Məlumat

13.5: Potensial tələlər və onlardan necə qaçınmaq olar - Biologiya

13.5: Potensial tələlər və onlardan necə qaçınmaq olar - Biologiya


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Bu yaxınlarda dövlətdən asılı diversifikasiya modellərini tənqid edən bir neçə məqalə dərc edilmişdir (Rabosky and Goldberg 2015, Maddison and FitzJohn (2015)). Bu sənədlər bu fəsildə təsvir olunan metodların empirik məlumatlara tətbiqi zamanı həll edilməsi vacib olan əsaslı tənqidləri qaldırır. Bu bölmədə mən tənqidləri və onların potensial çarələrini təsvir etməyə çalışacağam.

Hal-hazırda həyata keçirilən dövlətdən asılı modellərin ən ciddi məhdudiyyəti, mümkün modellərin yalnız nisbətən kiçik dəstini nəzərə almasıdır. Xüsusilə, yuxarıda təsvir etdiyimiz yanaşma iki modeli müqayisə edir: birincisi, doğum və ölüm nisbətlərinin sabit olduğu və xarakterin vəziyyətindən asılı olmayan model; və ikincisi, doğum və ölüm nisbətlərinin yalnız xarakter vəziyyətindən asılı olduğu model (Maddison et al. 2007). Ancaq nəzərdən keçirdiyimiz modellərdən hər ikisindən (ümumiyyətlə) daha ümumi ola biləcək başqa bir ehtimal var: doğum və ölüm nisbətləri dəyişir, lakin təhlil etmək üçün seçdiyimiz xüsusi xarakterdən asılı olmayan bir şəkildə. Deyirəm ki, bu, yəqin ki, ümumi bir nümunədir, çünki biz bilirik ki, doğum və ölüm nisbətləri həyat ağacındakı nəsillər arasında çox fərqlidir (Alfaro et al. 2009) və mənə elə gəlir ki, hansı personajların töhfə verə biləcəyi ilə bağlı bir çox fərziyyələrimiz bu variasiya, bu nöqtədə, qaranlıqda bıçaqlanır.

Bu məsələ statistik təhlillər üçün normal bir məsələdir – axırda bizim nəzərdən keçirilən imkanlarımızdan kənarda həmişə başqa modellər var. Bununla belə, bu halda, dövlətdən asılı diversifikasiya modellərinin yuxarıda göstərilən imkanı nəzərə almaması çox xüsusi və özünəməxsus bir problemə səbəb olur: sınaqları empirik filogenetik ağaclara tətbiq etsək, hətta uydurma məlumatlarla belə, demək olar ki, həmişə statistik əhəmiyyətli nəticələr tapın (Rabosky and Goldberg 2015). Məsələn, Rabosky və Goldberg (2015) tapdılar ki, çox vaxt bir növ adındakı hərflərin sayının bir sıra empirik məlumat dəstləri üzrə spesifikasiya nisbətləri ilə əhəmiyyətli dərəcədə əlaqəli olduğuna dair statistik əhəmiyyətli bir "siqnal" var. Bu nəticə gülməli və çaşdırıcı görünə bilər, çünki növlərin adının uzunluğunun diversifikasiya prosesləri ilə əlaqələndirilməsinin heç bir yolu yoxdur. Ancaq yuxarıdakı alternativ modelimizə qayıtsaq, nəticələr məna kəsb edir. Rabosky və Goldberg (2015) həqiqi filogenetik ağaclar üzərində xarakter təkamülünü simulyasiya etmişlər və ağaclar simvollarla birlikdə simulyasiya edildikdə onların nəticələri öz əksini tapmır (buna görə də Rabosky və Goldberg (2015) nəticələri "I tip səhvləri" təmsil etmir, əksinə onların kağızı, çünki məlumatlar sıfır fərziyyə altında simulyasiya edilmir). Bu real ağaclarda növləşmə və/yaxud nəsli kəsilmə dərəcələri siniflər arasında dəyişir. Müəlliflərin hesab etdikləri iki model arasında hər ikisi yanlışdır; növləşmə və yox olma xarakterdən müstəqildir, lakin zamanla sabit deyil. İki alternativdən dövlətdən asılı model daha yaxşı uyğunlaşmağa meyllidir, çünki statistik nöqteyi-nəzərdən modelin siniflər üzrə doğum və ölüm nisbətlərində bəzi variasiyaları tutması vacibdir. Hətta təsadüfi bir xarakter də bu dəyişkənliyin bir hissəsini götürəcək, belə ki, alternativ model sıfırdan daha yaxşı uyğunlaşmağa meyllidir – baxmayaraq ki, bu halda xarakterin diversifikasiya ilə heç bir əlaqəsi yoxdur!

Xoşbəxtlikdən, bu problemin öhdəsindən gəlməyin bir neçə yolu var. Birincisi, dövlətdən asılı model üçün statistik dəstəyi təsadüfi məlumatlar üçün əldə etdiyi dəstəklə müqayisə etmək olar. Təsadüfi məlumatlar ağacda təqlid edilə bilər və ya məsləhətləri dəyişdirə və ya multinomial paylamadan təsadüfi məlumat çəkə bilər (Rabosky və Goldberg 2015). Daha sonra, məsələn, paylanmasını müqayisə etmək olar ΔAICc bu permutasiyalardan əldə edilən ballar ΔAICc orijinal məlumatlar üçün. Oxşar statistik xüsusiyyətlərə malik olan permütasyonlara əsaslanan yarı parametrik üsullar da mövcuddur (Rabosky and Goldberg 2017). Alternativ olaraq, bəzi ölçülməmiş xarakterlərin əslində şaxələndirmə dərəcələrinə təsir edən şey olması ehtimalını açıq şəkildə nəzərdən keçirə bilərik (Beaulieu and O'Meara 2016). Bu sonuncu yanaşma ən zərifdir, çünki biz bu bölmədə təsvir olunan modeli birbaşa namizədlər siyahımıza əlavə edə bilərik (bax: Beaulieu and O'Meara 2016).

Dövlətdən asılı olan diversifikasiya modellərinin daha ümumi tənqidi Maddison və Fitzjohn tərəfindən qaldırılmışdır (Maddison and FitzJohn 2015). Bu sənəd, bu testlər üçün statistik əhəmiyyətli nəticələrin bir ağacın tək budağında baş verən hadisə ilə idarə oluna biləcəyinə və buna görə də təkrarlana bilməyəcəyinə diqqət çəkdi. Bu, bir sıra müqayisəli metodlara eyni dərəcədə uyğun gələn yaxşı tənqiddir. Test etdiyimiz hadisələrin məlumatlarımızda təkrarlandığına əmin olmaqla, bu tənqidlə qismən məşğul ola bilərik. Birlikdə, bu tənqidlərin hər ikisi müqayisəli metodlarda daha güclü model adekvatlıq yanaşmalarını müdafiə edir.


Üçün mərkəz Satış Strategiyası Blogu

Satıcılarla müsahibə aparmaq çətindir!

Ən yaxşı istedadların yoxlanılması, aşkarlanması və seçilməsi çoxlu təcrübə və etibarlı proses tələb edir. Qarşınıza çıxan hər bir qızıl müsahibə fürsətindən daha yaxşı yararlanmaq üçün ümumi tələləri bilməlisiniz - sonra onlardan qaçın.

Müsahibə suallarına gəldikdə, ən yaxşıları sertifikatlı İstedad Analitiki tərəfindən istifadə olunan (seçim prosesinizin sonuna doğru) təsdiqlənmiş elmi istedad alətində təqdim edilənlərdir. Növbəti ən yaxşı müsahibə sualları, onlara daha çox vaxt sərf etmək üçün kifayət qədər istedad sübutunun olub olmadığını müəyyən etmək üçün hər bir namizəddən fikirlərini, hisslərini və davranışlarını öyrənmək üçün soruşa biləcəyiniz suallardır.

Biz tez-tez müştərilərimizlə işləyirik ki, onlara müsahibə üsullarını təkmilləşdirsinlər və düzgün insanları hunidə irəli aparmaqda daha yaxşı olsunlar. Ən yaxşı istedadları işə götürməkdə və seçməkdə ən yaxşısı olanlar bilirlər ki, başlanğıcda güclü seçim hər dəfə daha çox istedadlı namizədlər fonduna səbəb olur. Bu cür ardıcıl təcrübəyə əməl etməyənlər beş ümumi müsahibə tələsindən birində ilişib qalmağa meyllidirlər və tez-tez gəmiyə gətirdiklərinin aşağı performansından məyus olurlar.


Səhv Səhifə Dizaynı

E-ticarət veb saytının əsas hissəsi müştərilərə cəlbedici səhifə dizaynı təqdim etməkdir. Təmiz, cazibədar və təklif etdiyi məhsullara uyğun olmalıdır. Əgər şəxsin veb-saytı gözləntiləri doğrultmursa, sahibi müsabiqənin veb-saytının dizaynına nəzər salmaq istəyə bilər. Bir çox e-ticarət saytları şablonlardan istifadə etməklə və ya internetdə tapılan şablonları təqlid etməklə uğur qazanır. Bunları quraşdırmaq və ya yaratmaq asandır. Saytda istifadə olunan şəkillər çox vacibdir. Yüksək keyfiyyətli məhsul şəkillərinin təqdim edilməsi xüsusi əhəmiyyət kəsb edir, çünki e-ticarət veb saytı potensial müştərilərə məhsullara fiziki toxunmaq imkanı verə bilməz. E-ticarət veb saytı onu ziyarət edənləri sıxışdırmamaq üçün tərtib edilməlidir. Həddindən artıq video, audio, qrafika və sair çox insan üçün çox ola bilər. Daha uğurlu e-ticarət saytları diqqətli və mütəşəkkil bir görünüşə malikdir.


Teleologiya

Təkamül biologiyasının anlayışları və prosesləri orta məktəb tələbələri, ictimaiyyət nümayəndələri və hətta orta məktəb tələbələri və biologiya məzunları tərəfindən zəif başa düşülür (Gregory 2009 Nehm and Schonfeld 2007, 2008). Təkamül biologiyasını öyrənməkdə əsas çətinliklərdən biri insanların dünyaya məqsədyönlü və məqsədyönlü perspektivdən baxmağa meylli olmasıdır (Gregory 2009 Kelemen and Rosset 2009). Bunun səbəbi, planlı və məqsədyönlü hərəkətlərlə digər canlıların, proseslərin və cansız cisimlərin insanlar kimi davranmasını gözlədiyimizə görə ola bilər (Mead və Scott 2010a, b). Beləliklə, təəccüblü deyil ki, təkcə təcrübəsiz öyrənənlər deyil, həm də digər insanlar təkamülü məqsədyönlü və yönləndirilmiş proses kimi görürlər (Catley et al. 2010 Kampourakis 2014 Kelemen 2012).

Teleoloji təfəkkür, obyektlərin və ya proseslərin xüsusi məqsədlərini yerinə yetirmək üçün əsas niyyətlə davrandığı düşüncə tərzidir (Kelemen 1999a Rosenberg və McShea 2008). Bu anlayış xüsusilə uşaqlarda güclüdür, lakin orta məktəb və universitet illərində də davam edir (Gregory 2009 Kelemen and Rosset 2009 Southerland et al. 2001 Trommler et al. 2018). Bundan əlavə, teleoloji izahatlarda cansız cisimlər və ya canlıların hissələri (məsələn, orqanlar) tez-tez şüur ​​və məqsədyönlü hərəkətlərlə yanlış şəkildə əlaqələndirilir (Tamir və Zohar 1991).

Təbiətin bir çox aspektlərini anlamağa çalışarkən məktəbəqədər yaşda tələbələrdə teleoloji qərəzlilik baş verir. Bu yaşda olan uşaqlar adətən orqanizm əlamətlərinin varlığına orqanizmin fiziki yaxşılığına xidmət edir, artefaktların xassələrinə isə xarici agentlərin xeyrinə baxırlar (Keil 2002 Kelemen 1999a). Bundan əlavə, məktəbəqədər və ibtidai məktəb uşaqları həm canlı orqanizmləri, həm də artefaktları “bir şey üçün hazırlanmış” kimi qələmə verirlər (Kelemen 1999b, c). Gənc yeniyetmələr mürəkkəb təkamül konsepsiyasını - heyvanların müəyyən bir müddət ərzində əhəmiyyətli dərəcədə dəyişə biləcəyini dərk edə bilsələr də, heyvanların uyğunlaşmaq məqsədi ilə dəyişdiyini izah etdiyinə görə teleoloji qərəzliyə meyllidirlər (Evans 2001). Tələbələr orta məktəbdə oxuyarkən tez-tez teleoloji olaraq heyvanlarda əlamətlərin mövcudluğu haqqında mübahisə edirlər. Məsələn, onlar izah edirlər ki, itlərin ovlarını tutmaq üçün pəncələr və dişlər kimi strukturlara ehtiyacı var (Kampourakis və Zogza 2007).

Biologiyada teleoloji əsaslandırmanın əsas səbəbi insanların məqsədyönlü şəkildə düşünməyə ümumi meylidir. Gündəlik həyatımız çətinliklərin öhdəsindən gəlmək, tapşırıqların yerinə yetirilməsi və ehtiyacların ödənilməsi ilə bağlı olduğundan, biz bir çox situasiyaya məqsədyönlü perspektivlə baxmağa meylliyik və buna görə də biz obyektlərin və ya proseslərin məqsədi və ya funksiyasına teleoloji meyl nümayiş etdiririk (Gregory 2009) .

Teleologiya və təkamül

Teleoloji təfəkkür təkamül kontekstində müxtəlif formalarda meydana çıxa bilər. Bir nümunə, təkamül proseslərinin aşağıdakı üç fikrə əsaslanaraq görülməsidir (González Galli and Meinardi 2011): (1) Təkamül prosesi müəyyən nəsillər və ya növləri (xüsusilə insanlar) yaratmağı hədəfləyir. (2) Təkamül prosesi növlərin sağ qalmasını təmin etmək məqsədi daşıyır. (3) Fərdi variasiyalar ətraf mühitin növlərin məcbur etdiyi ehtiyacları ödəmək və sağ qalma çətinliklərini aradan qaldırmaq üçün yaranır. Teleoloji təfəkkürün aydın görünməsinin başqa bir yolu, öyrənənlərin “niyə” sözünü ehtiva edən təkamül xarakterli suallara “Nə məqsədlə?” suallarını daha çox əks etdirən cavablarla cavab verməsidir. və ya "Nə üçündür?" “Səbəb nədir?” kimi elmi cəhətdən dəqiq mənanın əvəzinə. (Kelemen 1999a). Bu şərhlər tələbələrin mürəkkəb təsiredici amillər dəstinin nəticəsi olmaq əvəzinə bir funksiyaya əməl etmək üçün bioloji prosesləri qəbul etdiklərini ifadə edə bilər.

Yanlış təsəvvürləri aradan qaldırmaq çətin olan təkamüldə fərqli inanclar və konsepsiyalar teleoloji ideyalara əsaslanır (Kampourakis 2014). Bəzi tələbələr təkamül dəyişikliyini sağ qalma çətinliklərinin öhdəsindən gəlmək üçün bir vasitə kimi gördüklərindən, təkamülün artan mürəkkəbliyin inkişafı olduğunu düşünürlər. Çətinlikləri məqsədyönlü şəkildə aradan qaldırmaqla, növlər daha mürəkkəbləşir və buna görə də digər növlərə nisbətən “daha ​​(yüksək) inkişaf etmişdir”. Buna görə də, taksonomik sistemi artan mürəkkəblik nizamı kimi görmək anlayışı Kummer və digərlərinin təklif etdiyi teleoloji düşüncənin nəticəsi ola bilər. (2016). Bu iş zamanı biz bu fikri daha ətraflı şəkildə ortaya qoyacağıq.

