təminatından istifadə etməklə (Sequenom, CA). Bu texnika ilə, metilasyon CpG vahidləri bir və ya daha çox bitişik CpG yerindən ibarət ola bilən təhlil edilir. 79 CpG yerindən ibarət iki amplikon cəmi 37 CpG Vahidini əhatə etmişdir. Bütün nümunələr üç nüsxədə aparıldı. Ön emaldan sonra amplikon 1 və 2-də 26 CpG Vahidindən metilasiya məlumatları bütün analizlərə daxil edilmişdir (Şəkil 1). Prosedurun təfərrüatları, əsas ardıcıllıqlar və məlumatların təhlili Əlavə fayl 1-də verilmişdir.

SLC6A4 DNT metilasiya analizi üçün CpG ada amplikonları. Təhlil edilmiş CpG Vahidləri 1-dən 26-ya qədər nömrələnir. Tərcümə edilməmiş ekson 12-15 CpG Vahidlərini əhatə edir və 5-HTTLPR CpG adasının yuxarı axınında yerləşir. Ulduzlar Faktor 1, 2 və 3-ə aid olan CpG Vahidlərini göstərir (F1 - F3). F1 amil yükləri .35 ilə .83 arasında, F2 amil yükləri .37 ilə .76 arasında, F3 amil yükləri isə .73 ilə .87 arasında dəyişdi.

Gen ifadə analizləri

Hər bir iştirakçı üçün iki RNT nümunəsi gen ifadə analizləri üçün istifadə edilmişdir, biri TSST-dən 45 dəqiqə əvvəl (əsas xətt), digəri isə TSST-dən (cavab) 105 dəqiqə sonra. Gen ifadəsinin kəmiyyətinin müəyyən edilməsindən əvvəl, RNT nümunələrinin bütövlüyü Agilent 2100 BioAnalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, ABŞ) istifadə edərək qiymətləndirilmişdir. Nümunələrin RNT Bütövlük Nömrələri (RIN) yüksək idi (M = 7.94, SD = 1.32) və TSST-dən əvvəl və sonra nümunələrin RIN-ləri əhəmiyyətli dərəcədə fərqlənmədi (P = .853). Daha sonra istehsalçının protokoluna (Qiagen, CA) uyğun olaraq QuantiTect Reverse Transkripsiya Kitindən istifadə edərək hər zaman nöqtəsindən 1 μg RNT cDNA-ya çevrildi. Daha sonra cDNT nümunələri beş dəfə seyreltildi və 1 μl seyreltilmiş cDNA Qiagen SYBR Green PCR + UNG dəsti (Qiagen, CA) və gendən istifadə edərək, kəmiyyət PCR (qPCR) ilə namizəd genlərin gen ifadə analizi üçün istifadə edildi. - Roche Universal Probe Library saytından hazırlanmış xüsusi primerlər (http://www.roche-applied-science.com/sis/rtpcr/upl/ezhome.html). qPCR reaksiyaları üç nüsxədə Roche 480 LightCycler sistemində (Roche Applied Science, Indianapolis, IN, USA) 60°C tavlama temperaturunda həyata keçirilib.

PBMC-lərdə ən yaxşı istinad genlərini müəyyən etmək üçün altı namizəd istinad geninin ifadəsi baza və cavab vaxtı nöqtələrində əldə edilmiş beş fərdin RNT nümunəsindən təhlil edilmişdir. Bu üsul müəyyən edilmişdir HPRT1 (hipoksantin fosforiboziltransferaza 1) və GAPDH (gliseraldehid 3-fosfat dehidrogenaz) PBMC-lərdə ən yaxşı istinad genləri kimi. CT qPCR ilə əldə edilmiş dəyərlər daha sonra delta-delta-C istifadə edərək, baza və cavab nümunələri arasında gen ifadə dəyişikliyini qiymətləndirmək üçün istifadə edilmişdir.T üsul [53]. Referans genlər üçün normallaşdırılan hər bir nümunə üçün gen ifadəsindəki dəyişikliklər, qat dəyişikliyini əks etdirən qat-dəyişiklik dəyərləri kimi göstərilir. SLC6A4NR3C1 bazaya nisbətən TSST-dən sonra. qPCR təhlillərinin və primer ardıcıllığının təfərrüatları Əlavə fayl 1-də verilmişdir.