Təkamülün təcəssümü kimi təkamül ağacları

Biologiya haqqında öyrənmə və ünsiyyətdə mühüm element qrafik təsvirdir (Wiley et al. 2017). Təkamül biologiyası vəziyyətində, filogenetik və ya təkamül ağacları ünsiyyət üçün əvəzsiz bir vasitədir (Baum and Smith 2013). Təkamül ağacları taksonlar arasında nisbi əlaqələr haqqında diaqrammatik fərziyyələrdir və makro-təkamül proseslərini təmsil etməyin ən birbaşa forması kimi görünürlər (Baum et al. 2005). Onlar seçilmiş növlərin nisbi əlaqələrini göstərməklə təkamülün nəticələrini göstərməklə yanaşı, həm də təkamül proseslərini araşdırmaq üçün bir vasitə kimi çıxış edirlər (Baum and Smith 2013). Buna görə də, təkamül ağacları ilə işləmək bacarığı təkamül biologiyasının konsepsiyalarını və proseslərini tam başa düşmək üçün ilkin şərt kimi görünür (Catley et al. 2012 Meisel 2010).

Təkamül ağaclarını oxumaq, şərh etmək və istifadə etmək aspektləri verilmiş məlumatlardan təkamül ağacı üçün fərziyyə yaratmaq aspektləri ilə birlikdə ağac düşüncəsi adlanan “ağac oxuma” termini altında toplanır (Baum and Smith 2013 Halverson 2011). Bu yazıda biz ağac oxuma aspektinə diqqət yetirəcəyik. Təkamül ağaclarını oxumaq bacarığı daxili düyünlər, yeni əlamətlərin (apomorfiyaların) həddən artıq oxunması və şərh edilməsi, növlərin nisbi əlaqələrini qiymətləndirmək və müqayisə etmək üçün monofiletik qruplar yaratmaq kimi diaqrammatik elementlərin biliklərindən tutmuş bir sıra müxtəlif bacarıqlardan ibarətdir. və fərqli təkamül ağaclarını müqayisə edin (Halverson 2011 Novick and Catley 2016 Schramm et al. 2019).

Ağac təfəkkürünün aktuallığına baxmayaraq, çoxsaylı tədqiqatlar göstərir ki, tələbələr bu cür təsvirlərlə mübarizə aparır və təkamül ağacları ilə işləmək bütün təhsil səviyyələrində problemdir (Baum et al. 2005 Blacquiere and Hoese 2016 Bokor et al. 2014 Kummer et al. 2016 Meir və başqaları 2007). Bunu izah etmək olar, çünki çoxsaylı məlum amillər təkamül ağaclarını oxumaq çətinliyinə təsir edə bilər. Təkamül ağacı diaqramlarını oxumaq mürəkkəb bir işdir və təkamül anlayışları (MacDonald və Wiley 2012) və növlərin morfologiyası haqqında əvvəlki biliklər (Novick and Catley 2014) kimi amillərdən təsirlənir. Tələbə ilə əlaqəli amillərlə yanaşı, diaqramın tərəfindəki amillər ağacın oxuma çətinliyinə təsir göstərə bilər (məsələn, Catley et al. 2012 MacDonald and Wiley 2012 Novick et al. 2010). Bundan əlavə, çoxsaylı davamlı və geniş yayılmış yanlış təsəvvürlər, məsələn, düz, kəsilməyən xətlərin təkamül dəyişikliyini əks etdirməməsi və ya təqdim olunan növlərin sırasının onların nisbi əlaqəsini (budaqlanan modeldən fərqli olaraq) təmsil etməsi fikri kimi (məsələn, Gregory 2008 Meisel) bildirilmişdir. 2010).

Teleoloji təfəkkür təkamül biologiyasının tədrisində əsas maneələrdən biri kimi göründüyündən (Barnes et al. 2017 González Galli and Meinardi 2011), pedaqoqlar və tədqiqatçılar tələbələri teleoloji mülahizələri qəbul etməyə və ya rədd etməyə nəyin səbəb olduğunu və təkamül biologiyasının necə öyrədiləcəyini araşdırmağa çalışdılar. təkamül konsepsiyalarının elmi şərhlərini təşviq etmək üçün ən yaxşı üsul.

Teleoloji təfəkkür təkamül biologiyasını öyrənməkdə mərkəzi məsələ kimi görüldüyü kimi, təkamül ağaclarını oxumaq bacarığı da təkamül nəzəriyyəsini tam başa düşmək üçün vacib şərt kimi qəbul edilir. Bundan əlavə, ağac oxumaq müasir təkamül biologiyasında əsas bacarıq kimi görülür, lakin tədqiqatlar göstərir ki, bütün təhsil səviyyələrində tələbələr bu bacarıqlarda böyük çatışmazlıqlar göstərir (Catley et al. 2012 Gregory 2008 Kummer et al. 2016 Omland 2014). Bu işdə biz təkamül biologiyasının bir hissəsi kimi tədrisdə tipik teleoloji tələlərin müəyyən edilməsi və təqdim edilməsinə diqqət yetirməklə ağac oxuma ilə bağlı davam edən tədqiqatların nəticələrini və nəzəri mülahizələri araşdırmaq istəyirik. Daha sonra, ağac oxumağı elmi şəkildə öyrətmək və tələbələrə teleoloji düşüncəni düzgün şəkildə yerləşdirməyə kömək edə biləcək fəaliyyətləri ruhlandırmaq üçün təkamül ağaclarının konstruktiv şəkildə necə istifadə olunacağına dair fikirləri təqdim etmək istəyirik.


İçindəkilər

Kitabxana hazırlığı Redaktə edin

Ardıcıllıq üçün tamamlayıcı DNT (cDNA) kitabxanasını hazırlamaq üçün ümumi addımlar aşağıda təsvir edilmişdir, lakin çox vaxt platformalar arasında dəyişir. [8] [3] [9]

  1. RNT İzolyasiyası:RNT toxumadan təcrid olunur və deoksiribonukleaza (DNaz) ilə qarışdırılır. DNaz genomik DNT miqdarını azaldır. RNT deqradasiyasının miqdarı gel və kapilyar elektroforez ilə yoxlanılır və nümunəyə RNT bütövlüyü nömrəsi təyin etmək üçün istifadə olunur. Bu RNT keyfiyyəti və başlanğıc RNT-nin ümumi miqdarı sonrakı kitabxananın hazırlanması, ardıcıllığı və təhlili mərhələlərində nəzərə alınır.
  1. RNT seçimi/tükənməsi: Maraqlanan siqnalları təhlil etmək üçün təcrid olunmuş RNT ya olduğu kimi saxlanıla bilər, yalnız mRNT daxil olmaqla 3' poliadenilləşdirilmiş (poli(A)) quyruğu olan RNT üçün süzülür, ribosomal RNT (rRNA) tükənir və/yaxud RNT üçün süzülür. xüsusi ardıcıllığı bağlayır (RNT seçmə və tükənmə üsulları cədvəl, aşağıda). 3' poli(A) quyruğu olan RNT əsasən yetkin, işlənmiş, kodlaşdırıcı ardıcıllıqlardan ibarətdir. Poli(A) seçimi RNT-ni substrata kovalent şəkildə bağlanmış poli(T) oliqomerlərlə, adətən maqnit muncuqlarla qarışdırmaqla həyata keçirilir. [10][11] Poly(A) seçimi RNT biotipinin aşkarlanmasında mühüm məhdudiyyətlərə malikdir. Bir çox RNT biotipləri poliadenilləşməmişdir, o cümlədən bir çox kodlaşdırılmayan RNT və histon-nüvə zülal transkriptləri və ya onların poli(A) quyruq uzunluğu (məsələn, sitokinlər) vasitəsilə tənzimlənir və buna görə də poli(A) seçimindən sonra aşkar olunmaya bilər. [12] Bundan əlavə, poli(A) seçimi, xüsusən də aşağı keyfiyyətli RNT ilə 3' meyli artıra bilər. [13][14] Bu məhdudiyyətlər ribosomal tükənmə ilə qarşısı alına bilər, adətən hüceyrədəki RNT-nin 90%-dən çoxunu təşkil edən rRNT-ni çıxarır. Həm poli(A) zənginləşdirmə, həm də ribosomal tükənmə mərhələləri çox əmək tələb edir və qərəzlilik yarada bilər, ona görə də bu addımları buraxmaq üçün daha sadə yanaşmalar işlənib hazırlanmışdır. [15] MiRNA kimi kiçik RNT hədəfləri istisna gelləri, maqnit muncuqları və ya kommersiya dəstləri ilə ölçü seçimi vasitəsilə daha da təcrid edilə bilər.
  1. cDNT sintezi: RNT cDNA-ya əks transkripsiya edilir, çünki DNT daha sabitdir və gücləndirməyə imkan verir (DNT polimerazalarından istifadə edir) və daha yetkin DNT sıralama texnologiyasından istifadə edir. Əks transkripsiyadan sonrakı gücləndirmə, kimyəvi etiketləmə və ya tək molekul ardıcıllığı ilə qarşısı alına bilən iplik itkisi ilə nəticələnir. Parçalanma və ölçü seçimi ardıcıllıq maşını üçün uyğun uzunluqda olan ardıcıllıqları təmizləmək üçün həyata keçirilir. RNT, cDNT və ya hər ikisi fermentlər, sonikasiya və ya nebulizerlərlə parçalanır. RNT-nin parçalanması təsadüfi primer-əks transkripsiyanın 5' meylini və primerin bağlanma yerlərinin [11] təsirini azaldır, mənfi cəhəti isə 5' və 3' uclarının DNT-yə daha az səmərəli çevrilməsidir. Parçalanmadan sonra ölçü seçimi aparılır, burada ya kiçik ardıcıllıqlar çıxarılır, ya da ardıcıl uzunluqların sıx diapazonu seçilir. MiRNA kimi kiçik RNT-lər itirildiyi üçün bunlar müstəqil olaraq təhlil edilir.Hər bir təcrübə üçün cDNA heksamer və ya oktamer ştrix kodu ilə indeksləşdirilə bilər ki, bu təcrübələr multipleksləşdirilmiş ardıcıllıq üçün bir zolağa birləşdirilə bilsin.

Tamamlayıcı DNT ardıcıllığı (cDNA-Seq) Redaktə edin

RNT biotiplərindən əldə edilən cDNT kitabxanası daha sonra kompüter tərəfindən oxuna bilən formata salınır. Illumina, Thermo Fisher, BGI/MGI, PacBio və Oxford Nanopore Technologies tərəfindən hazırlanmış platformalar da daxil olmaqla cDNA ardıcıllığı üçün çoxlu yüksək məhsuldarlıqlı ardıcıllıq texnologiyaları mövcuddur. [16] cDNA ardıcıllığı üçün ümumi texnologiya olan Illumina qısa oxunma ardıcıllığı üçün adapterlər cDNT-yə bağlanır, DNT axın hüceyrəsinə bağlanır, klasterlər körpünün gücləndirilməsi və denaturasiya dövrləri vasitəsilə yaradılır və ardıcıllıqla sintez edilir. tamamlayıcı zəncir sintezi və geri dönən terminatorlarla əsasların lazerlə həyəcanlanması dövrlərində yerinə yetirilir. Ardıcıllıq platforması seçimi və parametrləri eksperimental dizayn və qiymət əsasında idarə olunur. Ümumi eksperimental dizayn mülahizələrinə ardıcıllığın uzunluğu, ardıcıllığın dərinliyi, tək və qoşalanmış ardıcıllığın istifadəsi, təkrarların sayı, multipleksləşdirmə, təsadüfiləşdirmə və spike-in qərarları daxildir. [17]

Kiçik RNT/kodlaşdırılmayan RNT ardıcıllığı Redaktə edin

mRNT-dən başqa RNT-ni ardıcıllaşdırarkən, kitabxana hazırlığı dəyişdirilir. Hüceyrə RNT istənilən ölçü diapazonuna əsasən seçilir. MiRNA kimi kiçik RNT hədəfləri üçün RNT ölçü seçimi ilə təcrid olunur. Bu, ölçülü istisna geli ilə, ölçü seçimi maqnit muncuqları vasitəsilə və ya kommersiya baxımından hazırlanmış dəstlə həyata keçirilə bilər. İzolyasiya edildikdən sonra bağlayıcılar 3' və 5' ucuna əlavə olunur, sonra təmizlənir. Son mərhələ tərs transkripsiya vasitəsilə cDNT-nin yaradılmasıdır.

Birbaşa RNT ardıcıllığı Edit

RNT-nin cDNT-yə çevrilməsi, bağlama, gücləndirmə və digər nümunə manipulyasiyalarının transkriptlərin həm düzgün xarakteristikası, həm də kəmiyyətinin müəyyən edilməsinə mane ola biləcək qərəzlər və artefaktlar təqdim etdiyi göstərildiyi üçün [18] tək molekullu birbaşa RNT ardıcıllığı Helicos da daxil olmaqla şirkətlər tərəfindən tədqiq edilmişdir. (iflas), Oxford Nanopore Technologies, [19] və s. Bu texnologiya RNT molekullarını birbaşa kütləvi-paralel şəkildə ardıcıllıqla sıralayır.

Tək molekullu real-vaxt RNT ardıcıllığı Edit

Kütləvi paralel tək molekullu birbaşa RNT-Seq ənənəvi RNT-Seq-ə alternativ olaraq tədqiq edilmişdir, burada RNT-dən cDNT-yə çevrilmə, bağlama, gücləndirmə və digər nümunə manipulyasiya mərhələləri qərəz və artefaktlar yarada bilər. [20] Tək molekullu real vaxtda RNT-Seq həyata keçirən texnologiya platformalarına Oxford Nanopore Technologies (ONT) Nanopore sekvensiyası, [19] PacBio IsoSeq və Helicos (iflas) daxildir. Doğma formada RNT ardıcıllığı metilasiya kimi modifikasiyaları qoruyub saxlayır, onların birbaşa və eyni vaxtda araşdırılmasına imkan verir. [19] Tək molekullu RNT-Seq-in başqa bir üstünlüyü ondan ibarətdir ki, transkriptlər tam uzunluqda əhatə oluna bilər ki, bu da qısa oxunan ardıcıllıqla müqayisədə daha yüksək inamlı izoformun aşkarlanması və kəmiyyətinin müəyyən edilməsinə imkan verir. Ənənəvi olaraq, tək molekullu RNT-Seq metodları qısa oxunan ardıcıllıqla müqayisədə daha yüksək xəta dərəcələrinə malikdir, lakin ONT kimi daha yeni üsullar parçalanma və cDNA çevrilməsinin qarşısını alaraq, birbaşa RNT-Seq xətalarını məhdudlaşdırır. İnsan hüceyrəsi populyasiyalarında diferensial ifadə üçün ONT birbaşa RNT-Seq-in son istifadələri bu texnologiyanın qısa və uzun cDNA ardıcıllığının bir çox məhdudiyyətlərini aradan qaldıra biləcəyini nümayiş etdirdi. [21]

Tək hüceyrəli RNT ardıcıllığı (scRNA-Seq) Redaktə edin

Mikroarraylar və standart toplu RNT-Seq analizi kimi standart üsullar böyük hüceyrə populyasiyalarından RNT-lərin ifadəsini təhlil edir. Qarışıq hüceyrə populyasiyalarında bu ölçmələr bu populyasiyalardakı fərdi hüceyrələr arasındakı kritik fərqləri gizlədə bilər. [22] [23]

Tək hüceyrəli RNT ardıcıllığı (scRNA-Seq) ayrı-ayrı hüceyrələrin ifadə profillərini təmin edir. Hər bir hüceyrə tərəfindən ifadə edilən hər bir RNT haqqında tam məlumat əldə etmək mümkün olmasa da, mövcud materialın kiçik miqdarına görə, gen ifadəsi nümunələri gen klasterləşdirmə analizləri ilə müəyyən edilə bilər. Bu, hüceyrə populyasiyasında əvvəllər heç vaxt görülməmiş nadir hüceyrə növlərinin mövcudluğunu aşkar edə bilər. Məsələn, ağciyərdə kistik fibroz transmembran keçiricilik tənzimləyicisini ifadə edən ağciyər ionositləri adlanan nadir ixtisaslaşmış hüceyrələr 2018-ci ildə ağciyər hava yolu epiteliyasında scRNA-Seq həyata keçirən iki qrup tərəfindən müəyyən edilmişdir. [24] [25]

Eksperimental prosedurlar Redaktə edin

Cari scRNA-Seq protokolları aşağıdakı addımları əhatə edir: tək hüceyrə və RNT-nin təcrid edilməsi, əks transkripsiya (RT), gücləndirmə, kitabxananın yaradılması və ardıcıllıqla. Tək hüceyrələr ya mexaniki olaraq mikroquyuculara ayrılır (məsələn, BD Rhapsody, Takara ICELL8, Vycap Puncher Platform və ya CellMicrosystems CellRaft) və ya damlacıqlara (məs., 10x Genomics Chromium, Illumina Bio-Rad ddSEQio, InDCELLomite) kapsullaşdırılır. [26] Tək hüceyrələr barkodlu oliqonukleotidləri olan muncuqların əlavə edilməsi ilə etiketlənir, həm hüceyrələr, həm də muncuqlar məhdud miqdarda verilir ki, çoxlu hüceyrə və muncuqlarla birgə yerləşmə çox nadir bir hadisədir. Əks transkripsiya tamamlandıqdan sonra, hər bir hüceyrənin unikal ştrix kodu ilə müəyyən edilmiş xüsusi hüceyrədən transkriptlərin ardıcıllaşdırılması üçün bir çox hüceyrədən cDNA-lar qarışdırıla bilər. [27] [28] Unikal molekulyar identifikator (UMI) kitabxananın hazırlanması zamanı artefaktları müəyyən etməyə kömək etmək üçün mRNA/cDNA hədəf ardıcıllığına əlavə edilə bilər. [29]

scRNA-Seq üçün problemlər hüceyrədə mRNA-nın ilkin nisbi bolluğunun qorunması və nadir transkriptlərin müəyyən edilməsini əhatə edir. [30] Əks transkripsiya mərhələsi çox vacibdir, çünki RT reaksiyasının effektivliyi hüceyrənin RNT populyasiyasının nə qədər hissəsinin nəticədə sekvenser tərəfindən təhlil ediləcəyini müəyyən edir. Əks transkriptazaların emal qabiliyyəti və istifadə olunan hazırlıq strategiyaları tam uzunluqlu cDNT istehsalına və genlərin 3' və ya 5' sonuna doğru meylli kitabxanaların yaradılmasına təsir göstərə bilər.

Gücləndirmə mərhələsində cDNA-nı gücləndirmək üçün hazırda ya PCR, ya da in vitro transkripsiya (IVT) istifadə olunur. PCR əsaslı metodların üstünlüklərindən biri tam uzunluqlu cDNA yaratmaq qabiliyyətidir. Bununla belə, müəyyən ardıcıllıqlar üzrə müxtəlif PCR effektivliyi (məsələn, GC məzmunu və snapback strukturu) qeyri-bərabər əhatə dairəsi olan kitabxanalar yaradaraq, eksponent olaraq gücləndirilə bilər. Digər tərəfdən, IVT tərəfindən yaradılan kitabxanalar PCR-induksiya etdiyi ardıcıllıq meylinin qarşısını ala bilsə də, xüsusi ardıcıllıqlar səmərəsiz şəkildə transkripsiya edilə bilər, beləliklə, ardıcıllığın buraxılmasına və ya natamam ardıcıllıqların yaranmasına səbəb ola bilər. [31] [22] Bir neçə scRNA-Seq protokolları nəşr edilmişdir: Tang et al., [32] STRT, [33] SMART-seq, [34] CEL-seq, [35] RAGE-seq, [36] Quartz -seq [37] və C1-CAGE. [38] Bu protokollar tərs transkripsiya, cDNT sintezi və gücləndirilməsi strategiyaları və ardıcıllıqla xüsusi barkodları (yəni UMI) yerləşdirmək imkanı və ya birləşdirilmiş nümunələri emal etmək imkanı baxımından fərqlənir. [39]

2017-ci ildə REAP-seq, [40] və CITE-seq kimi tanınan oliqonukleotid etiketli antikorlar vasitəsilə tək hüceyrəli mRNT və zülal ifadəsini eyni vaxtda ölçmək üçün iki yanaşma tətbiq olundu. [41]

Tətbiqlərin redaktəsi

scRNA-Seq İnkişaf, Nevrologiya, [42] Onkologiya, [43] [44] [45] Otoimmün xəstəlik, [46] və Yoluxucu xəstəlik daxil olmaqla, bioloji fənlər üzrə geniş istifadə olunur. [47]

scRNA-Seq embrionların və orqanizmlərin, o cümlədən qurdların inkişafı ilə bağlı kifayət qədər məlumat verdi. Caenorhabditis elegans, [48] və regenerativ planarian Schmidtea mediterraea. [49] [50] Bu şəkildə xəritəyə alınan ilk onurğalı heyvanlar zebra balığı [51] [52] və Xenopus laevis. [53] Hər bir halda embrionun çoxsaylı mərhələləri tədqiq edilmişdir ki, bu da bütün inkişaf prosesini hüceyrə-hüceyrə əsasında xəritələməyə imkan verirdi. [8] Elm bu irəliləyişləri 2018-ci ilin sıçrayışı kimi tanıdı. [54]

Eksperimental mülahizələr Redaktə edin

RNT-Seq təcrübələrini tərtib edərkən və apararkən müxtəlif parametrlər nəzərə alınır:

  • Toxumanın spesifikliyi: Gen ifadəsi toxumaların daxilində və arasında dəyişir və RNT-Seq hüceyrə tiplərinin bu qarışığını ölçür. Bu, maraqların bioloji mexanizmini təcrid etməyi çətinləşdirə bilər. Tək hüceyrə ardıcıllığı bu problemi yüngülləşdirərək hər bir hüceyrəni ayrıca öyrənmək üçün istifadə edilə bilər.
  • Zamandan asılılıq: Gen ifadəsi zamanla dəyişir və RNT-Seq yalnız bir şəkil çəkir. Transkriptomda dəyişiklikləri müşahidə etmək üçün vaxt kursu təcrübələri aparıla bilər.
  • Əhatə (həmçinin dərinlik kimi tanınır): RNT DNT-də müşahidə edilən eyni mutasiyaları ehtiva edir və aşkarlanması daha dərin əhatə tələb edir. Kifayət qədər yüksək əhatə dairəsi ilə RNT-Seq hər bir allelin ifadəsini qiymətləndirmək üçün istifadə edilə bilər. Bu, imprinting və ya cis-tənzimləyici təsirlər kimi hadisələr haqqında məlumat verə bilər. Xüsusi tətbiqlər üçün tələb olunan ardıcıllığın dərinliyi pilot təcrübədən ekstrapolyasiya edilə bilər. [55]
  • Məlumat yaratmaq artefaktları (həmçinin texniki variasiya kimi tanınır): Reagentlər (məsələn, kitabxana hazırlama dəsti), cəlb olunan işçi heyəti və sekvenerin növü (məsələn, Illumina, Pacific Biosciences) mənalı nəticələr kimi yanlış təfsir oluna bilən texniki artefaktlarla nəticələnə bilər. Hər hansı bir elmi təcrübədə olduğu kimi, RNT-Seq-i yaxşı idarə olunan şəraitdə aparmaq ehtiyatlıdır. Əgər bu mümkün deyilsə və ya tədqiqat meta-analizdirsə, başqa bir həll yolu gizli dəyişənlərə (adətən əsas komponent təhlili və ya faktor analizi) nəticə çıxarmaqla texniki artefaktları aşkar etmək və sonradan bu dəyişənlər üçün korrektə etməkdir. [56]
  • Məlumatların idarə olunması: İnsanlarda tək RNT-Seq təcrübəsi adətən 1-5 Gb (sıxılmış) və ya ara fayllar daxil edildikdə daha çox olur. [57] Bu böyük həcmli məlumat saxlama ilə bağlı problemlər yarada bilər. Çözümlərdən biri çoxməqsədli hesablama sxemlərindən (məsələn, gzip) və ya genomikaya xüsusi sxemlərdən istifadə edərək məlumatların sıxılmasıdır. Sonuncu istinad ardıcıllığına və ya de novo-ya əsaslana bilər. Başqa bir həll, hipoteza əsaslanan iş və ya təkrarlama tədqiqatları üçün (kəşfiyyat tədqiqatından fərqli olaraq) kifayət ola bilən mikroarray təcrübələrini yerinə yetirməkdir.

Transkriptom montajı Redaktə edin

Genomik xüsusiyyətlərə xam ardıcıllığı təyin etmək üçün iki üsuldan istifadə olunur (yəni, transkriptomun yığılması):

  • Yenidən: Bu yanaşma transkriptomu rekonstruksiya etmək üçün istinad genomunu tələb etmir və adətən genom naməlum, natamam və ya istinadla müqayisədə əhəmiyyətli dərəcədə dəyişdirildikdə istifadə olunur. [58] De novo montaj üçün qısa oxunuşlardan istifadə zamanı çətinliklərə 1) hansı oxunuşların bitişik ardıcıllıqla (contigs) birləşdirilməli olduğunun müəyyən edilməsi, 2) ardıcıllıq xətalarına və digər artefaktlara qarşı möhkəmlik və 3) hesablama səmərəliliyi daxildir. De novo montaj üçün istifadə olunan əsas alqoritm oxunuşlar arasında bütün cüt-cüt üst-üstə düşmələri müəyyən edən üst-üstə düşən qrafiklərdən oxunuşları k uzunluğunda ardıcıllıqla parçalayan və bütün k-merləri hash cədvəlinə yığan de Bruijn qrafiklərinə keçdi. [59] Üst-üstə düşən qrafiklər Sanger ardıcıllığı ilə istifadə edilmişdir, lakin RNT-Seq ilə yaradılan milyonlarla oxunuş üçün yaxşı ölçüdə deyil. De Bruijn qrafiklərindən istifadə edən assemblerlərə misal olaraq Trinity, [58] Oases [60] (genom assembler-dən əldə edilmişdir Velvet[61] ), Bridger, [62] və rnaSPAdes. [63] Eyni nümunənin qoşalaşmış son və uzun oxu ardıcıllığı şablon və ya skelet kimi xidmət etməklə qısa oxunma ardıcıllığında çatışmazlıqları azalda bilər. De novo montajın keyfiyyətini qiymətləndirmək üçün ölçülərə median kontig uzunluğu, kontiglərin sayı və N50 daxildir. [64]
  • Genom idarə olunur: Bu yanaşma istinad genomunun davamlı olmayan hissələrini əhatə edən oxunuşların uyğunlaşdırılmasının əlavə mürəkkəbliyi ilə DNT-nin uyğunlaşdırılması üçün istifadə edilən eyni üsullara əsaslanır. [65] Bu davamlı olmayan oxunuşlar birləşdirilmiş transkriptlərin ardıcıllığının nəticəsidir (şəklə bax). Tipik olaraq, hizalama alqoritmləri iki addımdan ibarətdir: 1) oxunanların qısa hissələrini uyğunlaşdırmaq (yəni, genomu səpmək) və 2) optimal uyğunlaşma tapmaq üçün dinamik proqramlaşdırmadan istifadə etmək, bəzən məlum annotasiyalarla birlikdə. Genomla idarə olunan uyğunlaşdırmadan istifadə edən proqram vasitələrinə Bowtie, [66] TopHat (birləşmə qovşaqlarını uyğunlaşdırmaq üçün BowTie nəticələrinə əsaslanır), [67][68] Subread, [69] STAR, [65] HISAT2, [70] və GMAP daxildir. . [71] Genomun idarəolunan düzülmə (xəritələmə) alətlərinin çıxışı, bitişik transkript ardıcıllıqlarını yenidən qurmaq üçün Manşet Düğmələri [68] və ya StringTie [72] kimi alətlər tərəfindən əlavə istifadə edilə bilər (yəni., bir FASTA faylı).Genomla idarə olunan montajın keyfiyyəti həm 1) de novo montaj ölçüləri (məs., N50) və 2) dəqiqlikdən istifadə edərək məlum transkript, birləşmə qovşağı, genom və zülal ardıcıllığı ilə müqayisələrlə ölçülə bilər, geri çağırma, və ya onların kombinasiyası (məsələn, F1 hesabı). [64] Bundan əlavə, silisiumda qiymətləndirmə simulyasiya edilmiş oxunuşlardan istifadə etməklə həyata keçirilə bilər. [73][74]

Montaj keyfiyyətinə dair qeyd: Hazırkı konsensus ondan ibarətdir ki, 1) montaj keyfiyyəti hansı metrikanın istifadə olunduğundan asılı olaraq dəyişə bilər, 2) bir növdə yaxşı nəticə göstərən montaj alətləri digər növlərdə mütləq yaxşı performans göstərmir və 3) müxtəlif yanaşmaların birləşdirilməsi ən etibarlı ola bilər. [75] [76] [77]

Gen ifadəsinin kəmiyyəti Redaktə edin

İfadə xarici stimullara cavab olaraq hüceyrə dəyişikliklərini, sağlam və xəstə vəziyyətlər arasındakı fərqləri və digər tədqiqat suallarını öyrənmək üçün kəmiyyətcə ölçülür. Transkript səviyyələri tez-tez zülal bolluğu üçün proksi kimi istifadə olunur, lakin RNT müdaxiləsi və cəfəngiyyatla əlaqəli çürümə kimi transkripsiyadan sonrakı hadisələr səbəbindən çox vaxt ekvivalent olmur. [78]

İfadə transkriptomun yığılması addımında hər bir lokusla əlaqəli oxunmaların sayını hesablamaqla ölçülür. Eksonlar və ya genlər üçün ifadə kontiglər və ya istinad transkript annotasiyalarından istifadə etməklə ölçülə bilər. [8] Bu müşahidə edilmiş RNT-Seq oxunuş sayları ifadə mikroarrayları və qPCR daxil olmaqla köhnə texnologiyalara qarşı etibarlı şəkildə təsdiq edilmişdir. [55] [79] Sayların kəmiyyətini müəyyən edən alətlər HTSeq, [80] FeatureCounts, [81] Rcount, [82] maxcounts, [83] FIXSEQ, [84] və Cuffquant-dır. Bu alətlər uyğunlaşdırılmış RNT-Seq məlumatlarından oxunma saylarını müəyyən edir, lakin düzülməsiz sayları Sailfish [85] və Kallisto ilə də əldə etmək olar. [86] Oxunma sayları daha sonra fərziyyə testi, reqressiya və digər təhlillər üçün müvafiq ölçülərə çevrilir. Bu çevrilmə üçün parametrlər:

  • Ardıcıllıq dərinliyi/əhatə dairəsi: Çoxsaylı RNT-Seq təcrübələri aparılarkən dərinlik əvvəlcədən müəyyən edilsə də, təcrübələr arasında yenə də geniş şəkildə dəyişəcək. [87] Buna görə də, bir təcrübədə yaradılan ümumi oxunuşların sayı, bir qayda olaraq, sayları fraqmentlərə, oxunuşlara və ya bir milyon xəritələnmiş oxunma sayına çevirməklə normallaşdırılır (FPM, RPM və ya CPM). RPM və FPM arasındakı fərq, fraqmentlərin tək uclu ardıcıllığından qoşa uclu ardıcıllığa qədər təkamül zamanı tarixən yaranmışdır. Tək uçlu ardıcıllıqda hər fraqmentə yalnız bir oxunur (yəni., RPM = FPM). Cütlənmiş ardıcıllıqda hər fraqmentə iki oxunuş var (yəni., RPM = 2 x FPM). Ardıcıllıq dərinliyi bəzən kitabxana ölçüsü, təcrübədə vasitəçi cDNA molekullarının sayı kimi istinad edilir.
  • Gen uzunluğu: Transkript ifadəsi eyni olarsa, daha uzun genlər daha qısa genlərə nisbətən daha çox fraqmentə/oxuma/sayma olacaq. Bu, FPM-ni funksiyanın uzunluğuna (gen, transkript və ya ekson ola bilər) bölmək yolu ilə tənzimlənir və nəticədə milyon xəritələnmiş oxunuş (FPKM) üçün funksiyanın kilobazasına görə metrik fraqmentlər əldə edilir. [88] Nümunələr üzrə xüsusiyyət qruplarına baxarkən, FPKM hər bir FPKM-ni nümunə daxilindəki FPKM-lərin cəminə bölmək yolu ilə transkript per milyona (TPM) çevrilir. [89][90][91]
  • Ümumi RNT nümunəsi çıxışı: Hər bir nümunədən eyni miqdarda RNT çıxarıldığı üçün daha çox ümumi RNT olan nümunələrdə hər gen üçün daha az RNT olacaqdır. Bu genlərin ekspressiyası azalıb, nəticədə aşağı axın analizlərində yanlış pozitivlər var. [87] Kvantil, DESeq2, TMM və Median Nisbət daxil olmaqla normallaşdırma strategiyaları nümunələr arasında diferensial şəkildə ifadə olunmayan genlər dəstini müqayisə edərək və müvafiq olaraq miqyas alaraq bu fərqi hesablamağa çalışır. [92]
  • Hər bir genin ifadəsi üçün variasiya: seçmə xətasını (aşağı oxunma sayları olan genlər üçün vacibdir), gücü artırmaq və yanlış müsbətləri azaltmaq üçün modelləşdirilmişdir. Variasiya normal, Puasson və ya mənfi binomial paylanma kimi qiymətləndirilə bilər [93][94][95] və tez-tez texniki və bioloji variasiyaya parçalanır.