Statistik təhlil

Bütün statistik təhlillər Windows versiyası 16.0 (Çikaqo, IL, ABŞ) üçün SPSS proqramından istifadə etməklə həyata keçirilmişdir. α = .05. TSST-nin kortizol reaksiyasını uğurla təhrik edib-etmədiyini qiymətləndirmək üçün təcrübə boyu toplanmış doqquz tüpürcək nümunəsi üçün təkrar ölçmə ANOVA-dan istifadə etdik. Bütün təhlillərdən əvvəl, kortizol məlumatları Kolmogorov-Smirnov testi ilə normal paylanma üçün sınaqdan keçirilmişdir. Çox vaxt nöqtələrində nümunələr üçün normallığın pozulmasına görə (P < .05), log transformasiyası bütün kortizol məlumatlarına tətbiq edilmişdir. Sferikliyin pozulmasına görə (P < .05), İstixana-Qeysser korreksiyası tətbiq edilmişdir.

Maraqlanan dəyişənlər arasındakı korrelyasiyanı araşdırmaq üçün Pearson korrelyasiya əmsalı (r) normal paylanmış dəyişənlər üçün istifadə edilmişdir və Spearmanın rho əmsalı (rs) qeyri-normal paylanmış dəyişənlər üçün istifadə edilmişdir. Yaş və kimi bəzi dəyişənlərin təsirlərinə nəzarət etmək üçün lazım olduqda qismən korrelyasiyalardan istifadə edilmişdir Xətt-1 metilasiya.

CpG adasında metilasiya nümunələrini anlamaq və araşdırılan dəyişənlərin sayını azaltmaq üçün, Olsson kimi adada 26 CpG Vahidini əhatə edən amil təhlili aparıldı. və b. [41]. Kaiser-Meyer-Olkin seçmə adekvatlığının ölçüsü (.834) və Bartlett sferiklik testi (P < .001) faktor analizinin verilənlər toplusu üçün uyğun olduğunu təklif etdi. Təhlil nəticəsində variasiyanın 75%-ni izah edən beş amil ortaya çıxdı. Bununla belə, son iki amilə üçdən az dəyişən yükləndiyi üçün yalnız ilk üç amil nəzərə alınıb: Faktor 1 (F1), Faktor 2 (F2) və Faktor 3 (F3). F1, F2 və F3 ilə izah edilən dispersiya faizi müvafiq olaraq 37, 15 və 12 olmuşdur. Bu amillərin yüklənməsi elə idi ki, F1 ilk növbədə CpG adasının başlanğıcında ekzonun başlanğıcına qədər CpG Vahidlərini, F2-yə adanın sonuna doğru olanları və F3-ə adanın sonuna doğru daha qısa bir bölgə daxil idi ( Şəkil 1).


GİRİŞ

Protein keyfiyyətinə nəzarət (PQC) eukaryotik hüceyrələrdə protein homeostazının saxlanılması üçün vacibdir. Sitozolda səhv qatlanmış zülallara həsr olunmuşlar da daxil olmaqla, çoxlu hüceyrə bölmələri üçün spesifik PQC yolları müəyyən edilmişdir (Eisele və Wolf, 2008 Heck). və b., 2010 Nillegoda və b., 2010), nüvə (Gardner və b., 2005), plazma membranı (Zhao və b., 2013) və endoplazmik retikulum membranı (Vembar və Brodsky, 2008). Həqiqətən, hətta ribosomdan çıxan qüsurlu tərcümə məhsullarına hücum edən PQC yolları mövcuddur (Bengtson və Joazeiro, 2010 Brandman və b., 2012 Defenouillere və b., 2013 Verma və b., 2013). Bununla belə, zülal strukturunun və lokalizasiyasının böyük müxtəlifliyini nəzərə alaraq, çox güman ki, PQC haqqında anlayışımız tam deyil.