Mütləq kəmiyyət təyini və genom-geniş təsirlərin aşkarlanması üçün spike-ins Edit

RNT spike-inləri eksperimental dizaynda qızıl standart kimi istifadə edilə bilən məlum konsentrasiyalarda RNT nümunələridir və mütləq kəmiyyətin müəyyən edilməsi və genom miqyasında təsirlərin aşkarlanması üçün aşağı axın analizləri zamanı.

  • Mütləq kəmiyyət: Bütün transkriptlərə nisbətən ifadənin kəmiyyətini müəyyən edən əksər RNT-Seq təcrübələrində gen ifadəsinin mütləq kəmiyyəti mümkün deyil. Bu, məlum konsentrasiyalarda RNT nümunələri olan spike-ins ilə RNT-Seq həyata keçirməklə mümkündür. Ardıcıllıqdan sonra hər bir genin oxunma sayları ilə bioloji fraqmentlərin mütləq miqdarları arasında əlaqəni müəyyən etmək üçün oxunma saylarından istifadə olunur [11][96] Bir nümunədə bu üsuldan istifadə edilmişdir. Xenopus tropicalis transkripsiya kinetikasını təyin etmək üçün embrionlar. [97]
  • Geniş genom təsirlərinin aşkarlanması: Qlobal tənzimləyicilərdəki dəyişikliklər, o cümlədən xromatin remodelləri, transkripsiya faktorları (məsələn, MYC), asetiltransferaza kompleksləri və nukleosomların yerləşdirilməsi normallaşdırma fərziyyələri ilə uyğun gəlmir və spike-in nəzarətləri dəqiq şərh təklif edə bilər. [98][99]

Diferensial ifadə Redaktə edin

RNT-Seq-in ən sadə, lakin tez-tez ən güclü istifadəsi iki və ya daha çox vəziyyət arasında gen ifadəsində fərqlərin tapılmasıdır (məs., müalicə olunan və müalicə olunmayan) bu proses diferensial ifadə adlanır. Çıxışlara tez-tez diferensial şəkildə ifadə olunan genlər (DEGs) deyilir və bu genlər yuxarı və ya aşağı tənzimlənə bilər (yəni., faiz şərti ilə daha yüksək və ya aşağı). Diferensial ifadəni yerinə yetirən çoxlu alətlər var. Əksəriyyəti R, Python və ya Unix komanda xəttində işləyir. Ümumi istifadə edilən alətlərə DESeq, [94] edgeR, [95] və voom+limma daxildir, [93] [100] bunların hamısı R/Bioconductor vasitəsilə mövcuddur. [101] [102] Diferensial ifadəni yerinə yetirərkən ümumi mülahizələr bunlardır:

  • Girişlər: Diferensial ifadə daxiletmələrinə (1) RNT-Seq ifadə matrisi (M gen x N nümunə) və (2) N nümunə üçün eksperimental şərtləri ehtiva edən dizayn matrisi daxildir. Ən sadə dizayn matrisi sınaqdan keçirilən vəziyyət üçün etiketlərə uyğun gələn bir sütundan ibarətdir. Digər kovariativlərə (həmçinin amillər, xüsusiyyətlər, etiketlər və ya parametrlər kimi istinad edilir) toplu effektlər, məlum artefaktlar və gen ifadəsini qarışdıra və ya vasitəçilik edə bilən hər hansı metadata daxil ola bilər. Məlum kovariativlərə əlavə olaraq, naməlum kovariativlər də əsas komponent, surroqat dəyişən, [103] və PEER [56] analizləri daxil olmaqla, nəzarətsiz maşın öyrənmə yanaşmaları vasitəsilə qiymətləndirilə bilər. Gizli dəyişən analizlər tez-tez metadatada tutulmayan əlavə artefaktlara malik olan insan toxuması RNT-Seq məlumatları üçün istifadə olunur (məs., işemik vaxt, bir çox qurumdan əldə etmək, əsas klinik əlamətlər, bir çox işçi ilə uzun illər ərzində məlumat toplamaq).
  • Metodlar: Əksər alətlər diferensial şəkildə ifadə olunan genləri müəyyən etmək üçün reqressiya və ya qeyri-parametrik statistikadan istifadə edir və ya istinad genomuna (DESeq2, limma, edgeR) uyğunlaşdırılmış oxunma saylarına, ya da düzülməsiz kəmiyyətləşdirmədən (sleuth, [104) əldə edilən oxunma saylarına əsaslanır. ] Manşet, [105] Balta [106] ). [107] Reqressiyadan sonra əksər alətlər çoxsaylı fərziyyələri (insan tədqiqatlarında,

20.000 protein kodlayan gen və ya

Diferensial şəkildə ifadə olunan genlərin siyahısı üçün aşağı axın təhlilləri müşahidələri təsdiqləyən və bioloji nəticələr çıxaran iki ləzzətlə gəlir. Diferensial ifadə və RNT-Seq tələlərinə görə, mühüm müşahidələr (1) eyni nümunələrdə ortoqonal üsulla (məsələn, real vaxtda PCR) və ya (2) yeni kohortda başqa, bəzən əvvəlcədən qeydiyyatdan keçmiş təcrübə ilə təkrarlanır. . Sonuncu ümumiləşdirməni təmin etməyə kömək edir və adətən bütün birləşdirilmiş kohortların meta-analizi ilə izlənilə bilər. Nəticələrin daha yüksək səviyyəli bioloji anlayışını əldə etmək üçün ən ümumi üsul gen dəstinin zənginləşdirilməsi təhlilidir, baxmayaraq ki, bəzən namizəd gen yanaşmalarından istifadə olunur. Gen dəstinin zənginləşdirilməsi iki gen dəsti arasındakı üst-üstə düşmənin statistik cəhətdən əhəmiyyətli olub olmadığını müəyyən edir, bu halda diferensial şəkildə ifadə olunan genlər və məlum yollardan/verilənlər bazalarından gen dəstləri arasında üst-üstə düşür (məs., Gen Ontologiyası, KEGG, İnsan Fenotipi Ontologiyası) və ya eyni məlumatdakı tamamlayıcı təhlillərdən (birgə ifadə şəbəkələri kimi). Gen dəstinin zənginləşdirilməsi üçün ümumi vasitələrə veb interfeysləri (məs., ENRICHR, g:profiler, WEBGESTALT) [114] və proqram paketləri. Zənginləşdirmə nəticələrini qiymətləndirərkən, bir evristik ilk olaraq bilinən biologiyanın zənginləşdirilməsini ağlı başında yoxlama kimi axtarmaq və sonra yeni biologiya axtarmaq üçün əhatə dairəsini genişləndirməkdir.

Alternativ birləşdirmə Redaktə edin

RNT-nin birləşdirilməsi eukariotların ayrılmaz hissəsidir və insan genlərinin >90%-də baş verən zülalların tənzimlənməsinə və müxtəlifliyinə əhəmiyyətli dərəcədə töhfə verir. [115] Bir çox alternativ splays rejimləri var: ekzon atlama (insanlarda və daha yüksək eukariotlarda ən çox yayılmış birləşmə rejimi), bir-birini istisna edən ekzonlar, alternativ donor və ya akseptor yerləri, intron tutulması (bitkilərdə, göbələklərdə və protozoalarda ən çox yayılmış birləşdirmə rejimi), alternativ transkripsiya başlanğıc yeri (promoter) və alternativ poliadenilasiya. [115] RNT-Seq-in məqsədlərindən biri alternativ splicing hadisələrini müəyyən etmək və onların şərtlər arasında fərqli olub olmadığını yoxlamaqdır. Uzun müddət oxunan ardıcıllıq tam transkripti tutur və beləliklə, birmənalı oxunma xəritəsi kimi izoform bolluğunun qiymətləndirilməsində bir çox məsələləri minimuma endirir. Qısa oxunan RNT-Seq üçün, üç əsas qrupa təsnif edilə bilən alternativ splicing aşkar etmək üçün bir çox üsul var: [116] [89] [117]

  • Say-əsaslı (həmçinin hadisəyə əsaslanan, diferensial birləşmə): ekzon saxlanmasını təxmin edin. Nümunələr DEXSeq, [118] MATS, [119] və SeqGSEA-dır. [120]
  • İzoforma əsaslı (həmçinin çox oxunan modullar, diferensial izoform ifadəsi): əvvəlcə izoform bolluğunu, sonra isə şərtlər arasında nisbi bolluğu qiymətləndirin. Nümunələr Manşet Düğmələri 2 [121] və DiffSplicedir. [122]
  • İntron eksizyonu əsasında: split oxunuşlardan istifadə edərək alternativ birləşməni hesablayın. Nümunələr MAJIQ [123] və Leafcutter. [117]

Əgər izoformlar RSEM kimi digər alətlərlə vaxtından əvvəl ölçülərsə, diferensial gen ifadə alətləri diferensial izoform ifadəsi üçün də istifadə edilə bilər. [124]

Birgə ifadə şəbəkələri Redaktə edin

Birgə ifadə şəbəkələri, toxumalar və eksperimental şərtlər arasında oxşar şəkildə davranan genlərin verilənlərdən əldə edilən təsvirləridir. [125] Onların əsas məqsədi əvvəllər naməlum genlərin funksiyalarını çıxarmaq üçün fərziyyələrin yaradılması və assosiasiya üzrə günah yanaşmalarıdır. [125] RNT-Seq məlumatları həm bitkilərdə [126], həm də məməlilərdə Pearson korrelyasiyasına əsaslanan xüsusi yollarda iştirak edən genləri çıxarmaq üçün istifadə edilmişdir. [127] Mikroarray platformaları üzərində bu cür analizdə RNT-Seq məlumatlarının əsas üstünlüyü bütün transkriptomu əhatə etmək qabiliyyətidir, buna görə də gen tənzimləyici şəbəkələrin daha tam təsvirlərini açmaq imkanı verir. Eyni genin birləşmə izoformlarının diferensial tənzimlənməsi aşkar edilə və onların bioloji funksiyalarını proqnozlaşdırmaq üçün istifadə edilə bilər. [128] [129] Çəkili gen birgə ifadə şəbəkə analizi RNT seq məlumatlarına əsaslanan birgə ifadə modullarını və moduldaxili mərkəz genlərini müəyyən etmək üçün uğurla istifadə edilmişdir. Birgə ifadə modulları hüceyrə tiplərinə və ya yollara uyğun ola bilər. Yüksək birləşdirilmiş moduldaxili qovşaqlar onların müvafiq modulunun nümayəndələri kimi şərh edilə bilər. Eigengen moduldakı bütün genlərin ifadəsinin çəkili cəmidir. Eigengenlər diaqnoz və proqnoz üçün faydalı biomarkerlərdir (xüsusiyyətlər). [130] RNT seq məlumatlarına əsaslanan korrelyasiya əmsallarının qiymətləndirilməsi üçün Variasiya-Sabitləşdirici Transformasiya yanaşmaları təklif edilmişdir. [126]

Variant kəşfi Redaktə edin

RNT-Seq tək nukleotid variantları, kiçik əlavələr/delesiyalar daxil olmaqla DNT variasiyasını ələ keçirir. və struktur dəyişkənliyi. RNT-Seq-də variant çağırışı DNT variantının çağırışına bənzəyir və tez-tez eyni alətlərdən (o cümlədən SAMtools mpileup [131] və GATK HaplotypeCaller [132] ) istifadə edir, əlavələr üçün düzəlişlər edir. RNT variantları üçün unikal ölçü allele spesifik ifadədir (ASE): yalnız bir haplotipdən olan variantlar, çap və ifadə kəmiyyət əlaməti lokusları və kodlaşdırılmayan nadir variantlar da daxil olmaqla tənzimləyici təsirlərə görə üstünlüklə ifadə edilə bilər. [133] [134] RNT variantının identifikasiyasının məhdudiyyətlərinə o daxildir ki, o, yalnız ifadə olunmuş bölgələri əks etdirir (insanlarda, genomun <5%-i), məlumatların işlənməsi ilə təqdim edilən qərəzlərə məruz qala bilər (məsələn, de novo transkriptom birləşmələri heterozigotluğu düzgün qiymətləndirmir [135] ) və birbaşa DNT ardıcıllığı ilə müqayisədə daha aşağı keyfiyyətə malikdir.

RNT redaktəsi (transkripsiyadan sonrakı dəyişikliklər) Redaktə edin

Fərdlərin uyğun genomik və transkriptomik ardıcıllığına malik olmaq transkripsiyadan sonrakı redaktələri (RNT redaktəsi) aşkar etməyə kömək edə bilər. [3] Əgər genin transkriptində genomik məlumatlarda müşahidə olunmayan allel/variant varsa, transkripsiyadan sonrakı modifikasiya hadisəsi müəyyən edilir.

Fusion gen aşkarlanması Edit

Genomdakı müxtəlif struktur dəyişikliklərinin səbəb olduğu füzyon genləri, xərçənglə əlaqəsi səbəbiylə diqqət çəkdi. [136] RNT-Seq-in nümunənin bütün transkriptomunu qərəzsiz şəkildə təhlil etmək qabiliyyəti onu xərçəngdə bu cür ümumi hadisələri tapmaq üçün cəlbedici bir alət edir. [4]

İdeya qısa transkriptomik oxunuşların istinad genomuna uyğunlaşdırılması prosesindən irəli gəlir. Qısa oxunuşların çoxu bir tam ekzona düşəcək və daha kiçik, lakin hələ də böyük bir dəstin məlum ekson-ekson qovşaqlarına uyğunlaşacağı gözlənilir. Qalan xəritələnməmiş qısa oxunuşlar daha sonra ekzonların müxtəlif genlərdən gəldiyi ekson-ekson qovşağına uyğun olub-olmadığını müəyyən etmək üçün əlavə təhlil ediləcəkdir. Bu, mümkün birləşmə hadisəsinin sübutu olardı, lakin oxunmaların uzunluğuna görə bu, çox səs-küylü ola bilər. Alternativ yanaşma, qoşalaşmış oxunuşlardan istifadə etməkdir, çünki potensial olaraq çoxlu sayda qoşa oxunuşlar hər ucu fərqli bir eksonla əlaqələndirir və bu hadisələri daha yaxşı işıqlandırır (şəklə bax). Buna baxmayaraq, son nəticə gələcək doğrulama üçün ideal başlanğıc nöqtəsini təmin edən çoxsaylı və potensial olaraq yeni gen birləşmələrindən ibarətdir.

RNT-Seq ilk dəfə 2000-ci illərin ortalarında növbəti nəsil sekvensiya texnologiyasının meydana çıxması ilə hazırlanmışdır. [139] RNT-Seq terminindən istifadə etmədən belə istifadə edən ilk əlyazmalara prostat xərçəngi hüceyrə xətləri [140] (2006-cı il tarixli) daxildir. Medicago truncatula [141] (2006), qarğıdalı [142] (2007) və Arabidopsis thaliana [143] (2007), "RNT-Seq" termininin özü ilk dəfə 2008-ci ildə qeyd edildiyi halda [144] Başlıqda və ya abstraktda (Şəkil, mavi xətt) RNT-Seq-ə istinad edən əlyazmaların sayı 6754 əlyazma ilə davamlı olaraq artır. 2018-ci ildə nəşr olundu. RNT-Seq və tibb (Şəkil, qızıl xətt) kəsişməsi oxşar sürətə malikdir. [145]

Təbabətə tətbiqlər Redaktə edin

RNT-Seq yeni xəstəlik biologiyasını, klinik göstəricilər üçün profil biomarkerlərini müəyyən etmək, narkotik maddələrə təsir edən yolları müəyyən etmək və genetik diaqnozlar qoymaq potensialına malikdir. Bu nəticələr daha effektiv profilaktika, diaqnostika və müalicəni vurğulayaraq, alt qruplar və ya hətta fərdi xəstələr üçün daha da fərdiləşdirilə bilər. Bu yanaşmanın məqsədəuyğunluğu qismən pul və vaxt xərcləri ilə diktə olunur, bununla bağlı məhdudiyyət bu təhlil nəticəsində yaranan böyük həcmdə məlumatı tam şərh etmək üçün tələb olunan mütəxəssislər komandasıdır (bioinformatikaçılar, həkimlər/klinisyenlər, fundamental tədqiqatçılar, texniklər). [146]

Geniş miqyaslı sıralama səyləri Edit

DNT Elementləri Ensiklopediyası (ENCODE) və Xərçəng Genom Atlası (TCGA) layihələri onlarla hüceyrə xəttini [147] və minlərlə ilkin şiş nümunəsini xarakterizə etmək üçün bu yanaşmadan istifadə etdikdən sonra RNT-Seq məlumatlarına çox diqqət yetirilmişdir. [148] müvafiq olaraq. KODLAR Hüceyrə xətlərinin müxtəlif kohortunda genom miqyasında tənzimləyici bölgələri müəyyən etmək məqsədi daşıyır və bu epigenetik və genetik tənzimləyici təbəqələrin aşağı axınının təsirini başa düşmək üçün transkriptomik məlumatlar çox vacibdir. TCGA, bunun əvəzinə, bədxassəli transformasiya və irəliləmənin əsas mexanizmlərini başa düşmək üçün 30 müxtəlif şiş növündən minlərlə xəstə nümunəsini toplamaq və təhlil etmək məqsədi daşıyırdı. Bu kontekstdə RNT-Seq məlumatları xəstəliyin transkriptomik statusunun unikal şəklini təqdim edir və müxtəlif texnologiyalarla aşkarlana bilməyən yeni transkriptləri, birləşmə transkriptlərini və kodlaşdırılmayan RNT-ləri müəyyən etməyə imkan verən qərəzsiz transkript populyasiyasına baxır.

Bu məqalə təqdim edilmişdir WikiJournal of Science 2019-cu ildə xarici akademik ekspert rəyi üçün (rəyçi hesabatları). Yenilənmiş məzmun CC-BY-SA-3.0 lisenziyası (2021) altında Vikipediya səhifəsinə yenidən inteqrasiya edilib. Nəzərdən keçirilən qeydin versiyası belədir: Feliks Rixter et al. (17 may 2021). "RNT-Seq-ə geniş giriş". WikiJournal of Science. 4 (2): 4. doi:10.15347/WJS/2021.004. ISSN 2470-6345. Wikidata Q100146647.


13.5: Potensial tələlər və onlardan necə qaçınmaq olar - Biologiya

Bu, vəkilin ən pis kabuslarından biridir: məhdudiyyət müddətini itirmək. Bunu etmək çox asan bir səhv ola bilər, lakin nəticələri çox böyük ola bilər.

Buraxılmış məhdudiyyət müddətləri və digər məhdudiyyət müddəti problemlərinə səbəb ola biləcək çoxsaylı "tələbələr" var. Bu tələlərdən bəzilərinin qarşısını almaq nisbətən asandır, digərləri isə hətta ən bacarıqlı və diqqətli vəkilləri də sındıra bilər.

Aşağıda vəkillərin qarşılaşdıqları daha çox yayılmış məhdudiyyət müddəti tələlərinə ümumi baxış və bu tələlərin qarşısını almaq üçün bəzi məsləhətlər verilmişdir. Bu tələlərdən bəziləri kifayət qədər açıq olmalıdır (lakin hələ də qeyd etmək lazımdır), digərləri isə o qədər də açıq olmaya bilər. Bu məqalə ilk növbədə məhkəmə iştirakçıları üçün nəzərdə tutulsa da, müzakirə edilən bəzi tələlərə məhkəmədə iştirak etməyənlər rast gələ bilər.

a) Daha Az Ümumi Məhdudiyyət Dövrlərini nəzərdən qaçırmaq

Nəzərə alsaq ki, əksər iddialar Qanunda göstərilən 2 illik məhdudiyyət müddətinə tabedir Məhdudiyyətlər Aktı, 2002, hüquqşünaslar bu 2 illik məhdudiyyət müddətinə həddindən artıq diqqət yetirə bilər və digər potensial uyğun məhdudiyyət müddətlərinin izini itirə bilər.

isə Məhdudiyyətlər Aktı, 2002 Ontario hərəkət səbəblərinin əksəriyyətinə aiddir, məhdudiyyət müddətləri tətbiq edən 40-dan çox Ontario nizamnaməsindən biridir. Bu nizamnamələrin əksəriyyəti (və bu nizamnamələrin tətbiq olunan müddəaları Cədvəldə verilmişdir. Məhdudiyyətlər Aktı, 2002. İddiaçılar bu cədvəllə tanış olmalıdırlar. Əhəmiyyətli odur ki, cədvələ federal qanunlara uyğun olaraq təyin edilmiş məhdudiyyət müddətləri daxil edilmir və həmçinin Qanunun 2(1)-ci bəndində istinad edilən qanunlardan irəli gələn məhdudiyyət müddətləri də daxil deyil. Məhdudiyyətlər Aktı, 2002.

Daha tez-tez nəzərdən qaçırılan (və buna görə də təhlükəli) məhdudiyyət müddətlərindən bəzilərinə aşağıdakılar daxildir: i) Qanunun 38(3) bölməsində göstərilən məhdudiyyət müddəti. Qəyyum Aktı, vəfat etmiş şəxsin əmlakına qarşı irəli sürülmüş bəzi iddialara şamil edilir ii) öhdəliyin 61-ci bölməsində göstərilən 6 aylıq məhdudiyyət müddəti. Vərəsəlik Hüququ İslahatı Aktı və iii) Qanunun 259.1-ci bölməsində müəyyən edilmiş bir illik məhdudiyyət müddəti Sığorta Qanunu, bu, “avtomobilin və ya onun içindəki əşyaların itirilməsi və ya zədələnməsi ilə bağlı müqavilə üzrə sığortaçıya qarşı icraat”a aiddir.

Hüquqşünaslar indi də qanunun 15-ci hissəsində göstərilən 15 illik son məhdudiyyət müddətini qaçırmağa başlayırlar. Məhdudiyyətlər Aktı, 2002. Bu məhdudiyyət müddəti başa çata biləcəyi ən erkən tarix 1 yanvar 2019-cu il olduğu üçün bu yaxınlarda problemə çevrilib. İndiyə qədər, son məhdudiyyət müddətinin potensial olaraq başa çatdığı hallar əsasən peşəkarlara qarşı iddiaları əhatə edir (ehtimal ki, peşəkarlara qarşı iddialar kəşf etmək bəzən uzun illər tələb edir).

Hüquqşünaslar həmçinin müqavilələrdə nəzərdə tutulan məhdudiyyət müddətlərinə diqqət yetirməlidirlər. Bəzi peşəkar firmalar (yəni: böyük mühasibat firmaları) tərəfindən istifadə edilən sığorta polisləri və saxlama müqavilələri də daxil olmaqla, standart formada olan müqavilələrdə belə məhdudiyyət müddətləri kifayət qədər üstünlük təşkil edir. Müqavilə ilə müəyyən edilmiş məhdudiyyət müddətləri arbitraj müqavilələrində də geniş yayılmışdır.

b) Kəşf oluna bilənliyə yersiz etibar etmək

Vəkillərin məhkəmə çəkişməsinə nə vaxt başlayacağını təyin edərkən aşkara etibar etmələri təhlükəli ola bilər. Kəşf oluna bilənlik aldadıcı dərəcədə mürəkkəb bir anlayışdır və ona həmişə məhkəmələr tərəfindən ardıcıl yanaşılmır. Çox vaxt iddianın nə zaman aşkar edildiyi və ya aşkar edilməli olduğu ilə bağlı edilə bilən bir çox etibarlı arqumentlər var və bu arqumentlərin hamısı dərhal aydın ola bilməz. Üstəlik, hüquqşünaslar həmişə aşkar olunma qabiliyyətini düzgün qiymətləndirə bilmək üçün faktları kifayət qədər yaxşı başa düşməyə bilərlər.

Əhəmiyyətli odur ki, aşkar edilə bilməyən bəzi məhdudiyyət dövrləri var. Bunun ən diqqətəlayiq nümunələrindən ikisi: a) 15 illik son məhdudiyyət Məhdudiyyətlər Aktı, 2002 və b) 38(3) bölməsi Qəyyum Aktıaşkar edilməsindən asılı olmayaraq müvafiq vəfat etmiş şəxsin vəfat etdiyi tarixdən qüvvəyə minir. Aşkar edilə bilənlik, necə ifadə olunduğundan asılı olaraq, müqavilə ilə müəyyən edilmiş bəzi məhdudiyyət dövrlərinə də şamil olunmaya bilər.

Müəyyən bir məhdudiyyət müddətinin aşkar edilə bilənliyə tabe olub-olmaması həmişə aydın deyil. Əgər məhdudiyyət müddəti müddəası iddia müddətinin hərəkətin səbəbi və ya zərərin baş verdiyi andan işə başlamasını nəzərdə tutursa və ya konkret olaraq aşkar edilə bilənliyə istinad edirsə, aşkar edilə bilənlik də tətbiq oluna bilər, halbuki müddəa məhdudiyyət müddətinin başqa bir nöqtədə davam etməsini nəzərdə tutursa, məsələn, bir ölüm tarixi, kəşf edilə bilməsi tətbiq edilə bilməz.

Kəşf oluna bilənliyin mürəkkəb bir anlayış olduğu və bəzi məhdudiyyət dövrlərinin aşkar edilə bilməsi səbəbindən ən təhlükəsiz hərəkət yolu, aşkar edilə bilənliyə etibar etməyə ehtiyac qalmadan məhkəmə iddialarını kifayət qədər erkən verməkdir.

c) Qeyri-qanuni işdən çıxarılma iddiası üçün məhdudiyyət müddətinin əmək müqaviləsinin başa çatdığı tarixdən başlayacağını fərz etsək

In Cons Fridmana qarşı, Ontario Apellyasiya Məhkəməsi qanunsuz işdən çıxarılma iddiaları üçün məhdudiyyət müddətini nəzərdən keçirdi. Bu iş 31 yanvar 1995-ci il tarixindən etibarən əmək müqaviləsinə xitam veriləcəyi barədə 12 dekabr 1994-cü il tarixdə bildiriş almış işçiyə aiddir. Apellyasiya Məhkəməsi müəyyən etmişdir ki, işçinin işdən çıxarılması barədə bildiriş aldığı andan (12 dekabr) iddia müddəti başa çatmışdır. , 1994) və işçinin əmək müqaviləsinin bitdiyi tarixə (31 yanvar 1995-ci il) deyil.

Cons Fridmana qarşı bəzi hüquqşünaslar iddia müddətinin xitam bildirişinin verildiyi tarixdən çox, xitam verilməsinin qüvvəyə mindiyi tarixə qədər davam etmədiyini güman etdiyi üçün bir çox vəkili yıxdı. Xoşbəxtlikdən, bu problemli fərziyyə həmişə ölümcül olmaya bilər. Daha doğrusu, Jones (əvvəlkilərə əsasən qərar verilmişdir Məhdudiyyətlər Aktı) işığında bəzi hallarda fərqlənə bilər Webster v. Almore Trading & Manufacturing CoƏdalət Pittinin saxlandığı yer:

Səhv işdən azad etmə, mənim fikrimcə, məhdudlaşdırma kontekstində xüsusilə çətin məsələ qaldırır, çünki bu, özlüyündə işdən çıxarılma deyil, daha çox əsaslandırılmış xəbərdarlıq və ya belə bildirişin əvəzinə əmək haqqı olmadan işdən çıxarılmadır, yəni hərəkətə keçə bilər. Müvafiq olaraq, qeyri-qanuni işdən çıxarılma iddiası üçün iddia müddəti mütləq işdən çıxarılma tarixindən keçmir. Hərəkətin səbəbi aşkar edildikdə, yəni işdən çıxarılan işçinin səbəbsiz və xəbərdarlıq edilmədən və ya xəbərdarlıq əvəzinə ödəniş etmədən işdən azad edildiyini bildiyi və ya bilməli olduğu tarix və məhkəmə icraatının uyğun bir yol olacağı gün aktivləşdirilir. təzminat almaq üçün. Aşkarlanma tarixi işdən çıxarılma tarixindən gec ola bilər.

Vebster qərara Ng Monreal Bankına qarşı işində təsdiqlənərək istinad edildi, burada Ədalət D.M. Qəhvəyi tutdu:

Qanunsuz işdən çıxarılma iddialarında iddianın səbəbi adətən müqavilə pozulduqda - yəni işəgötürən işçini əsaslı xəbərdarlıq etmədən işdən çıxardıqda yaranır: Cons Fridmana qarşı, 2006 CanLII 580 (ON CA), 2006 CanLII 580 (ON C.A.), paras. 3 və 4. İşə xas olan faktlar həmin ümumi prinsipi şübhə altına sala və iddianın aşkar edildiyi tarix kimi daha gec tarixə işarə edə bilər: Webster v. Almore Trading & Manufacturing Company Ltd., 2010 ONSC 3854 (CanLII).

Müvafiq olaraq, ən azı bir arqument var ki, qeyri-qanuni işdən çıxarılma iddiaları üçün məhdudiyyət müddəti işçinin xəbərdarlığın yerinə xitam verilməsi və ya ödəniş haqqında adekvat bildiriş almadığını aşkar edənə və ya aşkar etməli olana qədər davam edə bilməz. Əksər hallarda, işçinin bunu aşkar edə bilməsi üçün şübhəsiz ki, bir vəkillə məsləhətləşməlidir.

Qanunsuz işdən çıxarılma iddiaları üçün məhdudiyyət müddətləri ilə bağlı qanunun tənzimlənmədiyi nəzərə alınmaqla, hüquqşünaslar təbii ki, xitam verildiyi gündən iki il ərzində qeyri-qanuni işdən çıxarılması iddialarının qaldırılmasını təmin etməlidirlər. Hüquqşünaslar özlərini etibar etməli olduqları vəziyyətə salmamalıdırlar VebsterNg bunun qarşısını almaq mümkün olduqda qərarlar.

d) Sığortaçılara qarşı iddialar üzrə məhdudiyyət müddətinin sığortaçının sığorta təminatından imtina etdiyi tarixdən etibarən davam etdiyini fərz etsək

Hüquqşünaslar bəzən ehtimal edirlər ki, sığortaçılara qarşı sığorta təminatı üçün iddialar üzrə məhdudiyyət müddəti sığortaçının əhatə dairəsini açıq şəkildə rədd etdiyi zaman işə başlayır. Təəssüf ki, bu, təhlükəli fərziyyə ola bilər, çünki müvafiq presedent hüququ ziddiyyət təşkil edir. Bir tərəfdən Ontario Apellyasiya Məhkəməsinin qərarı Kassburg v. Sun Life Assurance Co., Kanada, sığortaçıya qarşı təminat iddiası üçün məhdudiyyət müddətinin sığortaçı əhatəni açıq şəkildə inkar edənə qədər davam etməməsi təklifini dəstəkləyir. Digər tərəfdən, Apellyasiya Məhkəməsinin qərarları Schmitz v.Lombard General Insurance Company of CanadaNasr Hospitality Services Inc. İntact Sığortaya qarşı İddia müddətinin sığortalının əhatə dairəsini tələb etdiyi gündən sonra işləməyə başlaması təklifini dəstəkləyin.