Zülal biogenezinin üzləşdiyi problemlərin mənzərəsini araşdırarkən, biz PQC-nin mexaniki tədqiqi üçün maraqlı bir hədəf olaraq ribosomu işıqlandırdıq. Mayada ribosom əmələ gəlməsi 35S və 5S rRNA-nın transkripsiyasını, 35S əsas rRNT-nin işlənməsini, 79 müxtəlif ribosom zülalının tərcüməsini və nüvə idxalını, işlənmiş rRNA-ların və ribosom zülallarının nüvədə yığılmasını tələb edən mürəkkəb prosesdir (Kressler). və b., 2010). Ribosom yığılması təkcə mürəkkəb deyil, həm də biogen qabiliyyətin təsirli bir hissəsini inhisara alır. Sürətlə böyüyən maya hüceyrələrində ümumi transkripsiyanın 60%-i rRNT-yə, RNT polimeraza II transkripsiyasının 50%-i və mRNT-nin birləşdirilməsinin 90%-i ribosomal zülallara həsr olunur (Warner, 1999). Bu nəhəng axın istifadəyə yararsız komponentlərin əmələ gəlməsini və yığılmasını minimuma endirmək üçün səmərəli PQC mexanizmlərinə üstünlük verir. Bununla belə, yığılmış ribosomlar üçün homeostatik tənzimləmə mexanizmləri haqqında anlayışımızın sürətlə genişlənməsinə baxmayaraq, ribosomların birləşməsini izləyən və hüceyrələrə yığılma prosesində səhvlər və ya balanssızlıqların öhdəsindən gəlməyə kömək edən homeostatik mexanizmlər zəif başa düşülür.

Ribosom yığılması ilə bağlı sadə, lakin dərin sual, hüceyrənin bütün zülalların stokiometrik istehsalını təmin etmək üçün ribosomal gen ifadəsini necə idarə etməsi ilə bağlıdır. Bir sıra tədqiqatlar göstərir ki, bəzi ribosom zülalları həddindən artıq istehsal oluna bilər və hüceyrə yığılmamış zülalları parçalayaraq bu zülalların müvafiq səviyyəsini saxlayır. Belə bir mexanizmin mövcudluğu bir neçə dəlil xətti ilə təsdiqlənir. Məsələn, rRNT emalı pozulduqda yeni sintez edilmiş ribosomal zülallar sürətlə parçalanır (Gorenstein and Warner, 1977 Warner, 1977). Bundan əlavə, ribosomal zülal geninin əlavə nüsxələrini saxlayan hüceyrələrdə, həddindən artıq qısa nəbz işarəsi (~ 45 s) aparılmasa, müvafiq zülalın həddindən artıq istehsalı aşkar edilə bilməz (Abovich və b., 1985). Bu müşahidələrə əsasən təklif edilmişdir ki, bəzi ribosom zülalları normal olaraq hüceyrələrin tələb etdiyi səviyyədən daha yüksək səviyyədə sintez olunur, lakin artıq miqdarlar sürətlə parçalanır, belə ki, onlar aşkar edilərək yığılmır. Bununla belə, həddindən artıq istehsal edilmiş ribosomal zülalların parçalanması mexanizmi araşdırılmamışdır. Bu fərziyyə daha iki yeni araşdırma ilə dəstəklənir. Hüceyrə mədəniyyətində amin turşuları ilə impulslu stabil izotop etiketlənməsi ilə aparılan təcrübələr göstərir ki, yeni sintez edilmiş insan ribosom zülalları rRNT ilə birləşmək üçün sürətlə nüvəyə idxal olunur və artıqlığı proteazom (Lam) tərəfindən parçalanır. və b., 2007). Bundan əlavə, mayada əlavə bir xromosomun əldə edilməsi əlavə xromosomdakı genlərin əksəriyyəti üçün mRNT və protein səviyyələrində mütənasib artıma səbəb olur (Torres). və b., 2007, 2010), əksər ribosom zülalları surətlərin sayı ilə mütənasib olaraq artmır, lakin naməlum mexanizm (Dephoure) tərəfindən posttranslational olaraq zəiflədilir. və b., 2014). Bir çox mexanizmlər artıq ribosom zülallarının deqradasiyasına potensial vasitəçilik edə bilər. İnsan tədqiqatları proteazomu əhatə etdiyi halda, Lam tərəfindən müşahidə edilən ribosomal alt bölmələrin deqradasiyası müəyyən edilməmişdir. və b. (2007) montaj statusu ilə bağlı idi və ya ubiquitinasiyadan asılı idi. Maya hüceyrələrində ribosom metabolizması ilə digər iki mexanizm əlaqələndirilmişdir. Amin turşularından ac qalan maya hüceyrələri ribofagiya adlanan prosesdə avtofaqosomlarda mövcud yetkin ribosomları əhatə edir (Kraft və b., 2008). Bundan əlavə, istilik şokuna məruz qalan maya hüceyrələri 40S subunitləri olan stress qranulları əmələ gətirir və onlar da otofagiya (Grousl) ilə xaric edilir. və b., 2009).