Qeyd edək ki, in Kassburquzunmüddətli əlillik iddiası ilə bağlı məhkəmədən iddianın açıq-aşkar rədd edildiyi zaman (hətta cavabdeh sığortaçı da onun rədd edildiyi gündən başa çatdığını qəbul etmiş kimi görünürdü) iddia müddətinin keçib-keçməməsinə qərar vermək üçün xüsusi olaraq tələb olunmamışdır. Daha doğrusu, məhkəmədən ümumi qərarın qəbul edilməsi barədə vəsatət kontekstində sığortaçının rədd cavabı məktubunun açıq-aşkar rədd cavabı olub-olmamasına və ya iddia müddətinin yalnız sığortaçının daxili apellyasiya proseduru bitdikdən sonra başa çatmasına baxması xahiş olunub. Vəsatətlər baxır Kassburq sonuncunun belə olduğunu müəyyən etdi. Sığortaçının apellyasiya şikayəti əsasında Apellyasiya Məhkəməsi bu qənaətə gəlmək üçün hakimin vəsatətlərə açıq olduğunu müəyyən edib və şikayəti təmin etməyib.

Qərarın qəbul edilməsi əhəmiyyətlidir Kassburq əvvəlki qərara istinad etmir Schmitz. Üstəlik, qərar Nəsr əvvəlki qərara istinad etmir Kassburq. Əksəriyyətin iştirak etdiyi halda, bu da əlamətdardır Nəsr Məhdudiyyət müddətinin əhatə dairəsi tələb olunduğu andan keçdiyi qənaətinə gəlsə də, Ədalət Feldman kəskin etirazını bildirdi.

e) Saxlanılmayan hallarda və ya müştərinin məhkəməyə başlamaq üçün vaxtında göstəriş vermədiyi hallarda məhdudiyyət müddəti barədə xəbərdarlıq edilməməsi

Hüquqşünaslar potensial müştərilər qarşısında fəaliyyət göstərmədikləri məsuliyyətə məruz qala bilərlərmi? Ən azı vəkil (və ya vəkil firması) potensial müştəri ilə əlaqə saxladıqda, lakin potensial müştərini tətbiq olunan məhdudiyyət müddəti barədə xəbərdar etmədikdə bunun baş verməsi riski var.

Qeyri-müştərilər qarşısında mümkün məsuliyyətə məruz qalmaqdan qorunmaq üçün vəkil və ya hüquq firması aşağıdakı addımları atmalıdır. yazılı (və ideal olaraq da şifahi olaraq) potensial müştərilərlə məsləhətləşdikləri, lakin saxlanılmadıqları zaman: a) onların saxlanmadığını təsdiqləyin b) potensial müştərinin iddiasına məhdudiyyət müddəti (və əgər varsa, xəbərdarlıq müddəti) tətbiq olunduğu barədə xəbərdarlıq edin. ) və hər hansı iddianın məhdudiyyət müddəti bitməmişdən əvvəl başlanmasının vacib olduğunu c) potensial müştəriyə vəkil/firmanın məhdudiyyət müddətinin nə vaxt başa çatacağı ilə bağlı məlumat vermək iqtidarında olmadığını bildirin (alternativ olaraq, hüquqşünaslar məsləhət verə bilər). potensial müştəri, ehtimal ki, məhdudiyyətin nə vaxt başa çatacağı barədə məlumat verir, lakin potensial müştərinin buna etibar etməməli olduğunu da qeyd etmək ehtiyatlı olardı, çünki məsələ tam qiymətləndirilməmişdir) d) məhdudiyyət müddətini nəzərə alaraq müştəriyə tövsiyə etmək Müştəri hələ də məhkəmə prosesini davam etdirməkdə maraqlıdırsa, təxirə salınmadan alternativ məsləhətçi ilə məsləhətləşin və e) müştəriyə məhdudiyyət müddəti ilə bağlı şifahi xəbərdarlıq edildiyini təsdiqləyin. yazılı xəbərdarlıq (əgər varsa).

Eynilə, hüquqşünasların mövcud müştəriləri aşağıdakı hallarda məhdudiyyət müddətləri barədə yazılı (və ideal olaraq şifahi) xəbərdar etmələri ehtiyatlıdır: a) müştərinin üçüncü tərəfə qarşı potensial iddiası varsa, lakin məhkəməyə başlamaq üçün vaxtında göstərişlər verməmişdir və ya b) vəkilin saxlanması müştərinin iddiası başlamazdan əvvəl başa çatır. Vəkil müştərinin potensial iddiasının əsassız olduğuna və buna görə də davam etdirməyə dəyməz olduğuna inansa belə, belə bir xəbərdarlıq ideal olaraq verilməlidir.

Məhdudiyyət müddətləri ilə bağlı yazılı xəbərdarlıqlar ideal olaraq əl ilə çatdırılmalı və ya qeydə alınmış poçt və ya kuryer kimi izlənilə bilən çatdırılma metodundan istifadə etməklə göndərilməlidir. Müştərilər və potensial müştərilər adi poçtla göndərilən xəbərdarlıqları asanlıqla inkar edə bilərlər.

Qeyd etmək lazımdır ki, yuxarıda qeyd olunan hallarda müştərilərə və potensial müştərilərə xəbərdarlıq edilməməsi mütləq olaraq müvafiq qayğı standartının pozulması sayıla bilməz. Bununla belə, qayğı standartının pozulması ilə nəticələnməsə belə, bu addımların atılmaması müştərinin və ya potensial müştərinin vəkilə qarşı iddiası ilə nəticələnə bilər.

f) Müvafiq iddialar üzrə məhdudiyyət müddəti barədə xəbərdarlıq edilməməsi

Müştərilər çox vaxt eyni faktlar toplusundan irəli gələn birdən çox potensial iddiaya malikdirlər. Məsələn, avtonəqliyyat vasitəsi qəzasına məruz qalan müştəri, digər şeylərlə yanaşı, qəza nəticəsində müavinət iddiası, hüquq pozuntusu iddiası, yol idarəsi iddiası, əlillik iddiası və ya hətta əmək qanunvericiliyi iddiası ola bilər. Hüquqşünaslar öz müdafiəçilərini yalnız müştərinin potensial iddiaları ilə məhdudlaşdıra bilsələr də, bunu edən hüquqşünaslar hələ də müştərini digər iddiaların mövcud olması barədə xəbərdar etmək və bu cür iddiaların məhdudiyyət müddətlərinə tabe olduğu barədə xəbərdarlıq etmək öhdəliyinə malik ola bilərlər. Müvafiq olaraq, hüquqşünaslar müştərinin həll etmək üçün saxlandıqları iddialardan başqa hansı potensial iddialara malik ola biləcəyini düşünməli və müştəriyə bu potensial iddialar barədə yazılı məlumat verməlidirlər ki, müştəri onları davam etdirmək üçün başqa məsləhətçini saxlamalı olacaq. , və iddiaların məhdudiyyət müddətinə (və əgər varsa, xəbərdarlıq müddəti) tabe olması faktı.

g) Münaqişənin həlli ilə bağlı danışıqlara cəhd edərkən məhdudiyyət müddətindən xəbərdar olmamaq

Hüquqşünaslar bəzən həll müzakirələri zamanı məhdudiyyət müddətlərini nəzərdən qaçırırlar. Bu səhv bəzən məhkəmədə iştirak etməyən şəxslər tərəfindən məhkəmə prosesində iştirak etməyən şəxsin məhkəmə vəkilinin köməyinə müraciət etmədən gözlənilmədən məhkəmədə iştirak etməyən şəxsdən yaranan mübahisəni həll etməyə çalışdığı hallarda edilir.

Aşağıdakı hallar istisna olmaqla, nizamlanma müzakirələrinin ümumiyyətlə məhdudiyyət müddətinin işini dayandırmaması təklifi üçün səlahiyyət var: a) tərəflər danışıqları asanlaşdıran vasitəçi kimi neytral üçüncü tərəfin olması barədə razılığa gəliblər b) dayandırılma və/və ya imtina edilə bilər. müəyyən edilmiş (bu hallarda estoppel və/və ya imtinanın müəyyən edilməsi çətindir) və ya c) tərəflər tollinq müqaviləsi bağlamışlar.

Müzakirələr zamanı iddia müddəti problemi ilə üzləşən hüquqşünaslar bəzən iddia müddətinin müdafiəsinə hücum edə biləcəklərini soruşurlar, əsas götürürlər ki, qarşı tərəf məhkəmə prosesinin başlanmasının gecikməsinə xələl gətirməyib (çünki qarşı tərəflər həmişə bilirdilər ki, iddia irəli sürülürdü). Təəssüf ki, qərəz məsələsi, bir qayda olaraq, iddia müddətinin keçib-keçməməsinə aidiyyatı yoxdur (sözügedən xüsusi məhdudiyyət müddətinin müddəasının zərərin nəzərə alınmasını nəzərdə tutduğu nadir hallar istisna olmaqla).

Daşınmaz əmlak və ya korporativ sövdələşmədən (və ya digər qeyri-məhkəmə məsələsindən) potensial məhkəmə mübahisəsi yarandığı hallarda, müştərilər məhkəmə prosesində iştirak etməyən müvəkkilinin bunu etməyə çağırmasına baxmayaraq, vaxtaşırı məhkəmə məsləhətçisini saxlamaqdan imtina edəcəklər. Bu şəraitdə məhkəmədə iştirak etməyənlər sadəcə yazılı şəkildə müştəriyə məhkəmə icraçısı ilə görüşməyi tövsiyə etməkdən daha çox şey etməlidirlər. Onlar həmçinin müştərini yazılı şəkildə xəbərdar etməlidirlər ki, istənilən vaxt başa çata biləcək tətbiq olunan məhdudiyyət müddəti ola bilər və onlar iddia müddətinin nə vaxt başa çatacağına dair rəy verə bilməzlər və ya məhkəmə iştirakçısı olmadığı üçün onun bitməsinin qarşısını almaq üçün tədbirlər görmürlər. .

h) Faktların adekvat şəkildə araşdırılmaması

İddia ilə bağlı əhəmiyyətli faktlar və müvafiq tarixlər barədə məlumat vermək üçün müştərilərə çox etibar etmək təhlükəlidir. Müştərilər çox vaxt etibarsız olurlar – xüsusən də tarixlərlə bağlı. Bəzi hallarda asanlıqla əldə edilə bilən sənədlər və məlumatlarda müştərinin təqdim etdiyi məlumatlara uyğun gəlməyən faktlar ola bilər.

Müştəri tərəfindən verilən qeyri-dəqiq məlumatlara görə iddia müddətinin buraxılması faktı vəkili mütləq azad etmir. Əksinə, vəkil aşağıdakı hallarda məsuliyyətə məruz qala bilər: a) vəkil müştərinin yanlış məlumatın mənbəyi olduğunu sübut edə bilmədikdə b) vəkil sənədlərdən və ya digər mənbələrdən düzgün faktiki məlumat əldə edə bilməli idi və ya müştəriyə düzgün suallar verməklə və/və ya c) vəkil müştərini təqdim etdiyi məlumatların düzgünlüyünün təmin edilməsinin vacibliyi barədə adekvat şəkildə xəbərdar etməmişdir.

Hüquqşünaslar son nəticədə yanlış faktlara istinad etdiklərini öyrənəndə bunu müştəridən öyrənmələri qeyri-adi deyil. Çox vaxt onlar bu barədə müştərini imtahana hazırlayarkən və ya faktiki müayinə zamanı öyrənirlər. Bunun tez-tez baş verməsi onu deməyə əsas verir ki, hüquqşünaslar müvəkkilin əvvəlində faktları müştəriləri ilə daha ətraflı nəzərdən keçirməklə və müştəriləri müvafiq sənədlərə, fotoşəkillərə və xəritələrə istinad etməklə, bu məhdudiyyət müddətinin tələ riskini minimuma endirə bilərlər. xatirələr və hadisələrin öz versiyasını ifadə etməkdə onlara kömək edin (xəritələrin və/yaxud aerofotoların istifadəsi zədə və ya hadisənin harada baş verdiyinə əmin olmağın vacib olduğu hallarda xüsusilə faydalıdır).

Bu məhdudiyyət müddəti tələsindən qaçmaq üçün vəkillərin atmalı olduğu digər addımlara aşağıdakılar daxildir: a) saxlanıldıqdan sonra müvafiq sənədləri/məlumatları dərhal əldə etmək və nəzərdən keçirmək b) müştərilər tərəfindən verilən məlumatları təsdiqləmək üçün korporativ axtarışlardan, başlıq axtarışlarından və müxtəlif potensial axtarışlardan istifadə etmək c ) əsas faktlarla bağlı müştərilərlə müzakirələrə dair yaxşı qeydlər aparmaq e) dərhal məhkəmə çəkişmələrinə başlamaq və f) mümkün olduqda, hər hansı mümkün məhdudiyyət müddətləri bitməzdən əvvəl aşkara çıxarmaq üçün müayinələrə getmək

i) Müvafiq hallarda “Con Doe” müttəhimlərinin adının çəkilməməsi

Məhkəmə prosesinin başlanğıcında kimin cavabdeh kimi göstərilməli olduğu həmişə aydın olmur. Bu şəraitdə bir və ya bir neçə Con Doe müttəhiminin yer tutan kimi adlarını çəkmək çox vaxt ehtiyatlıdır.

John Doe cavabdehinə yalvarmağın məqsədi iddiaçı və iddiaçının vəkilini sonradan onların sözügedən cavabdehin şəxsiyyətini bilməli olduqları və buna görə də məhdudiyyət müddətinin qaçırıldığı iddia edilən hallardan qorumaqdır. John Doe cavabdehinin adını çəkməklə, iddiaçı adətən düzgün cavabdehin şəxsiyyətini öyrəndikdən sonra John Doe cavabdehini düzgün cavabdehlə əvəz etməklə məhdudiyyət müddəti problemlərindən qaça bilər.

John Doe cavabdehinə qarşı iddianı dəstəkləyən maddi faktları müdafiə etmək vacibdir. Bununla belə, iddianı o qədər konkret etməkdən qaçınmaq da eyni dərəcədə vacibdir ki, nəticədə müəyyən edilmiş cavabdehi dəqiq təsvir edə bilməz.

Məsələn, sürüşmə və yıxılma məsələsində potensial məsuliyyət daşıyan texniki xidmət şirkətinin olub-olmamasının aydın olmadığı halda, Con Doe cavabdehinin adını çəkmək və sonra Con Doe-nun müqaviləyə uyğun olaraq və ya başqa şəkildə müqaviləyə uyğun olaraq məsuliyyət daşıdığını iddia etmək məqsədəuyğun olardı. binalar, lakin John Doe bunu edə bilmədi. Digər tərəfdən, John Doe-nun texniki xidmət müqaviləsi olduğunu iddia etmək qədər uzağa getmək məsləhət görülə bilməz. sözügedən əmlakın sahibi ilə çünki onun əvəzinə başqa tərəflə, məsələn, kirayəçi ilə müqavilə bağlamış olması mümkündür.

j) Faylların ötürülməsi zamanı qarışıqlıq

Məhdudiyyət müddətləri tez-tez məhkəmə prosesi zamanı və ya vəkillər arasında ötürüldükdən qısa müddət sonra qaçırılır. Bu şəraitdə həm faylı ötürən vəkil, həm də yeni vəkil potensial olaraq iddiaya məruz qala bilər. Bu cür halların qarşısını almaq üçün vəkillər/firmalar arasında sənədlərin ötürülməsi zamanı aşağıdakı addımlar nəzərə alınmalıdır: a) faylı ötürən vəkilin yeni vəkilə istənilən vaxt həssas olduğu barədə yazılı məlumat verməsi yaxşı təcrübədir. qarşıdan gələn məhdudiyyət müddəti də daxil olmaqla məsələlər b) faylı qəbul edən vəkilin (yeni vəkil) eyni məlumatı dərhal təqdim edilmədiyi dərəcədə yazılı şəkildə tələb etməsi yaxşı təcrübədir c) yeni vəkil bunu aydınlaşdırmağı düşünməlidir. müştəriyə və ilkin vəkilə yazılı surətdə o, köhnə vəkildən faylı alana qədər saxlanılan şəxsi qəbul etməyəcək və d) yeni vəkil faylı aldıqdan sonra onu dərhal nəzərdən keçirməlidir.

k) İddia vermək üçün mümkün olan son ana qədər gözləmək

Bəzi hüquqşünaslar iddialar vermək üçün müntəzəm olaraq son mümkün ana qədər (və ya demək olar ki, mümkün olan son ana) gözləyirlər. Bir çox məhdudiyyət müddəti problemləri vəkillərin bunu etdiyi hallardan yaranır.

İddianın verilməsini uzun müddət dayandırmaq əksər hallarda pis təcrübədir. İddianın verilməsini təxirə salmaq üçün yaxşı səbəb yoxdursa, hüquqşünaslar iddiaları tez bir zamanda verməyi hədəfləməlidirlər.

İddia müddətinin bitmə tarixi aydın və aydın görünsə belə, iddianın verilməsini təxirə salmaqdan yarana biləcək çoxsaylı problemlər var. Məsələn, müştərinin təqdim etdiyi (yaxud əsas sənədlərdə qeyd olunan) müvafiq tarixlər səhv olarsa necə? Məhdudiyyət müddətini qeyd edərkən səhv olarsa nə olar? Əgər müttəhim vəkildən xəbərsiz ölübsə və 38(3) bəndi Qəyyum Aktı buna görə tətbiq olunur? Müqavilə üzrə məhdudiyyət müddəti göz ardı edilsə nə etməli? Məhdudiyyət müddətinin bitməsinə az qalmış xəstələnsəniz nə olacaq? İddia ərizəsinin verilməsinin gecikməsinə səbəb olan inzibati xəta baş verərsə nə etməli? Əgər məhkəmə işçiləri hansısa texniki səbəbə görə iddianı rədd edərsə?

Mümkün olan son anda iddianın verilməsi, iddianın iddia müddətində verildiyi üzə çıxsa belə, iddia müddəti problemi ilə nəticələnə bilər. Məsələn, cavabdehin Müdafiə Bəyannaməsindən aydın olarsa və ya başqa bir şəkildə bildiriş tələbinin qaçırıldığı (məsələn, qanunun tələbi ilə bağlı bildiriş tələbi kimi) Crown Aktına Qarşı Prosedurlar), bunu bildiriş vermək və yeni iddia verməklə müalicə etmək mümkün ola bilər, ancaq məhdudiyyət müddəti hələ bitməmişsə. Bundan əlavə, iddia qaldırıldıqdan sonra ortaya çıxan məlumatlardan vəsatətlərin dəyişdirilməsinə ehtiyac olduğu və ya iddiaya yeni tərəflərin əlavə edilməsinə ehtiyac olduğu aydın olarsa, məhdudiyyət müddəti keçdiyi təqdirdə bunu etmək mümkün olmaya bilər.

İdeal olaraq, hüquqşünaslar mümkün qədər tez hərəkətlər etməli və hər hansı məhdudiyyət müddəti bitməzdən əvvəl kəşf üçün müayinələri tamamlamaq üçün özlərinə kifayət qədər vaxt qoymağa çalışmalıdırlar. Bu, kəşflər nəticəsində bunu etmək zərurəti aydın olarsa, yeni iddiaların məhdudiyyət müddəti problemi olmadan irəli sürülməsini təmin etməyə kömək edəcək.

İddianın icrasını dayandırmaq üçün qanuni səbəb varsa, adətən iddianın verilməsini dayandırmaqdansa, iddianın verilməsini dayandırmaq, lakin başlanğıc prosesə xidmət göstərməyi müvəqqəti olaraq dayandırmaq daha yaxşı təcrübədir. Xidmət üçün son tarixin qaçırılmamasını təmin etmək üçün səylər göstərilməli olsa da, buraxılmışsa, bu, adətən xidmətin uzadılması və ya xidmətin təsdiqlənməsi təklifi ilə təmir edilə bilər, halbuki buraxılmış məhdudiyyət müddəti adətən ölümcül olur.

l) aşkar oluna bilməməsi

Cavabdeh iddianın qanuni qadağan edildiyini iddia edirsə və iddiaçı aşkar edilə bilənliyə əsaslanaraq məhdudiyyət müddətini keçmək niyyətindədirsə, iddiaçı Cavabda və ya başqa şəkildə aşkar edilə bilənlik arqumentini dəstəkləyən faktları iddia etməlidir. Bunun edilməməsi iddiaçının məhkəmədə və ya vəsatətdə aşkar oluna biləcəyini iddia edə bilməsini mümkün şəkildə istisna edə bilər (xüsusilə, Collins v. Cortez-ə qarşı işdə qərar göstərir ki, aşkar edilə bilənliyi iddia etməmək, fərqli olaraq, ümumi qərar üçün vəsatətdə ölümcül olmayacaqdır. tətil haqqında vəsatətdən və ya digər vəsatətdən).

m) Lazımi tərəfin iddiadan kənarda qaldığını öyrəndikdən sonra müvafiq addımların atılmaması

Uzun illər məhkəmə prosesində səhv bir tərəfin cavabdeh və ya iddiaçı kimi göstərildiyini və ya lazımi tərəfin adını çəkmədiyinizi başa düşsəniz nə edərsiniz. Tətbiq olunan məhdudiyyət müddətindən asılı olmayaraq, aşağıdakılardan birinə və ya bir neçəsinə əsaslanaraq bu problemləri düzəltmək çox vaxt mümkündür: i) aşkarlıq ii) Qanunun 6, 7, 11 və 16-cı bölmələri Məhdudiyyətlər Aktı, 2002, məhdudiyyət müddətinin davam edə bilməyəcəyi və ya tətbiq oluna bilməyəcəyi müxtəlif halları müəyyən edən iii) 2002-ci il Məhdudiyyətlər Aktının 21(2) bölməsi, tərəfin yanlış adlandırılmasına və ya yanlış təsvirinə məhdudiyyət müddəti bitdikdən sonra düzəliş edilməsinə icazə verir iv) xüsusi hallar doktrinası (bu doktrina yalnız bəzi məhdudiyyət dövrləri üçün mövcuddur) v) hesablaşma və/və ya vi) bəzi nadir hallarda, Qayda 2.01 Mülki Prosessual Qaydalar.

Bu şəraitdə bəzi hüquqşünaslar mövcud məhkəmə prosesinə istənilən tərəfi əlavə etmək üçün vəsatət verməkdənsə, istədiyi tərəfə qarşı ayrıca yeni iddia qaldırmağı üstün tuturlar. Bu yanaşmanın üstünlüyü ondan ibarətdir ki, o, potensial mübahisəli hərəkətə ehtiyacın qarşısını alır. Bununla belə, bu yanaşma qərarın işığında müəyyən risklə gəlir Maynes Allen-Vanguard Technologies Inc-ə qarşı, Ontario Apellyasiya Məhkəməsi ayrı bir iddianın verilməsinin prosesdən sui-istifadə təşkil edə biləcəyini müəyyən etdi. isə Maynes Qərar daha sonra Ontario Apellyasiya Məhkəməsi tərəfindən fərqləndirildi Abarca Varqasa qarşı, bu şəraitdə ayrıca iddia qaldırmağın icazəli olub-olmaması ilə bağlı qanun öz axında qalır və buna görə də vəsatət vermək əvəzinə ayrıca iddia qaldırmaq çox vaxt (lakin həmişə deyil) məqsədəuyğun ola bilməz.

21(2) bəndinin olduğu hallarda Məhdudiyyətlər Aktı, 2002 etibar edildiyi halda, yeni tərəfin məhkəmə prosesinin mövcud tərəfi ilə əvəz edilməsi normal olaraq vacibdir. Bununla belə, məhkəmələr müəyyən məhdud hallarda Qanunun 21-ci maddəsinin 2-ci bəndinə istinad etməyin mümkün ola biləcəyini qeyd ediblər. Məhdudiyyətlər Aktı, 2002 məhkəmə prosesinə tərəfi əvəz etmək əvəzinə yeni tərəf əlavə etmək.

Təəssüf ki, hüquqşünaslar bəzən problemi necə həll edəcəklərini bilmədiklərinə və ya problemi həll etmək üçün çox gec olduğunu güman etdiklərinə görə, müvafiq tərəfin məhkəmə prosesindən kənarda qaldığını öyrəndikdən sonra “donurlar”. Bu, bir vəkilin bu vəziyyətlərdə edə biləcəyi ən pis şey ola bilər, çünki bu problemləri həll etmək üçün vəsatət vermək və ya yeni məhkəmə iddiası verməkdə gecikmələr ölümcül ola bilər. Qeyd edək ki, yeni tərəfin əlavə edilməsi üçün vəsatət qaldırıldığı hallarda, məhdudiyyət müddəti saatı vəsatət təqdim edilən kimi fəaliyyətini dayandırır.

n) Məhdudiyyət müddətlərinin buraxılmamasını təmin etmək üçün müvafiq prosedurların olmaması

Hüquqşünaslar ideal olaraq məhdudiyyət müddəti məsələlərini (və bildiriş tələblərini) yeni saxlayıcı qəbul edən kimi (və ya hətta yeni saxlama haqqında düşünərkən) nəzərdən keçirməlidirlər. Hüquqşünaslar avtomatik olaraq vəkil qəbul edən şəxsləri qəbul etdikləri və ya qeyri-hüquqşünasların onlar üçün qoruyucuları qəbul etdiyi razılaşmalardan çəkinməlidirlər, çünki belə razılaşmalar vəkil onun saxlanıldığını bilmədən məhdudiyyət müddətlərinin buraxıla biləcəyi hallar yaradır.

Məhdudiyyət müddətinin son tarixləri dərhal qeyd edilməlidir. Hüquqşünasın gündəliyi sistemi ideal şəkildə elə qurulmalıdır ki, o, çoxsaylı səhvlərə tab gətirə bilsin (məsələn, o, tarixlərin birdən çox yerdə birdən çox şəxs tərəfindən qeyd olunmasını tələb etmək üçün tərtib oluna bilər).Sistem həmçinin müəyyən bir faylı təhvil verən vəkil xəstələnsə və ya firmanı tərk etsə belə, başqa vəkilə vaxtında məlumat verilməsini təmin etmək üçün qurulmalıdır.

Firmalar xəbərdar olmalıdırlar ki, məhdudiyyət müddətləri hətta cavabdehlər üçün çıxış edərkən də problem yarada bilər, çünki Qarşı İddiaların, Çapraz İddiaların və Üçüncü Şəxs İddialarının da məhdudiyyət müddətləri var. Bu cür iddialar üçün məhdudiyyət müddətləri də qeyd edilməlidir.

Firmalar hər bir işin istənilən vaxt vəkilə tapşırılmasını və hansı işin hansı vəkilə tapşırıldığına dair yazılı qeydin olmasını təmin etməlidir (çaşqınlığın qarşısını almaq üçün). Hüquqşünas firmanı tərk etdikdə, adətən vəkildən köçürmə memorandumu hazırlaması xahiş edilməlidir və köçürmə memorandumu həmişə mövcud ola biləcək məhdudiyyət müddətinin son tarixlərini əhatə etməlidir.

o) Həddindən artıq çox fayl qəbul etmək

Bu açıq-aydın olmalıdır, lakin buna baxmayaraq demək lazımdır: həddən artıq çox fayl götürmək, şübhəsiz ki, buraxılmış məhdudiyyət dövrləri də daxil olmaqla, səhvlərin olma ehtimalını artırır.

Yuxarıda göstərilən tələlərin siyahısı heç də tam olmasa da, buraxılmış məhdudiyyət dövrlərinə səbəb olan bir çox vəziyyətləri əhatə edir. Müvafiq olaraq, yuxarıda qeyd olunan tələlərdən müvəffəqiyyətlə qaçan hüquqşünaslar (bəlkə də bunu etməkdən daha asandır) məhdudiyyət müddəti problemlərindən tamamilə qaçmaq üçün yaxşı şansa malikdirlər.

LAWPRO¹ bölməsinin direktoru və məsləhətçisi Jordan Nichols tərəfindən

¹ Bu məqalə ilkin olaraq 2017-ci ilin aprelində tərtib edilib və dərc edilib və sonra 2019-cu ilin martında yenilənib. Presedent hüququnun redaktə edilməsində və qeyd edilməsində köməklik göstərdikləri üçün Tova Cranford və Chantelle Dallasa təşəkkür edirik.


2 Məlumat yüklənməsi

BI tətbiqiniz üçün mobil interfeys qurarkən, bütün məlumatların təhlili və dizayn zəngləri və fitləri ilə iş masası təcrübəsini təkrarlamağa cəhd etmək cazibədar ola bilər. Lakin mobil Bl idarə panelləri istifadəçinin iş masasında olan təcrübəsini tamamlamalıdır - əvəz etməməli və ya tam olaraq təkrarlamamalıdır.

Mobil analitikaya gəldikdə, tərtibatçılar "kiçik ekranın" məhdud sahəsinə qiymətli daşınmaz əmlak, məhdud resurs kimi yanaşmalı və buna görə də yalnız ən vacib məlumatları çatdırmalıdırlar. Böyük miqdarda məlumatı mobil ekrana sığışdırmaq cəhdi istifadəçilərin elementlər arasında fərq qoymasını və məlumatları tez emal etməyi çətinləşdirəcək ki, bu da ilk növbədə mobil BI-nin bütün məqsədidir. Bununla belə, tərtibatçılar müəyyən məlumatların və nəzarətlərin gizlədilməsi kimi taktikalardan istifadə edə, onları yalnız istifadəçi üçün uyğun olduğu anda görünə bilər.

100 sütundan ibarət məlumat şəbəkəsini nəzərdən keçirək. Bunu mobil auditoriyaya xidmət etmək istəməyə bilərsiniz. Bunun əvəzinə, onlara kiçik bir parça - mobil kontekstdə yalnız vacib məlumat verməyi düşünün. Məzmunu gizlətmək üçün pop-up pəncərələrdən və sürüşmə qablardan istifadə edin. Bu, yükləmə müddətlərini sürətləndirmək bonusuna malikdir və hər hansı bir tərtibatçının bildiyi kimi, zəif performans proqramların cəlb edilməsi üçün öldürücüdür.

Yadda saxlamaq lazımdır ki, mobil qurğular güclü olsa da, ümumi hesablama işləri üçün əla deyil. Bununla belə, onlar istifadəçini kompüterindən uzaqda kontekstdə dəstəkləyən məqsədyönlü məlumat axtarışında üstündürlər. Mobil telefona gəldikdə, tətbiq mükəmməlliyi tərtibatçılar kontekstdən xəbərdar olan və analitik cəhətdən zəngin proqramlar yaratdıqda, son istifadəçilərinə güclü fikirlər çatdırdıqda əldə edilir.


Yeni Sahibkarların 10 Ümumi Tələləri - və Onlardan Necə Qaçmaq olar

Digərləri Meksikanın Akapulko şəhərindəki La Quebradada uçurumun zirvəsindən baxarkən uçuruma dalğıc tullanır. [+] 17 may 2012. 'La Quebrada' ənənəsi 1934-cü ilə gedib çıxır, o zaman Akapulkonun iki qonşusu öz cəsarətlərini göstərmək üçün özlərini meydan oxudular və öz qüvvələrini qayalığın başından dənizə ataraq ölçmək qərarına gəldilər. Bu iki kişinin rəqabəti əvvəlcə ehtiyatsız tamaşa, daha sonra isə çörəkpulu qazanma yolu ilə başa çatdı. 'La Quebrada' mifi doğuldu və bu gün onun ardıcılları üçün demək olar ki, bir dindir. (Şəkil krediti: @daylife vasitəsilə AFP/Getty Images)

Bir işə başlamaq təcrübəsi olmayanlar üçün olduqca çətin bir işdir və bilmədikləriniz fəlakətli ola bilər. Kiçik biznesin əksəriyyəti ilk beş il ərzində uğursuzluğa düçar olur, lakin bunun səbəbi tez-tez asanlıqla qarşısı alına bilən səhvlərdir. Yeni bir işə, xüsusən də xidmətə əsaslanan biznesə başlamağı planlaşdırırsınızsa, burada ən çox rast gəlinən başlanğıc tələlərindən qaçmağınıza kömək edəcək bəzi göstərişlər var:

    Müqavilədən istifadə edin. Kim sizə deyirsə ki, müqaviləyə ehtiyacınız yoxdur. Bir dəqiqəlik işə başlamazdan əvvəl müqavilənin şərtlərini çəkin və kağıza köçürün. Müqavilələr təmin edir ki, iş əhatə dairəsi genişlənməsinə tabe ola bilməz -- burada müştəri gözləntiləri büdcəni üstələyir -- və ödəniş almağın vaxtı çatdıqda hər hansı problem yaranarsa, hüquqi sənədləriniz var.