Bu işdə biz ribosomal zülalların digər ribosomal subunitlərə nisbətən stoxiometrik artıqlıqda əmələ gələn taleyini araşdırırıq. Nümayiş edirik ki, həddindən artıq istehsal olunmuş ribosom zülalları əsasən ribosomlara birləşə bilmir və əvəzində proteazomdan asılı şəkildə nüvədə sürətlə ubiquitinləşir və parçalanır.


Müəlliflər fəal və mehriban əməkdaşlığa görə GS və onun ailəsinə, texniki yardıma görə O. Sthandier və M. Markioniyə, elmi məsləhətə görə D. Kakkiarelliyə, əlyazmanı oxuduğuna görə V. Silenziyə, bioloji tədqiqatlar üçün Telethon Network Genetic Biobanks (GTB12001F) üçün təşəkkür edir. nümunələri və fiqur dizaynı üçün Servier tərəfindən SMART (https://smart.servier.com/). Bu iş qismən ERC-2019-SyG (855923-ASTRA), Telethon (GGP16213), Ana Layihə Italia, AIRC (IG 2019 Id. 23053) və PRIN 2017 (2017P352Z4) tərəfindən I.B-yə qrantlar hesabına dəstəkləndi. İspaniya İqtisadiyyat, Sənaye və Rəqabətlilik Nazirliyi (MEIC) (BFU2016-75008-P) - L.D.C.və Sapienza Araşdırma Zəngləri (RM118164363B1D21) J.M.

İşin konseptuallaşdırılması və dizaynı JM, LDC və IB tərəfindən həyata keçirilmişdir. Təcrübələr JM, ML, FC, AR, VDC, DM, TS və LP tərəfindən aparılıb və təhlil edilib. Bioinformatika məlumatlarının təhlili EB, AS və AC tərəfindən aparılmışdır. Əlyazmanın orijinal layihəsi JM və IB tərəfindən yazılmışdır. Layihə bütün müəlliflər tərəfindən nəzərdən keçirilmiş və redaktə edilmişdir.


Videoya baxın: Delta Feedback: How to pass Delta Module 2 (Iyul 2022).


Şərhlər:

  1. Daoud

    Bütün gecə ayağını bağlamadın .. Dostların olmaq lazım deyil - dostlarla dost olmalısan. - Bahar kimin harda olduğunu göstərəcək! Vodka "Buratino" ... Özünüzü odun kimi hiss edin ... Yalnızlıq E-poçtunuz olduqda və məktubların yalnız poçt serveri tərəfindən göndərilməsidir! Araba ilə Babu! Mare - pozada! Arağın etiketindəki yazı: "Sui-istifadə etməzdən əvvəl soyuducuda saxlayın"

  2. Mezisho

    Əla fikir, mən sizinlə razıyam.

  3. Lycomedes

    analoqları varmı?



Mesaj yazmaq