    – sərfəli onlayn hesablaşma xidməti – mütəşəkkil sistemlə vergi ayırmalarınızı maksimum dərəcədə artırmaq və sadə ingilis dilində hansı ayırmaları götürə biləcəyinizi öyrənmək üçün resurs – sadələşdirilmiş, təhlükəsiz onlayn mühasibat xidməti – başa düşülən və onlayn imzalana bilən müqavilələr – səs yazısı, mətn, sənədlər, əl yazısı (iPad), internet kəsimi və s. vasitəsilə ideyaları əldə etmək və əldə etmək üçün onlayn "hər yerdə" proqram.

Uğurlu bir iş qurmaq xəyaldan başlayır, lakin lazımi bilik və alətlər olmadan bu, kabusa çevrilə bilər. Öz uğurunuz üçün məsuliyyət götürməyin əvəzi yoxdur. Dalın, ancaq suyun dərinliyini əvvəlcədən yoxlayın -- və ilk növbədə nə olduğunu bilməklə biznesə başlamağın tələlərindən qaçın.

Nik Riz rəqəmsal strategiya və filial marketinqi üzrə ixtisaslaşan Microbrand Media-nın təsisçi tərəfdaşıdır. Nik həmçinin bir neçə başqa şirkətləri idarə edir və onlara məsləhətlər verir və digər sahibkarlarla əlaqə qurmaqdan həzz alır.

Gənc Sahibkarlar Şurası (YEC) dünyanın ən perspektivli gənc sahibkarlarından ibarət yalnız dəvət olunan qeyri-kommersiya təşkilatıdır. YEC, gənclər arasında işsizliyə son qoymaq və gənc amerikalıları işə qaytarmaq məqsədi daşıyan həllər əsaslı hərəkat olan #FixYoungAmerica-ya rəhbərlik edir.

Gənc Sahibkarlar Şurası (YEC) dünyanın ən uğurlu 45 və daha gənc sahibkarlarından ibarət yalnız dəvətnamə əsasında ödənişli təşkilatdır. Haqqında suallar…


Layihənin idarə edilməsində tələlər nələrdir?

Pitfals tərifi olduqca aydındır. Bunlar layihənizin müvəffəqiyyətlə həyata keçirilməsinə mane olan hər hansı bir şey və ya proseslərdir. Onların fərqli təbiəti var, lakin bəzi ümumi xüsusiyyətlərə görə bu problemli məqamlar qruplara birləşdirilə bilər.

1. Zəif ünsiyyət

İstənilən layihədə 1 nömrə. Mən daha çox deyərdim - dünyada baş verən əksər vəziyyətlərdə kommunikasiya hərəkətverici qüvvədir. Hər bir üzvlə daimi söhbət etmək çox vacibdir. Beləliklə, menecer davamlı rəy alır, həmkarlarını yeniləyir və sadəcə olaraq göstərir ki, o, sərt idarəetmə tərzinə malik bir patron deyil, hətta dünənki televiziya şousunu müzakirə edə bilən bir liderdir.

Təkmilləşdirmə yolları

Düzgün ünsiyyət kanallarını seçin. Əgər messencerdə söhbət yaratsanız, orada iştirak edən hər kəsin təqdim olunduğundan əmin olun. Və ya ani ünsiyyətə ehtiyacınız varsa, e-poçt yazmayın, çünki bu, vaxt aparan və sürətli söhbət üçün səmərəsizdir.

Üz-üzə söhbət etməyi unutmayın. Müntəzəm olaraq görüşlər keçirin və həmkarlarınızla danışmaq üçün düzgün yol seçin.

2. Güvən və nümayəndəliyin olmaması

Menecer yadda saxlamalıdır ki, layihə təkcə ona aid deyil. Onun komandası da çoxlu tapşırıqları yerinə yetirir. Təəccüblü səslənməməlidir, lakin layihədə iştirak edən hər kəs buna görə məsuliyyət daşıyır. Beləliklə, minimum səviyyəli nümayəndə heyəti ilə bütün tapşırıqları özünüzə götürməmək daha yaxşıdır. Belə idarəetmə tərzi yalnız bir şeyi deyir - menecer öz həmkarlarına etibar etmir.

Təkmilləşdirmə yolları

Layihənin idarə edilməsində bu tələdən qaçmaq üçün menecer tapşırıqları yerinə yetirmək üçün əlindən gələni edəcək insanlara həvalə edə bilər. Üstəlik, etibar və nümayəndə heyəti iştirakçılara psixoloji təsir göstərir. Onlar əhval-ruhiyyəni artırır və hər kəs özünü mürəkkəb bir cihazda təkərlər deyil, komandanın bir hissəsi kimi hiss edir.

Xalqınızı dinləyin və fikirlərini nəzərə alın.

3. Aydın olmayan rollar, məsuliyyətlər və nəticələr

Hər şeyin hara getdiyini bilmək üçün hər kəs rol və məsuliyyətləri, eləcə də layihənin sonunda nə gözlənildiyini bilməlidir. Əvvəldən hər şeyə aydınlıq gətirmək lazımdır. Beləliklə, komandalar daha mütəşəkkil və özünü idarə edir.

Təkmilləşdirmə yolları

Ən başlanğıcda bütün gözləntilərin və ümumi kursun təyin olunacağı bir görüş keçirin. Bütün kritik məlumatları layihənin əhatə dairəsi bəyanatında qeyd edin. Hər şeyi aydınlaşdırmaq və hər şeyin yanlış istiqamətə getməsinə imkan verməmək zərurəti yarandıqda, layihənin istənilən mərhələsində bu sənədə müraciət etməkdə sərbəstsiniz.

4. Zəif yaradılmış layihə planı

İdarəetmədə planlaşdırmanın tələlərinə layihə planı, daha doğrusu, zəif yaradılmış plan daxildir.

Layihə planı nədir? Bu a formal layihənin əhatə dairəsi ilə bağlı bütün qərarların və digər müvafiq məlumatların daxil edildiyi sənəd. Məharətlə hazırlanmış plan layihə ilə bağlı bütün suallara cavab verir, ona görə də onun hazırlanması menecerdən dərin bilik və bacarıq tələb edir. Amma sonda o, lazımsız tələlərdən qaçır.

Təkmilləşdirmə yolları

Hətta əvvəlcədən hazırlanmış bir plan olmadan layihələri idarə etməyə çalışmayın. Bilin ki, o, aşağıdakı suallara cavab verməlidir: niyə?, nə?, kim? və nə zaman?

Əgər bir şey səhv olarsa, bu, tələlərə və layihənin əhatə dairəsinin sürüşməsinə səbəb ola bilər ki, bu da nəzarətsiz dəyişiklikləri və ilkin planlaşdırılan əhatə dairəsinin böyüməsini nəzərdə tutur.

5. Layihələrin daha kiçik vəzifələrə bölünməməsi

Layihələr adətən böyük və uzunmüddətli olur. Yəqin razılaşarsınız ki, bir neçə ay ərzində başa çatdırılması nəzərdə tutulan qeyri-maddi bir iş ilə özünüzü işə hazırlamaq çətindir. İnsana xas olan psixoloji məqamdır.

Təkmilləşdirmə yolu

Layihənin idarə edilməsində bu tələlərin qarşısını almaq üçün bütün işləri aydın qısamüddətli vaxt məhdudiyyətləri, aydın məqsədlər və onları yerinə yetirmək üçün alətlər olan parçalara bölün. Beləliklə, siz komanda üzvlərinin idarə oluna bilən tapşırıqlar və vaxt məhdudiyyətləri ilə bağlı özlərini rahat hiss etdikləri atmosfer yaradırsınız. Cəmi bir həftə çəkən bir iş 3 aylıq bir layihədən daha yaxşı səslənir, elə deyilmi?

6. Resursların zəif idarə edilməsi

Resurslar da layihələri təşkil edir. Onların fərqli təbiəti var. Onlardan bəziləri avadanlıq kimi materialdır. Onlardan bəziləri bütün komanda üzvlərindən ibarət işçi qüvvəsinə istinad edir. Digər resurslar xərclərə əsaslanır.

Təkmilləşdirmə yolları

İşçi qüvvəsinə gəldikdə, layihənin idarə edilməsində ümumi tələlərdən birinin qarşısını almaq olduqca asandır. İş günlərinizi əvvəlcədən və təfərrüatlarla fərdiləşdirdiyinizə əmin olun. Bütün iş günləri, istirahət günləri və məzuniyyətləri nəzərə alın. Unutmayın ki, resursların idarə edilməsi layihədəki hər hansı digər fəaliyyət kimi vacibdir. Bunda əhəmiyyətsiz bir detal yoxdur.

Həmçinin, bütün resursların onların qabiliyyətlərinə uyğun olaraq bölüşdürüldüyünə əmin olun. Lazım gələrsə, onları yenidən bölüşdürün.

7. İnsanların idarə olunmasına əhəmiyyət verilməməsi

Layihənin əhatə dairəsi, xərclər, nəticələr, son tarixlər... həddən artıq çox menecer onlara ilişib və beləliklə, digər layihə tələləri üçün mühit yaradır. Onlar sadəcə olaraq bütün işləri görən insanları unudurlar. Komandanın düzgün idarə edilməsi layihə daxilində daha yaxşı ünsiyyət və anlaşmaya gətirib çıxarır. Və əksinə, insanların idarə edilməməsi tapşırıqların səhv yerinə yetirilməsinə və buraxılmış müddətlərə gətirib çıxarır.

Təkmilləşdirmə yolu

Əslində bu nöqtə ünsiyyətin təsvir olunduğu birinci nöqtəyə bənzəyir. Həmkarlarınızla danışın, hər kəsə onun rolunun layihənin idarə edilməsi tələləri olmadan uğurla həyata keçirilməsi üçün necə vacib olduğunu xatırladın. Hər kəsin aydın təsəvvür əldə etməsi və maraqlı tərəflərin layihənin maraqlı tərəflərinin daha yaxşı idarə edilməsini təmin etməsi üçün komanda iştirakçıları ilə görüşlər keçirin.

8. Risklərin qeyri-adekvat idarə edilməsi

Bu, kiməsə təəccüblü və ya hətta qorxulu görünə bilər, lakin hər şeyin başlanğıcda nə qədər mükəmməl görünməsindən asılı olmayaraq, risklər baş verəcəkdir. Risklər layihənin idarə edilməsində istənilən mərhələdə baş vermə ehtimalı yüksək olan tələlərdən biridir. Ancaq menecerin edə biləcəyi hər bir uğurlu menecerin 10 layihə idarəetmə bacarığından birini tətbiq etmək, onları qabaqcadan görmək və onlara hazır olmaqdır.

Təkmilləşdirmə yolları

Əlinizdən gələni edin və əvvəldən mümkün qədər çox risk hesablayın. Fikirlərinizi komanda üzvlərinizlə paylaşın, onlara hesablamalarınızın bütün nəticələrini bildirin və onları hər bir vəziyyətə, hətta ən pis vəziyyətə hazırlayın. Risklər və özlərini necə aparmağın yolları haqqında nə qədər çox bilsələr, bu, bütün layihə üçün bir o qədər yaxşıdır.

9. Saxta və ya real olmayan son tarixlər

Bu, bütün psixologiya ilə bağlı bir məqamdır. Müdirlər və menecerlər, adətən, demək olar ki, qeyri-real vaxt məhdudiyyətləri ilə saxta son tarixlər təyin edirlər və sonra real olanlar gələcək. Onların düşündükləri budur: saxta son tarixə çatmaq çətindir, lakin mənim komanda üzvlərim bunun real olduğunu düşünürlər və bu, onları tapşırıqları yerinə yetirmək üçün əllərindən gələni etməyə məcbur edəcək. Bundan sonra, real olana qədər hələ bir müddət boşluq olduğunu anlayaraq, onları mütləq vaxtında bitirməlidirlər.

Təkmilləşdirmə yolları

Saxta son tarixlər təyin etmək təcrübəsindən imtina edin. Bu sürüşkən bir yamacdır. Həmkarlar menecerin saxta son tarixlər təyin etmək təcrübəsinə riayət etdiyini gördükdə, bir dəfə və hamılıqla menecerə inanmağı dayandıra bilərlər. Bu, hər bir liderin qaçmalı olduğu çətin bir layihə tələsidir.

10. Səmərəli layihə idarəetmə alətindən istifadə etməmək və ya istifadə etməmək

Xüsusi aləti olmayan layihə meneceri silahsız ovçu kimidir. Xüsusilə birdən çox layihə mühitində hər şeyi yadda saxlamaq və idarə etmək demək olar ki, mümkün deyil.

Buna görə də, düzgün alət seçimi bir çox çətin tələləri unutmağa kömək edən vacib bir məqamdır. GanttPRO Gantt chart proqramı menecerlərə və komanda üzvlərinə layihə izlərini saxlamağa, hər bir tapşırığın başlanğıc və bitmə tarixlərindən xəbərdar olmağa, resursları effektiv şəkildə bölüşdürməyə və sadəcə olaraq komanda üzvləri və ya maraqlı tərəflərlə əməkdaşlıq etməyə imkan verir.

Layihə idarəçiliyində yuxarıda təsvir edilən tələlərin planlarınızı məhv etdiyi vəziyyətlərdə heç olmusunuzmu? Yəqin ki, burada təsvir olunmayan vəziyyətdə olmusunuz? Zəhmət olmasa şərhlərinizi bizimlə bölüşün!


Məqsədi göz önündə saxlayın

Bütün ezoterik terminologiyası ilə tamamlanmış CI/CD-nin tələlərini kəşf etdikcə, onu gözdən itirmək asandır. niyə bu vacibdir. Nəhayət, CI/CD vacibdir, çünki o, biznes məqsədlərinə cavab verir.

Texnologiya rəhbərləri bilirlər ki, davamlı təkamül, sürətli düzəlişlər və keyfiyyətli nəticələr müştərilər yaradır və saxlayır. Onlar bilirlər ki, uğursuz buraxılış qulduru App Store rəylərinə dəvət edir və yüksək rəyləri geri qaytarmaq onları saxlamaqdan daha çətindir. Devops komandanız üçün daha yaxşı iş təcrübəsi yarada bilər, lakin şirkətlərin devops tətbiq etmələrinin səbəbi bu deyil.

Sadəcə olaraq, CI/CD-nin tələləri nəzərdən keçirilməyə dəyər, çünki milyardlarla dollar risk altındadır. Mən sizə CI/CD tablosuna səhm kodu və ya App Store nəzərdən keçirmə izləyicisi əlavə etməyi təklif etməsəm də, sizi bundan xəbərdar olmağa çağırıram. Çox şey CI/CD-nin xırdalıqlarından asılıdır.

Zubin Irani çevik transformasiyaları həyata keçirən və 50-dən çox Fortune 100 firması və Silikon Vadisinin bir çox ən böyük işəgötürənləri üçün çevik həllər təqdim edən tam xidmət konsaltinq şirkəti cPrime-ın həmtəsisçisi və baş direktorudur.


Videoya baxın: Qeydiyyat, Ödəmə və dərs alma məlumatları. (Iyul 2022).


Şərhlər:

  1. Alijha

    What a crazy thought?

  2. Mosegi

    Qarışdığım üçün üzr istəyirəm... Məndə də oxşar vəziyyət var. Müzakirə edə bilərsiniz.

  3. Tzuriel

    Hər şey göründüyü kimi sadə deyil

  4. Zotikos

    Bəli, demək olar ki, bir və eyni.

  5. Riccardo

    təsadüfi təsadüf



Mesaj yazmaq